Производные 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов, способы их получения и их терапевтическое применение
Владельцы патента RU 2283838:
СОСЬЕТЕ ДЕ КОНСЕЙ ДЕ РЕШЕРШ Э Д
Изобретение относится к новым производным 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов, структурные формулы которых представлены в формуле изобретения, обладающих аффинностью (сродством) и селективностью в отношении рецепторов соматостатина и к их применению в качестве лекарственных средств, предназначенных для лечения патологических состояний или заболеваний, в которые вовлечен один или несколько рецептор(ов) соматостатина, например, такие как акромегалия, гипофизарная аденома, эндокринные гастроэнтеропанкреатические опухоли, включая карциноидный синдром, желудочно-кишечные кровотечения и т.д. 2 н. и 4 з.п. ф-лы.
Предметом настоящей заявки являются новые производные 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов и способы их получения. Данные продукты имеют хорошую аффинность с некоторыми подтипами рецепторов соматостатина и поэтому обладают полезными фармакологическими свойствами. Настоящее изобретение также касается указанных продуктов в качестве лекарственных средств, содержащих их фармацевтических композиций и их применения для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологических состояний или заболеваний, в которые вовлечен один (или более) рецептор(ов) соматостатина.
Соматостатин (SST) представляет собой циклический тетрадекапептид, который был впервые выделен из гипоталамуса как вещество, ингибирующее гормон роста (Brazeau P. et al., Science, 1973, 179, 77-79). Он также действует как нейротрансмиттер в мозге (Reisine T. et al., Neuroscience, 1995, 777-790; Reisine T. et al., Endocrinology, 1995, 16, 427-442). Молекулярное клонирование позволило выяснить, что биоактивность соматостатина зависит непосредственно от семейства пяти рецепторов, связанных с мембраной.
Гетерогенность биологических функций соматостатина вызвала проведение исследований, направленных на идентификацию связей между структурой и активностью аналогов пептида, влияющих на рецепторы соматостатина, что привело к открытию 5 подтипов рецепторов (Yamada et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 89, 251-255, 1992; Raynor, K. et al., Mol. Pharmacol., 44, 385-392, 1993). Функциональные роли таких рецепторов в настоящее время активно изучаются. Аффинность с различными подтипами рецепторов соматостатина связана с лечением следующих нарушений/заболеваний. Активация подтипов 2 и 5 связана с подавлением гормона роста (GH) и, более конкретно, с подавлением аденом, секретирующих GH (акромегалия), и аденом, секретирующих гормон TSH (тиреостимулирующий гормон). Активация подтипа 2, но не подтипа 5, связана с лечением аденом, секретирующих пролактин. Другими показаниями, связанными с активацией подтипов рецепторов соматостатина, являются рецидив стеноза, ингибирование секреций инсулина и/или глюкагона и, в частности, сахарный диабет, гиперлипемия, невосприимчивость к инсулину, синдром Х, ангиопатия, пролиферативная ретинопатия, феномен «утренней зари» и нефропатия; ингибирование секреции желудочной кислоты и, в частности, пептических язв, энтерокожных и панкреатокожных фистул, синдрома раздраженного кишечника, демпинг-синдрома, синдрома водной диареи, диареи, связанной со СПИД, диареи, вызванной химиотерапией, острого или хронического панкреатита и секреторных желудочно-кишечных опухолей; лечение рака, такого как гепата; ингибирование ангиогенеза; лечение воспалительных нарушений, таких как артрит; хроническое отторжение аллотрансплантатов; ангиопластика; предотвращение кровотечения из трансплантированных сосудов и желудочно-кишечного кровотечения. Агонисты соматостатина также могут быть использованы для снижения веса пациента.
Среди патологических нарушений, связанных с соматостатином (Moreau J.P. et al., Life Sciences, 1987, 40, 419; Harris A.G. et al., The European Journal of Medicine, 1993, 2, 97-105), могут быть, например, приведены: акромегалия, гипофизарные аденомы, болезнь Кушинга, гонадотрофиномы и пролактиномы, катаболическое побочное действие глюкокортикоидов, инсулинзависимый диабет, диабетическая ретинопатия, диабетическая нефропатия, гипертироидизм, гигантизм, эндокринные гастроэнтеропанкреатические опухоли, включая карциноидный синдром, випому, инсулиному, незидиобластому, гиперинсулинемию, глюкагоному, гастриному и синдром Золлингера-Эллисона, GRFома, а также острое кровотечение из эзофагеальных вен, гастроэзофагеальный рефлюкс, гастродуоденальный рефлюкс, панкреатит, энтерокожные и панкреатические фистулы, а также диарея, рефракторная диарея синдрома приобретенного иммунодефицита, хроническая секреторная диарея, диарея, связанная с синдромом раздраженного кишечника, нарушения, связанные с гастринвысвобождающим пептидом, вторичные патологии с кишечными имплантатами, портальная гипертензия, а также кровотечения из вен у пациентов с циррозом, желудочно-кишечные кровотечения, кровотечения при гастродуоденальной язве, болезнь Крона, системный склероз, демпинг-синдром, синдром тонкой кишки, гипотензия, склеродермия и медуллярная тиреоидная карцинома, заболевания, связанные с клеточной гиперпролиферацией, такие как различные виды рака, в частности рак молочной железы, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, а также рак поджелудочной железы и колоректальный рак, фиброз, в частности фиброз почек, фиброз печени, фиброз легких, фиброз кожи, а также фиброз центральной нервной системы, фиброз носа и фиброз, вызываемый химиотерапией, а также другие терапевтические области, такие как, например, лечение цефалии, включая цефалию, вызванную гипофизарными опухолями, боли, приступов паники, химиотерапии, рубцевания ран, почечной недостаточности, вызванной замедленным развитием, ожирения и замедленного развития, связанного с ожирением, замедленного развития матки, дисплазии скелета, синдрома Нунана, синдрома апноэ во сне, болезни Грейвса, поликистозного заболевания яичников, панкреатических ложных кист и асцитов, лейкемии, менингиомы, раковой кахексии, ингибирования Н-привратников, псориаза, а также болезни Альцгеймера. Также может быть приведен остеопороз.
Было обнаружено, что описываемые ниже соединения общей формулы (I) проявляют аффинность и селективность по отношению к рецепторам соматостатина. Поскольку соматостатин и его пептидные аналоги зачастую имеют плохую биодоступность при введении пероральным способом и низкую селективность (Robinson, C., Drugs of the Future, 1994, 19, 992; Reubi, J.C. et al., TIPS, 1995, 16, 110), указанные соединения, непептидные агонисты или антагонисты соматостатина, могут успешно применяться для лечения перечисленных выше патологических состояний или заболеваний, в которые вовлечен один (или более) рецептор(ов) соматостатина. Указанные соединения предпочтительно могут быть использованы для лечения акромегалии, гипофизарных аденом или эндокринных гастроэнтеропанкреатических опухолей, включая карциноидный синдром.
Соединения согласно настоящему изобретению соответствуют общей формуле (I)
в рацемической, энантиомерной форме или всех сочетаниях указанных форм, в которых:
R1 представляет амино(С2-С7)алкильный,
аминоалкиларилалкильный, аминоалкилциклоалкилалкильный,
(С1-С15)алкильный, (С3-С7)циклоалкильный,
(С1-С6)алкил(С3-С6)циклоалкильный, (С3-С6)циклоалкилалкильный,
циклогексенилалкильный, алкенильный, алкинильный,
карбоциклический арильный радикал, содержащий по меньшей мере два кольца, из которых по меньшей мере одно не является ароматическим, карбоциклический или гетероциклический аралкильный радикал, необязательно замещенный по арильной группе, бис-арилалкильный, алкоксиалкильный, фуранилалкильный или тетрагидрофуранилалкильный, диалкиламиноалкильный, N-ацетоамидоалкильный, цианоалкильный, алкилтиоалкильный, арилгидроксиалкильный, аралкоксиалкильный, морфолиноалкильный, пирролидиноалкильный, пиперидиноалкильный, N-алкилпирролидиноалкильный, N-алкипиперазинилалкильный или оксипирролидиноалкильный радикал,
или R1 представляет один из радикалов, представленных ниже:
или R1 также представляет радикал -С(R11)(R12)-CO-R10;
R2 представляет необязательно замещенный карбоциклический или гетероциклический арильный радикал,
или R2 представляет один из представленных ниже радикалов:
R3 представляет алкильный, адамантильный, необязательно замещенный карбоциклический или гетероциклический арильный радикал, карбоциклический или гетероциклический аралкил, необязательно замещенный по арильной группе,
или R3 представляет один из радикалов, представленных ниже:
или R3 также представляет радикал -CO-R5;
R4 представляет Н, алкил, карбоциклический или гетероциклический аралкил, необязательно расположенный по арильному радикалу;
или дополнительно радикал
представляет радикал общей формулы
в которой i равно целому числу 1-3:
R5 представляет радикал N(R6)(R7);
R6 представляет (С1-С16)алкильный, циклоалкилалкильный, гидроксиалкильный, арилоксиалкильный радикал, карбоциклический или гетероциклический аралкильный радикал, необязательно замещенный по арильной группе, аралкоксиалкильный, арилгидроксиалкильный, алкоксиалкильный, алкилтиоалкильный, алкенильный, алкинильный, циклогексенильный, циклогексенилалкильный, алкилтиогидроксиалкильный, цианоалкильный, N-ацетамидоалкильный радикал, бис-арилалкильный радикал, необязательно замещенный по арильным группам, диарилалкильный радикал, необязательно замещенный по арильным группам, морфолиноалкильный, пирролидиноалкильный, пиперидиноалкильный, N-алкилпирролидиноалкильный, оксопирролидиноалкильный, тетрагидрофуранилалкильный, N-бензилпирролидиноалкильный, N-алкилпиперазинилалкильный, N-бензилпиперазинилалкильный, N-бензилпиперидинилалкильный или N-алкоксикарбонилпиперидинильный радикал,
или R6 представляет (С3-С8)циклоалкильный радикал, необязательно замещенный радикалом, выбранным из группы, включающей гидроксирадикал и алкильный радикал,
или R6 представляет радикалы, представленные ниже:
R7 представляет Н или алкильный, гидроксиалкильный, моно- или диаминоалкильный или аралкильный радикал;
или радикал -N(R6)(R7) представляет радикал следующей общей формулы:
в которой:
R8 представляет Н, алкил, гидроксиалкил, необязательно замещенный карбоциклический или гетероциклический арил, аралкил, необязательно замещенный по арильной группе, алкенил, алкоксиалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, бис-арилалкил, пиперидинил, пирролидинил, гидроксил, арилалкенил,
или R8 представляет -Х-(СН2)b-R9;
R9 представляет Н или алкильный, алкокси, арилокси, необязательно замещенный карбоциклический или гетероциклический арильный, морфолинильный, пирролидинильный, алкиламино или N,N'-(алкил)(арил)аминорадикал;
Х представляет СО, СО-NH или SO2;
Y представляет СН или N;
а равно 1 или 2;
b равно целому числу от 0 до 6;
или радикал N(R6)(R7) представляет радикал общей формулы
в которой:
Z представляет СН, О или S;
с равно целому числу от 0 до 4;
или радикал N(R6)(R7) представляет один из радикалов, представленных ниже:
R10 представляет амино(С2-С7)алкиламино,
((аминоалкил)арил)алкиламино,
((аминоалкил)циклоалкил)алкиламино, пиперазинильный,
гомопиперазинильный радикал,
или R10 представляет радикал, представленный ниже:
R11 представляет Н;
R12 представляет Н или алкильный, (С3-С7)циклоалкильный, необязательно замещенный карбоциклический или гетероциклический аралкильный, пропаргильный, аллильный, гидроксиалкильный, алкилтиоалкильный, арилалкилалкоксиалкильный, арилалкилтиоалкоксиалкильный радикал;
или соединения данного изобретения представляют собой соли соединений общей формулы (I).
Если соединения общей формулы (I) включают радикалы R1, R2, R3, R4, R5, R6, R8, R9 или R10, содержащие замещенный арильный радикал или аралкил, замещенный по арильной группе, то указанные арильные или аралкильные радикалы такие, что:
- для R1: если арильная группа замещена, то она может быть замещена 1-5 (но не по связи, соединяющей ее с оставшейся частью молекулы) радикалами, независимо выбранными из группы, включающей атом галогена и алкильный, алкокси, алкилтио, галоалкильный, галоалкокси, арильный, аралкоксирадикал или радикал SO2NH2. При необходимости два заместителя могут быть связаны вместе, образуя кольцо, например, представляя вместе метилендиокси или пропиленовый радикал;
- для R2: если арильная группа замещена, то она может быть замещена 1-5 раз (но не по связи, соединяющей ее с оставшейся частью молекулы). Арильный радикал может быть замещен радикалами, независимо выбранными из группы, включающей атом галогена и алкильный, алкокси, алкилтио, галоалкильный, алкенильный, галоалкокси, нитро, циано, азидо, SO2N, моно- или диалкиламино, аминоалкильный или арильный радикал. При необходимости два заместителя могут быть связаны вместе, образуя кольцо, например, представляя вместе метилендиокси, этилендиокси или пропиленовый радикал;
- для R3: если арильная группа или группы (получаемые из арильного или аралкильного радикала) замещены, то они могут быть, в зависимости от назначения, замещены 1-5 раз (но не по связи, соединяющей их с оставшейся частью молекулы). Карбоциклические арильные или аралкильные радикалы могут быть замещены по арильному кольцу 1-5 радикалами, независимо выбранными из группы, включающей атом галогена и алкильный, гидрокси, алкокси, галоалкильный, галоалкокси, нитро, циано, азидо, моно- или диалкиламино, пирролидинильный, морфолинильный, аралкокси или арильный радикал. При необходимости два заместителя могут быть связаны вместе, образуя кольцо, например, представляя вместе алкилендиоксирадикал, содержащий 1-3 атома углерода. Гетероциклические арильные или аралкильные радикалы R3 могут быть замещены 1-2 радикалами по кольцу, независимо выбранными из группы, включающей атом галогена и алкильный радикал;
- для R4: если арильная группа замещена, то она может быть замещена 1-5 раз (но не по связи, соединяющей ее с оставшейся частью молекулы). Арильный радикал может быть замещен радикалами, независимо выбранными из группы, включающей атом галогена и алкильный или алкоксирадикал;
- для R6: если арильная группа или группы замещены, то они могут быть замещены 1-5 раз (но не по связи, соединяющей их с оставшейся частью молекулы). Необязательные заместители по арильным группам независимо выбраны из группы, включающей атом галогена и алкильный, алкокси, алкилтио, галоалкильный, галоалкокси, арильный, арилоксирадикал или радикал SO2NH2;
- для R8: если арильная группа или группы замещены, то они могут быть замещены 1-5 раз (но не по связи, соединяющей их с оставшейся частью молекулы). Необязательные заместители по арильным группам независимо выбраны из группы, включающей атом галогена и алкильный, галоалкильный, алкокси, гидрокси, циано, нитро или алкилтиорадикал;
- для R9: если карбоциклический или гетероциклический арильный радикал замещен, то он может быть замещен 1-5 раз (но не по связи, соединяющей его с оставшейся частью молекулы). Необязательные заместители по арильной группе независимо выбраны из группы, включающей атом галогена и алкильный, галоалкильный, алкокси, галоалкокси, алкилтио, карбоциклический арильный, гидрокси, циано или нитрорадикал;
- для R12: если карбоциклический или гетероциклический арильный радикал замещен, то он может быть замещен 1-5 раз (но не по связи, соединяющей его с оставшейся частью молекулы). Необязательные заместители по арильной группе независимо выбраны из группы, включающей атом галогена и алкильный, алкокси, карбоциклический арильный, аралкокси, гидрокси, циано или нитрорадикал.
Под алкилом, если не указано иначе, подразумевается линейный или разветвленный алкильный радикал, содержащий 1-6 атомов углерода. Под циклоалкилом, если не указано иначе, подразумевается моноциклическая углеродная система, содержащая 3-7 атомов углерода. Под алкенилом, если не указано иначе, подразумевается линейный или разветвленный алкильный радикал, содержащий 1-6 атомов углерода и имеющий по меньшей мере одну ненасыщенность (двойную связь). Под алкинилом, если не указано иначе, подразумевается линейный или разветвленный алкильный радикал, содержащий 1-6 атомов углерода и имеющий по меньшей мере одну двойную ненасыщенность (тройную связь). Под карбоциклическим или гетероциклическим арилом подразумевается карбоциклическая или гетероциклическая система, содержащая по меньшей мере одно ароматическое кольцо, при этом систему называют гетероциклической, если по меньшей мере одно из составляющих ее колец содержит гетероатом (О, N или S). Под галоалкилом подразумевается алкильный радикал, в котором по меньшей мере один из атомов водорода (и необязательно все атомы) замещен атомом галогена.
Под алкилтио, алкокси, галоалкильным, галоалкокси, аминоалкильным, алкенильным, алкинильным и аралкильным радикалами подразумеваются, соответственно, алкилтио, алкокси, галоалкильный, галоалкокси, аминоалкильный, алкенильный, алкинильный и аралкильный радикалы, алкильный радикал которых имеет вышеуказанное значение.
Под линейным или разветвленным алкилом, имеющем 1-6 атомов углерода, подразумеваются, в частности, метильный, этильный, пропильный, изопропильный, бутильный, изобутильный, втор-бутильный и трет-бутильный, пентильный, неопентильный, изопентильный, гексильный, изогексильный радикалы. Под циклоалкилом подразумеваются, в частности, циклопропанильный, циклобутанильный, циклопентанильный, циклогексильный и циклогептанильный радикалы. Под карбоциклическим или гетероциклическим арилом подразумеваются, в частности, фенильный, нафтильный, пиридинильный, фуранильный, тиофенильный, инданильный, индолильный, имидазолильный, бензофуранильный, бензотиофенильный, фталимидильный радикалы. Под карбоциклическим или гетероциклическим аралкилом подразумеваются, в частности, бензильный, фенилэтильный, фенилпропильный, фенилбутильный, индолилалкильный, фталимидоалкильный, нафтилалкильный, фуранилалкильный, тиофенилалкильный, бензотиофенилалкильный, пиридинилалкильный и имидазолилалкильный радикалы.
Исходящая от химической структуры стрелка показывает точку присоединения. Например:
представляет бензильный радикал.
Соединения общей формулы (I) предпочтительно такие, что:
R1 представляет -C(R11)(R12)-CO-R10 или один из следующих радикалов:
R2 представляет один из следующих радикалов:
R3 представляет один из следующих радикалов:
R4 представляет Н, алкил, карбоциклический или гетероциклический аралкил, необязательно замещенный по арильному радикалу;
или в таком случае радикал
представляет радикал общей формулы
в которой i равно целому числу от 1 до 3;
R5 представляет один из следующих радикалов:
R10 представляет один из следующих радикалов:
R11 представляет Н;
R12 представляет один из следующих радикалов:
что касается R4, следует отметить, что когда арильная группа является замещенной, она может быть замещена 1-5 (но не по связи, соединяющей ее с оставшейся частью молекулы) радикалами, независимо выбранными из группы, включающей атом галогена и алкильный или алкоксирадикал.
В предпочтительных соединениях данного изобретения R4 представляет Н.
Более предпочтительно, соединения по данному изобретению соответствуют общей формуле (II)
в которой:
- или R1 представляет один из приведенных ниже радикалов
R2 представляет один из приведенных ниже радикалов
R3 представляет один из приведенных ниже радикалов
и R4 представляет Н;
- или R1 также представляет один из приведенных ниже радикалов
R2 представляет один из приведенных ниже радикалов
R3 представляет СОR5,
R4 представляет Н,
и R5 представляет один из приведенных ниже радикалов
- или, наконец, R1 представляет радикал -C(R11)(R12)-CO-R10, в котором
R10 представляет радикал
R11 представляет Н,
и R12 представляет радикал
R2 представляет радикал
R3 представляет радикал
и R4 представляет Н.
Данное изобретение также относится к соединению, соответствующему:
- формуле
или соли одного из указанных соединений.
Еще более предпочтительно данное изобретение относится к соединению, соответствующему формуле
или соли одного из указанных выше соединений.
Иными словами, предпочтительными являются соединения, описанные в примерах 1642-1654, 1656-1680, 2468-2502, 2525-2550, 2556-2582, 2605-2611, 2614, 2623-2630, 2632-2646, 2670-2678, 2680-2694, 2702-2710, 2712-2726 и 2827-2836, или соль одного из указанных соединений. Еще более предпочтительными являются соединения примеров 2827-2836 или их соли.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способам получения на твердом носителе описанных выше соединений общей формулы (I) (данное положение также относится к соответствующим соединениям общей формулы (II)).
Данного изобретения соединения общей формулы (I)a
в которой:
R1 представляет радикал -CH2-A1-NH2, в котором A1 представляет -(CH2)n-, -(CH2)n-O-(CH2)p-, аралкиленовый или циклоалкилалкиленовый радикал, n и р равны целым числам от 1 до 6;
R2 и R4 представляют такие же радикалы, как и в общей формуле (I);
и R3 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I), за исключением радикалов -CO-R5;
могут быть получены, например, в соответствии со способом, заключающимся в том, что включает следующие последовательные стадии:
1) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, п-нитрофенилкарбонатной смолы Ванга (Wang) большим избытком симметричного диамина R1-NH2;
2) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, смолы, выделенной после стадии (1), ароматическим изотиоцианатом общей формулы R2-N=C=S, в которой радикал R2 имеет такие же значения, как и в общей формуле (I)a;
3) обработку в апротонном растворителе, таком как диоксан или диметилформамид, смолы, полученной на стадии (2), соединением общей формулы (III)
в которой радикалы R3 и R4 имеют такие же значения, как и в общей формуле (I)a;
4) расщепление смолы в кислых условиях;
5) обработку в основных условиях продукта, полученного после стадии (4).
Получение п-нитрофенилкарбонатной смолы Ванга описано ниже в разделе, озаглавленном «ПОЛУЧЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ».
Для того чтобы иметь большой избыток на стадии (1) описанного выше способа, предпочтительно используют порядка 10-20 эквивалентов диамина R1-NH2. Стадию (1) предпочтительно осуществляют при температуре окружающей среды. Стадию (3) осуществляют при температуре выше температуры окружающей среды, например, при температуре, составляющей диапазон 60-90°, используя порядка 2-5 эквивалентов соединения общей формулы (III). На стадии (4) кислые условия, например, могут быть созданы при использовании 50% смеси дихлорметан/трифторуксусная кислота, при этом указанные кислые условия предпочтительно поддерживают в течение порядка 1-2 часов. На стадии (5) основные условия, например, могут быть созданы при использовании насыщенного раствора гидрокарбоната натрия или при элюировании с картриджа из основной окиси алюминия.
В соответствии с одним из вариантов осуществления данного изобретения соединения общей формулы (I)b
в которой:
R1 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I), за исключением радикалов типа -CH2-A1-NH2, в котором A1 представляет -(CH2)n-, -(CH2)n-O-(CH2)p-, аралкиленовый или циклоалкилалкиленовый радикал, n и р равны целым числам от 1 до 6, а также за исключением радикалов -C(R11)(R12)-CO-R10);
R2 представляет аминоалкилфенильный радикал;
R3 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I), за исключением радикалов -СО-R5;
и R4 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I);
могут быть, например, получены в соответствии со способом, заключающимся в том, что включает следующие последовательные стадии:
1) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, п-нитрофенилкарбонатной смолы Ванга избытком аминоалкиланилина общей формулы R2-NH2, в которой радикал R2 имеет такие же значения, как и в общей формуле (I)b;
2) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, смолы, выделенной после стадии (1), ароматическим изотиоцианатом общей формулы, R1-N=C=S, в которой радикал R1 имеет такие же значения, как и в общей формуле (I)b;
3) обработку в апротонном растворителе, таком как диоксан или диметилформамид, смолы, полученной на стадии (2), соединением общей формулы (III)
в которой радикалы R3 и R4 имеют такие же значения, как и в общей формуле (I)b;
4) расщепление смолы в кислых условиях;
5) обработку в основных условиях продукта, полученного после стадии (4).
Для того чтобы иметь избыток на стадии (1) описанного выше способа, предпочтительно используют порядка 5-10 эквивалентов аминоалкиланилина. Стадию (1) предпочтительно осуществляют при температуре окружающей среды. Стадию (3) осуществляют при температуре выше температуры окружающей среды, например при температуре, составляющей диапазон 60-90°, используя порядка 2-5 эквивалентов соединения общей формулы (III). На стадии (4) кислые условия, например, могут быть созданы при использовании смеси 50% дихлорметан/трифторуксусная кислота, при этом указанные кислые условия предпочтительно поддерживают в течение порядка 1-2 часов. На стадии (5) основные условия, например, могут быть созданы при использовании насыщенного раствора гидрокарбоната натрия или при элюировании с картриджа из основной окиси алюминия.
В соответствии с другим вариантом осуществления данного изобретения соединения общей формулы (I)с
в которой:
R1 представляет радикал -CH2-A1-NH2, в котором A1 представляет -(CH2)n-, -(CH2)n-O-(CH2)p-, аралкиленовый или циклоалкилалкиленовый радикал, n и р равны целым числам от 1 до 6;
R2 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I);
R3 представляет радикал -СО-R5;
и R4 и R5 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I);
могут быть получены в соответствии со способом, заключающимся в том, что включает следующие последовательные стадии:
1) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, п-нитрофенилкарбонатной смолы Ванга большим избытком симметричного диамина общей формулы R1-NH2, в которой радикал R1 имеет такие же значения, как и в общей формуле (I)с;
2) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, смолы, выделенной после стадии (1), ароматическим изотиоцианатом общей формулы, R2-N=C=S, в которой радикал R2 имеет такие же значения, как и в общей формуле (I)с;
3) обработку в апротонном растворителе, таком как диоксан или диметилформамид, смолы, полученной на стадии (2), кислотой общей формулы (IV)
в которой радикал R4 имеет такие же значения, как и в общей формуле (I)с;
4) пептидное связывание;
5) расщепление смолы в кислых условиях;
6) обработку в основных условиях продукта, полученного после стадии (5).
Для того чтобы иметь большой избыток на стадии (1) описанного выше способа, предпочтительно используют порядка 10-20 эквивалентов симметричного диамина. Стадию (1) предпочтительно осуществляют при температуре окружающей среды. Стадию (3) осуществляют при температуре выше температуры окружающей среды, например при температуре, составляющей диапазон 60-90°, используя порядка 2-5 эквивалентов кислоты общей формулы (IV). Пептидное связывание на стадии (4) осуществляют, например, в ДМФ, используя связующие агенты, такие как, например, дициклогексилкарбодиимид (DCC),
диизопропилкарбодиимид (DIC),
смесь DIC/N-гидроксибензотриазол (HOBt),
гексафторфосфат бензотриазолилокситрис(диметиламино)фосфония (PyBOP),
гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU) или
тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), и аминированные соединения. Связующие агенты предпочтительно используют в количестве 4-5 эквивалентов, как с аминированными соединениями, и реакция происходит при температуре порядка температуры окружающей среды в течение порядка 1-24 часов. На стадии (5) кислые условия, например, могут быть созданы при использовании 50% смеси дихлорметан/трифторуксусная кислота, при этом указанные кислые условия предпочтительно поддерживают в течение порядка 1-2 часов. На стадии 6) основные условия, например, могут быть созданы при использовании насыщенного раствора гидрокарбоната натрия или при элюировании с картриджа из основной окиси алюминия.
В соответствии со следующим вариантом осуществления данного изобретения соединения общей формулы (I)d
в которой:
R1 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I), за исключением радикалов типа -CH2-A1-NH2, в которых A1 представляет -(CH2)n-, -(CH2)n-O-(CH2)p-, аралкиленовый или циклоалкилалкиленовый радикал, n и р равны целым числам от 1 до 6, а также за исключением радикалов -C(R11)(R12)-CO-R10;
R2 представляет аминоалкилфенильный радикал;
R3 представляет радикал -СО-R5;
и R4 и R5 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I);
могут быть получены в соответствии со способом, заключающимся в том, что включает следующие последовательные стадии:
1) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, п-нитрофенилкарбонатной смолы Ванга избытком аминоалкиланилина общей формулы R2-NH2, в которой радикал R2 имеет такое же значение, как и в общей формуле (I)d;
2) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, смолы, выделенной после стадии (1), изотиоцианатом общей формулы R1-N=C=S, в которой радикал R1 имеет такое же значение, как и в общей формуле (I)d;
3) обработку в апротонном растворителе, таком как диоксан или диметилформамид, смолы, полученной на стадии (2), кислотой общей формулы (IV)
в которой радикал R4 имеет такое же значение, как и в общей формуле (I)d;
4) пептидное связывание;
5) расщепление смолы в кислых условиях;
6) обработку в основных условиях продукта, полученного после стадии (5).
Для того чтобы иметь избыток на стадии (1) описанного выше способа, предпочтительно используют порядка 5-10 эквивалентов аминоалкиланилина. Стадию (1) предпочтительно осуществляют при температуре окружающей среды. Стадию (3) осуществляют при температуре выше температуры окружающей среды, например при температуре, составляющей диапазон 60-90°, используя порядка 2-5 эквивалентов кислоты общей формулы (IV). Пептидное связывание на стадии (4) осуществляют, например, в ДМФ, используя связующие агенты, такие как, например,
дициклогексилкарбодиимид (DCC), диизопропилкарбодиимид (DIC),
смесь DIC/N-гидроксибензотриазол (HOBt),
гексафторфосфат бензотриазолилокситрис(диметиламино)фосфония (PyBOP),
гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU) или
тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), и аминированные соединения. Связующие агенты предпочтительно используют в количестве 4-5 эквивалентов, как с аминированными соединениями, и реакция происходит при температуре порядка температуры окружающей среды в течение порядка 1-24 часов. На стадии (5) кислые условия, например, могут быть созданы при использовании 50% смеси дихлорметан/трифторуксусная кислота, при этом указанные кислые условия предпочтительно поддерживают в течение порядка 1-2 часов. На стадии 6) основные условия, например, могут быть созданы при использовании насыщенного раствора гидрокарбоната натрия или при элюировании с картриджа из основной окиси алюминия.
В соответствии с очередным вариантом соединения общей формулы (I)е
в которой:
R1 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I), за исключением радикалов типа -CH2-A1-NH2, в которых A1 представляет -(CH2)n-, -(CH2)n-O-(CH2)p-, аралкиленовый или циклоалкилалкиленовый радикал, n и р равны целым числам от 1 до 6, а также за исключением радикалов -C(R11)(R12)-CO-R10;
R2 представляет такие же радикалы, как и в общей формуле (I);
R3 представляет радикал -СО-R5;
R4 представляет Н;
R5 представляет радикал -NH-CH2-A1-NH2, в котором А1 представляет линейный или разветвленный алкиленовый радикал, содержащий 1-6 атомов углерода, -(CH2)n-O-(CH2)p-, аралкилен или циклоалкилалкилен, n и р равны целым числам от 1 до 6, или R5 также представляет радикал N(R6)(R7), соответствующий следующей общей формуле:
в которой:
R8 представляет Н;
Y представляет N;
и n равно 1 или 2;
могут быть получены способом, заключающимся в том, что включает следующие последовательные стадии:
1) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, п-нитрофенилкарбонатной смолы Ванга большим избытком симметричного диамина общей формулы R5-H;
2) пептидное связывание с кислотой общей формулы (IV) смолы, полученной на стадии (1)
в которой радикал R4 имеет такое же значение, как и в общей формуле (I)е;
3) взаимодействие первичного амина общей формулы R1-NH2 c изотиоцианатом общей формулы R2-NCS в растворителе, таком как диметилформамид или диоксан, при этом R1 и R2 имеют такие же значения, как и в общей формуле (I)e;
4) добавление тиомочевины, полученной на стадии (3), к смоле, полученной на стадии (2), и нагревание смеси;
5) расщепление смолы в кислых условиях;
6) обработку в основных условиях продукта, полученного после стадии (5).
Для того чтобы иметь большой избыток на стадии (1) описанного выше способа, предпочтительно используют порядка 10-20 эквивалентов диамина R5-H. Стадию (1) предпочтительно осуществляют при температуре окружающей среды. Пептидное связывание на стадии (2) осуществляют в ДМФ, используя связующий агент, такой как, например, смесь DIC/N-гидроксибензотриазол (HOBt). Взаимодействие на стадии (3) предпочтительно осуществляют в растворителе, таком как диметилформамид или диоксан. Во время добавления на стадии (4) предпочтительно используют 2-5 эквивалентов тиомочевины на эквивалент смолы; также предпочтительно осуществляют нагревание при температуре выше температуры окружающей среды, например при температуре от 40 до 100° (в частности, при температуре приблизительно 80°), в течение 2-24 часов. На стадии (5) кислые условия, например, могут быть созданы при использовании 50% смеси дихлорметан/трифторуксусная кислота, при этом указанные кислые условия предпочтительно поддерживают в течение порядка 1-2 часов. На стадии 6) основные условия, например, могут быть созданы при использовании насыщенного раствора гидрокарбоната натрия или при элюировании с картриджа из основной окиси алюминия.
В соответствии с дальнейшим вариантом соединения общей формулы (I)f
в которой:
R1 представляет радикал -C(R11)(R12)-CO-R10;
R2, R3 и R4 представляют такие же радикалы, как и в общей формуле (I);
R10 представляет амино(С2-С7)алкиламино,
((аминоалкил)арил)алкиламино,
((аминоалкил)циклоалкил)алкиламино, пиперазинильный,
гомопиперазинильный радикал;
или R10 представляет радикал, представленный ниже:
R11 представляет Н;
R12 представляет Н или алкильный, (С3-С7)циклоалкильный, необязательно замещенный карбоциклический или гетероциклический аралкильный, пропаргильный, аллильный, гидроксиалкильный, алкилтиоалкильный, арилалкилалкоксиалкильный, арилалкилтиоалкоксиалкильный радикал;
могут быть получены способом, заключающимся в том, что включает следующие последовательные стадии:
1) обработку в апротонном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид, п-нитрофенилкарбонатной смолы Ванга большим избытком симметричного диамина общей формулы R10-H, в которой R10 имеет такое же значение, как и в общей формуле (I)f;
2) пептидное связывание смолы, полученной на стадии (1), с аминокислотой общей формулы HOOC-C(R11)(R12)-NH-Fmoc, в которой R11 и R12 имеют такое же значение, как и в общей формуле (I)f;
3) отщепление группы Fmoc от смолы, полученной на стадии (2);
4) взаимодействие смолы, полученной на стадии (3), с изотиоцианатом общей формулы R2-NCS, в которой R2 имеет такое же значение, как и в общей формуле (I)f;
5) расщепление смолы в кислых условиях;
6) обработку в основных условиях продукта, полученного после стадии (5).
Для того чтобы иметь большой избыток на стадии (1) описанного выше способа, предпочтительно используют порядка 10-20 эквивалентов диамина R10-H. Стадию (1) предпочтительно осуществляют при температуре окружающей среды. Пептидное связывание на стадии (2) осуществляют, например, в ДМФ, используя связующие агенты, такие как, например,
дициклогексилкарбодиимид (DCC), диизопропилкарбодиимид (DIC),
смесь DIC/N-гидроксибензотриазол (HOBt),
гексафторфосфат бензотриазолилокситрис(диметиламино)фосфония (PyBOP),
гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU) или
тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), и аминированные соединения. Взаимодействие на стадии (2) предпочтительно осуществляют при температуре окружающей среды в течение 1-24 часов. Снятие защиты на стадии (3) может быть, например, осуществлено смесью ДМФ, содержащей 20% пиперидин. Стадию (4) предпочтительно осуществляют в растворителе, таком как диметилформамид или дихлорметан, при этом изотиоцианат предпочтительно добавляют в количестве 5-10 эквивалентов на эквивалент смолы, получаемой на стадии (3). На стадии (5) кислые условия, например, могут быть созданы при использовании 50% смеси дихлорметан/трифторуксусная кислота, при этом указанные кислые условия предпочтительно поддерживают в течение порядка 1-2 часов. На стадии 6) основные условия, например, могут быть созданы при использовании насыщенного раствора гидрокарбоната натрия или при элюировании с картриджа из основной окиси алюминия.
Предметом данного изобретения также являются описанные выше соединения общих формул (I) и (II) или их фармацевтически приемлемые соли в качестве лекарственных средств. Настоящее изобретение также касается фармацевтических композиций, содержащих указанные соединения или их фармацевтически приемлемые соли, и их применения для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологических состояний или заболеваний, в которые вовлечен один (или несколько) из рецепторов соматостатина.
В частности, описанные выше соединения общих формул (I) и (II) или их фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологических состояний или заболеваний, выбранных из группы, включающей следующие патологические состояния или заболевания: акромегалию, гипофизарные аденомы, болезнь Кушинга, гонадотрофиномы и пролактиномы, катаболическое побочное действие глюкокортикоидов, инсулинзависимый диабет, диабетическую ретинопатию, диабетическую нефропатию, синдром Х, феномен «утренней зари», ангиопатию, ангиопластику, гипертироидизм, гигантизм, эндокринные гастроэнтеропанкреатические опухоли, включая карциноидный синдром, випому, инсулиному, незидиобластому, гиперинсулинемию, глюкагоному, гастриному и синдром Золлингера-Эллисона, GRFому, а также острое кровотечение из эзофагеальных вен, язвы, гастроэзофагеальный рефлюкс, гастродуоденальный рефлюкс, панкреатит, энтерокожные и панкреатические фистулы, а также диарею, рефракторную диарею синдрома приобретенного иммунодефицита, хроническую секреторную диарею, диарею, связанную с синдромом раздраженного кишечника, диарею, вызванную химиотерапией, нарушения, связанные с гастринвысвобождающим пептидом, вторичные патологии с кишечными имплантатами, портальную гипертензию, а также кровотечения из вен у пациентов с циррозом, желудочно-кишечные кровотечения, кровотечения при гастродуоденальной язве, кровотечения из трансплантированных сосудов, болезнь Крона, системный склероз, демпинг-синдром, синдром тонкой кишки, гипотензию, склеродермию и медуллярную тиреоидную карциному, заболевания, связанные с клеточной гиперпролиферацией, такие как различные виды рака, в частности рак молочной железы, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, а также рак поджелудочной железы и колоректальный рак, фиброз, в частности фиброз почек, фиброз печени, фиброз легких, фиброз кожи, а также фиброз центральной нервной системы, фиброз носа и фиброз, вызываемый химиотерапией, а также в других терапевтических областях, для лечения, например, цефалии, включая цефалию, вызванную гипофизарными опухолями, боли, воспалительных заболеваний, включая артрит, приступов паники, химиотерапии, рубцевания ран, почечной недостаточности, вызванной замедленным развитием, гиперлипемии, ожирения и замедленного развития, связанного с ожирением, замедленного развития матки, дисплазии скелета, синдрома Нунана, синдрома апноэ во сне, болезни Грейвса, поликистозного заболевания яичников, панкреатических ложных кист и асцитов, лейкемии, менингиомы, раковой кахексии, ингибирования Н-привратников, псориаза, хронического отторжения аллотрансплантатов, а также болезни Альцгеймера и, наконец, остеопороза.
Описанные выше соединения общих формул (I) и (II) или их фармацевтически приемлемые соли могут быть предпочтительно использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологических состояний или заболеваний, выбранных из группы, включающей следующие патологические состояния или заболевания: акромегалию, гипофизарные аденомы или эндокринные гастроэнтеропанкреатические опухоли, включая карциноидный синдром, а также желудочно-кишечные кровотечения.
Под фармацевтически приемлемой солью подразумеваются, в частности, аддитивные соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, сульфат, фосфат, дифосфат, гидробромид и нитрат, или органических кислот, такие как ацетат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, памоат, оксалат и стеарат. Соли, получаемые из оснований, таких как гидроксид натрия или калия, также входят в объем настоящего изобретения, если они могут быть использованы. Другие примеры фармацевтически приемлемых солей могут быть найдены в "Pharmaceutical salts", J. Pharm. Sci. 66:1 (1977).
Фармацевтическая композиция может быть в форме твердого вещества, например порошков, гранул, таблеток, капсул, липосом или суппозиториев. Подходящими твердыми носителями могут служить, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактоза, декстрин, крахмал, желатин, целлюлоза, метилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидин и воск. Суспензии, в частности, включают суспензии микрочастиц с пролонгированным высвобождением, «нагруженных» активным ингредиентом (а именно, микрочастицы полилактида-когликолида или PLGA - см., например, патенты US 3773919, EP 52510 или ЕР 58481 либо патентную заявку РСТ WO 98/47489) и позволяющих вводить определенную суточную дозу в течение периода времени от нескольких дней до нескольких недель.
Фармацевтические композиции, содержащие соединение данного изобретения, также могут быть в форме жидкости, например растворов, эмульсий, суспензий или сиропов. Подходящими жидкими носителями могут быть, например, вода, органические растворители, такие как глицерин или гликоли, а также их смеси в воде в различных пропорциях.
Введение лекарственного средства данного изобретения может быть осуществлено местным, пероральным, парентеральным способом, в виде внутримышечной инъекции и т.д.
Вводимая доза, предусматриваемая для лекарственного средства данного изобретения, составляет от 0,1 мг до 10 г в зависимости от вида применяемого активного соединения.
Данные соединения могут быть получены в соответствии с описываемыми ниже способами.
ПОЛУЧЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
I) Получение α-бромкетонов
ПЕРВЫЙ СПОСОБ
Данный способ был инспирирован протоколами, описанными в следующих публикациях: Macholan, L.; Skursky, L. Chem. Listy 1955, 49, 1385-1388; Bestman, H.J.; Seng, F. Chem. Ber. 1963, 96, 465-469; Jones, R.G.; Kornfeld, E.C.; McLaughlin, K.C. J. Am. Chem. Soc. 1950, 72, 4526-4529; Nimgirawath, S.; Ritchie, E.; Taylor, W.C. Aust. J. Chem. 1973, 26, 183-193).
Карбоновую кислоту сначала превращают в хлорангидрид, используя оксалил или тионилхлорид, либо активируя ее в виде ангидрида при использовании алкилхлорформиата (например, изобутилхлорформиат, см. Krantz, A.; Copp, L.J. Biochemistry, 1991, 30, 4678-4687; или этилхлорформиат см. Podlech, J.; Seebach, D. Liebigs Ann., 1995, 1217-1228) в присутствии основания (триэтиламин или N-метилморфолин).
Активированную карбоксильную группу затем превращают в диазокетон, используя диазометан в растворе простого эфира или коммерчески доступном растворе триметилсилилдиазометана (Aoyama, T.; Shiori, T. Chem. Pharm. Bull. 1981, 29, 3249-3255) в апротонном растворителе, таком как простой диэтиловый эфир, тетрагидрофуран (ТГФ) или ацетонитрил.
Затем осуществляют бромирование, используя бромирующий агент, такой как бромистоводородная кислота в уксусной кислоте, водная бромистоводородная кислота в диэтиловом эфире или дихлорметане.
Получение 1
2-(4-бром-3-оксобутил)-1Н-изоиндол-1,3(2Н)-дион
(С12Н10BrNO3, MM=296,12):
Оксалилхлорид (5,8 мл, 66,7 ммоль) добавляют к Pht-β-Ala-OH (9,96 г, 44,5 ммоль), растворенному в дихлорметане (120 мл) и 3 каплях диметилформамида (ДМФ). Смесь перемешивают в течение 3 часов при температуре окружающей среды. После удаления растворителя твердое белое вещество поглощают 1:1 смесью безводного тетрагидрофурана и ацетонитрила (200 мл) и затем по каплям при 0°С добавляют 49 мл 2М раствора (триметилсилил)диазометана в гексане (97,9 ммоль). После перемешивания в течение ночи при 0°С растворители удаляют. Бледно-желтое твердое вещество затем растворяют в дихлорметане (60 мл) и по каплям при 0°С добавляют 12 мл водной бромистоводородной кислоты (48%). Смесь перемешивают до тех пор, пока температура не достигнет 15°С, и затем добавляют 50 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Органическую фазу промывают соленой водой, затем сушат над сульфатом натрия. В результате кристаллизации из диэтилового эфира получают твердое белое вещество (11,39 г, выход=86%).
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 100 МГц, δ): 7,83 (с, 4Н); 4,36 (с, 2Н, СН2Br); 3,8 (т, 2Н, J=7,1 Гц, NCH2); 2,98 (т, 2H, J=6,9 Гц, СН2СО).
Получения 2-11
Следующие соединения получают в соответствии с методикой, описанной в получении 1:
ВТОРОЙ СПОСОБ
Исходным продуктом является арилметилкетон или гетероарилметилкетон.
Исходный арилметилкетон или гетероарилметилкетон превращают в соответствующий α-бромкетон, используя различные бромирующие агенты:
- CuBr2 (King, L.C.; Ostrum, G.K. J. Org. Chem., 1964, 29, 3459-3461), нагретый в этилацетате или диоксане;
- N-бромсукцинимид в CCl4 или водном ацетонитриле (Morton, H.E.; Leanna, V.R. Tetrahedron Lett., 1993, 34, 4481-4484);
- бром в ледяной уксусной кислоте или серной кислоте;
- трибромид фенилтриметиламмония (Sanchez, J.P.; Parcell, R.P. J. Heterocyclic Chem., 1988, 25, 469-474) при 20-80°С в апротонном растворителе, таком как ТГФ или трибромид тетрабутиламмония (Kajigaeshi, S.; Kakinami, T.; Okamoto, T.; Fujisaki, S. Bull. Chem. Soc. Jpn., 1987, 60, 1159-1160), в смеси дихлорметан/метанол при температуре окружающей среды;
- бромирующий агент на полимерном носителе, такой как пербромид на смоле Amberlyst А-26, поли(пербромид гидробромида винилпиридиния)(Frechet, J.M.J.; Farral, M.J. J. Macromol. Sci. Chem., 1977, 507-514), в протонном растворителе, таком как метанол, при температуре приблизительно 20-35°С в течение приблизительно 2-10 часов.
Получение 12
1-(1-бензофуран-2-ил)-2-бром-1-этанон
(С10Н7BrO2, MM=239,06):
Полимер пербромида пиридингидробромида (8,75 г, 17,5 ммоль, 1,4 эквивалента) добавляют к раствору (бензофуран-2-ил)метилкетона (2 г, 12,5 ммоль) в метаноле (40 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 7 часов и взаимодействие останавливают фильтрованием. Метанол удаляют при пониженном давлении, и дополнительное добавление диэтилового эфира обеспечивает кристаллизацию ожидаемого продукта (3,6 г, выход=60%).
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 100 МГц, δ): 8,09 (с, 1Н); 7,98 (д, 1Н, J= 6,6 Гц); 7.75 (д, 1Н, J=8,4 Гц); 7,58 (т, 1Н, J=8,4 Гц); 7,4 (т, 1Н, J=7 Гц); 4,83 (с, 2Н, CH2Br).
Получения 13-18
Следующие соединения получают в соответствии с методикой, описанной в получении 12:
II) Синтез 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов путем синтеза в твердой фазе
Получение п-нитрофенилкарбонатной смолы Ванга
Данную смолу получают из смолы Ванга, выпускаемой Bachem или Novabiochem с уровнем нагрузки свыше 0,89 ммоль/г, применяя хорошо описанную общую процедуру (см. Bunin, B.A. The Combinatorial Index, Academic Press, 1998, p. 62-63; Dressman, B.A.; Spangle, L.A.; Kaldor, S.W. Tetrahedron Lett., 1996, 37, 937-940; Hauske, J.R.; Dorff, P. Tetrahedron Lett., 1995, 36, 1589-1592; Cao, J.; Cuny, G.D.; Hauske, J.R. Molecular Diversity, 1998, 3, 173-179): N-метилморфолин или пиридин в виде основания и 4-нитрофенилхлорформиат последовательно добавляют к смоле Ванга, подвергнутой предварительному набуханию в дихлорметане (DCM) или тетрагидрофуране (ТГФ) при температуре окружающей среды. Смесь перемешивают в течение ночи. Затем смолу последовательно промывают ТГФ, диэтиловым эфиром и DCM, после чего сушат в течение ночи при пониженном давлении и температуре 50°С.
СПОСОБ А
Получение монозащищенных симметричных диаминов
Общая методика: как уже описано в литературе (Dixit, D.M.; Leznoff, C.C. J. C. S. Chem., Comm. 1977, 798-799; Dixit, D.M.; Leznoff, C.C. Israel J. Chem. 1978, 17, 248-252; Kaljuste K.; Unden, A. Tetrahedron Lett., 1995, 36, 9211-9214; Munson, M.C.; Cook, A.W.; Josey, J.A.; Rao, C. Tetrahedron Lett., 1998, 39, 7223-7226), п-нитрофенилкарбонатную смолу Ванга обрабатывают большим избытком симметричного диамина (10-20 эквивалентов) в апротонном растворителе, таком как DCM или ДМФ для получения монозащищенной диаминной смолы после перемешивания в течение ночи.
Получение смол тиомочевины
Общая методика: ароматические и гетероароматические изотиоцианаты (5-10 эквивалентов) добавляют (Smith, J.; Liras, J.L.; Schneider, S.E.; Anslyn, E.V. J. Org. Chem., 1996, 61, 8811-8818) к монозащищенным симметричным диаминам в растворителе, таком как DCM или ДМФ, и перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды. Промытую последовательно ДМФ и DCM смолу тиомочевины выделяют, затем сушат в течение ночи при пониженном давлении и температуре 50°С.
Получение 19
(Фениламинотиоил)этилкарбамат смолы Ванга
Фенилизотиоцианат (1 мл, 8,5 ммоль, 5 экв.) добавляют к этилендиамин-N-карбамату смолы Ванга (2 г, 1,72 ммоль, 0,86 ммоль/г), подвергнутому набуханию в DCM (50 мл). После перемешивания в течение ночи при температуре окружающей среды смолу последовательно промывают ДМФ (5×20 мл) и DCM (5×20 мл). Осуществление связывания контролируют при помощи теста Кайзера с применением нингидрина (Kaiser, E.; Colescott, R.L.; Bossinger, C.D.; Cook, P.I. Anal. Biochem., 1970, 34, 595-598). Получают бледно-желтую смолу (1,79 г) с уровнем нагрузки 0,648 ммоль/г, рассчитанным по элементному анализу серы.
Синтез 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов
Общая методика: региоселективная стадия циклизации (Korohoda, M.J.; Bojarska, A.B. Polish J. Chem., 1984, 58, 447-453; Ragab, F.A.; Hussein, M.M.; Hanna, M.M.; Hassan, G.S.; Kenawy, S.A. Egypt J. Pharm. Sci., 1993, 34, 387-400; Hassan, H.Y.; El-Koussi, N.A.; Farghaly, Z.S. Chem. Pharm. Bull., 1998, 46, 863-866) происходит в апротонных растворителях, таких как диоксан или ДМФ, при 80°С в течение 2-3 часов между смолой тиомочевины и α-бромкетоном (2-5 эквивалентов). Затем смолу последовательно промывают ДМФ, метанолом и DCM, после чего сушат при пониженном давлении. 2-Арилимино-2,3-дигидротиазольную смолу расщепляют в кислых условиях (в 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота) в течение 1-2 часов, затем промывают DCM. Растворитель выпаривают и свободное основание выделяют после обработки в основных условиях (насыщенный раствор гидрокарбоната натрия), экстрагирования DCM или элюирования метанолом с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim).
Пример 1
N-[3-(2-аминоэтил)-4-(4-хлорфенил)-1,3-тиазол-2(3Н)-илиден]анилин
(C17H16ClN3S, MM=329,86):
2-Бром-4'-хлорацетофенон (30,2 мг, 129 мкмоль, 2 экв.), растворенный в ДМФ (1 мл), добавляют к полученной выше смоле тиомочевины (100 мг, 64,8 мкмоль, уровень нагрузки 0,648 ммоль/г). Смесь перемешивают в течение 2 часов при 80°С. Затем смолу последовательно промывают ДМФ (3×2 мл), метанолом (3×2 мл) и DCM (3 x 2 мл). В результате стадии высвобождения, осуществляемой в 1 мл 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота, после одного часа 30 минут перемешивания получают масло, которое элюируют метанолом с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim). Свободное основание выделяют количественно (21,3 мг) в виде желтого масла, имеющего, как показывают результаты измерения при помощи УФ-спектрофотометрии, чистоту 98% при 220 нм.
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 100 МГц) δ: 7,55 (с, 5Н); 7,3 (д, 2H, J=7,1 Гц); 6,99 (д, 2H, J=7,1 Гц); 6,21 (с, 1Н, Н азол); 3,74 (т, 2H, J=6,2 Гц, NCH2); 3,32 (широкий с, 2H, NH2); 2,72 (т, 2H, J=6,2 Гц, NCH2). SM/LC: m/z=330 (M+H)+.
Ряд 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов синтезируют в соответствии со способом А, используя автоматизированную систему (АСТ MOS 496):
группы R1:
группы R2:
группы R3:
R4 представляет Н, алкил, карбоциклический или гетероциклический аралкил, необязательно замещенный по арильному радикалу;
или дополнительно радикал
представляет радикал общей формулы
,
в которой i равно целому числу от 1 до 3;
при этом подразумевается, что если в R4 арильная группа замещена, она может быть замещена 1-5 (но не по связи, соединяющей ее с оставшейся частью молекулы) радикалами, независимо выбранными из группы, включающей атом галогена и алкильный или алкоксирадикал.
СПОСОБ В
Получение карбаматов смолы Ванга из аминоалкиланилинов
Общая методика: как описано выше (Hulme, C.; Peng, J.; Morton, G,; Salvino, J.M.; Herpin, T.; Labaudiniere, R. Tetrahedron Lett., 1998, 39, 7227-7230), п-нитрофенилкарбонатную смолу Ванга обрабатывают избытком аминоалкиланилина (5-10 экв.) в DCM или ДМФ и перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды. Смолу последовательно промывают ДМФ, метанолом и DCM, затем сушат в течение ночи при пониженном давлении и температуре 50°С.
Получение 20
4-Аминофенилэтилкарбамат смолы Ванга
Раствор 2-(4-аминофенил)этиламина (2,48 г, 17,3 ммоль, 5 экв.) в 30 мл безводного ДМФ добавляют к п-нитрофенилкарбонату смолы Ванга (4,05 г, 3,47 ммоль, уровень нагрузки 0,857 ммоль/г), подвергнутой предварительному набуханию в 50 мл безводного ДМФ. Смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи и фильтруют. Смолу последовательно промывают ДМФ (10×30 мл), метанолом (5×30 мл) и DCM (5x30 мл). После сушки в течение ночи при пониженном давлении и температуре 50°С выделяют 3,7 г желтой смолы (уровень нагрузки, рассчитанный по элементному анализу азота, составляет 0,8 ммоль/г), дающей положительный результат в нингидриновом тесте Кайзера.
Получение смол тиомочевины с алифатическими изотиоцианатами
Общая методика: алифатические изотиоцианаты (5-10 эквивалентов) добавляют к аминоалкиланилиновой смоле в растворителе, таком как DCM или ДМФ, и смесь перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды. После последовательного промывания ДМФ и DCM смолу тиомочевины выделяют и сушат в течение ночи при пониженном давлении и температуре 50°С.
Получение 21
4-{[(Фенилэтиламино)карботиоил]амино}фенилэтилкарбамат смолы Ванга
10 мл безводного ДМФ и фенилэтилизотиоцианата (624 мкл, 4 ммоль, 10 экв.) добавляют в атмосфере аргона к описанной выше смоле (0,5 г, 0,4 ммоль, уровень нагрузки 0,8 ммоль/г). Реакционную среду перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды и получают отрицательный результат в нингидриновом тесте Кайзера. Затем смолу последовательно промывают ДМФ (5×20 мл) и DCM (5×20 мл). В результате сушки при пониженном давлении и температуре 50°С получают 488 мг смолы с уровнем нагрузки, составляющим 0,629 ммоль/г, рассчитанным по элементному анализу серы.
Синтез 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов
Общая методика: стадия циклизации происходит в апротонных растворителях, таких как диоксан или ДМФ, при 80°С в течение 2 часов между смолой тиомочевины и α-бромкетоном (2-5 эквивалентов). Затем смолу последовательно промывают ДМФ, метанолом и DCM, после чего сушат при пониженном давлении. Иминотиазольную смолу расщепляют обработкой в кислых условиях (в 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота) в течение 1-2 часов, затем промывают DCM. Растворитель выпаривают и свободное основание выделяют после экстрагирования в основных условиях (насыщенный раствор гидрокарбоната натрия), экстрагирования DCM или элюирования метанолом с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim).
Пример 2
4-(2-Аминоэтил)-N-[4-(4-[хлорфенил)-3-фенетил-1,3-триазол-2(3Н)-илиден]анилин
(С25Н24ClN3S, ММ=434,01):
100 мг (62,9 мкмоль, уровень нагрузки 0,629 ммоль/г) смолы тиомочевины и 2-бром-4'-хлорацетофенон (30 мг, 125,8 мкмоль, 2 экв.) растворяют в 1 мл ДМФ и нагревают до 80°С в течение 2 часов. Затем смолу последовательно промывают ДМФ (5×1 мл), метанолом (5×1 мл) и DCM (5×1 мл). Смолу перемешивают в 1 мл 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота в течение одного часа 30 минут при температуре окружающей среды. Смолу промывают DCM (5×1 мл) и фильтрат упаривают при пониженном давлении. Остаток, растворенный в метаноле, элюируют с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim), получая количественно (27,3 мг) ожидаемый продукт в виде твердого вещества (УФ-чистота: 97% при 220 нм).
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 100 МГц) δ: 7,9 (широкий с, 2H, NH2); 7,53 (д, 2H, J=8,5 Гц); 7,32-7,15 (м, 7Н); 7,08-6,9 (м, 4Н); 6,37 (с, 1Н, Н азол); 4,07 (м, 2H, NCH2); 3,03 (м, 2H, NCH2); 2,88 (м, 4Н). MS/LC: m/z=435 (M+H)+.
Ряд 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов синтезируют в соответствии со способом В, используя автоматизированную систему (АСТ MOS 496):
группы R1:
- группы R2:
- группы R3 и R4 такие же, как и в способе А.
СПОСОБ С
Синтез 2-арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамидов
Общая методика: стадию региоселективной циклизации с применением α-бромпировиноградной кислоты (2-5 экв.) осуществляют, используя в качестве исходного вещества смолу тиомочевины, полученную в способе А, в апротонных растворителях, таких как диоксан или ДМФ, при 80°С в течение 2-3 часов. Затем смолу последовательно промывают ДМФ, метанолом и DCM, после чего сушат при пониженном давлении. Пептидное связывание (Knorr, R.; Trzeciak, A.; Bannwart, W.; Gillessen, D. Tetrahedron Lett., 1989, 30, 1927-1930) осуществляют в ДМФ при температуре окружающей среды в течение 1-24 часов в присутствии различных стандартных связующих агентов (4-5 экв.), таких как
дициклогексилкарбодиимид (DCC), диизопропилкарбодиимид (DIC),
смесь DIC/N-гидроксибензотриазол (HOBt),
гексафторфосфат бензотриазолилокситрис(диметиламино)фосфония (РуВОР),
гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU) или
тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), и аминированных соединений (4-5 экв.). Смолу 2-арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамида расщепляют обработкой в кислых условиях (в 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота) в течение 1-2 часов, затем промывают DCM. Растворитель выпаривают и свободное основание выделяют после обработки в основных условиях (насыщенный раствор гидрокарбоната натрия), экстрагирование осуществляют, используя DCM, или осуществляют элюирование метанолом с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim).
Пример 3
3-(4-Аминобутил)-N-бензгидрил-2-[(4-бромфенил)имино]-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамид
(С27Н27BrN4OS, MM=535,51):
50 мг (27,5 мкмоль, уровень нагрузки 0,55 ммоль/г) смолы карбоновой кислоты активируют в течение 15 минут 14,8 г (0,11 ммоль, 4 экв.) N-гидроксибензотриазола и 35,3 мг (0,11 ммоль, 4 экв.) TBTU в 800 мкл безводного ДМФ. Затем добавляют 20,7 мг (0,11 ммоль, 4 экв.) аминодифенилметана, растворенного в 200 мкл безводного ДМФ, и смолу фильтруют после перемешивания в течение ночи при температуре окружающей среды. В результате последовательного промывания ДМФ (5×1 мл), метанолом (5×1 мл) и DCM (5×1 мл) получают смолу, которую обрабатывают в течение одного часа 30 минут в кислых условиях (в 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота). Смолу промывают DCM (5×1 мл) и фильтрат упаривают при пониженном давлении. Остаток поглощают в метаноле, элюируют с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim), получая бледно-желтое твердое вещество (8,2 мг, выход 55,7%, УФ-чистота 94% при 220 нм).
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 100 МГц, δ): 9,6 (д, 1H, J=8,6 Гц, NH); 7,49 (д, 2H, J=8,6 Гц); 7, 35 (с, 10H); 6,92 (с, 1H, H азол); 6,91 (д, 2H, J=8,5 Гц); 6,27 (д, 1H, J=8,5 Гц, NHCH); 4,02 (м, 2H, NCH2); 3,45 (широкий м, 2H+2H, NH2 и NCH2); 1,55-1,24 (широкий м, 4H). MS/LC: m/z=535 (M+H).
Ряд 2-арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамидов синтезируют в соответствии со способом С, используя автоматизированную систему (АСТ MOS 496):
- группы R1 и R2 описаны в способе А;
- R3 = -CO-R5;
- R4 = H;
- группы R5
СПОСОБ D
Синтез 2-арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамидов
Общая методика: стадию региоселективной циклизации с применением α-бромпировиноградной кислоты (2-5 экв.) осуществляют, используя в качестве исходного вещества смолу тиомочевины, полученную в способе В, в апротонных растворителях, таких как диоксан или ДМФ, при 80°С в течение 2-3 часов. Затем смолу последовательно промывают ДМФ, метанолом и DCM, после чего сушат при пониженном давлении. Пептидное связывание (Knorr, R.; Trzeciak, A.; Bannwart, W.; Gillessen, D. Tetrahedron Lett., 1989, 30, 1927-1930) осуществляют в ДМФ при температуре окружающей среды в течение 1-24 часов при помощи различных стандартных связующих агентов (4-5 экв.), таких как дициклогексилкарбодиимид (DCC), диизопропилкарбодиимид (DIC), смесь DIC/N-гидроксибензотриазол (HOBt), гексафторфосфат бензотриазолилокситрис(диметиламино)фосфония (РуВОР), гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU) или тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU), и аминированных соединений (4-5 экв.). Смолу 2-арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамида расщепляют обработкой в кислых условиях (в 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота) в течение 1-2 часов, затем промывают DCM. Растворитель выпаривают и свободное основание выделяют после обработки в основных условиях (насыщенный раствор гидрокарбоната натрия) с последующим экстрагированием DCM или элюированием метанолом с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim).
Пример 4
(2Z)-2-{[4-(2-Аминоэтил)фенил]имино}-N-(4-хлорбензил)-3-(2-фенилэтил)-2,3-дигидро-1,3-тиазол-4-карбоксамид
(С27Н27ClN4OS, MM=491,05):
Фенилэтилизотиоцианат (310 мг, 1,9 ммоль, 10 экв.) в 3 мл диметилформамида добавляют к 200 мг (190 мкмоль, уровень нагрузки 0,946 ммоль/г) аминированной смолы (см. получение 20). После перемешивания в течение ночи при температуре окружающей среды получают отрицательный результат в нингидриновом тесте Кайзера. Затем смолу последовательно промывают ДМФ (5 x 3 мл) и DCM (5 x 3 мл), после чего сушат в вакууме в течение часа перед добавлением бромпировиноградной кислоты (63,4 мг, 380 мкмоль, 2 экв.), предварительно разбавленной в 3 мл диметилформамида. Смесь перемешивают в течение 2,5 часов при 80°С. Смолу фильтруют и промывают ДМФ (5×3 мл), метанолом (3×3 мл) и затем DCM (5×3 мл). Смолу карбоновой кислоты предварительно активируют в течение часа, используя 244 мг (0,76 ммоль, 4 экв.) TBTU, разбавленную 2 мл безводного ДМФ. Затем добавляют 110 мг (0,76 ммоль, 4 экв.) 4-хлорбензиламина, растворенного в 1 мл безводного ДМФ, и смолу фильтруют после перемешивании в течение ночи при температуре окружающей среды. В результате последовательного промывания ДМФ (5×3 мл), метанолом (3×3 мл) и DCM (3×3 мл) получают смолу, которую обрабатывают в течение одного часа 30 минут в кислых условиях (в 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота). Смолу промывают DCM (5×1 мл) и фильтрат упаривают при пониженном давлении. Остаток, поглощенный в метаноле, нейтрализуют насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, получая, после выпаривания, твердое вещество (38,2 мг, выход 41%, УФ-чистота 90% при 210 нм).
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц, δ): 9,1 (м, 1H); 7,39 (д, 2H, J=8,4 Гц); 7, 33 (д, 2H, J=8,4 Гц); 7,25 (кв, 2Н, J=6,8 Гц); 7,19 (кв, 1Н, J=7,2 Гц); 7,11 (м, 4Н); 6,8 (д, 2Н, J=8 Гц); 6,75 (с, 1H, H азол); 4,34 (д, 2H, J=6 Гц); 4,27 (т, 2H, J=6,8 Гц; 3,14 (м, 1H); 2,89 (т, 2Н, J=6,8 Гц); 2,73 (т, 1Н, J=7,2 Гц); 2,62 (м, 2H). MS/LC: m/z=491,24 (M+H)+.
Ряд 2-арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамидов синтезируют в соответствии со способом D, используя автоматизированную систему (АСТ MOS 496):
- группы R1 и R2 уже описаны в способе B;
- R3 = -CO-R5;
- R4 = H;
- группы R5 уже описаны в способе С.
Способ Е
Получение монозащищенной диаминной смолы, функционализированной α-бромпировиноградной кислотой
Общая методика: монозащищенную симметричную первичную или вторичную диаминную смолу (получение которой описано в способе А) функционализируют пептидным связыванием с α-бромпировиноградной кислотой (10 экв.), DIC (10 экв.) и HOBt (10 экв.) в растворителе, таком как ДМФ, при температуре окружающей среды. Смолу последовательно промывают ДМФ, затем DCM через 2-4 часа перемешивания перед сушкой в вакууме. Отрицательный результат в нингидриновом тесте Кайзера свидетельствует о полной функционализации.
Получение 22
2-[(3-Бром-2-оксопропаноил)амино]этил-N-карбамат смолы Ванга
HOBt (0,93 г, 6,88 ммоль) и α-бромпировиноградную кислоту (1,18 г, 6,88 ммоль) растворяют в 28 мл ДМФ (0,5 М). Затем с помощью шприца добавляют DIC (1,07 мл, 6,88 ммоль) с целью активирования кислоты. Смесь перемешивают в течение приблизительно 15 минут при температуре окружающей среды перед ее добавлением к этилендиамин-N-карбамату смолы Ванга (0,8 г, 0,688 ммоль, уровень нагрузки 0,86 ммоль/г). После перемешивания в течение 3 часов при температуре окружающей среды, при этом результат нингидринового теста Кайзера является отрицательным, смолу фильтруют и перед сушкой в вакууме последовательно промывают ДМФ (5×20 мл), затем DCM (5×20 мл). Получают бледно-коричневато-желтую смолу (0,812 г) с уровнем нагрузки 0,525 ммоль/г, рассчитанным по элементному анализу брома.
Синтез 2-арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамидов
Общая методика: получение тиомочевины осуществляют в растворителе, таком как ДМФ или диоксан, смешивая эквимолярное количество первичного амина и ароматического или гетероароматического изотиоцианата. После перемешивания в течение 2-24 часов при температуре окружающей среды к функционализированной смоле добавляют тиомочевину (2-5 экв.), затем смесь нагревают при 80°С в течение 2-4 часов. 2-Арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамидную смолу расщепляют обработкой в кислых условиях (в 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота) в течение 1-2 часов, затем промывают DCM. Растворитель выпаривают и свободное основание выделяют после обработки в основных условиях (насыщенный раствор гидрокарбоната натрия), экстрагирования DCM или элюирования этанолом с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim).
Пример 5
(2Z)-N-(2-аминоэтил)-3-[2-(3,4-диметоксифенил)этил]-2-(фенилимино)-2,3-дигидро-1,3-тиазол-4-карбоксамид
(С22Н26N4O3S, MM=426,54):
18 мкл (105 мкмоль, 2 экв.) β-(3,4-диметоксифенил)этиламина и 12,6 мкл (105 мкмоль, 2 экв.) фенилизотиоцианата перемешивают в 1 мл ДМФ в течение 18 часов. Тиомочевину добавляют к 100 мг (52,5 мкмоль, уровень нагрузки 0,525 ммоль/г) смолы (получение 22) и смесь нагревают при 80°С в течение 3 часов. Затем смолу фильтруют, после чего последовательно промывают ДМФ (5 x 1 мл), метанолом (5×1 мл) и DCM (5 x 1 мл). Перед добавлением 1 мл 50% смеси DCM/ТФУ смолу сушат в вакууме. Перемешивание осуществляют в течение 1,5 часов при температуре окружающей среды, после чего смолу фильтруют и промывают DCM. Остаток, выделяемый после выпаривания, затем элюируют метанолом с картриджа из основной окиси алюминия, выделяя 22,2 мг (количественный выход, УФ-чистота 93,4% при 230 нм) коричневого твердого вещества, соответствующего свободному амину.
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 100 МГц, δ): 8,42 (м, 1H, NH); 7,32 (т, 2H, J=7,1 Гц); 7,08-6,63 (м, 6H); 5,76 (с, 1H, H азол); 4,31 (т, 2H, J=6,6 Гц); 3,72 (с, 6H, ОСН3); 3,32 (широкий с, 2H); 3,17 (м, 2Н); 2,89 (м, 2Н); 2,62 (м, 2H). MS/LC: m/z=427,17 (M+H)+.
Ряд 2-арилимино-1,3-тиазол-4(3Н)-карбоксамидов синтезируют в соответствии со способом Е, используя автоматизированную систему (АСТ MOS 496):
- группы R1:
- группы R2 описаны в способе А,
- R3 = -CO-R5,
- R4 = H,
- группы R5:
СПОСОБ F
Получение монозащищенных диаминных смол, функционализированных N-замещенными аминокислотами (Fmoc)
Общая методика: пептидное связывание монозащищенных диаминных смол коммерчески доступными N-Fmoc аминокислотами (4-10 экв.) (Bunin, B.A. The Combinatorial Index, Academic Press, 1998, p. 77-82), осуществляют в ДМФ при температуре окружающей среды в течение 1-24 часов с использованием различных стандартных связующих агентов (4-10 экв.), таких как дициклогексилкарбодиимид (DCC), диизопропилкарбодиимид (DIC), смесь DIC/N-гидроксибензотриазол (HOBt), гексафторфосфат бензотриазолилокситрис(диметиламино)фосфония (РуВОР), гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU) или тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TBTU). Затем смолу последовательно промывают ДМФ и DCM. Последовательность связывания может быть повторена (один или два раза) до тех пор, пока нингидриновый тест Кайзера не даст отрицательный результат.
Получение 23
4-[({[(9Н)-флуорен-9-илметокси)карбонил]амино}ацетил)амино]бутил-N-карбамат смолы Ванга
Кислоту Fmoc-Gly-ОН (2,36 г, 7,94 ммоль) активируют, используя HOBt (1,07 г, 7,94 ммоль) и DIC (1,25 мл, 7,94 ммоль) в 22 мл ДМФ в течение 5 минут перед добавлением смеси к бутиламин-N-карбамату смолы Ванга (1 г, уровень нагрузки 0,794 ммоль/г), подвергнутому предварительному набуханию в 10 мл ДМФ. После перемешивания в течение 18 часов при температуре окружающей среды смолу последовательно промывают ДМФ (5×20 мл), затем DCM (5×20 мл) перед сушкой в вакууме. Таким образом получают 1,27 г бледно-желтой смолы, дающей отрицательный результат на нингидриновый тест Кайзера.
Получение смол тиомочевины
Общая методика: описанную выше смолу лишают защиты, используя 20% смесь ДМФ/пиперидин. После перемешивания в течение часа при температуре окружающей среды смолу фильтруют и последовательно промывают, используя сначала ДМФ, затем DCM. Последовательность снятия защиты/промывания повторяют и смолу сушат в вакууме. Смолу подвергают предварительному набуханию в растворителе, таком как ДМФ или DCM, затем добавляют ароматический или гетероароматический изотиоцианат (5-10 экв.). Смесь перемешивают в течение 2-24 часов при температуре окружающей среды перед фильтрованием и последовательным промыванием сначала ДМФ, затем DCM. Затем смолу сушат в вакууме, и отрицательный результат на нингидриновый тест Кайзера подтверждает, что реакция замещения завершена.
Получение 24
4-[({[(1-нафтиламино)карботиоил]амино}ацетил)амино]бутил-N-карбамат смолы Ванга
1,27 г вышеуказанной смолы (см. получение 23) подвергают снятию защитной группы, используя 20% смесь ДМФ/пиперидин. Смесь перемешивают в течение часа при температуре окружающей среды. Затем смолу фильтруют, промывают ДМФ (5×30 мл) и DCM (5 x 30 мл). Последовательность снятие защиты/промывка повторяют один раз перед сушкой смолы в вакууме. Таким образом получают 0,781 г бледно-желтой смолы с уровнем нагрузки 0,758 ммоль/г, рассчитанным по элементному анализу серы. 416 мг (2,2 ммоль, 10 экв.) 1-нафтилизоцианата, разбавленного в 6 мл ДМФ, добавляют к 0,3 г (0,22 ммоль) смолы и тиомочевины. Смесь перемешивают в течение 18 часов при температуре окружающей среды. Смолу фильтруют, а затем последовательно промывают ДМФ (5×20 мл) и DCM (5×20 мл). После сушки в вакууме выделяют 310 мг бледно-желтой смолы с уровнем нагрузки 0,66 ммоль/г, рассчитанным по элементному анализу азота.
Синтез 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов
Общая методика: стадию региоселективной циклизации осуществляют в апротонных растворителях, таких как диоксан, ДМФ или N-метилпирролидинон, при 80°С в течение 2-3 часов между смолой тиомочевины и α-бромкетоном (2-5 экв.). Затем смолу последовательно промывают ДМФ, метанолом и DCM, после чего сушат при пониженном давлении. 2-Арилимино-2,3-дигидротиазольную смолу расщепляют в кислотных условия (в 50% смеси DCM/трифторуксусная кислота) в течение 1-2 часов, а затем промывают DCM. Растворитель выпаривают и свободное основание выделяют после обработки в основных условия (насыщенный раствор гидрокарбоната натрия) с последующим экстрагированием DCM или элюированием метанолом с картриджа из основной окиси алюминия (500 мг, Interchim).
Пример 6
N-(4-аминобутил)-2-((2Z)-4-(4-хлорфенил]-2-(1-нафтилимино}-1,3-тиазол-3(2Н)-ил)ацетамид
(С25Н25ClN4OS, MM=465,02):
80 мг (52,8 мкмоль, уровень нагрузки 0,66 ммоль/г) смолы тиомочевины (получение 24) и 25,1 мг (105,6 ммоль, 2 экв.) 2-бром-4'-хлорацетофенона разбавляют в 1 мл ДМФ. Смесь нагревают при 80°С в течение 2 часов. Затем смолу фильтруют, после чего промывают ДМФ (5 x 1 мл), метанолом (5×1 мл) и DCM (5 x 1 мл) перед сушкой в вакууме. После перемешивания в течение 1 часа 30 минут добавляют 1 мл 50% смеси DCM/ТФУ. Смолу фильтруют и промывают DCM. Фильтрат упаривают и затем вновь разбавляют в метаноле для элюирования на основной окиси алюминия. Таким образом после выпаривания выделяют 20,6 мг (выход 84%, УФ-чистота 94,2% при 220 нм) желтого твердого вещества, соответствующего свободному основанию.
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 100 МГц, δ): 8,36 (т, 1H, J=4,7 Гц, NH); 8,12 (дд, 1Н, J=2,1 и 7,3 Гц); 7,87 (дд, 1H, J=2,7 и 6,3 Гц); 7,63-7,34 (м, 8H); 7,13 (дд, 1Н, J=1,6 и 6,7 Гц); 6,33 (с, 1H, H азол); 4,44 (широкий с, 2H); 3,14 (м, 2H); 2,7 (м, 2Н); 1,5 (м, 4Н). MS/LC: m/z=465,21 (M+H)+.
Ряд 2-арилимино-2,3-дигидротиазолов синтезируют в соответствии со способом F, используя автоматизированную систему (АСТ MOS 496):
- R1 = -C(R11)(R12)-CJ-R10,
- группы R2, R3 и R4 описаны в способе А,
- группы R10:
- R11 = H,
- группы R12:
ПРИМЕРЫ
Примеры соединений, полученных в соответствии с описанными выше способами А, В, С, D, E и F, представлены ниже в таблицах. Указанные примеры предназначены для иллюстрации описанных выше способов и ни при каких обстоятельствах не должны рассматриваться как ограничивающие объем данного изобретения.
Полученные соединения характеризуются временем их удерживания (rt) и масс-спектрометрией (М+Н)+.
Хроматограммы получают при помощи прибора для высокоэффективной жидкостной хроматографии (Hewlett-Packard 1100), оборудованного сканирующим УФ-детектором. Для определения времени удерживания при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии используют следующие условия, при этом необходимо отметить, что длина волны экстракции каждой из хроматограмм составляет 220 нм:
t(мин.) | А (%) | В (%) |
0 | 90 | 10 |
6 | 15 | 85 |
8 | 15 | 85 |
Элюент А: вода + 0,02% трифторуксусная кислота; элюент В: ацетонитрил.
Скорость потока: 1 мл/мин; инжектируемый объем: 5 мкл; температура: 40°С; Колонка: Uptisphere 3 мкм ODS, вн.д. 50 x 4,6 мм (Interchim).
Масс-спектры получают, используя один квадрупольный масс-спектрометр, оборудованный источником электрораспыления (Micromass, Platform II).
Некоторые соединения данного изобретения могут быть получены согласно описываемому ниже способу G.
СПОСОБ G
Синтез в растворе производных 2-иминотиазол-4-карбоксамида из монозащищенных симметричных диаминов (Вос)
Общая методика:
Монозащищенный симметричный диамин (Вос) (1 экв.) перемешивают в течение ночи с ароматическим изотиоцианатом (1 экв.) при температуре окружающей среды в безводном растворителе, таком как диоксан, диметилформамид или хлороформ. 1 Эквивалент неорганического основания, такого как гидрокарбонат натрия или калия, и 1 эквивалент этилбромпирувата, предварительно растворенного в безводном растворителе, таком как диоксан или диметилформамид, последовательно добавляют к необработанному промежуточному соединению изотиомочевины. Затем смесь нагревают при 80°С в течение 1-3 часов и неорганические соли удаляют фильтрованием. Растворители выпаривают в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле, используя градиент этилацетат/гептан. Омыление промежуточного соединения сложного эфира осуществляют в растворителе, таком как тетрагидрофуран, используя 1 н. раствор КОН, LiOH или NaOH. Смесь энергично перемешивают в течение 6-20 часов при температуре окружающей среды, затем подкисляют 1 н. водным раствором хлористоводородной кислоты до рН 2,5. Органическую фазу несколько раз экстрагируют дихлорметаном, затем указанную фазу промывают водой до получения нейтрального рН и сушат над сульфатом натрия.
Первичный или вторичный амин (1,1-2 экв.), предварительно растворенный в безводном растворителе, таком как диметилформамид, добавляют в атмосфере аргона к раствору промежуточной карбоновой кислоты (1 экв.) и пептидному связывающему агенту, такому как DIC, DIC/HOBt, HATU или TBTU (1,1-2 экв.), предварительно растворенному в безводном растворителе, таком как диметилформамид. Смесь перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле, используя градиент этилацетат/гептан. Промежуточный карбоксамид разбавляют в растворителе, таком как дихлорметан или этилацетат, и подвергают снятию защитной группы пропусканием через раствор потока сухого хлористого водорода в течение 1-6 часов при температуре окружающей среды. Соответствующий дигидрохлорид выделяют либо фильтрованием осадка, либо, после выпаривания растворителя в вакууме, добавлением диэтилового эфира для улучшения кристаллизации.
Получение 25
Этил (2Z)-3-{5-[(трет-бутоксикарбонил)амино]пентил}-2-[(3,5-диметилфенил)имино]-2,3-дигидро-1,3-тиазол-4-карбоксилат
(С24Н35N3O4S; MM=461,63)
N-Boc-1,5-диаминопентан (1,04 г, 5 ммоль) перемешивают с 3,5-диметилизотиоцианатом (824 мг, 5 ммоль) в 10 мл безводного диоксана. 420 мг (5 ммоль) гидрокарбоната натрия и 1,08 г (5 ммоль) этилбромпирувата, предварительно растворенного в 2 мл безводного диоксана, последовательно добавляют к необработанной промежуточной изотиомочевине. Затем смесь нагревают при 80°С в течение часа и неорганические соли удаляют фильтрованием. Диоксан выпаривают в вакууме и желтый остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (элюент: этилацетат/гептан, сначала 2:8, затем 3:7). В результате выделяют желтое масло (1,8 г, выход 77,9%), соответствующее ожидаемому соединению.
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ: 7,23 (c, 1H); 6,71 (широкий с, 1H); 6,65 (с, 1H); 6,54 (с, 2H); 4,26 (кв, 2H, J=6,4 Гц); 4,13 (т, 2H, J=6,4 Гц); 2,9 (кв, 2H, J=6 Гц); 2,22 (с, 6Н); 1,63 (м, 2Н); 1,4 (м, 2H); 1,36 (с, 9Н); 1,29-1,23 (м, 2Н + 3Н). MS/LC: m/z=462,3 (M+H)+.
Получение 26
(2Z)-3-{5-[(трет-бутоксикарбонил)амино]пентил}-2-[(3,5-диметилфенил)имино]-2,3-дигидро-1,3-тиазол-4-карбоновая кислота
(С22Н31N3O4S; MM=433,57)
Соединение получения 25 (1,77 г, 3,83 ммоль) растворяют в 20 мл тетрагидрофурана и обрабатывают 15 мл 1 н. водного раствора NaOH. Смесь энергично перемешивают в течение 6 часов при температуре окружающей среды. Затем карбоксилат подкисляют 1 н. водным раствором хлористоводородной кислоты до рН 2,5. Водную фазу экстрагируют дихлорметаном (4×50 мл) и органические фазы промывают водой до получения нейтрального рН и сушат над сульфатом натрия. После выпаривания растворителей в вакууме выделяют бледно-желтое твердое вещество (1,51 г, выход 90,9%).
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ: 13,28 (широкий с, 1Н); 7,16 (c, 1H); 6,69 (широкий с, 1H); 6,65 (с, 1H); 6,54 (с, 2Н); 4,17 (т, 2H, J=7,2 Гц); 2,89 (кв, 2H, J=6,4 Гц); 2,22 (с, 6Н); 1,63 (кв, 2Н, J=6,8 Гц); 1,41 (м, 2H); 1,36 (с, 9Н); 1,25 (м, 2Н). MS/LC: m/z=434,27 (M+H)+.
Получение 27
Трет-бутил 5-[(2Z)-2-[(3,5-диметилфенил)имино]-4-{[(1-фенилпропил)амино]карбонил}-1,3-тиазол-3(2Н)-ил]пентилкарбамат
(С31Н42N4O3S; MM=550,76)
600 мг (1,38 ммоль) карбоновой кислоты получения 26 предварительно активируют 888 мг (2,76 ммоль, 2 экв.) TBTU в 10 мл безводного диметилформамида в течение часа. Затем добавляют 410 мкл (2,76 ммоль, 2 экв.) α-этилбензиламина и смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи. После выпаривания диметилформамида неочищенный остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле (элюент: этилацетат/гептан 4:6), получая белое твердое вещество (498 мг, выход 65,5%).
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): 9,00 (д, 1Н, J=8,4 Гц); 7,36-7,30 (м, 4H); 7,25-7,21 (м, 1H); 6,72 (т, 1Н, J=5,4 Гц); 6,67 (с, 1Н); 6,63 (с, 1Н); 6,53 (с, 2Н); 4,77 (кв, 1H, J=8,8 Гц); 3,95 (м, 2H); 2,84 (кв, 2Н, J=6 Гц); 2,21 (с, 6Н); 1,74 (м, 2H); 1,51 (м, 2Н); 1,36 (с, 9Н); 1,31 (кв, 2Н, J=7,2 Гц); 1,13 (м, 2Н); 0,89 (т, 3Н, J=7,2 Гц). MS/LC: m/z=551,44 (M+H)+.
Пример 2826
дигидрохлорид (2Z)-3-(5-аминопентил)-2-[(3,5-диметилфенил)имино]-N-(1-фенилпропил)-2,3-дигидро-1,3-тиазол-4-карбоксамида
(С26H34N4OS.2HCl; MM=523,57)
300 мг (0,54 ммоль) трет-бутил 5-[(2Z)-2-[(3,5-диметилфенил)имино]-4-{[(1-фенилпропил)амино]карбонил}-1,3-тиазол-3(2Н)-ил]пентилкарбамата растворяют в 15 мл этилацетата. После барботирования безводного хлористого водорода через реакционную среду в течение часа при температуре окружающей среды соответствующая соль дигидрохлорида выпадает в осадок. Ее выделяют фильтрованием и промывают диэтиловым эфиром, получая белое твердое вещество (268 мг, выход 94,8%).
1Н ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц): 9,48 (широкий с, 1Н); 8,03 (широкий с, 3Н); 7,39-7,32 (м, 5Н); 7,25 (т, 1Н, J=7,2 Гц); 7,00 (м, 3H); 4,80 (кв, 1Н, J=8,4 Гц); 4,33 (широкий с, 2Н); 2,70 (кв, 2H, J=6,8 Гц); 2,29 (с, 6H); 1,77 (м, 2H); 1,65 (м, 2Н); 1,52 (м, 2Н); 1,27 (м, 2Н); 0,89 (т, 3Н, J=7,2 Гц). MS/LC: m/z=451,35 (M+H)+.
В соответствии со способом G может быть синтезирован ряд соединений, включающих:
- группы R1 и R2, уже описанные в способе А; и
- группы R5, уже описанные в способе С.
В частности, соединения, представленные в нижеприведенной таблице, были синтезированы с применением способа G.
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОДУКТОВ ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Соединения настоящего изобретения могут быть и были протестированы относительно их аффинности к различным подтипам рецепторов соматостатина в соответствии с описываемыми ниже методиками.
Исследование аффинности к подтипам рецепторов соматостатина человека:
Аффинность соединения данного изобретения по отношению к подтипам рецепторов соматостатина человека 1-5 (sst1, sst2, sst3, sst4 и sst5, соответственно) определяют, измеряя ингибирование связывания [125I-Tyr11]SRIF-14 трансфицированными клетками СНО-К1.
Ген рецептора sst1 соматостатина человека клонируют в виде геномного фрагмента. Сегмент PstI-XmnI, с 1,5 т.п.н., содержащих 100 п.н. нетранскрибированной области 5', 1,17 т.п.н. кодирующей области, в целом, и 230 п.н. нетранскрибированной области 3', модифицируют, добавляя линкер Bg1II. Получаемый фрагмент ДНК субклонируют в сайт BamHI pCMV-81, получая экспрессионную плазмиду млекопитающих (производится Dr. Graeme Bell, Univ. Chicago). Клонированную клеточную линию, устойчиво экспрессирующую рецептор sst1, получают трансфекцией клеток СНО-К1 (АТСС), применяя способ соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-нео (АТСС) включают в качестве селективного маркера. Клонированные клеточные линии выбирают в среде RPMI 1640, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Gibco), с последующим циркулярным клонированием и размножением в культуре.
Ген рецептора sst2 соматостатина человека, выделенный в виде геномного фрагмента ДНК BamHI-HindIII с 1,7 т.п.н. и субклонированный в плазмидный вектор pGEM3Z (Promega), производится Dr. G. Bell (Univ. of Chicago). Экспрессионный вектор клеток млекопитающих конструируют, встраивая фрагмент BamН1-HindIII с 1,7 т.п.н. в рестрикционные сайты эндонуклеазы, совместимые с плазмидой pCMV5. Клонированную клеточную линию получают трансфекцией клеток СНО-К1, применяя способ соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-нео включают в виде селективного маркера.
Рецептор sst3 выделяют в виде геномного фрагмента, при этом полная кодирующая последовательность содержится во фрагменте BamHI/HindIII с 2,4 т.п.н. Экспрессионную плазмиду у млекопитающих, pCMV-h3, конструируют, встраивая фрагмент NcoI-HindIII с 2,0 т.п.н. в сайт ЕсоR1 вектора pCMV после модификации окончаний и добавления линкеров ЕсоR1. Клонированную клеточную линию, устойчиво экспрессирующую рецептор sst3, получают трансфекцией клеток СНО-К1 (АТСС), применяя способ соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-нео (АТСС) включают в виде селективного маркера. Клонированные клеточные линии выбирают в среде RPMI 1640, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Gibco), с последующим циркулярным клонированием и размножением в культуре.
Экспрессионную плазмиду рецептора sst4 человека, pCMV-HX, производится Dr. Graeme Bell (Univ. Chicago). Данный вектор содержит геномный фрагмент, кодирующий рецептор sst4 человека c 1,4 т.п.н. NheI-NheI, 456 п.н. нетранскрибированной области 5' и 200 п.н. нетранскрибированной области 3', клонированной в сайты XbaI/EcoR1 PCMV-HX. Клонированную клеточную линию, устойчиво экспрессирующую рецептор sst4, получают трансфекцией клеток СНО-К1 (АТСС), применяя способ соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-нео (АТСС) включают в качестве селективного маркера. Клонированные клеточные линии выбирают в среде RPMI 1640, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Gibco) с последующим циркулярным клонированием и размножением в культуре.
Ген, соответствующий рецептору sst5 человека, получаемому способом PCR с использованием геномного клона λ в качестве зонда, производится Dr. Graeme Bell (Univ. Chicago). Получаемый фрагмент PCR с 1,2 т.п.н. содержит 21 п.н. нетранскрибированной области 5', кодирующую область, в целом, и 55 п.н. нетранскрибированной области 3'. Клон вставляют в сайт EcoR1 плазмиды pBSSK(+). Вставку восстанавливают в виде фрагмента HindIII-XbaI с 1,2 т.п.н. с целью субклонирования в экспрессионный вектор млекопитающих, рCVM5. Клонированную клеточную линию, устойчиво экспрессирующую рецептор sst5, получают трансфекцией клеток СНО-К1 (АТСС), применяя способ соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-нео (АТСС) включают в виде селективного маркера. Клонированные клеточные линии выбирают в среде RPMI 1640, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Gibco), с последующим циркулярным клонированием и размножением в культуре.
Клетки СНО-К1, устойчиво экспрессирующие рецепторы sst человека, культивируют в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки и 0,4 мг/мл генетицина. Клетки собирают 0,5 мМ ЭДТА и центрифугируют при 500 g в течение приблизительно 5 минут при температуре приблизительно 4°С. Осадок повторно суспендируют в 50 мМ Tris буфере при рН 7,4 и дважды центрифугируют при 500 g в течение приблизительно 5 минут при температуре приблизительно 4°С. Клетки лизируют ультразвуком, затем центрифугируют при 3900 g в течение приблизительно 10 минут при 4°С. Осадок повторно суспендируют в таком же буфере и центрифугируют при 50000 g в течение приблизительно 10 минут при температуре приблизительно 4°С и мембраны в получаемом осадке хранят при -80°С.
Эксперименты по конкурентному ингибированию связывания с [125I-Tyr11]SRIF-14 осуществляют в двух повторах в 96-луночных полипропиленовых планшетах. Клеточные мембраны (10 мкг белка/лунка) инкубируют с [125I-Tyr11]SRIF-14 (0,05 нМ) в течение приблизительно 60 минут при температуре приблизительно 37°С в 50 мМ буфере HEPES (рН 7,4), содержащем 0,2% BSA (бычий сывороточный альбумин), 5 мМ MgCl2, 200 KIU/мл Trasylol, 0,02 мг/мл бацитрицина и 0,02 мг/мл фенилметилсульфонилфторида.
Связанный [125I-Tyr11]SRIF-14 отделяют от свободного [125I-Tyr11]SRIF-14 путем немедленной фильтрации через фильтровальные пластины из стекловолокна GF/C (Unifilter, Packard), предварительно пропитанные 0,1% полиэтиленимином (P.E.I.), используя Filtermate 196 (Packard). Фильтры промывают 50 мМ буфера HEPES при температуре приблизительно 0-4°С в течение приблизительно 4 секунд и определяют их радиоактивность, используя счетчик (Packard Top Count).
Специфическое связывание получают, вычитая неспецифическое связывание (определенное в присутствии 0,1 мкМ SRIF-14) из общего связывания. Данные, относящиеся к связыванию, анализируют при помощи автоматизированного нелинейного регрессионного анализа (MDL) и определяют величины констант ингибирования (Ki).
Агонистический или антагонистический характер соединения настоящего изобретения определяют, применяя описываемый ниже тест.
Функциональный тест: ингибирование продуцирования внутриклеточного цАМФ:
Клетки СНО-К1, экспрессирующие подтипы рецепторов соматостатина человека (SRIF-14), культивируют в 24-луночных планшетах в среде RPMI 1640 с 10% фетальной телячьей сыворотки и 0,4 мг/мл генетицина. Среду меняют в день, предшествующий эксперименту.
Клетки в количестве 105 клеток/лунка дважды промывают 0,5 мл новой среды RPMI, содержащей 0,2% BSA, дополненной 0,5 мМ 3-изобутил-1-метилксантином (IBMX, и инкубируют в течение приблизительно 5 минут при температуре приблизительно 37°С.
- Продуцирование циклического АМФ стимулируют добавлением 1 мМ форсколина (FSK) в течение 15-30 минут при температуре приблизительно 37°С.
- Ингибирующее действие соматостатина соединением-агонистом измеряют, одновременно добавляя FSK (1 мкМ), SRIF-14 (10-12 M-10-6 М) и подвергаемое тестированию соединение (10-10 М-10-5 М).
- Антагонистическое действие соединения измеряют, одновременно добавляя FSK (1 мкМ), SRIF-14 (1-10 нМ) и подвергаемое тестированию соединение (10-10 М-10-5 М).
Реакционную среду удаляют и добавляют 200 мл 0,1 н. HCl. Количество цАМФ определяют, проводя радиоиммунологический тест (набор FlashPlate SMP001A, New England Nuclear).
Результаты:
Тесты, проводимые в соответствии с описанными выше протоколами, показывают, что продукты общей формулы (I), описанные в данной заявке, имеют хорошую аффинность по отношению по меньшей мере к одному из подтипов рецепторов соматостатина, при этом константа ингибирования Кi для некоторых проиллюстрированных соединений, в частности для продуктов, представленных в приводимой ниже таблице, ниже микромолярного уровня.
Помимо соединений, указанных в приведенных выше таблицах, каждое соединение примеров 2827-2836 также имеет константу Кi ниже 200 нМ.
1. Соединение, соответствующее
- формуле
в которой
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
-R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал или, наконец
- R2 представляет радикал и R5 представляет
радикал,
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- формуле
в которой R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
, или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
-R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- формуле
в которой
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет, R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
или, наконец,
- R10 представляет , R2 представляет
и R3 представляет
;
- или, наконец, формуле
в которой
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
или, наконец,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
;
или фармацевтически приемлемая соль одного из указанных соединений.
2. Соединение по п.1, соответствующее формуле
в которой
- R1 представляет , R2 представляет
R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
или, наконец,
- R1 представляет , R2 представляет
и R5 представляет
;
или фармацевтически приемлемая соль одного из указанных выше соединений.
3. Соединение по п.1 или 2 или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, обладающие аффинностью и селективностью в отношении рецепторов соматостатина.
4. Применение соединения по п.1 или 2 или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологических состояний или заболеваний, в которые вовлечен один (или несколько) рецептор(ов) соматостатина.
5. Применение по п.4, отличающееся тем, что подвергаемые лечению патологические состояния или заболевания выбраны из группы, включающей следующие патологические состояния или заболевания: акромегалию, гипофизарные аденомы, болезнь Кушинга, гонадотрофиномы и пролактиномы, катаболическое побочное действие глюкокортикоидов, инсулинзависимый диабет, диабетическую ретинопатию, диабетическую нефропатию, синдром X, феномен «утренней зари», ангиопатию, ангиопластику, гипертироидизм, гигантизм, эндокринные гастроэнтеропанкреатические опухоли, включая карциноидный синдром, випому, инсулиному, незидиобластому, гиперинсулинемию, глюкагоному, гастриному и синдром Золлингера-Эллисона, GRFому, а также острое кровотечение из эзофагеальных вен, язвы, гастроэзофагеальный рефлюкс, гастродуоденальный рефлюкс, панкреатит, энтерокожные и панкреатические фистулы, а также диарею, рефракторную диарею синдрома приобретенного иммунодефицита, хроническую секреторную диарею, диарею, связанную с синдромом раздраженного кишечника, диарею, вызванную химиотерапией, нарушения, связанные с гастринвысвобождающим пептидом, вторичные патологии с кишечными имплантатами, портальную гипертензию, а также кровотечения из вен у пациентов с циррозом, желудочно-кишечные кровотечения, кровотечения при гастродуоденальной язве, кровотечения из трансплантированных сосудов, болезнь Крона, системный склероз, демпинг-синдром, синдром тонкой кишки, гипотензию, склеродермию и медуллярную тиреоидную карциному, заболевания, связанные с клеточной гиперпролиферацией, такие как различные виды рака, в частности рак молочной железы, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, а также рак поджелудочной железы и колоректальный рак, фиброз, в частности фиброз почек, фиброз печени, фиброз легких, фиброз кожи, а также фиброз центральной нервной системы, фиброз носа и фиброз, вызываемый химиотерапией, а также в других терапевтических областях, для лечения, например, цефалии, включая цефалию, вызванную гипофизарными опухолями, боли, воспалительных заболеваний, таких как артрит, приступов паники, химиотерапии, рубцевания ран, почечной недостаточности, вызванной замедленным развитием, гиперлипемии, ожирения и замедленного развития, связанного с ожирением, замедленного развития матки, дисплазии скелета, синдрома Нунана, синдрома апноэ во сне, болезни Грейвса, поликистозного заболевания яичников, панкреатических ложных кист и асцитов, лейкемии, менингиомы, раковой кахексии, ингибирования Н-привратников, псориаза, хронического отторжения аллотрансплантатов, а также болезни Альцгеймера и, наконец, остеопороза.
6. Применение по п.5, отличающееся тем, что подвергаемые лечению патологические состояния или заболевания выбраны из группы, включающей следующие патологические состояния или заболевания: акромегалию, гипофизарные аденомы или эндокринные гастроэнтеропанкреатические опухоли, включая карциноидный синдром, а также желудочно-кишечные кровотечения.