Способ повышения качества жизни половозрелого животного

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Данная заявка представляет собой частичное продолжение находящейся на рассмотрении патентной заявки США № 11/813276, поданной 28 марта 2008 года, которая находится на национальной стадии в США по § 371 раздела 35 Кодекса законов США, а также международной заявки № PCT US 2005/047461, поданной 30 декабря 2005 года, публикация № WO 2006/074089, для которой испрашивается приоритет по предварительной патентной заявке США с регистрационным № 60/640890, поданной 30 декабря 2004 года, каждая из которых включена полностью для всех целей.

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение в общем относится к способам повышения качества жизни животного и, в частности, к применению кормовых композиций, содержащих омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты для повышения качества жизни половозрелого животного или животного на стадии жизни выше половой зрелости.

Уровень техники

Домашним животным, таким как собаки и кошки, часто требуются различные пищевые режимы, зависящие от их стадии жизни (возраста), строения тела и породы. Требования к питательным веществам как для собаки, так и для кошки могут быть разделены на три различные стадии жизни на основе возраста: растущие собаки (или кошки), взрослые собаки (или кошки) и половозрелые собаки (или кошки). Последняя категория, половозрелые собаки (или кошки), может быть еще разделена на две стадии, которые включают половозрелых (или зрелых особей) и сверхполовозрелых (или гериатрических). Собаки дополнительно разделены на различные категории для собак стандартной породы против собак крупной породы.

Незаменимые жирные кислоты, состоящие из омега-3 и омега-6 полиненасыщенных жирных кислот, являются важными питательными веществами для здоровья животного. Данные питательные вещества однако или не могут производиться животными или не могут производиться в достаточных количествах, чтобы приносить полезные результаты, и поэтому должны потребляться в рационе животного. См., например, Hornstra, G., et al., “Essential fatty acids in pregnancy and early human development”, Eur J. Obs. and Reprod. Biology, 61:57-62 (1995). Ранее постулировано, что докозангексаеновая кислота (“DHA”), омега-3 полиненасыщенная жирная кислота, является эффективной в повышении способности к обучению в лабиринте и функций мозга у старых мышей. См., Lim, S.-Y., “Intakes of dietary docosahexaenoic acid ethyl ester and egg phosphatidylcholine improve maze-learning ability in young and old mice”, J. Nutr., 130:1629-1632 (2000).

Roggers обсуждает теорию потенциального использования антиоксидантов для того, чтобы замедлять ухудшение познавательной функции, особенно у пожилых. См., Rogers, P., “A healthy body, a healthy mind: long-term impact of diet on mood and cognitive function”, Proceedings of the Nutrition Society, 60:135-143 (2001).

Вопреки изучениям и разработкам, связанным с улучшением познавательных способностей, продолжается потребность в методах для повышения качества жизни половозрелых животных, измеряемого, например, усиленной настороженностью, улучшенной жизнеспособностью, защитой хряща, поддержанием мышечной массы, усиленной усвояемостью и улучшенным качеством кожи и шерсти у половозрелых и гериатрических животных. Как сообщено ранее, композиция корма для гериатрических домашних животных, описанная в настоящем документе, может быть введена для достижения этого результата. Кроме того, авторы данного изобретения далее сообщают в настоящем документе об удивительном открытии, состоящем в том, что повышенное качество жизни половозрелых и гериатрических животных, достигаемое введением домашним животным композиций корма, раскрытых в настоящем описании, отражено на геномном уровне. В частности, как описано подробно в примерах ниже, данные по генному чипу указывают, что экспрессия генов, которые кодируют белки, связанные с некоторыми биологическими путями обмена, такими как свертывание крови и активация и агрегация тромбоцитов, целостность костей и мышц, воспалительные реакции, разрушение хряща и болевой ответ, повреждение и пути репарации ДНК, нейральная функция, синтез и деградация гликогена, гликолиз, глюконеогенез, пентозный фосфатный путь и электронный транспорт, модифицирована, т.е. в общем большей частью изменяется с пользой за счет введения животному композиций корма для половозрелых домашних животных, описанных в данном документе.

Сущность изобретения

Данное изобретение относится к способам улучшения качества жизни половозрелых и гериатрических животных кормлением животного композицией, содержащей, по меньшей мере, примерно 9% масс. белка, по меньшей мере, примерно 5% жира и, по меньшей мере, примерно 0,05% масс., по меньшей мере, одной омега-3 полиненасыщенной жирной кислоты.

В одном варианте осуществления, способ включает кормление животного количеством композиции, эффективным для повышения качества жизни животного, в котором повышенное качество жизни подтверждено улучшением одной или нескольких характеристик, выбираемых из группы, состоящей из настороженности, жизнеспособности, защиты хряща, поддержания мышечной массы, усвояемости и качества кожи и шерсти.

В другом варианте осуществления, способ включает кормление животного композицией, содержащей, по меньшей мере, одну омега-3 полиненасыщенную жирную кислоту, выбираемую из группы, состоящей из докозагексаеновой кислоты (“DHA”) и эйкозапентаеновой кислоты (“ЕРА”). В дополнительном варианте осуществления, способ включает кормление животного композицией, еще содержащей, по меньшей мере, один антиоксидант и, по меньшей мере, одно питательное вещество, выбираемое из группы, состоящей из холина, марганца, метионина, цистеина, L-карнитина, лизина и их смесей.

В одном варианте осуществления, способ включает кормление животного количеством композиции, эффективным для улучшения или повышения качества жизни животного, в котором повышенное качество жизни подтверждено улучшением в одном или нескольких биологических путях обмена, выбираемых из группы, состоящей из свертывания крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакций, разрушения хряща и болевого ответа, повреждения и путей репарации ДНК, нейральной функции, синтеза и деградации гликогена, гликолиза, глюконеогенеза, пентозного фосфатного пути и электронного транспорта.

В другом варианте осуществления, способ включает кормление животного количеством композиции, эффективным для повышения качества жизни животного, в котором повышенное качество жизни подтверждено изменением в экспрессии одного или нескольких генов, которые кодируют белки, связанные с биологическими путями обмена или относящиеся к биологическим путям обмена, выбираемым из группы, состоящей из свертывания крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакций, разрушения хряща и болевого ответа, повреждения и путей репарации ДНК, нейральной функции, синтеза и деградации гликогена, гликолиза, глюконеогенеза, пентозного фосфатного пути и электронного транспорта.

В еще другом варианте осуществления, изобретение относится к способу лечения животного, страдающего от расстройства или заболевания, связанного с биологическими путями обмена или относящегося к биологическим путям обмена, выбираемым из группы, состоящей из свертывания крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакций, разрушения хряща и болевого ответа, повреждения и путей репарации ДНК, нейральной функции, синтеза и деградации гликогена, гликолиза, глюконеогенеза, пентозного фосфатного пути и электронного транспорта, причем способ включает введение упомянутому животному композиции, раскрытой в настоящем описании. В одном варианте осуществления, упомянутая композиция содержит, по меньшей мере, примерно 9% масс. белка, по меньшей мере, примерно 5% жира и, по меньшей мере, примерно 0,05% масс., по меньшей мере, одной омега-3 полиненасыщенной жирной кислоты. В следующем варианте осуществления, упомянутая композиция содержит, по меньшей мере, одну омега-3 полиненасыщенную жирную кислоту, выбираемую из группы, состоящей из докозагексаеновой кислоты (“DHA”) и эйкозапентаеновой кислоты (“ЕРА”). В еще дополнительном варианте осуществления, композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, один антиоксидант и, по меньшей мере, одно питательное вещество, выбираемое из группы, состоящей из холина, марганца, метионина, цистеина, L-карнитина, лизина и их смесей.

В другом варианте осуществления изобретение относится к способам измерения или получения характеристик повышения в качестве жизни животного, в частности половозрелого или гериатрического животного, получавшего в виде корма композицию, описанную в настоящем документе, посредством количественного определения уровней экспрессии гена для одного или нескольких генов, выбираемых из группы, состоящей из таковых, раскрытых в таблицах 5-14, в упомянутом животном и сравнением упомянутых уровней в животном с уровнями в животном перед введением композиции корма.

В следующем варианте осуществления, изобретение относится к способам повышения качества жизни животного модулированием уровня экспрессии одного или нескольких генов, перечисленных в таблицах 5-14 (т.е. восходящее или нисходящее регулирование, как обозначено там), в животном, чтобы имитировать образец экспрессии, наблюдаемой in vivo после введения домашнему животному композиций корма по данному изобретению. Также в настоящем описании рассмотрено, что модулирование уровней экспрессии данных генов может иметь терапевтическое значение в отношении лечения заболеваний или расстройств, связанных с различными биологическими путями метаболизма.

Изобретение также относится к способам идентификации животного, которое могло бы получать пользу от съедания композиции, раскрытой в настоящем описании, включающем измерение уровней экспрессии гена для любого одного или нескольких генов, перечисленных в таблицах 5-14, в упомянутом животном и сравнение упомянутых уровней с уровнями экспрессии генов, представленными в таблицах 5-14, где животное с уровнями, отличными от уровней, представленных в таблицах 5-14, было бы идентифицировано как потенциально получившее пользу от съедания композиции по данному изобретению.

В еще другом аспекте по данному изобретению предложены способы анализа и наборы, включающие компоненты, необходимые для определения экспрессии полинуклеотидов, кодирующих гены, раскрытые в настоящем описании, или уровней кодируемого белка, или их фрагментов в образцах тканей организма, полученных от животного, причем такие наборы включают, например, антитела, которые присоединяются к упомянутым полипептидам или к их фрагментам, или олигонуклеотидным зондам, которые гибридизируют с упомянутыми полинуклеотидами. В предпочтительном варианте осуществления, такие наборы также содержат инструкции, детализирующие процедуры, согласно которым должны применяться компоненты набора.

Другие и дополнительные цели, особенности и преимущества по данному изобретению будут легко очевидны специалистам в данной области.

Подробное описание изобретения

Определения

Предполагается, что изобретение, описанное в настоящем документе, не ограничено конкретной методологией, протоколами и представленными реагентами, так как они могут меняться. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, дается только с целью описания определенных вариантов осуществления и не предназначена для того, чтобы ограничить объем данного изобретения каким-либо способом.

Если не определено особо, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют те же значения, которые обычно понятны квалифицированному специалисту в данной области, к которой относится данное изобретение. Хотя любые методы и материалы, подобные или эквивалентные таковым, описанным в настоящем документе, могут быть использованы на практике и в тестировании по данному изобретению, предпочтительные методы, устройства и материалы описаны ниже. Все публикации, упоминаемые в настоящем описании, включены ссылкой с целью представления и раскрытия материалов и методологий, которые освещены в публикации, которая могла быть использована в связи с данным изобретением.

В практической реализации по данному изобретению могут быть использованы многие традиционные методики молекулярной биологии. Эти методики хорошо известны и объяснены, например, в Сurrent Prorocols in Molecular Biology, Volumes I, II and III, 1997, (F. M. Ausubel ed.); Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.,Y.; DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II, 1985 (D. N. Glover ed.); Oligonucleotide Synthesis, 1984 (M. L. Gait ed.); Nucleic Acid Hybridization, 1985, (Hames and Higgins); Transcription and Translation, 1984 (Hames and Higgins eds.); Animal Cell Culture, 1986 (R. I. Freshney ed.); Immobilized Cells and Enzymes, 1986 (IRL Press); Perbal, 1984, A Practical Guide to Molecular Cloning; серии, Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, 1987 (J. H. Miller and M. P. Calos eds., Cold Spring Harbor Laboratory); и Methods in Enzymology Vol. 154 и Vol. 155 (Wu и Grossman, и Wu, eds., соответственно).

Используемые в настоящем описании и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают указание на множественное число, если в контексте не отмечено особо.

Термины “половозрелая” или “зрелая особь” относятся к стадии жизни животного. Для псовых мелких и стандартных пород “половозрелая” стадия жизни составляет от примерно 7 до примерно 10 лет возраста. Для кошачьих “половозрелая” стадия жизни составляет от примерно 7 до примерно 12 лет возраста. Для псовых крупных пород возраст свыше 5 лет означает возраст выше половой зрелости, как описано ниже.

Термины “сверхполовозрелое” или “гериатрическое” животное относятся к стадии жизни животного. Для псовых мелких и стандартных пород гериатрическая стадия представляет собой любой возраст, превышающий 10-летний возраст. Для псовых крупных пород гериатрическая стадия представляет собой любой возраст, превышающий 5-летний возраст. Для кошачьих гериатрическая стадия представляет собой любой возраст, превышающий 12-летний возраст.

Термин “крупная порода” псовых относится к псовым с массой более чем 22 кг(55 фунтов) во взрослом состоянии.

Термин “стандартная порода” псовых относится к псовым с массой менее чем 22 кг(55 фунтов) во взрослом состоянии.

Термин “мелкая порода” псовых относится к псовым с массой более чем 8 кг(20 фунтов) во взрослом состоянии.

Термин “композиция корма для гериатрического домашнего животного” относится к любой и всем композициям корма для домашнего животного, раскрытым в настоящем описании.

Используемый в настоящем описании термин “углевод” включает полисахариды (например, крахмалы и декстрины) и сахара (например, сахарозу, лактозу, мальтозу, глюкозу и фруктозу), которые метаболизируются при гидролизе для энергии. Примеры углеводов, подходящих для включения в композиции, раскрытые в настоящем описании, включают, но без ограничения только ими, кукурузу, сорго, пшеницу, ячмень и рис.

Термин “антиоксидант” означает вещество, которое способно реагировать со свободными радикалами и нейтрализовать их. Иллюстративные примеры таких веществ включают бета-каротин, селен, коэнзим Q10 (убихинон), лютеин, токотриенолы, изофлавоны сои, S-аденозилметионин, глутатион, таурин, N-ацетилцистеин, витамин Е, витамин С, липоевую кислоту и L-карнитин. Примеры продуктов питания, содержащих полезные уровни одного или нескольких антиоксидантов, включают, но без ограничения только ими, гингко билоба, зеленый чай, брокколи, мякоть цитрусовых, виноградные выжимки, томатные выжимки, морковь, шпинат и широкое разнообразие видов муки из фруктов и овощей. Будет понятно квалифицированному специалисту в данной области, что хотя единицы антиоксидантов могут быть приведены в настоящем описании как “ч/млн”, соответствующие количества антиоксидантов также могут быть приведены в виде “МЕ/кг” в случаях, целесообразных и привычных для данного антиоксиданта, такого как, например, витамин Е.

Выражения “полезное изменение” в экспрессии гена, или экспрессия гена может быть “полезно измененной” и подобные выражения относятся к модификации в экспрессии гена (например, восходящее или нисходящее регулирование уровней мРНК) таким образом, что уровни белков, кодируемых генами, могут быть соответственно модифицированы так, что ассоциированные биологические пути обмена могут быть более подходящими, чтобы функционировать нормально и с меньшей тенденцией отражать патологические изменения в пути обмена, которые, например, могут быть типичными у гериатрического животного. Большей частью, полезные изменения в экспрессии гена имеют отношение к улучшенному здоровью и/или пониженной склонности к заболеванию животного. Как используется в настоящем описании, измерение различий в “уровнях” экспрессии гена и подобные термины относятся, например, к рассмотрению, регулирована ли экспрессия гена в животном восходящим или нисходящим образом по сравнению с контрольным уровнем.

Используемое в настоящем описании выражение “улучшение” или “повышение” качества жизни животного относится к улучшению или повышению одной или нескольких характеристик, выбираемых из группы, состоящей из настороженности, жизнеспособности, защиты хряща, поддержания мышечной массы, усвояемости и качества кожи и шерсти. Кроме того, также предполагается улучшение/повышение в свертывании крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакциях, разрушении хряща и болевом ответе, повреждении и путях репарации ДНК, нейральной функции, синтезе и деградации гликогена, гликолизе, глюконеогенезе, пентозном фосфатном пути и электронном транспорте.

“Улучшение” или “повышение” в характеристике или биологическом пути обмена относится к модификации упомянутой характеристики или пути обмена таким образом, что есть тенденция в характеристике или пути обмена проявляться и/или функционировать нормально и с меньшей тенденцией отражать патологические изменения в характеристике или пути обмена, которые, например, могут быть типичными у гериатрического животного.

Используемые в настоящем описании способы, чтобы “лечить” животное, страдающее от заболевания, также предназначены для охвата способов по предотвращению и/или устранению заболевания или расстройства с таким же успехом.

Данное изобретение относится к способам улучшения или повышения качества жизни половозрелого или гериатрического животного. Способ включает кормление животного композицией, содержащей, по меньшей мере, примерно 9% масс. белка, по меньшей мере, примерно 5% жира и, по меньшей мере, примерно 0,05% масс. омега-3 полиненасыщенной жирной кислоты. Способ применим для повышения настороженности, улучшения жизнеспособности, защиты хряща, поддержания мышечной массы, усиления усвояемости и улучшения качества кожи и шерсти у половозрелого или гериатрического животного. Способы применимы также для улучшения в животном одного или нескольких биологических путей обмена, выбираемых из группы, состоящей из свертывания крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакций, разрушения хряща и болевого ответа, повреждения и путей репарации ДНК, нейральной функции, синтеза и деградации гликогена, гликолиза, глюконеогенеза, пентозного фосфатного пути и электронного транспорта, причем такие улучшения также отражаются в общих полезных изменениях на геномном уровне. Способы лечения животных, страдающих от расстройств и заболеваний, связанных с или относящихся к данным биологическим путям обмена, причем включающие введение композиций по данному изобретению, также рассмотрены в настоящем описании.

Без привлечения теории полагают, что преимущества изобретения могут быть результатом физиологических эффектов от добавления омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в пищевой рацион половозрелого или гериатрического животного. Аналогично, антиоксиданты, холин и другие питательные вещества могут играть роль в повышении качества жизни половозрелого или гериатрического животного.

Хотя способы по данному изобретению могут улучшать качество жизни животного усилением всех вышеописанных характеристик или усилением всех вышеописанных биологических путей обмена, нет необходимости в том, чтобы показывать существенные улучшения в каждой из характеристик или в каждом из путей обмена, чтобы достигать “повышенное качество жизни”, как определено в настоящем описании.

Когда композиции введены половозрелому или гериатрическому животному, животное испытывает повышенное качество жизни, например проявляет или испытывает один или несколько эффектов из усиленной настороженности, улучшенной жизнеспособности, защищенного хряща, сохраненной мышечной массы, повышенной усвояемости, улучшенноого качества кожи и шерсти, а также улучшения, например, в свертывании крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакциях, разрушении хряща и болевом ответе, повреждении и путях репарации ДНК, нейральной функции, синтезе и деградации гликогена, гликолизе, глюконеогенезе, пентозном фосфатном пути и электронном транспорте, как показано общими полезными изменениями на геномном уровне. Методы для определения данных показателей качества жизни известны квалифицированным специалистам. Например, настороженность может быть измерена различными способами, включающими анализ метаболизма и антиоксидантных маркеров, а также путем клинических изучений с последующими вопросами владельцам участвующих домашних животных. Потенциальные маркеры метаболизма могут включать грелин, GLP-1, тироидный гормон и/или гормон роста. Потенциальные маркеры антиоксидантного статуса могут включать сывороточный витамин Е, ORAC, глутатионпероксидазу, алканолы и/или индикаторы клеточного повреждения. Кроме того, жизнеспособность может быть измерена различными способами, включающими анализ метаболизма и антиоксидантных маркеров, а также путем клинических изучений с последующими вопросами владельцам участвующих домашних животных. Аналогично защита хряща может быть измерена различными способами, включающими анализ биомаркеров артрита. Потенциальные биомаркеры артрита могут включать синтез коллагена типа II, матриксную металлопротеиназу, остеокальцин, активную щелочную фосфатазу, СОМР и фрагменты повреждения хряща. Cохранение мышечной массы может быть измерено различными способами, включающими анализ строения тела, и усвояемость может быть измерена различными способами, включающими клинические изучения с последующими вопросами владельцам участвующих домашних животных и кормлением животных для определения процента усвояемых питательных веществ. Качество кожи и шерсти может быть измерено различными способами, включающими клинические изучения с последующими вопросами владельцам участвующих домашних животных. Кроме того, как обсуждено выше, улучшения в качестве жизни также отражены на геномном уровне, как подтверждено данными по генному чипу, которые показывают полезные изменения на экспрессии большей части генов, связанных с различными важными биологическими путями обмена, включающими свертывание крови и активацию и агрегацию тромбоцитов, целостность костей и мышц, воспалительные реакции, разрушение хряща и болевой ответ, повреждение и пути репарации ДНК, нейральную функцию, синтез и деградацию гликогена, гликолиз, глюконеогенез, пентозофосфатный путь и путь электронного транспорта. Идентичности данных генов даны в примерах ниже.

Способы по данному изобретению применимы для повышения качества жизни людей и животных, включающих приматов (например, обезьяны, шимпанзе и т.д.), домашних животных (например, собаки, кошки, лошади и т.д.), сельскохозяйственных животных (например, козы, овцы, свиньи, крупный рогатый скот и т.д.), лабораторных животных (например, мыши, крысы и т.д.), птиц (например, домашние птицы, такие как канарейки, попугаи и т.д. и коммерческие птицы, такие как цыплята, утки, индейки и т.д.), грызунов (например, хомяки, морские свинки, песчанки, кролики, ежи, хорьки, шиншиллы и т.д.) и диких экзотических животных и животных из зоопарка (например, волки, медведи, олени и т.д.). В разных вариантах осуществления животное представляет собой кошку, собаку или лошадь.

Композиции по данному изобретению делают для повышения усвояемости и улучшения жевательной способности. Корма для собак и кошек обычно готовят с учетом стадии жизни (возраста), размера, строения тела и породы. Таким образом, некоторые варианты осуществления по данному изобретению включают композиции, которые приготовлены для того, чтобы обратить внимание на определенные различия в питательных веществах между собаками стандартных и мелких пород, собаками крупных пород и кошками.

Изобретение относится к способам использования множества композиций, содержащих, по меньшей мере, одну омега-3 полиненасыщенную жирную кислоту. Композиции включают корма, добавки, лакомства и игрушки (обычно жевательные и съедаемые игрушки). В способах также предлагаются композиции обозначенным животным в течение периода времени, который является достаточно долгим, чтобы осуществлять улучшенное качество жизни. В одном варианте осуществления способ относится к животному с композицией в течение, по меньшей мере, тридцати суток.

Композиции для применения в способах по данному изобретению обычно имеют содержание омега-3 полиненасыщенной жирной кислоты, по меньшей мере, примерно в 0,02% (или от примерно 0,05% до примерно 10%, или от примерно 0,1% до примерно 6% масс.) в расчете на сухое вещество. В некоторых вариантах осуществления, омега-3 полиненасыщенная жирная кислота представляет собой DHA. В других вариантах осуществления, омега-3 полиненасыщенная жирная кислота представляет собой ЕРA. В еще других вариантах осуществления, омега-3 полиненасыщенная жирная кислота содержит смесь DHA и ЕРA.

В некоторых вариантах осуществления, композиция, содержащая омега-3 полиненасыщенную жирную кислоту, представляет собой корм. Хотя предложены как жидкие, так и твердые корма, обычно предпочитают твердые корма. Корма включают как сухие корма, так и влажные корма. Некоторые компоненты, не являющиеся полиненасыщенной жирной кислотой, и их предпочтительные пропорции включают то, что перечислено в таблице 1.

В одном варианте осуществления, способы по данному изобретению включают скармливание гериатрическому животному композиции в количестве, эффективном для повышения качества жизни животного. Такие композиции обычно содержат:

(а) 0,02% (или от примерно 0,05% до примерно 10%, или от примерно 0,1% до примерно 6%), по меньшей мере, одной омега-3 полиненасыщенной жирной кислоты, и

(b) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) от примерно 10% до примерно 55% (или от примерно 18% до примерно 30%, или от примерно 33% до примерно 55%, или от примерно 18% до примерно 20%, или от примерно 33% до примерно 36%) белка,

(ii) от примерно 7% до примерно 35% (или от примерно 18% до примерно 35%, или от примерно 7% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 16%, или от примерно 18% до примерно 24%) жира и

(iii) по меньшей мере, примерно 0,05 (или от примерно 0,05 ч/млн или МЕ/кг до примерно 7500 ч/млн или МЕ/кг, или от примерно 250 ч/млн или МЕ/кг до примерно 3600 ч/млн или МЕ/кг, или от примерно 250 ч/млн или МЕ/кг до примерно 1650 ч/млн или МЕ/кг, или от примерно 5 ч/млн или МЕ/кг до примерно 225 ч/млн или МЕ/кг, или от примерно 0,05 ч/млн или МЕ/кг до примерно 2,4 ч/млн или МЕ/кг) антиоксиданта.

В другом варианте осуществления, способы по данному изобретению включают скармливание гериатрическим псовым стандартной или мелкой породы композиции в количестве, эффективном для повышения качества жизни псовых. Композиция обычно содержит:

(а) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 0,02% (или от примерно 0,02% до примерно 0,3%, или от примерно 0,05% до примерно 0,3%, или от примерно 0,05% до примерно 0,2%) DHA и

(ii) по меньшей мере, примерно 0,1% (или от примерно 0,1% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,3%) ЕРА,

(b) по меньшей мере, примерно 9% (или от примерно 9% до примерно 30%, или от примерно 18% до примерно 30%, или от примерно 18% до примерно 20%) белка,

(с) по меньшей мере, примерно 7% (или от примерно 7% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 16%) жира, и

(d) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i)по меньшей мере, примерно 250 МЕ/кг (или от примерно 250 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1000 МЕ/кг) витамина Е,

(iv) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 301 ч/млн) витамина С,

(v) по меньшей мере, примерно 600 ч/млн (или от примерно 600 ч/млн до примерно 2400 ч/млн, или от примерно 1260 ч/млн до примерно 2400 ч/млн, или от примерно 1260 ч/млн до примерно 1545 ч/млн) таурина,

(vi) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 200 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 160 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 155 ч/млн) липоевой кислоты и,

(vii) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 200 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 200 ч/млн до примерно 350 ч/млн) карнитина.

В другом варианте осуществления, способы по данному изобретению включают скармливание гериатрическим псовым крупной породы композиции в количестве, эффективном для повышения качества жизни псовых. Композиции обычно содержат:

(а) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 0,02% (или от примерно 0,02% до примерно 0,3%, или от примерно 0,05% до примерно 0,3%, или от примерно 0,05% до примерно 0,2%) DHA и

(ii) по меньшей мере, примерно 0,1% (или от примерно 0,1% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,3%) ЕРА,

(b) по меньшей мере, примерно 9% (или от примерно 9% до примерно 30%, или от примерно 18% до примерно 30%, или от примерно 18% до примерно 20%) белка,

(с) по меньшей мере, примерно 7% (или от примерно 7% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 16%) жира, и

(d) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 250 МЕ/кг (или от примерно 250 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1000 МЕ/кг) витамина Е,

(viii) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 301 ч/млн) витамина С,

(ix) по меньшей мере, примерно 600 ч/млн (или от примерно 600 ч/млн до примерно 2400 ч/млн, или от примерно 1260 ч/млн до примерно 2400 ч/млн или от примерно 1260 ч/млн до примерно 1575 ч/млн) таурина,

(x) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 200 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 160 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 155 ч/млн) липоевой кислоты и,

(xi) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 200 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 200 ч/млн до примерно 350 ч/млн) карнитина.

В другом варианте осуществления, способы по данному изобретению включают скармливание гериатрическим кошачьим композиции в количестве, эффективном для повышения качества жизни кошачих. Композиции обычно содержат:

(а) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 0,05% (или от примерно 0,05% до примерно 0,30%, или от примерно 0,1% до примерно 0,30%, или от примерно 0,1% до примерно 0,2%) DHA и

(ii) по меньшей мере, примерно 0,1% (или от примерно 0,1% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,3%) ЕРА,

(b) по меньшей мере, примерно 15% (или от примерно 15% до примерно 55%, или от примерно 30% до примерно 55%, или от примерно 33% до примерно 36%) белка,

(с) по меньшей мере, примерно 9% (или от примерно 9% до примерно 35%, или от примерно 18% до примерно 35%, или от примерно 18% до примерно 24%) жира, и

(d) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 250 МЕ/кг (или от примерно 250 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1100 МЕ/кг) витамина Е,

(хii) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 300 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 300 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 200 ч/млн) витамина С,

(xiii) по меньшей мере, примерно 1100 ч/млн (или от примерно 1100 ч/млн до примерно 3500 ч/млн, или от примерно 2300 ч/млн до примерно 3500 ч/млн, или от примерно 2300 ч/млн до примерно 2350 ч/млн) таурина, и

(xiv) по меньшей мере, примерно 200 ч/млн (или от примерно 200 ч/млн до примерно 750 ч/млн, или от примерно 400 ч/млн до примерно 750 ч/млн, или от примерно 400 ч/млн до примерно 525 ч/млн) карнитина и,

(xv) по меньшей мере, примерно 0,05% (или от примерно 0,05% до примерно 0,6%, или от примерно 0,1% до примерно 0,6%, или от примерно 0,1 ч/млн до примерно 0,4%) цистина.

В другом варианте осуществления, способы по данному изобретению включают скармливание гериатрическому животному композиции в количестве, эффективном для повышения настороженности и жиснеспособности животного. Такие композиции обычно содержат:

(а) 0,02% (или от примерно 0,05% до примерно 10%, или от примерно 0,1% до примерно 6%), по меньшей мере, одной омега-3 полиненасыщенной жирной кислоты, и

(b) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(xvi) от примерно 10% до примерно 55% (или от примерно 18% до примерно 30%, или от примерно 33% до примерно 55%, или от примерно 18% до примерно 20%, или от примерно 33% до примерно 36%) белка,

(xvii) от примерно 7% до примерно 35% (или от примерно 18% до примерно 35%, или от примерно 7% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 16%, или от примерно 18% до примерно 24%) жира,

(xviii) по меньшей мере, примерно 0,05 ч/млн (или от примерно 0,05 ч/млн до примерно 7500 ч/млн, или от примерно 250 ч/млн до примерно 3600 ч/млн, или от примерно 250 ч/млн до примерно 1650 ч/млн, или от примерно 5 ч/млн до примерно 225 ч/млн, или от примерно 0,05 ч/млн до примерно 2,4 ч/млн или) антиоксиданта и

(xix) по меньшей мере, примерно 1000 ч/млн (или от примерно 1000 ч/млн до примерно 5000 ч/млн, или от примерно 3300 ч/млн до примерно 5000 ч/млн, или от примерно 2000 ч/млн до примерно 3000 ч/млн, или от примерно 3000 ч/млн до примерно 4000 ч/млн) холина.

В другом варианте осуществления, способы по данному изобретению включают скармливание гериатрическим псовым стандартной или мелкой породы композиции в количестве, эффективном для повышения настороженности и жизнеспособности псовых. Композиция обычно содержит:

(а) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 0,02% (или от примерно 0,02% до примерно 0,3%, или от примерно 0,05% до примерно 0,3%, или от примерно 0,05% до примерно 0,2%) DHA и

(ii) по меньшей мере, примерно 0,1% (или от примерно 0,1% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,3%) ЕРА,

(b) по меньшей мере, примерно 9% (или от примерно 9% до примерно 30%, или от примерно 18% до примерно 30%, или от примерно 18% до примерно 20%) белка,

(с) по меньшей мере, примерно 7% (или от примерно 7% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 16%) жира, и

(d) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 250 МЕ/кг (или от примерно 250 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1000 МЕ/кг) витамина Е,

(хх) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 301 ч/млн) витамина С,

(xxi) по меньшей мере, примерно 600 ч/млн (или от примерно 600 ч/млн до примерно 2400 ч/млн, или от примерно 1260 ч/млн до примерно 2400 ч/млн, или от примерно 1260 ч/млн до примерно 1545 ч/млн) таурина, и

(ххii) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 200 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 160 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 155 ч/млн) липоевой кислоты и,

(xxiii) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 200 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 200 ч/млн до примерно 350 ч/млн) карнитина,

(e) по меньшей мере, примерно 1000 ч/млн (или от примерно 1000 ч/млн до примерно 3200 ч/млн, или от примерно 2000 ч/млн до примерно 3200 ч/млн, или от примерно 2000 ч/млн до примерно 2500 ч/млн) холина,

(f) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 150 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 150 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 110 ч/млн) марганца и

(g) по меньшей мере, примерно 0,4% (или от примерно 0,4% до примерно 2%, или от примерно 0,9% до примерно 2%, или от примерно 0,9% до примерно 1,2%) лизина и

(h) по меньшей мере, примерно от 0,4% до примерно 1,5% метионина.

В другом варианте осуществления, способы по данному изобретению включают скармливание гериатрическим псовым крупной породы композиции в количестве, эффективном для повышения резвости и жизнеспособности псовых. Композиция обычно содержит:

(а) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 0,02% (или от примерно 0,02% до примерно 0,3%, или от примерно 0,05% до примерно 0,3%, или от примерно 0,05% до примерно 0,2%) DHA и

(ii) по меньшей мере, примерно 0,1% (или от примерно 0,1% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,3%) ЕРА,

(b) по меньшей мере, примерно 9% (или от примерно 9% до примерно 30%, или от примерно 18% до примерно 30%, или от примерно 18% до примерно 20%) белка,

(с) по меньшей мере, примерно 7% (или от примерно 7% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 24%, или от примерно 14% до примерно 16%) жира,

(d) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 250 МЕ/кг (или от примерно 250 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1000 МЕ/кг) витамина Е,

(ххiv) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 301 ч/млн) витамина С,

(xxv) по меньшей мере, примерно 600 ч/млн (или от примерно 600 ч/млн до примерно 2400 ч/млн, или от примерно 1260 ч/млн до примерно 2400 ч/млн, или от примерно 1260 ч/млн до примерно 1575 ч/млн) таурина, и

(ххvi) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 200 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 160 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 155 ч/млн) липоевой кислоты и,

(xxvii) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 200 ч/млн до примерно 500 ч/млн, или от примерно 200 ч/млн до примерно 350 ч/млн) карнитина,

(e) по меньшей мере, примерно 1000 ч/млн (или от примерно 1000 ч/млн до примерно 3200 ч/млн, или от примерно 2000 ч/млн до примерно 3200 ч/млн, или от примерно 2000 ч/млн до примерно 2500 ч/млн) холина,

(f) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 150 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 150 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 110 ч/млн) марганца и

(g) по меньшей мере, примерно 0,4% (или от примерно 0,4% до примерно 2%, или от примерно 0,9% до примерно 2%, или от примерно 0,9% до примерно 1,2%) лизина и

(h) по меньшей мере, примерно от 0,4% до примерно 1,5% метионина.

В другом варианте осуществления, способы по данному изобретению включают скармливание гериатрическим кошачьим композиции в количестве, эффективном для повышения настороженности и жизнеспособности кошачих. Композиция обычно содержит:

(а) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 0,05% (или от примерно 0,05% до примерно 0,30%, или от примерно 0,1% до примерно 0,30%, или от примерно 0,1% до примерно 0,2%) DHA и

(ii) по меньшей мере, примерно 0,1% (или от примерно 0,1% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,5%, или от примерно 0,2% до примерно 0,3%) ЕРА,

(b) по меньшей мере, примерно 15% (или от примерно 15% до примерно 55%, или от примерно 30% до примерно 55%, или от примерно 33% до примерно 36%) белка,

(с) по меньшей мере, примерно 9% (или от примерно 9% до примерно 35%, или от примерно 18% до примерно 35%, или от примерно 18% до примерно 24%) жира,

(d) по меньшей мере, один компонент из следующих:

(i) по меньшей мере, примерно 250 МЕ/кг (или от примерно 250 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1500 МЕ/кг, или от примерно 500 МЕ/кг до примерно 1100 МЕ/кг) витамина Е,

(ххviii) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 300 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 300 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 200 ч/млн) витамина С,

(xxix) по меньшей мере, примерно 1100 ч/млн (или от примерно 1100 ч/млн до примерно 3500 ч/млн, или от примерно 2300 ч/млн до примерно 3500 ч/млн, или от примерно 2300 ч/млн до примерно 2350 ч/млн) таурина, и

(xxx) по меньшей мере, примерно 200 ч/млн (или от примерно 200 ч/млн до примерно 750 ч/млн, или от примерно 400 ч/млн до примерно 750 ч/млн, или от примерно 400 ч/млн до примерно 525 ч/млн) карнитина и,

(xxxi) по меньшей мере, примерно 0,05% (или от примерно 0,05% до примерно 0,6%, или от примерно 0,1% до примерно 0,6%, или от примерно 0,1 ч/млн до примерно 0,4%) цистина,

(e) по меньшей мере, примерно 1600 ч/млн (или от примерно 1600 ч/млн до примерно 5000 ч/млн, или от примерно 3300 ч/млн до примерно 5000 ч/млн, или от примерно 3300 ч/млн до примерно 3400 ч/млн) холина,

(f) по меньшей мере, примерно 50 ч/млн (или от примерно 50 ч/млн до примерно 150 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 150 ч/млн, или от примерно 100 ч/млн до примерно 110 ч/млн) марганца и

(g) по меньшей мере, примерно 0,7% (или от примерно 0,7% до примерно 3%, или от примерно 1,4% до примерно 3%, или от примерно 1,4 до примерно 1,7%) лизина и

(h) по меньшей мере, примерно 0,4% до примерно 1,5% метионина.

В другом варианте осуществления, данное изобретение относится к способу улучшения качества жизни половозрелых или гериатрических псовых мелкой или стандартной породы. Способ включает кормление псовых композицией, содержащей:

от примерно 60% до примерно 70% масс. углевода;

от примерно 15% до примерно 25% масс. белка, выбираемого из группы, состоящей из животного белка и растительного белка;

от примерно 5% до примерно 7% масс. жира, выбираемого из группы, состоящей из животного жира и растительного жира;

от примерно 2,5% до примерно 4% масс., по меньшей мере, одной из омега-3 полиненасыщенных жирных кислот;

от примерно 1% до примерно 4% масс. волокнистой массы;

от примерно 1% до примерно 2% масс. минералов; и

от примерно 0,5% до примерно 1,5% масс. витаминов.

В другом варианте осуществления, данное изобретение относится к способу улучшения качества жизни половозрелых или гериатрических псовых крупной породы. Способ включает кормление псовых композицией, содержащей:

от примерно 60% до примерно 70% масс. углевода;

от примерно 15% до примерно 25% масс. белка, выбираемого из группы, состоящей из животного белка и растительного белка;

от примерно 5% до примерно 10% масс. жира, выбираемого из группы, состоящей из животного жира и растительного жира;

от примерно 3% до примерно 5% масс., по меньшей мере, одной из омега-3 полиненасыщенных жирных кислот;

от примерно 1% до примерно 4% масс. волокнистой массы;

от примерно 0,5% до примерно 1% масс. минералов; и

от примерно 0,75% до примерно 1,25% масс. витаминов.

В другом варианте осуществления, данное изобретение относится к способу улучшения качества жизни половозрелых или гериатрических кошачьих. Способ включает кормление кошачих композицией, содержащей:

от примерно 30% до примерно 35% масс. углевода;

от примерно 35% до примерно 50% масс. белка, выбираемого из группы, состоящей из животного белка и растительного белка;

от примерно 12% до примерно 15% масс. жира, выбираемого из группы, состоящей из животного жира и растительного жира;

от примерно 1% до примерно 2% масс., по меньшей мере, одной из омега-3 полиненасыщенных жирных кислот;

от примерно 1% до примерно 5% масс. волокнистой массы;

от примерно 1% до примерно 2% масс. минералов; и

от примерно 1% до примерно 2% масс. витаминов.

В следующем варианте осуществления, данное изобретение относится к способу улучшения качества жизни половозрелого или гериатрического животного, включающему кормление животного (например, псовое или кошачье мелкой, стандартной и крупной породы, в зависимости от обстоятельств) композицией, содержащей компоненты, указанные в таблице 1А ниже.

Композиции для применения в способах по данному изобретению также содержат, по меньшей мере, один питательный компонент, выбираемый из группы, состоящей из марганца, метионина, цистеина, смесей метионина и цистеина, L-карнитина, лизина и аргинина. Конкретные предпочтительные количества для каждого компонента в композиции будут зависеть от множества факторов, включающих, например, виды животного, потребляющего композицию; определенные компоненты, включенные в композицию; возраст, массу, общее здоровье, пол и пищевой рацион животного; норму потребления животным и тому подобное. Таким образом, количества компонентов могут широко изменяться и могут также отличаться от соотношений, данных в настоящем описании.

Омега-3 жирные кислоты могут быть получены из множества источников. Один удобный источник представляет собой рыбьи жиры из, например, менхэдена, макрели, сельди, анчоуса и лосося. DHA и ЕРА являются типичными жирными кислотами, присутствующими в таких рыбьих жирах, и вместе часто составляют значительную часть жира, а именно от примерно 25% до примерно 38% жира.

Когда композиция представляет собой корм для животного, витамины и минералы предпочтительно включены в количествах, требуемых для того, чтобы избегать дефицита и поддерживать здоровье. Эти количества легко доступны в данной области. Национальный Совет Исследований/National Research Council (NRC), например, обеспечивает рекомендуемые количества таких ингредиентов для сельскохозяйственных животных. См., например, Nutrient Requirements of Swine (10th Rev. Ed., Nat'l Academy Press, Wash. D.C., 197298), Nutrient Requirements of Poultry (9th Rev. Ed., Nat'l Academy Press, Wash. D.C., 1994), Nutrient Requirements of Horses (Fifth Rev. Ed., Nat'l Academy Press, Wash. D.C., 1989), Nutrient Requirements of Dogs and Cats (Nat'l Academy Press, Wash. D.C., 2006). Американская ассоциация по контролю пищевых продуктов/The American Feed Control Officials (AAFCO), например, обеспечивает рекомендуемые количества таких ингредиентов для собак и кошек. См. American Feed Control Officials, Inc., Official publication, pp. 126-140 (2003). Примеры витаминов, применимых в качестве кормовых добавок, включают витамин А, В1, В2, В6, В12, С, D, E, K, H (биотин), К, фолиевую кислоту, инозит, ниацин и пантотеновую кислоту. Примеры минералов и микроэлементов, применимых в качестве кормовых добавок, включают кальций, фосфор, натрий, калий, магний, медь, цинк, хлорид и соли железа.

Способы по данному изобретению включают композиции, которые еще могут содержать другие добавки, известные в данной области. Предпочтительно, такие добавки присутствуют в количествах, которые не снижают результат и эффект, предоставляемый изобретением. Примеры добавок включают, например, вещества со стабилизирующим эффектом, средства, способствующие обработке, вещества, которые повышают аппетит, окрашивающие вещества и вещества, которые обеспечивают общие полезные результаты питательных элементов.

Стабилизирующие вещества включают, например, вещества, которые проявляют тенденцию повышать срок хранения композиции. Потенциально подходящие примеры таких веществ включают, например, консерванты, антиоксиданты, синергисты и комплексообразующие добавки, упаковочные газы, стабилизаторы, эмульгаторы, загустители, гелеобразователи и увлажнители. Примеры эмульгаторов и/или загустителей включают, например, желатин, простые эфиры целлюлозы, крахмал, сложные эфиры крахмала, простые эфиры крахмала и модифицированные крахмалы.

Добавки для окрашивания, вкусовой привлекательности (“усилители вкуса”) и результатов от питательных компонентов включают, например, красящие вещества (например, оксид железа, а именно красная, желтая или коричневая формы); хлорид натрия, цитрат калия, хлорид калия и другие съедобные соли; витамины; минералы; и ароматизатор. Такие добавки известны в данной области. См., например, патент США № 3202514. См. также патент США № 4997671. Ароматизаторы включают, например, ароматизаторы молочных продуктор (например, молока или сыра), ароматизаторы мяса (например, бекона, печени, говядины, домашней птицы или рыбы), природную смолу, пинакол и разные ароматизаторы, идентифицированные в торговле под номером FEMA (Ассоциация производителей пищевых добавок/Flavor Extract Manufacturers Association). Ароматизаторы помогают обеспечивать дополнительную вкусовую привлекательность и являются известными в данной области. См., например, патент США № 4997672. См. также патент США № 5004624. См. также патент США № 5114704. См. также патент США № 5532010. См. также патент США № 6379727. Концентрация таких добавок в композиции обычно может доходить до примерно 5% масс. В некоторых вариантах осуществления, концентрация таких добавок (в частности, где такие добавки в основном представляют собой питательные балансирующие средства, такие как витамины и минералы) составляют от примерно 0% до примерно 2,0% масс. В некоторых вариантах осуществления, концентрация таких добавок (снова, в частности, где такие добавки в основном представляют собой питательные балансирующие средства) составляют от примерно 0% до примерно 1,0% масс.

Добавки включают, например, корм, используемый с другим кормом, чтобы улучшить питательный баланс или эффективность в целом. Добавки включают композиции, которые cкармливаются неразбавленными как добавочный корм к другим кормам, предоставляя свободный выбор, наряду с другими частями рациона животного, которые по отдельности доступны или разбавлены и смешаны со стандартным кормом животного, чтобы получить полный корм. AAFCO, например, обеспечивает всестороннее рассмотрение, касающееся кормовых добавок, в American Feed Control Officials, Inc. Official Рublication, p. 220 (2003). Добавки могут быть в разных формах, включающих, например, порошки, жидкости, сиропы, пилюли, капсулированные композиции, и тому подобное.

Лакомства включают, например, композиции, которые даются животному, чтобы соблазнять животное к съеданию их в течение периода, не связанного с приемом корма. Лакомства для псовых включают, например, кости для собак. Лакомства могут быть питательными, где композиция содержит один или несколько питательных компонентов, и могут, например, иметь композицию, описанную выше для корма. Непитательные лакомства охватывают любые другие лакомства, которые являются нетоксичными.

Игрушки включают, например, жевательные игрушки. Игрушки для собак включают, например, искусственные кости. Имеется широкий спектр подходящих игрушек, продаваемых на рынке в настоящее время. См., например, пат. США № 5339771 (и ссылки, раскрытые в пат. США № 5339771). См. также пат. США № 5419283 (и ссылки, раскрытые в пат. США № 5419283). Данное изобретение относится как к частично потребляемым игрушкам (например, игрушки, содержащие пластмассовые компоненты), так и к полностью потребляемым игрушкам (например, игрушки из недубленой кожи и различные искусственные кости). Следует еще осознавать, что данное изобретение относится к игрушкам для использования как человеком, так и нечеловеческим существом, в частности для использования домашним, сельскохозяйственным и зоологическим животным, и особенно для использования собакой, кошкой или птицей.

“Корм” представляет собой полный пищевой рацион с питательными компонентами для предназначенного реципиентного животного (например, домашняя кошка или домашняя собака). “Полный пищевой рацион с питательными компонентами” представляет собой пищевой рацион, который включает достаточные питательные компоненты для поддержания стандартного здоровья жизнеспособного животного на диете. В способах по данному изобретению используются композиции, которые не предназначены для того, чтобы быть ограниченными любым конкретным перечислением белковых или жирных ингредиентов или формы продуктов. Композиции могут быть приготовлены, например, в сухой, консервированной, влажной или полувлажной форме при использовании обычных методик для кормов домашних животных. В некоторых вариантах осуществления, содержание влаги составляет от примерно 10% до примерно 90% от общей массы композиции. В других вариантах осуществления, содержание влаги составляет от примерно 65% до примерно 75% от общей массы композиции.

В приготовлении композиции для применения в способах по данному изобретению, любой ингредиент (например, рыбий жир) может быть включен в композицию, например, в течение обработки препаративной формы, а именно в течение и/или после смешивания других компонентов композиции. Распределение данных компонентов в композицию может быть выполнено обычными способами. В одном варианте осуществления, белковые ткани размельченного животного и домашней птицы смешивают с другими ингредиентами, включающими жиры рыб, злаковые зерна, другие ингредиенты, питательно балансирующие вещества, добавки для специальных целей (например, смеси витаминов и минералов, неорганические соли, целлюлоза и свекловичная пульпа, наполнители, и тому подобное); и добавляют также воду, которая достаточна для обработки. Данные ингредиенты предпочтительно смешивают в сосуде, подходящем для нагревания при перемешивании компонентов. Нагревание смеси может быть произведено при использовании любого подходящего способа, а именно, например, прямым введением пара или применением сосуда, снабженного теплообменником. После добавления последнего ингредиента смесь нагревают до температурного интервала от примерно 50°F (10°C) до примерно 212°F (100°C). В некоторых вариантах осуществления, смесь нагревают до температурного интервала от примерно 70°F (21°C) до примерно 140°F (60°C). Температуры вне данных интервалов обычно являются приемлемыми, но могут быть коммерчески непрактичными без использования других средств, способствующих обработке. При нагревании до соответствующей температуры продукт обычно будет в форме густой жидкости. Густую жидкость разливают в контейнеры. Применяют крышку и контейнер герметически закрывают. Закрытый контейнер затем помещают в обычное оборудование, созданное для стерилизации содержимого. Это обычно выполняют нагреванием до температур выше чем примерно 230°F (110°C) в течение соответствующего времени, которое зависит, например, от используемой температуры и композиции.

Способы по данному изобретению включают использование композиций, которые могут быть приготовлены в сухой форме при применении обычных методов. В одном варианте осуществления, сухие ингредиенты, включающие, например, источники животного белка, источники растительного белка, зерна, и т.д., измельчают и смешивают вместе. Влажные или жидкие ингредиенты, включающие жиры, масла, источники животного белка, затем добавляют к сухой смеси и перемешивают с ней. Смесь затем перерабатывают в гранулы или подобные сухие кусочки. Гранулы часто формуют, используя процесс экструзии, в котором смесь сухих и влажных ингредиентов подвергают механической обработке при высоком давлении и температуре и направляют через мелкие отверстия и рассекают на гранулы вращающимся ножом. Влажные гранулы затем сушат и необязательно покрывают одним или несколькими локальными слоями, которые могут включать, например, ароматизаторы, жиры, масла, порошки и тому подобное. Гранулы также могут быть сделаны из теста c использование процесса выпечки, а не экструзии, где тесто помещают в шаблонную форму перед сухой тепловой обработкой.

Также созданы композиции, чтобы быть более легкими для жевания. Собачьи и кошачьи корма обычно готовят, основываясь на стадии жизни (возрасте), размере, строении тела и породе. В способах по данному изобретению, некоторые варианты осуществления композиций адресуются определенным пищевым различиям между собаками стандартной и мелкой породы, собаками крупной породы и кошками.

Все процентные содержания, представленные в настоящем описании, даются на массу сухого вещества, если определенно не указано иное.

Как указано ранее, данное изобретение относится отчасти к способу повышения качества жизни животного. Способ включает скармливание половозрелому или гериатрическому животному композиции в количестве, эффективном для повышения настороженности, улучшения жизнеспособности, защиты хряща, поддержания мышечной массы, усиления усвояемости и улучшения качества кожи и шерсти. Кроме того, авторы сообщают далее в настоящем описании об удивительном открытии, что повышенное качество жизни животного, достигаемое введением композиций по данному изобретению, отражено на геномном уровне. Хотя возможно, что изменение в экспрессии любого одного гена, раскрытого в таблицах, представленных ниже, может приводить к полезным или вредным биологическим эффектам, данные, присутствующие в настоящем описании, указывают, что повсеместно наблюдаемые профили экспрессии согласуются с полезными биологическими эффектами, наблюдаемыми in vivo после введения рационов кормления, раскрытых в настоящем описании. В частности, данные по генному чипу указывают, что экспрессия генов, которые кодируют белки, связанные с некоторыми биологическими путями обмена, такими как свертывание крови и активация и агрегация тромбоцитов, целостность костей и мышц, воспалительные реакции, разрушение хряща и болевой ответ, поражение и пути репарации ДНК, нейральнная функция, синтез гликогена и деградация, гликолиз, глюконеогенез, пентозный фосфатный путь и электронный транспорт, большей частью изменена с пользой за счет введения животному композиций корма, описанных в данном документе. Таким образом, изобретение также относится к способам измерения или получения характеристик повышения в качестве жизни животного, в частности половозрелого или гериатрического животного, получавшего в виде корма композицию, описанную в настоящем документе, посредством количественного определения уровней экспрессии гена для одного или нескольких генов, выбираемых из группы, состоящей из таковых, раскрытых в таблицах 5-14, в упомянутом животном, и сравнением упомянутых уровней в животном с уровнями в животном перед введением композиции корма. Количественное определение экспрессии гена может быть проведено разными методами, известными квалифицированному специалисту в данной области, и включают такие методы как RT PCR, а также анализы генного чипа и нозерн-блоттинг. Таким образом, в настоящем описании предположено, что детектируемые уровни экспрессии могут быть использованы, например, в методах для измерения повышения в качестве жизни животного, как описано в настоящем документе.

В другом аспекте, данное изобретение относится к наборам, которые содержат:

(а) полинуклеотид гена, раскрытого в настоящем описании, или его фрагмент;

(b) нуклеотидную последовательность, комплиментарную к последовательности из (а);

(c) полипептид, кодируемый геном, раскрытым в настоящем описании, или его фрагмент; или

(d) антитело к полипептиду, кодируемому геном, раскрытым в настоящем описании, или его фрагменту.

В настоящем описании предположено, что модулирование уровней экспрессии генов, раскрытых здесь, может иметь терапевтическое значение в отношении лечения заболеваний или расстройств, связанных с различными биологическими путями обмена. Такое исследование может быть сделано определением гена без излишнего экспериментирования, например, оценкой уровней экспрессии в тканях, а также в образцах крови или оценкой уровней экспрессии в клетках in vitro или клеточных линиях, значимых для состояний определенных заболеваний или подходящих для такого экспериментирования. Могут быть также использованы модели заболевания in vivo в таком экспериментировании. Природа этих и других подходящих дополнительных анализов должна быть известна квалифицированному специалисту в данной области. Таким образом, на основе геномных данных, раскрытых в настоящем описании, изобретение также относится к способам повышения качества жизни животного модулированием уровня экспрессии одного или нескольких генов, перечисленных в таблицах 5-14 (т.е. восходящее или нисходящее регулирование, как отмечено там), в животном, чтобы имитировать образец экспрессии, наблюдаемый in vivo после введения композиций корма по данному изобретению для домашнего животного.

Модулирование уровней экспрессии генов может быть достигнуто через использование известных модуляторов экспрессии генов, подходящих для введения in vivo, причем включающих, но без ограничения только ими, рибозимы, антисмысловые олигонуклеотиды, трехспиральную ДНК, аптамеры РНК и/или двухцепочечную РНК, направленную к соответствующей нуклеотидной последовательности гена, представляющего интерес. Данные ингибирующие молекулы могут быть созданы при использовании обычных методик квалифицированным специалистом в данной области без излишнего усилия или экспериментирования. Например, модификация (например, ингибирование) экспрессии гена может быть получена созданием антисмысловых молекул, ДНК или РНК, к областям контроля генов, обсужденных в настоящем описании, т.е. к промоторам, усилителям и интронам. Например, могут быть использованы олигонуклеотиды, полученные от сайта инициации транскрипции, например, между положениями -10 и +10 от стартового сайта. Несмотря на это все области гена могут быть использованы для конструирования антисмысловой молекулы, чтобы получить молекулы, которые дают самую сильную гибридицацию для мРНК, и такие подходящие антисмысловые олигонуклеотиды могут быть произведены и идентифицированы процедурами стандартного анализа, известными квалифицированному специалисту в данной области.

Аналогично, ингибирование экспрессии гена может быть достигнуто при использовании “трехспиральной” методологии спаривания. Трехспиральное спаривание применимо, потому что оно вызывает ингибирование способности двойной спирали открываться достаточно для связывания полимераз, факторов транскрипции или регуляторных молекул. Недавние терапевтические достижения, использующие триплекс-ДНК, описаны в литературе (Gee, J.E. et al. (1994) In: Huber, B.E. and B.I. Carr, Molecular and Immunologic Approaches, Futura Publishing Co., Mt. Kisco, N.Y.). Данные молекулы могут быть также созданы для блокировки трансляции мРНК предохранением транскрипта от присоединения к рибосомам.

Рибозимы, т.е. молекулы РНК, обладающие ферментативной активностью, могут быть также использованы для модулирования экспрессии гена катализированием специфического расщепления РНК. Механизм рибозимного действия включает гибридизацию специфической последовательности рибозимной молекулы до комплементарной целевой РНК с последующим эндонуклеолитическим расщеплением. Примеры, которые могут быть использованы, включают сконструированные молекулы с “молоточковым” или “шпилечным” фрагментом рибозима, которые могут быть предназначены для того, чтобы специфично и эффективно катализировать эндонуклеолитическое расщепление последовательностей гена.

Cайты специфического рибозимного расщепления в пределах любой потенциальной цели РНК первоначально идентифицированы сканированием целевой молекулы для сайтов рибозимного расщепления, которые включают следующие последовательности: GUA, GUU и GUC. После того как идентифицированы, короткие последовательности РНК между 15 и 20 рибонуклеотидами, соответствующие области целевого гена, содержащего сайт расщепления, могут быть оценены для вторичных структурных образований, которые могут компенсировать олигонуклеотидную неприменимость. Пригодность потенциальных целей может быть также оценена тестированием доступности к гибридизации с комплементарными олигонуклеотидами при использовании анализов с защитой рибонуклеазы.

Рибозимные методы включают воздействие на клетку рибозимов или индуцирование экспрессии в клетке таких маленьких РНК-рибозимных молекул (Grassi and Marini, 1996, Annals of Medicine 28:499-510; Gibson, 1996, Cancer and Metastasis Reviews 15:287-299). Внутриклеточная экспрессия молоточковых и шпилечных рибозимов, нацеленных на мРНК, соответствующую, по меньшей мере, одному из генов, обсужденных в настоящем описании, может быть использована для ингибирования белка, кодируемого данным геном.

Рибозимы могут быть доставлены либо непосредственно к клеткам в форме олигонуклеотидов РНК, включающих последовательности рибозимов, либо введены в клетку как вектор экспрессии, кодирующий требуемую рибосомальную РНК. Рибозимы могут быть регулярно экспрессированы in vivo в достаточном количестве, чтобы быть каталитически эффективными в расщеплении мРНК и тем самым модифицирующими большое количество мРНК в клетке (Cotton et al., 1989 EMBO J. 8:3861-3866). В частности, рибозин-кодирующая ДНК последовательность, созданная согласно обычным хорошо известным правилам и синтезированная, например, стандартными методами химии амидофосфитов, может быть лигирована в сайт ферментативный рестрикции в антикодоновом стебле и петле гена, кодирующего тРНК, которая может быть затем трансформирована в клетку и экспрессирована в клетке, представляющей интерес, методами, принятыми в данной области. Предпочтительно, индуцируемый промотер (например, глюкокортикоид или тетрациклин-отвечающий элемент) также введен в данную структуру так, что экспрессия рибозима может быть селективно проконтролирована. Для насыщенного применения может быть использован высоко и избирательно активный промотер. Гены тДНК гены (т.е. гены, кодирующие тРНК) применимы в данном случае из-за их небольшого размера, высокой скорости транскрипции и повсеместной экспрессии в различных видах тканей. Поэтому рибозимы могут быть регулярно разработаны для того, чтобы расщеплять фактически любую последовательность мРНК, и клетка может быть регулярно трансформирована с ДНК, кодирующей для таких рибозомных последовательностей таким образом, что экспессировано контролируемое и каталитически эффективное количество рибозима. В соответствии с этим, большое количество фактически любых видов РНК в клетке может быть модифицировано или выведено из устойчивого состояния.

Рибозимные последовательности могут быть модифицированы, по существу, тем же самым способом, как описано для антисмысловых нуклеотидов, например, рибозимная последовательность может включать модифицированную группировку основания.

Аптамеры РНК могут быть также введены в клетку или экспрессированы в клетке, чтобы модифицировать обилие или активность РНК. Аптамеры РНК представляют собой специфические лиганды РНК для белков, таких как Tat и Rev РНК (Good et al., 1997, Gene Therapy 4:45-54), которые могут специфично ингибировать их трансляцию.

Генное специфическое ингибирование экспрессии гена также может быть достигнуто использованием обычных методик РНК-интерференции. Различные ссылки, описывающие такие методики, существуют и включают, например, WO 99/32619; Miller et al. Cell Mol. Neurobiol. 25:1195-207 (2005); Lu et al. Adv. Genet. 54:117-42 (2005).

Антисмысловые молекулы, трехспиральная ДНК, аптамеры РНК и рибозимы по данному изобретению могут быть приготовлены любым способом, известным в области по синтезу молекул нуклеиновых кислот. Эти способы включают методики для химического синтеза олигонуклеотидов, а именно, для твердофазного химического синтеза амидофосфитов. В альтернативном случае, молекулы РНК могут быть получены посредством in vitro и in vivo транскрипции последовательностей ДНК, кодирующих гены, обсужденные в настоящем описании. Такие последовательности ДНК могут быть включены во множество векторов с подходящими промотерами РНК полимеразы, а именно Е7 или SP6, согласно общепринятым методам. В альтернативном случае, конструкции кДНК, которые синтезируют антисмысловую РНК, конститутивно или посредством индукции могут быть введены в клеточные линии, клетки или ткани при использовании методов, известных квалифицированному специалисту в данной области. Векторы могут быть введены в клетки или ткани многими доступными методами и могут быть использованы in vivo, in vitrо или ex vivo. Для терапии ex vivo векторы могут быть введены в стволовые клетки, взятые от животного и клонально размноженные для аутологического транспланта спины в том же животном. Доставка трансфекцией и липосомными инъекциями может быть достигнута применением методов, которые хорошо известны в данной области.

Настоящее изобретение также включает способ для идентификации животного, которое могло бы извлекать пользу от съедания композиции, раскрытой в данном описании, причем способ включает измерение уровней экспрессии генов для одного или нескольких генов, перечисленных в таблицах 5-14, в упомянутом животном, и сравнение указанных уровней с уровнями экспрессии генов, рассмотренными в таблицах 5-14, где животное с уровнями, отличными от уровней, находящихся в таблицах 5-14 (например, регулируемые восходящим образом против регулируемых нисходящим образом) было бы идентифицировано как потенциально извлекающее пользу от съедания композиции по данному изобретению.

Также предполагается в настоящем описании, что данное изобретение относится к способам лечения животного, страдающего от расстройств или заболевания, связанных с или относящихся к любому одному из нескольких следующих биологических путей обмена: свертывание крови и активация и агрегация тромбоцитов, целостность костей и мышц, воспалительные реакции, разрушение хряща и болевой ответ, поражение и пути репарации ДНК, нейральная функция, синтез и деградация гликогена, гликолиз, глюконеогенез, пентозный фосфатный путь и электронный транспорт, причем способы включают введение животному композиции по данному изобретению.

Данное изобретение не ограничено конкретной методологией, протоколами и реагентами, описанными в настоящем документе, так как они могут меняться. Кроме того, терминология, использованная в настоящем документе, дается с целью описания только определенных вариантов осуществления и не предназначена для того, чтобы ограничивать объем данного изобретения. Выражения “содержат”, “содержит” и “содержащий” должны интерпретироваться как включительно, а не исключительно.

Если не указано особо, все технические и научные термины и любые акронимы, используемые в настоящем описании, имеют те же значения, которые обычно понятны квалифицированному специалисту в области охвата изобретения. Хотя любые способы и материалы, подобные или эквивалентные способам и материалам, описанным в настоящем документе, могут быть использованы в практике по данному изобретению, в настоящем документе описаны предпочтительные способы, устройства и материалы.

Все патенты, патентные заявки и публикации, упомянутые в настоящем описании, включены здесь ссылкой до степени, допускаемой законодательством с целью описания и раскрытия композиций, соединений, методов и аналогичной информации, опубликованных в них, которые могли быть использованы в настоящем изобретении. Однако ничто в настоящем описании не должно быть рассмотрено как допущение, что изобретение не наделено правом датировать задним числом такое раскрытие на основании предшествующего изобретения.

В описании раскрыты типичные предпочтительные варианты осуществления изобретения и хотя использованы специфические термины, они применены только в общем и описательном смысле и не для целей ограничения, причем область изобретения формулируется в следующих пунктах формулы изобретения. Поэтому должно быть понятно, что в пределах охвата прилагаемой формулы изобретения изобретение может осуществляться на практике иным образом чем конкретно описано.

ПРИМЕРЫ

Данное изобретение далее может быть проиллюстрировано следующими примерами предпочтительных вариантов его осуществления, хотя должно быть понятно, что данные примеры включены в основном для целей иллюстрации и не предназначены для ограничения области изобретения, если в частности не указано особо.

Пример 1

Композиция, приготовленная для половозрелых или гериатрических псовых стандартной или мелкой породы, описана в таблице 2.

Пример 2

Композиция, приготовленная для половозрелых или гериатрических псовых крупной породы, описана в таблице 3.

Пример 3

Композиция, приготовленная для половозрелых и гериатрических кошачьих, описана в таблице 4.

Пример 4

Геномный анализ вариантов с контрольным кормом в сравнении с кормом для гериатрического домашнего животного

Для дальнейшей характеристики питательных преимуществ композиций корма для гериатрического домашнего животного по данному изобретению оценены профили экспрессии генов от животных, получавших в качестве корма данные композиции, по сравнению с контрольными животными, и результаты подробно представлены ниже.

Материалы и методы

План исследования

Образцы крови берут от 9 биглей согласно общепринятым методам перед и после скармливания в течение 14 суток рациона К9 для гериатрического животного (в целом 18 образцов). Каждый образец, взятый после 14-дневного опыта, сравнивают с его собственным контролем.

Выделение лимфоцитов из крови псовых

Реагенты

Пробирки с 4 мл собачьей крови, гепарином или ЕДТА/EDTA, cбалансированный солевой раствор Хенка (Gibco 14175-095), хепес/HEPES-буфер (Gibco 15630-080), Accu-Paque (Accurate Chemical & Scientific Corp AN3100).

Материалы/Оборудование

Пипетки для переноса (VWR 14670-147), 14 мл центрифужные пробирки w/caps, 9” пипетки Пастера, 1,5 мл микроцентрифужные пробирки (VWR 20170-038), подставки для центрифужных пробирок, подставка для микроцентрифужных пробирок, контейнер для отходов, Beckman Coulter Allegra 25R Centrifuge, SN AJC01J015 центрифуга Эппендорфа, 5417C.

Растворы

Сбалансированный солевой раствор Хэнка (HBSS) w/25 мМ хепес/HEPES буферный раствор делают добавлением 12,8 мл хепес/HEPES буферного раствора в 500 мл cосуд c HBSS. Сбалансированный солевой раствор Хэнка и Accu-Paque нуждаются в том, чтобы быть удаленными из рефрижератора и помещенными при комнатной температуре, по меньшей мере, на 30 минут перед началом выделения лимфоцитов. Оба раствора следует помещать обратно в рефрижератор (4°С) сразу после их использования.

Процедура

1. Отмерить 4 мл HBSS w/HEPES в соответствующее число 14 мл центрифужных пробирок (одна пробирка для каждых 4 мл взятой крови).

2. Используя пипетку c меткой, калиброванную на вытекание, перенести 4 мл крови из пробирок Vacutainer® в 14 мл центрифужную пробирку, содержащую HBSS w/HEPES.

3. Смешать образец, основательно используя пипетку c меткой, калиброванную на вытекание, путем движения пипетки вверх и вниз в течение 30 секунд.

4. Вставить 9” пипетку Пастера в каждую из 14 мл центрифужных пробирок. Проверить, что нижний конец пипетки Пастера достигает нижней точки пробирки.

5. Используя пипетку c меткой, калиброванную на вытекание, медленно добавлять 4 мл Accu-Paque направлением жидкости вниз внутри пипетки Пастера, что оставляет из-за силы тяжести слой Accu-Paque под разбавленным образцом крови.

6. Закрыть верх пипетки Пастера при помощи своего пальца и осторожно удалить пипетку.

7. Центрифугировать пробирки при 800 х g в течение 20 минут при комнатной температуре. Для крови от щенков требуется более долгое центрифугирование в 45 минут, чтобы создать возможность для хорошего отделения RBC от WBC.

8. Используя пипетку c меткой, калиброванную на вытекание, осторожно удалить верхний слой в пределах 0,5 см срединного непрозрачного слоя и отбросить.

9. Используя новую пипетку c меткой, калиброванную на вытекание, осторожно удалить срединный непрозрачный слой и перенести в 1,5 мл микроцентрифужную пробирку. Следует быть осторожными, чтобы не переносить ничего из нижних слоев.

10. Центрифугировать микроцентрифужные пробирки при 13200 об/мин в течение 3,5 минут при комнатной температуре.

11. Осторожно удалить супернатант и cразу же заморозить шарик (лимфоциты) в жидком азоте. Хранить окончательные образцы при -80°С.

Выделение РНК

Реагенты

Деионизированная Н₂О, абсолютный этанол (Sigma E7023), исходный раствор РНК (Ambion 7000), Rnase Zap® (Ambion 9780), буфер RLT, буфер RW1 и буфер RPE (представленные в мини-наборе Rneasy Mini Kit).

Оборудование/Материалы

Мини-набор RNeasy (Qiagen 74104), cпин-колонки QIAshredder (Qiagen 79656), пипетка серии Pipetman Р1000 (фирма Rainin), пипетка серии Pipetman Р200 (фирма Rainin), 1-100 мкл очищенные наконечники для пипеток (USA Scientific 1126-7810), 1-200 мкл очищенные наконечники для пипеток (USA Scientific 1120-8810), cтерильные пипетки с меткой, калиброванные на вытекание (VWR 14670-147), 55 мл cтерильные резервуары для растворов (VWR 21007-974), 2 контейнера для отходов (один для жидкости, один для наконечников/пипеток), 1,5 мл стерильные микроцентрифужные пробирки (VWR 20170-038), подставка для микроцентрифужных пробирок, постоянный маркер, микроцентрифуга Эппендорфа, модель #5417C.

Процедура

1. Разрыхлить шарик в микроцентрифужных пробирках слабым размораживанием и затем слегка стукнуть пробирку для разрушения шарика.

2. Добавить соответствующий объем буфера RLT (в данном случае используют 600 мкл) воронкой или пипеткой для перемешивания.

3. Перенести образец в пробирку QIAshredder, чтобы гомогенизировать образец. Центрифугировать в течение 2 минут при 14000 об/мин. Отбросить спин-колонку, но оставить пробирку для сбора и ее содержимое.

4. Добавить один объем (600 мкл) 70% этанола к гомогенизированному лизату и смешать пипетированием.

5. Использовать 600 мкл аликвоту образца для RNeasy мини-колонки, помещенной в 2 мл пробирку для сбора. Осторожно заполнить пробирку и центрифугировать в течение 15 с при 14000 об/мин. Отбросить чрезмерное вытекание. Добавить вторую 600 мкл аливкоту клеточного лизата в ту же спин-колонку и повторить. Отбросить чрезмерное вытекание.

6. Повторно использовать пробирку для сбора со стадии 5. Добавить в колонку 700 мкл буфера RW1. Центрифугировать в течение 15 с при 14000 об/мин. Отбросить чрезмерное вытекание и пробирку для сбора.

7. Перенести колонку в новую 2 мл пробирку для сбора и внести пипеткой 500 мкл буфера RPE на колонку. Центрифугировать в течение 15 с при 14000 об/мин, чтобы промыть колонку. Отбросить чрезмерное вытекание, но сохранить пробирку для сбора для стадии 8.

8. Добавить другие 500 мл буфера RPE в колонку. Центрифугировать в течение 2 мин при 14000 об/мин для высушивания мембраны.

9. Перенести колонку в новую 1,5 мл пробирку для сбора. Нанести пипеткой 10 мкл исходного раствора РНК непосредственно на мембрану. Центрифугировать в течение 1 мин при 14000 об/мин, чтобы элюировать РНК. Добавить второй объем из 5 мкл исходного раствора РНК непосредственно на мембрану и вращать в течение дополнительной минуты. Хранить конечное разбавление РНК при -80°С.

Приготовление и гибридизация зонда РНК

Реагент

ТМ биотиновая система/Ovation TM Biotin System v 1,0 для подготовок зонда.

Протокол

Руководство для пользователя (Cat#D01002, версия 10/27/04, NuGEN Technologies, Inc). Экспериментальная процедура применена, как описано в руководстве для пользователя. Приготовление всех зондов начинается с 50 нг общей РНК.

Процедуры для генного чипа

Генные чипы, использованные для теста, представляют собой мини-набор Canine Genome 2/0 Array (компания Affimetrix). Данный генный чип содержит 44000 пробных квадратиков. Подробная информация о последовательности для числа идентификаций по каждому cпецифичному зонду доступна от изготовителя.

Анализ экспрессии гена

Нормализацию проводили, используя MAS 5, представленную в GCOS Affimetrix программном обеспечении (версия 1,2). Уровни экспрессии для анализируемых генов указаны в таблицах, включенных в примеры ниже, где стрелка с направленной вверх головкой относится к “восходящей регуляции” или повышению и стрелка с направленной вниз головкой относится к “нисходящей регуляции” в экспрессии гена. Аналогично, в некоторых таблицах стрелки с направленной головкой вверх или вниз также указывают на повышение или снижение в активности некоторых белков, включенных в определенные пути обмена, и объяснены иным образом.

Отбор списка генов

15411 генов выбрано для дальнейшего анализа, основанного на их существующих обозначениях, по меньшей мере, в 9 из 18 образцов.

Результаты анализа генного чипа указывают, что 1088 генов по-разному экспрессированы в зависимости от контрольных групп и групп гериатрических животных, получавших диету. Уровни экспрессии данных 1088 генов являются статистически значимыми для особей, сгруппированных диетой, при этом используется параметрический тест, где, как предполагается, расхождения не равны (t-критерий Велча/Уэлча/Welch). Отклонение р-величины равно 0,01 без многократной коррекции тестирования. При таких критериях отбора только примерно в 154 генах, как ожидалось, могла бы вероятно произойти рестрикция. Геномные данные обсуждены подробно ниже.

Результаты

Действие корма на гены, связанные с болью и воспалением

На основе анализа данных по генному чипу, при уровне Р<0,01, 1088 генов изменились по сравнению с контрольными уровнями экспрессии (10 регулированы восходящим образом и остаток нисходящим). При уровне Р<0,001 данные показывают, что 35 генов регулированы нисходящим образом в биглях, получавших корм для гериатрических особей. Девять из данных генов, регулируемых нисходящим образом, идентифицированы как относящиеся к воспалительному и болевому ответу. Нисходящая регуляция данных генов может быть прогнозирована для получения облегчения боли, защиты хряща (меньшее поражение) или снижения воспалительных реакций. Композиции, раскрытые в настоящем описании, могут быть частью терапевтических схем, чтобы лечить животных, страдающих от боли и/или воспалительных заболеваний. Данные гены и их предполагаемая роль в воспалении и болевом ответе представлены ниже в таблицах 5 и 6.

Действие корма на гены, включенные в здоровье сердца и коагуляцию крови.

При уровне Р<0,001 и Р<0,01, 12 генов идентифицированы как связанные со здоровьем сердца через регуляцию эйкозаноидного метаболизма и пути коагуляции крови. Гены ответственны за коагуляцию крови через активацию и агрегацию тромбоцитов. Нисходящая регуляция данных генов через корм может предотвращать неуместное свертывание крови, которое может привести к сердечным или мозговым соответствующим нарушениям. Композиции по данному изобретению могут быть частью терапевтических схем, чтобы лечить животных, страдающих от расстройств или заболеваний крови, сердца или головного мозга. Данные гены и их предполагаемая роль in vivo представлены ниже в таблицах 7 и 8.

Действие корма на гены, включенные в мышечную и костную регуляцию

Десять генов с нисходящей регуляцией идентифицированы как связанные со строением организма через кости и мышцы. Гены берегут мышцы и кости от разрушения снижением образования оксида азота и глюкокортикоидной деградации мышцы. Нисходящая регуляция данных генов приводит к снижению образования оксида азота и глюкокортикоидного ответа. Композиции по данному изобретению могут быть частью терапевтических схем, чтобы лечить животных, страдающих от расстройств или заболеваний, связанных с мышцами или костями. Данные гены и их предполагаемая роль в регуляции мышц и костей представлены ниже в таблицах 9 и 10.

Действие корма на гены, включенные в поражение/защиту ДНК и нейральную функцию

Идентифицированы одиннадцать генов, которые связаны с поражением/защитой ДНК и нейральной функцией. В отношении последней, идентифицированные гены важны для восстановительного потенцирования; полагают, что они играют потенциальную роль в усилении двигательного навыка. Интересно, из данных генов, все регулированы нисходящим образом, за исключением гамма 2, А рецептора гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК/GABA), который регулирован нисходящим образом. Композиции, раскрытые в настоящем описании, могут быть частью терапевтической схемы, чтобы лечить животных, страдающих от расстройств или заболеваний, связанных с или относящихся к поражению/защите ДНК и нейральной функции. Идентификация данных генов и их предполагаемая роль в поражении/защите ДНК и нейральной функции представлены ниже в таблицах 11 и 12.

Действие корма на гены, включенные в метаболизм глюкозы

Двадцать четыре гена, связанных с метаболизмом глюкозы, регулированы нисходящим образом в животных, получавших диетический корм для гериатрической стадии, и это позволит предположить, что данные животные используют жир (окисленнный жир) вместо глюкозы в качестве источника питания. Композиции, раскрытые в настоящем описании, могут быть частью терапевтической схемы для животных с диабетом и/или для предотвращения или лечения ожирения в животном. Данные гены с нисходящим регулированием идентифицированы и их предполагаемая роль в метаболизме глюкозы подробно представлены ниже в таблицах 13 и 14.

1. Способ улучшения качества жизни половозрелого и гериатрического животного, включающий кормление животного композицией, содержащей питательные элементы в основном в соответствии с композицией, выбираемой из следующих композиций А, В и С, определенных из расчета на сухую массу:

2. Способ по п.1, где способ включает кормление животного композицией в количестве, эффективном для повышения качества жизни животного, где повышенное качество жизни подтверждено улучшением одной или нескольких характеристик, выбираемых из группы, состоящей из настороженности, жизнеспособности, защиты хряща, поддержания мышечной массы и качества кожи и шерсти.

3. Способ по п.1, где способ включает кормление животного композицией в количестве, эффективном для повышения настороженности.

4. Способ по п.1, где способ включает кормление животного композицией в количестве, эффективном для повышения жизнеспособности.

5. Способ по п.1, где способ включает кормление животного композицией в количестве, эффективном для защиты хряща.

6. Способ по п.1, где способ включает кормление животного композицией в количестве, эффективном для поддержания мышечной массы.

7. Способ по п.1, где способ включает кормление животного композицией в количестве, эффективном для улучшения качества кожи и шерсти.

8. Способ по п.1, в котором животное представляет собой кошку или собаку.

9. Способ по п.1, где способ включает кормление животного композицией в количестве, эффективном для повышения качества жизни животного, в котором повышенное качество жизни подтверждено улучшением в одном или нескольких биологических путях обмена, выбираемых из группы, состоящей из свертывания крови, активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакций, разрушения хряща и болевого ответа, повреждения и путей репарации ДНК, нейральной функции, синтеза и деградации гликогена, гликолиза, глюконеогенеза, пентозного фосфатного пути и электронного транспорта.

10. Способ по п.1, где способ включает кормление животного композицией в количестве, эффективном для повышения качества жизни животного, в котором повышенное качество жизни подтверждено изменением в экспрессии одного или нескольких генов, которые кодируют белки, связанные с или относящиеся к биологическим путям обмена, выбираемым из группы, состоящей из свертывания крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакций, разрушения хряща и болевого ответа, повреждения и путей репарации ДНК, нейральной функции, синтеза и деградации гликогена, гликолиза, глюконеогенеза, пентозного фосфатного пути и электронного транспорта.

11. Способ по п.1, в котором животное страдает от расстройства или заболевания, связанного с или относящегося к биологическому пути обмена, выбираемому из группы, состоящей из свертывания крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакций, разрушения хряща и болевого ответа, повреждения и путей репарации ДНК, нейральной функции, синтеза и деградации гликогена, гликолиза, глюконеогенеза, пентозного фосфатного пути и электронного транспорта.

12. Способ по п.1, в котором животное страдает от расстройства или заболевания, связанного с или относящегося к биологическому пути обмена, выбираемому из группы, состоящей из свертывания крови и активации и агрегации тромбоцитов, целостности костей и мышц, воспалительных реакций, разрушения хряща и болевого ответа, повреждения и путей репарации ДНК, нейральной функции, синтеза и деградации гликогена, гликолиза, глюконеогенеза, пентозного фосфатного пути и электронного транспорта, включающий модулирование уровня экспрессии одного или нескольких генов, перечисленных в таблицах 5-14, в упомянутом животном, чтобы имитировать образец экспрессии, наблюдаемой in vivo после введения композиции корма для гериатрического домашнего животного.