Способ моделирования нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти наркозависимых лиц
Владельцы патента RU 2680095:
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского" (RU)
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для создания модели нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти наркозависимых лиц при испытании различных способов лечения и профилактики остеонекрозов челюстей, вызываемых кустарно изготовленным метамфетамином. Способ включает ежедневные внутрижелудочные введения 3-месячным крысам модельной ненаркотической смеси, полученной восстановлением лекарственного препарата «Анаприлин» с использованием йода и красного фосфора, в дозе 70-90 мг/кг на протяжении 12 недель. Изобретение позволяет создать модель остеонекроза нижней челюсти с использованием молекулярных аналогов примесей, образование которых возможно при синтезе метамфетамина в кустарных условиях. 1 ил.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для создания модели нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти при испытании различных способов лечения и профилактики остеонекрозов челюстей, вызываемых кустарно изготовленным метамфетамином.
Известен способ создания модели остеонекроза нижней челюсти у экспериментальных мышей, построенный на предварительном 12-недельном введении золедроновой кислоты (0,2 мг/кг) и дексаметазона (5 мг/кг, внутрибрюшинно, еженедельно) с последующей экстракцией первого нижнего моляра. [Hyo-Won Jang, Jin-Woo Kim, and In-Ho Cha. Development of animal model for Bisphosphonates-related osteonecrosis of the jaw (BRONJ) Maxillofac Plast Reconstr Surg. 2015 Dec; 37(1): 18.]. Недостатком аналога является то, что при моделировании остеонекроза используется препарат аминобисфосфонатной группы, в то время, как остеонекрозы, моделируемые при его использовании, по этиологическому фактору не полностью соответствуют остеонекрозам, возникающим у наркозависимых пациентов. Следует так же отметить, что исследуемый орган подвергается оперативному вмешательству исходом, которого является открытая рана в полости рта, создающая условия для течения остеонекротических процессов в септических условиях. Кроме этого, низкая частота введения аминобисфосфонатного препарата и имуносупресора (дексаметазона) в предварительном лекарственном воздействии затрудняет трактовку изменений, вызываемых золендроновой кислотой.
Наиболее близким к заявленному способу является способ создания модели остеонекроза нижней челюсти [ Curra, Camila Lopes CardosoII, Osny Ferreira 
, Marcos Martins CuriIV, Mariza Akemi MatsumotoV, Bruno Cavalini Cavenago, 
dos Santos, Joel Ferreira Santiago Junior Medication-related osteonecrosis of the jaw. Introduction of a new modified experimental model Acta Cirurgica Brasileira - Vol. 31 (5) 2016-309]. Остеонекротическую модель создают путем введения в хвостовую вену крысы золедроновой кислоты (35 мкг/кг каждые две недели в течение 8 недель) с последующей экстракцией верхнечелюстного резца. Недостатком ближайшего аналога является оперативное вмешательство, исходом которого является открытая послеоперационная рана, заживающая в септических условиях, а также введение золендроновой кислоты, которая относится к соединениям аминобисфосфонатной группы, образование которых маловероятно при изготовлении метамфетамина в кустарных условиях.
В основу предлагаемого способа поставлена задача создания модели остеонекроза нижней челюсти с использованием молекулярных аналогов примесей, образование которых возможно при синтезе метамфетамина в кустарных условиях.
Для решения поставленной задачи модель экспериментального остеонекроза создают путем ежедневного внутрижелудочного введения 3-х месячным крысам весом 100-120 г модельной ненаркотической смеси, полученной восстановлением лекарственного препарата «Анаприлин» с использованием иода и красного фосфора, в дозе от 70-90 мг/кг на протяжении 12 недель
Способ моделирования нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти наркозависимых лиц осуществляют следующим образом.
3-х месячным крысам осуществляют ежедневные внутрижелудочные введения модельной ненаркотической смеси, полученной восстановлением лекарственного препарата «Анаприлин» с использованием иода и красного фосфора, в дозе от 70-90 мг/кг на протяжении 12 недель, что определяется минимальным сроком, при котором возникают морфологические изменения в костной ткани при воздействии остеотропных препаратов. По истечении указанного срока животных выводили из эксперимента под кетаминовым наркозом в дозе 44 мг/кг. Контрольная группа состояла из животных, которым производили внутрибрюшинное введение 1,0 мл физиологического раствора 1 раз в сутки в течение 3-х месяцев.
На фиг. представлено: А - Гиперостоз нижней челюсти, окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×100. В - Зоны остеоцитарного остеолиза (1), сочетающиеся с участками интенсивной базофилии костного матрикса (2), окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×400. С - зоны остеосклероза, окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×400. D - остеоидные массы в участках рарефикации кости, окраска по Массону-Голднеру, увеличение ×100. Е - Процессы метапластического остеогенеза (I) и миелофиброза (2) в костномозговой полости, окраска по Массону-Голднеру, увеличение ×400. F - Начало процесса облитерации гаверсова канала, в центре которого разрушенный сосуд с фибриноилным некрозом стенки, окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×100.
Материалом для исследования служили скелетированные нижние челюсти крыс, фиксированные в 10% нейтральном забуференном формалине более 72 часов, декальцинированные в 14% растворе трилона Б, забуференном при рН 7,0. Далее осуществляли проводку с использованием изопропанола и минерального масла и заливали ткани парафином. Парафиновые срезы толщиной 3 мкм резали на ротационном микротоме Leica RM2245 лезвиями Surgipath DB80LX. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином по Массону-Голднеру. Гистологические препараты исследовались методом световой микроскопии с помощью микроскопа Olympus СХ-31, снабженном цифровой камерой Olympus C5050Z при увеличениях 100, 400, 1000.
При исследовании гистологических препаратов отмечено, что воздействие модельной смеси приводит к блокированию активности остеокластического компонента и смещению процессов перестройки кости в сторону остеоцитарного ремоделирования как компенсаторного процесса. Явления токсической васкулопатии, осложненной фибриноидным некрозом, а также высокие минерализирующие свойства модельной смеси привели к возникновению остеометапластических процессов, которые дополняют остеопролиферативный аппозиционный рост кости и приводят к гиперостозу с формированием афункциональных хрупких костных остеосклеротических масс. Динамика данной патологии сходна с процессами, развивающимися при оссифицирующем остите, который является одной из форм асептических остеонекротических поражений, и может быть расценена как нулевая стадия остеонекроза нижней челюсти (фиг. 1).
Способ создания экспериментальной модели нулевой стадии остеонекроза нижней челюсти наркозависимых лиц, включающей воздействие остеотропным соединением фосфора, отличающийся тем, что осуществляют ежедневные внутрижелудочные введения 3-месячным крысам модельной ненаркотической смеси, полученной восстановлением лекарственного препарата «Анаприлин» с использованием иода и красного фосфора, в дозе от 70-90 мг/кг на протяжении 12 недель.
