Способ получения креатинкиназы
279892
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
3 аявлено 24.Ч11.1967 (№ 1174888/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 26,VIII.1970. Бюллетень № 27
Дата опубликования описания 19.XI.1970
Кл. 30h, 2/04
МПК А 61k 19/00
С 07g 7/00
УДК 577.15.072(088.8) комитет оо делам изобретений и открытий ври Совете Министров
СССР
Авторы изобретения
Е. П. Четверикова и А. В. Крннская
Институт биологической физики AH СССР
Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРЕАТИНКИНАЗЫ
Известны способы получения креатинкиназы путем экстракции мышц кролика хлористым калием, осаждения балластных белков, тепловой денатурации, отделения осадка с последующим диализом надосадочной жидкости и кристаллизации целевого продукта.
По предлагаемому способу надосадочную жидкость охлаждают и обрабатывают освобожденным от тяжелых металлов этанолом до достижения концентрации 70%. Это позволяет повысить качество фермента и упростить технологию его получения.
Для получения креатинкиназы мышцы кролика гомогениз ируют и экстрагируют 0,01 М раствором хлористого калия. Экстракт отделяют от осадка центрифугированием, подщелачивают аммиаком до рН 9,0, добавляют 5,3 г на 1 л экстракта хлористого аммония для осаждения катионов кальция и магния и затем осаждают балластные белки этанолом.
Для осаждения берут спирт-ректификат, обраоатывают его едким натром (5 мл 50%-ного раствора на 1 л) для удаления перекисей, перегоняют и затем встряхивают в течение
1 час с катионитом дауэкс=50>(1 в водородной форме (20 г сырого катионита ста 1 л спирта) для удаления примесей тяжелых металлов. После осаждения балластных белков смесь нагревают до 20 С, оставляют на 2 час при перемешивании и отделяют осадок цент2 рифугированием .при температуре минус 5 плюс 2 С. Надосадочную жидкость оставляют на ночь в холодильнике, и если нужно фильтруют через бумажный фильтр. Для осаждения фермента полученный раствор охлаждают до 0 — минус 5 С и медленно добавляют охлажденный до минус 5 — минус 10 С этанол до концентрации 70 при постоянном перемешивании. Смесь оставляют на 2 час, пос10 ле чего выпавший осадок фермента отделяют центрифугированием в течение 15 мик при плюс 2 — минус 5 С и растворяют в небольшом кол ичестве 0,01 М глицинового буферного раствора (рН 9,0). Диализ для удаления
15 спирта производят при 0 — 4 С в течение
20 час против глицинового буферного раствора. В случае появления осадка раствор фермента центрифугируют и получают прозрачный бесцветный раствор, содержащий 20—
20 25 мг/мл препарата с активностью 250 ед/мг.
Предмет изобретения
Способ получения креатинкиназы путем экстракции мышц кролика хлористым калием, осаждения балластных белков, тепловой денатурации, отделения осадка с последующим
ЗС диализом надосадочной жидкости и кристал279392
Составитель В. A. Таратута
Корректор Т. А. Уманец
Редактор О. Н. Кузнецова
Заказ 3331/17 Тиран< 480 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, К-35, Раушская наб., д. 4,:5
Типография, пр. Сапунова, 2 лйзац ии целевого продукта, отличпющийся тем, что, с целью повышения качества фермента и упрощения процесса, надосадочную жидкость охлаждают и оораоатывают освооон денным от тяжелых металлов этанолом до достижения концентрации 70%.
