Лечение эмфиземы с помощью ретиноидных агонистов (rar), обладающих избирательным действием
Изобретение касается применения агониста RARγ для приготовления лекарственного средства, содержащего один или несколько таких агонистов, предназначенного для лечения эмфиземы, где агонист RARγ выбирают из соединений формулы I
где R1 обозначает остаток формулы
R2 обозначает С2-С8алканоил, С2-С8алкил, С2-С8алкенил, С2-С8алкинил или -OCH2R3; R3 обозначает водород, С1-С6алкил, С2-С6алкенил или С2-С6алкинил; R4-R9 каждый независимо друг от друга обозначает водород или С1-С6алкил;или R8 и R9 вместе обозначают (CRaRb)n, Ra и Rb независимо друг от друга обозначают водород или С1-С6алкил, n равно 1, 2 или 3 и R4-R7 имеют указанные выше значения; R10 обозначает карбоксил, С1-С6алкоксикарбонил или моно- или ди(С1-С6алкил)карбамоил; и их фармацевтически приемлемых солей; или из соединений формулы VI
где R1 обозначает C(O)R6 или СН2ОН (где R6 обозначает гидрокси или С1-С6алкокси); R2 обозначает водород, С1-С15алкил, С1-С6алкокси или циклоалифатическую группу; R3 обозначает водород, гидрокси, С1-С6алкил, дигидрокси С1-С6алкил, С1-С10алкокси или циклоалифатическую группу; и R4 и R5 независимо друг от друга обозначают водород, гидрокси, С1-С6алкил, С1-С6алкокси; или из соединения формулы VIII
Технический результат - применение агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, для приготовления лекарственного средства, содержащего один или несколько таких агонистов, предназначенного для лечения эмфиземы. 3 з.п. ф-лы., 5 табл.
Настоящее изобретение относится к применению агонистов рецептора ретиноевой кислоты (RAR), в частности агониста рецептора ретиноевой кислоты, обладающего избирательным действием в отношении RARγ.
Хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ) представляет собой одно из распространенных серьезных заболеваний, часто приводящее к смерти, оно занимает третье и четвертое место среди основных причин смерти в странах Европы и Северной Америки соответственно. ХОЗЛ характеризуется уменьшенной объемной максимальной скоростью выдоха, которая не претерпевает изменения в течение нескольких месяцев и может сохраняться в течение 2 или более последовательных лет. У пациентов, страдающих наиболее серьезной формой ХОЗЛ, обычно проявляются выраженные симптомы эмфиземы.
С анатомической точки зрения при эмфиземе происходит постоянное увеличение сверх нормы воздушных пространств, расположенных дистальнее терминальных бронхиол, и она характеризуется постепенным уменьшением тяги легкого, разрушением альвеол, уменьшением площади поверхности альвеол и газообмена, что приводит к снижению односекундного объема воздуха при форсированном выдохе (ОФВ1) (American Thoracic Society: Am. J. Resp. And Critical Care, 152: стр.77-124, 1995). Ухудшение газообмена и уменьшение объемной скорости выдоха представляют собой характерные физиологические аномалии, приносящие страдания пациентам, больным эмфиземой. Основным симптомом пациентов, серьезно пораженных эфмиземой, является учащенное дыхание при минимальной физической активности.
Хотя в возникновении эмфиземы могут участвовать и другие токсины, которые могут встречаться в окружающей среде, наиболее частой причиной ее возникновения является курение сигарет. Такие вредные агенты активируют деструктивные процессы в легком, включая высвобождение активных протеаз и окислителей, представляющих собой свободные радикалы, в таком количестве, которое не может быть нейтрализовано с помощью защитных механизмов. Неконтролируемое высвобождение активных протеаз приводит к нарушению баланса уровней протеаз/антипротеаз в легких, вызывающему разрушение эластинового матрикса, уменьшению эластической тяги легкого, повреждению ткани и непрерывному снижению функции легкого. Скорость развития такого повреждения можно замедлить с помощью устранения вредных агентов (например, путем прекращения курения); однако при этом поврежденные альвеолярные структуры не восстанавливаются и функция легкого не нормализуется.
Полностью транс-ретиноевая кислота (ATRA) представляет собой многофункциональный модулятор клеточной функции, обладающий способностью изменять как метаболизм внеклеточного матрикса, так и нормальную дифференцировку эпителия. Было установлено, что в легких ATRA модулирует различные аспекты дифференцировки клеток легкого путем взаимодействия со специфическими рецепторами ретиноевой кислоты (RAR), которые избирательно экспрессируются согласно определенной временной и пространственной схеме. Установлено, что у новорожденных крыс координированная активация RARβ и RARγ сопровождается разветвлением легкого, увеличением количества альвеол/образованием перегородок и активацией гена тропоэластина.
При образовании альвеолярных перегородок в фибробластной мезенхиме, окружающей стенки альвеол, происходит увеличение количества гранул, в которых запасается ретиноевая кислота (ретиниловые эфиры) (Liu и др., Am. J. Physiol., 265: стр.430-437, 1993; McGowan и др.. Am. J. Physiol., 269: стр.463-472, 1995) и экспрессия RARγ в легком достигает максимума (Ong D.Е. и Chytil F., Proc. Natl. Acad. of Sciences 73: 3976-3978, 1976; Grummer M.A., Thet L. и Zachman R.D., Pediatr. Pulm. 17: 234-238, 1994). Истощение этих запасов ретиниловых эфиров происходит параллельно с формированием нового эластинового матрикса и образованием перегородок. Подтверждением этой концепции является установленный Massaro и Massaro (Massaro D. и Massaro G., Am. J. Physiol. 270, стр.305-310, 1996) факт того, что введение ретиноевой кислоты новорожденным крысам вызывает увеличение количества альвеол. Введение новорожденным крысятам дексаметазона ингибирует процесс образования перегородок в легких. Это действие можно преодолеть с помощью дополнительного введения ретиноевой кислоты. Кроме того, с помощью ATRA оказывается возможным устранить действие дексаметазона, направленное на предупреждение экспрессии мРНК CRBP (протеин, связывающий клеточную ретиноевую кислоту) и RARβ и последующего образования альвеолярных перегородок в находящихся в стадии формирования легких крыс.
Исследования, проведенные в последние годы на моделях эмфиземы с использованием животных, позволили установить, что ATRA может индуцировать образование новых альвеол и восстанавливать эластическую тягу легкого до уровня, близкого к нормальному (Massaro D. и Massaro G., Nature Med. 3: 675-677, 1997; "Strategies to Augment Alveolization," National Heart, Lung, and Blood Institute, RFA: HL-98-011, 1998). Однако механизм этого действия до сих пор не выяснен.
Ретиноиды, включающие как встречающиеся в естественных условиях, так и синтетические соединения, представляют собой класс соединений, структура которых близка к структуре витамина А. В клинических опытах было установлено, что некоторые типы ретиноидов можно применять для лечения дерматологических и онкологических заболеваний. Полностью транс-ретиноевая кислота (ATRA) и ее встречающиеся в естественных условиях ретиноидные аналоги (9-цис-ретиноевая кислота, полностью транс-3-4-дидегидроретиноевая кислота, 4-оксоретиноевая кислота и ретинол) являются плейотропными регуляторными соединениями, которые модулируют структуру и функцию широкого разнообразия воспалительных клеток, иммунноцитов и структурных клеток. Они являются важными регуляторами пролиферации, дифференцировки и морфогенеза эпителиальных клеток легкого. Ретиноиды осуществляют биологическое воздействие через посредство ряда ядерных рецепторов, которые являются индуцируемыми лигандами факторами транскрипции, принадлежащими к суперсемейству стероидных/тиреоидных рецепторов.
Ретиноидные рецепторы подразделяют на два семейства, а именно на рецепторы ретиноевой кислоты (RAR) и ретиноидные Х-рецепторы (RXR), каждое из которых состоит из трех различных подтипов (α, β и γ). Каждый подтип семейства генов RAR кодирует различное количество изоформ, возникающих в результате различного сплайсинга двух первичных транскриптов РНК. ATRA представляет собой физиологический гормон для рецепторов ретиноевой кислоты, который связывается приблизительно с одинаковой аффинностью со всеми тремя подтипами RAR. ATRA не связывается с рецепторами RXR; для этих рецепторов природным лигандом является 9-цис-ретиноевая кислота.
В отношении различных типов тканей, не относящихся к тканям легкого, ретиноиды обладают противовоспалительными действиями, изменяют развитие клеточной дифференцировки и ингибируют производство стромального клеточного матрикса. Эти свойства послужили основой для разработки ретиноидных терапевтических средств для местного применения, предназначенных для лечения таких кожных заболеваний, как псориаз, угри и гипертрофические кожные рубцы. Кроме того, их можно применять для лечения острой промиелозной лейкемии, аденокарциномы, плоскоклеточного рака и фиброза печени. Однако терапевтическое применение ретиноидов для лечения болезней, не связанных с раком, ограничено вследствие относительно высокой токсичности встречающихся в естественных условиях ретиноидов, ATRA и 9-цис RA. Такие встречающиеся в естественных условиях лиганды не обладают избирательным действием и поэтому оказывают плейотропные действия на весь организм, которые часто являются токсическими. В последние годы были описаны различные ретиноиды, которые избирательно или специфично взаимодействуют с рецепторами RAR или RXR или определенными подтипами (α, β, γ) этих классов рецепторов. С помощью этих новых ретиноидов оказалось возможным разделить активности ретиноидов в отношении трансрепрессии АР-1 и трансактивации (Li J. J. и др., Cancer Research, 56: 483-489 (1996); Fanjul А. и др., Nature, 372: 107-111 (1994); Schule R. и др., PNAS, 88: 6092-6096 (1991); Nagpal и др.. Journal of Biological Chemistry 270: 923-927 (1995)). Кроме того, было установлено, что обладающие избирательным действием соединения проявляют меньшую токсичность in vitro и in vivo (Chandraratna R., J. Am. Acad. Dermatology, 39: стр.149-152, 1998; Look J. и др., Am. J. Physiol. 269: стр.91-98, 1995).
Одним из объектов настоящего изобретения является применение избирательных агонистов RARγ для лечения эмфиземы и связанных с ней легочных заболеваний. Применение ретиноидов, которые обладают избирательным действием по меньшей мере в отношении RARγ и не взаимодействуют с RARα, позволяет ускорять восстановление, не оказывая неблагоприятных действий на уровни триглицеридов в плазме.
Еще одним объектом настоящего изобретения является применение агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, для стимуляции экспрессии гена тропоэластина в фибробластах легкого человека.
В контексте настоящего описания понятие (Сх-Су)алкил обозначает полностью насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, имеющий от х до y атомов углерода; (Сх-Су)фторалкил обозначает алкильный радикал как он определен выше, в котором один или несколько атомов водорода, присоединенных к углеродному скелету, замещены одним или несколькими атомами фтора.
В контексте настоящего описания понятие (Сх-Су)циклоалкил обозначает полностью насыщенный циклический углеводородный радикал, имеющий от х до у кольцевых атомов углерода, и оно включает бициклические, полицикличсские и связанные с помощью мостиков кольцевые системы, например циклопропил, циклопентил, декалинил, адамантил и т.п.; понятие циклофтор(Сх-Су)алкил обозначает циклоалкильный радикал, как он определен выше, в котором один или несколько атомов водорода присоединены к углеродному скелету, замещены одним или несколькими атомами фтора.
В контексте настоящего описания понятие "Е" обозначает такую стереохимическую конфигурацию относительно двойной связи углерод-углерод, в которой два атома водорода присоединены к различным атомам углерода и находятся на противоположных сторонах двойной связи углерод-углерод. Понятие "Z" обозначает такую стереохимическую конфигурацию относительно двойной связи углерод-углерод, в которой два атома водорода присоединены к различным атомам углерода и находятся на одной и той же стороне двойной связи углерод-углерод (Pure Appl. Chem., 45, 13-30 (1976)).
В контексте настоящего описания понятие ED обозначает эффективную дозу, и это понятие употребляется при описании моделей с использованием животных. Понятие ЕС обозначает эффективную концентрацию и используется при описании опытов in vitro.
В контексте настоящего описания понятие "ЕD50" ретиноида для рецептора ретиноевой кислоты обозначает молярную концентрацию ретиноида, при которой в опытах на моделях с использованием животных трансактивация конкретного рассматриваемого рецептора ретиноевой кислоты составляет 50% от максимальной трансактивации, достигаемой с помощью этого ретиноида. В контексте настоящего описания понятие "ЕС50" ретиноида для рецептора ретиноевой кислоты обозначает молярную концентрацию ретиноида, при которой в опытах in vitro уровень трансактивации конкретного рассматриваемого рецептора ретиноевой кислоты составляет 50% от максимального уровня трансактивации, достигаемой с помощью этого ретиноида.
В контексте настоящего описания понятие "ретиноид" обозначает любое соединение, которое обладает способностью трансактивировать любой или все α-, β-или γ-подтипы рецепторов RAR или RXR на уровне ЕD50, равном 1000 нМ или менее.
В контексте настоящего описания понятие "трансактивация" обозначает способность ретиноида активировать транскрипцию гена, причем транскрипция гена инициируется в результате связывания лиганда с конкретным исследуемым рецептором ретиноевой кислоты, т.е. RARα, RARβ или RARγ. Определение способности соединения трансактивировать рецептор ретиноевой кислоты можно осуществлять с помощью методов, известных специалистам в данной области. Примеры таких методов описаны у Bernard и др., Biochem. Biophys. Res. Commun., 186: 977-983 (1992) и у С. Apfel и др., Proc. Nat. Sci. Acad. (USA), 89: 7129-7133(1992).
В контексте настоящего описания понятие "избирательный агонист RARγ" относится к соединению, которое обладает способностью избирательно связываться с рецептором RARγ и стимулировать активацию RARγ. Избирательные агонисты RARγ связываются с рецептором RARγ в существенно более низких концентрациях (>10-кратная избирательность, предпочтительно 50-100-кратная избирательность), чем с рецепторами RARα и RARβ. Предпочтительный профиль активности включает лишь слабую активацию рецепторов RARα, в результате чего достигаются наиболее избирательные биологические реакции.
В контексте настоящего описания понятие "избирательный агонист RARγ/β" относится к агонисту, который избирательно связывается с рецепторами RARγ и RARβ, стимулируя активацию как RARγ, так и RARβ, и слабо активирует рецепторы RARα.
В контексте настоящего описания понятие "агонист RAR, обладающий избирательным действием по меньшей мере в отношении RARγ и слабо взаимодействующий с RARα" обозначает агонист, обладающий избирательным действием в отношении RARγ или RARγ/β.
В контексте настоящего описания понятие "пан-агонист RAR" обозначает агонист, который связывается с рецепторами RARα, RARβ и RARγ с приблизительно одинаковой аффинностью, стимулируя активацию RARα, RARβ и RARγ.
Понятие "пролекарство" обозначает любое соединение, которое in vivo высвобождает обладающее активностью исходное соединение, когда такое пролекарство вводят пациенту-млекопитающему. Пролекарства получают путем модификации функциональных групп, присутствующих в обладающем активностью лекарственном средстве таким образом, чтобы модифицирующие группы могли отщепляться in vivo, высвобождая исходное соединение. Пролекарства включают соединения, в которых гидроксигруппа, присутствующая в обладающем активностью лекарственном средстве, связана с любой группой, которую можно отщепить in vivo, восстанавливая при этом свободную гидроксильную группу. Примеры пролекарств включают (но не ограничиваясь ими) сложные эфиры (например, ацетатные, формиатные и бензоатные производные), карбаматы (например, N,N-диметиламинокарбонил) и простые эфиры функциональных гидроксильных групп, присутствующих в обладающих активностью лекарственных средствах, и т.п. Специалист в данной области может получать такие соединения стандартным образом путем ацилирования или этерификации гидроксильной группы, присутствующей в исходном лекарственном средстве.
При создании изобретения было установлено, что избирательные агонисты RARγ трансактивируют экспрессию гена тропоэластина в фибробластах легкого человека. Кроме того, было установлено, что соединения, обладающие избирательным действием в отношении RARγ, стимулируют восстановление и/или регенерацию альвеол в легких крыс. В то время как агонисты, обладающие избирательным действием в отношении RARγ, индуцируют экспрессию тропоэластина в фибробластах легкого человека, агонисты, обладающие избирательным действием в отношении RARβ и RARα, такую индукцию не вызывают. Таким образом, одним из объектов настоящего изобретения является способ стимуляции производства содержащего эластин внеклеточного матрикса у млекопитающего путем введения агониста, обладающего избирательным действием по меньшей мере в отношении RARγ.
Однако специалисту в данной области должно быть очевидно, что под объем настоящего изобретения подпадает применение всех агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, а не только тех агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, которые описаны в приведенных выше ссылках или которые известны в настоящее время в данной области. В целом любые соединения, обладающие избирательной активностью по меньшей мере в отношении RARγ, можно применять согласно изобретению и в способах по изобретению.
Согласно способам, представленным в настоящем описании, можно применять соединения, относящиеся к одному из семейств агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, которые описаны в патенте US №5700836, выданном 23 декабря 1997 г., и имеют структурную формулу I
где R1 обозначает радикал формулы
R2 обозначает С2-С8алканоил, С2-С8алкил, С2-С8алкенил, С2-С8алкинил или -ОСН2R3;
R3 обозначает водород, C1-С6алкил, C2-С6алкенил или C2-С6алкинил;
R4-R9 каждый независимо друг от друга обозначает водород или C1-С6алкил;
или R8 и R9 вместе обозначают (CRaRb)n, Ra и Rb независимо друг от друга обозначают водород или C1-С6алкил, n равно 1, 2 или 3 и R4-R7 имеют указанные выше значения;
R10 обозначает карбоксил, C1-С6алкоксикарбонил или моно- или ди(C1-С6алкил)карбамоил;
и их фармацеитически приемлемые соли.
Особенно предпочтительными соединениями в этом семействе являются соединения формулы Iа или Ib
где R2 обозначает С2-С8алкил, -ОСН2R3 или С2-С8алканоил.
Более предпочтительно R2 обозначает н-пентил, н-гексил, н-пропокси, н-пентокси или н-гексаноил.
где R2 обозначает гексил или н-пентокси.
Согласно способам по настоящему изобретению можно применять агонисты, обладающие избирательным действием в отношении RARγ, из другого семейства, которые описаны в патенте US №5726191, выданном 10 марта 1998 г., и которые имеют структурную формулу II
где
R1 обозначает водород или C1-С6алкил;
R2 обозначает C1-С6алкил или адамантил;
R3 обозначает C1-С6алкил или гидрокси; или
R2 и R3 вместе обозначают -(CR6R7)n- (где R6 и R7 обозначают водород или С1-С6алкил и n равно 3, 4 или 5);
R4 обозначает С2-С8алканоил, С2-С8алкил, С2-С8алкенил, С2-С8алкинил или -ОСН2R5;
R5 обозначает C1-С6алкил, C2-С6алкенил или C2-С6алкинил;
Y обозначает кислород или серу;
и их фармацевтически приемлемые соли.
Наиболее предпочтительными соединениями в этом семействе являются соединения формулы IIа
прежде всего соединения, в которых R4 обозначает н-пентил или н-гексил.
Третье семейство агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, которые можно применять согласно способам по настоящему изобретению, описано в патенте US №5498795, выданном 12 марта 1996 г., и характеризуется структурной формулой III
где R1-R3 и R5 независимо друг от друга обозначают водород, (низш.)алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, алкил с разветвленной цепью или циклоалкил, имеющий 3-15 атомов углерода, циклоалкил, имеющий 3-15 атомов углерода, замещенный (низш.)алкилом;
R4 обозначает (низш.)алкил, имеющий 1 -6 атомов углерода, алкил с разветвленной цепью или циклоалкил, имеющий 3-15 атомов углерода, или циклоалкил, имеющий 3-15 атомов углерода, замещенный (низш.)алкилом;
Y обозначает фенильную группу или гетероарил, выбранный из ряда, включающего пиридил, тиенил, фурил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, тиазолил, имидазолил и оксазолил, где указанные группы замещены указанной выше группой R5;
А обозначает (СН2)n, где n равно 0-5, (низш.)алкил с разветвленной цепью, имеющий 3-6 атомов углерода, циклоалкил, имеющий 3-6 атомов углерода, алкенил, имеющий 2-6 атомов углерода и 1 или 2 двойные связи, алкинил, имеющий 2-6 атомов углерода и 1 или 2 тройные связи;
В обозначает водород, СООН или ее фармацевтически приемлемую соль, COOR8, CONR9R10, -СН2ОН, CH2OR11, СН2ОСОR11, СНО, OH(OR12)2, CHOR13O, -COR7, CR7(OR12)2 или CR7OR13O, где R7 обозначает алкильную, циклоалкильную или алкенильную группу, имеющую 1-5 атомов углерода, R8 обозначает алкильную группу, имеющую 1-10 атомов углерода, или циклоалкильную группу, имеющую 5-10 атомов углерода, или R8 обозначает фенил или (низш.)алкилфенил, R9 и R10 независимо друг от друга обозначают водород, алкильную группу, имеющую 1-10 атомов углерода, или циклоалкильную группу, имеющую 5-10 атомов углерода, или фенил или (низш.)алкилфенил, R11 обозначает (низш.)алкил, фенил или (низш.)алкилфенил, R12 обозначает (низш.)алкил и R13 обозначает двухвалентный алкильный радикал, имеющий 2-5 атомов углерода.
Особенно предпочтительными агонистами, обладающими избирательным действием в отношении RARγ, являются соединения формулы IIIa
Согласно способам по настоящему изобретению можно применять четвертое семейство агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, которые описаны в патенте US №5760084, выданном 2 июня 1998 г., и характеризуются структурной формулой IV
где Х обозначает F, Cl, ОН или СН3;
Y обозначает Н или F;
R1-R6 каждый независимо друг от друга обозначает водород или C1-С6алкил;
n обозначает целое число от 1 до 4;
R7 обозначает водород или карбоксизащитную группу;
и их фармацевтически приемлемые соли.
Особенно предпочтительным соединением в этом семействе агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, является соединении формулы IVa (BMS-961)
Пятое семейство агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, которые можно применять согласно способам по настоящему изобретению, описано в патентах US №5130335, выданном 12 июля 1992 г., и №5231113, выданном 27 июля 1993 г., и характеризуется структурной формулой V
где группы R независимо друг от друга обозначают водород или (низш.)алкил;
А обозначает -С(O)O-, -ОС(O)-, -C(O)S-или SC(O)-;
n равно 0-5; и
Z обозначает Н, -СОВ, -ОЕ, -СНО или его ацетальное производное, или -COR3, где
В обозначает -OR1, где R1 обозначает группу, образующую сложный эфир, или В обозначает -N(R)2, где R обозначает водород или (низш.)алкил;
Е обозначает водород, группу, образующую простой эфир, или -COR2, где R2 обозначает водород, (низш.)алкил, фенил или (низш.)алкилфенил;
R3 обозначает -(СН2)mСН3, где m равно 0-4 и сумма n и m не превосходит 4.
Особенно предпочтительным соединением в этом семействе агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, является соединение формулы Va
Шестое семейство агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, которые можно применять согласно способам по настоящему изобретению, описано в опубликованной заявке РСТ WO 97/37648 и во французской заявке на патент FR 2739557-A1, опубликованной 11 апреля 1997 г., и они характеризуются структурной формулой VI
где R1-R5 имеют значения, указанные в WO 97/37648.
В частности, R1 обозначает C(O)R6 или СН2ОН (где R6 обозначает гидрокси или C1-С6алкокси);
R2 обозначает водород, C1-С15алкил, C1-С6алкокси или циклоалифатическую группу;
R3 обозначает водород, гидрокси, C1-С6алкил, дигидроксиC1-С6алкил, C1-С10алкокси или циклоалифатическую группу; и
R4 и R5 независимо друг от друга обозначают водород, гидрокси, C1-С6алкил, C1-С6алкокси.
Особенно предпочтительными соединениями в этом семействе агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, являются соединение формулы VIa (CD-437) и соединение формулы VIb (CD-2247), описанные в Biochem. Biophys. Res. Commun., 179: 1554-1561 (1991), Biochem. Biophys. Res. Commun., 186: 977-984 (1992) и в Int. J. Cancer 71: 497 (1997).
Другими представляющими интерес соединениями являются соединения формул VII, VIII, IX, Х и XI ((R)-и (S)-энантиомеры), описанные в Skin Pharmacol. 8: 292 -299 (1995))
Другие соединения, которые можно применять согласно способам по настоящему изобретению, имеют структурные формулы XII (J. Med. Chem. 39: 2411-2421 (1996) и Cancer Res. 55: 446-4451 (1995))
XIII и XIV (Cancer Letters, 115: 1-7 (1997))
Еще одно представляющее интерес соединение имеет структурную формулу XV (см. J. Med. Chem. 32: 834-840 (1989) и публикацию японского патента 62/053981 (1987)).
Соединения, обладающие избирательным действием в отношенииRARγ, по данным анализа трансактивации должны обладать как минимум в 10 раз большей избирательностью в отношении RARγ по сравнению с RARα и RARβ, предпочтительно более чем 100-кратной избирательностью по сравнению с действием в отношении RARα.
Избирательность действия соединения в качестве агониста RARγ можно оценивать с помощью стандартных методов анализа связывания с лигандами, известных специалисту в данной области, например, таких, которые описаны у С. Apfel и др., Proc. Nat. Sci. Acad. (USA), 89: 7129-7133 (1992); M. Teng и др., J. Med. Chem., 40: 2445-2451 (1997) и в публикации РСТ WO 96/30009.
Агонисты, обладающие избирательным действием в отношении RARγ, можно применять согласно изобретению для стимуляции восстановления поврежденных альвеол и образования перегородок новых альвеол. Благодаря таким свойствам эти соединения можно применять для лечения таких заболеваний, как эмфизема.
Конкретная доза агониста RAR или агониста, обладающего избирательным действием в отношении RARγ, которая необходима для стимуляции восстановления/регенерации альвеол согласно настоящему изобретению, должна зависеть от серьезности состояния, пути введения и сопутствующих факторов, которые должны приниматься во внимание лечащим врачом. Как правило, доза для перорального введения составляет от приблизительно 1,0 до 0,01 мг/кг веса тела в день (мг/кг/день), предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,05 мг/кг веса тела в день. Для больного человека весом 50 кг суточная доза действующего вещества, предназначенная для перорального введения, составляет от приблизительно 50 до приблизительно 0,5 мг, предпочтительно от приблизительно 5 до приблизительно 2,5 мг. Эту дозу можно вводить в организм в виде обычной фармацевтической композиции путем однократного введения, путем введения нескольких разделенных доз или с помощью системы, обеспечивающей контролируемое высвобождение, если необходимо достичь наиболее эффективных действий. Предполагается, что местное введение лекарственного средства в виде аэрозоля в воздушные пространства легких позволяет снизить эффективную дозу в 10-100 раз (от 10 до 0,1 мкг/кг/день). Введение лекарственного средства следует продолжать в течение необходимого с медицинской точки зрения периода времени, который в зависимости от серьезности заболевания может составлять от нескольких недель до нескольких месяцев.
Как правило, фармацевтически приемлемую композицию, такую как соль или пролекарство агониста RAR, вводят вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. В контексте настоящего описания фармацевтически приемлемые соли включают любые приемлемые соли, известные в области ретиноидов, которые можно вводить больным людям. Примеры обычных известных в данной области солей включают соли щелочных металлов, такие как натриевые и калиевые соли, соли щелочно-земельных металлов, такие как кальциевые и магниевые соли, и соли аммония и алкиламмоння. Особенно предпочтительные пролекарства композиций агонистов RAR(включают гидролизуемые производные в виде сложных эфиров, такие как ароматические и бензиловые эфиры или (низш.)алкиловые эфиры, например этиловый, трет-бутиловый, циклопентиловый эфиры и т.п.
Репрезентативные пути введения включают пероральный, парентеральный (в том числе подкожный, внутримышечный и внутривенный), ректальный, буккальный (в том числе сублингвальный), трансдермальный, легочный и интраназальиый. Один из методов легочного введения предусматривает получение аэрозоля из водного раствора агониста RAR. Аэрозольные композиции могут включать соединение, упакованное в обратимые мицеллы или липосомы. Другие методы легочного введения включают введение сухого порошка с помощью ингаляционных устройств для сухого порошка и введение жидкой композиции, содержащих ретиноидный агонист и полиэтиленгликоль или водный раствор этанола, с помощью электрогидродинамических ингаляционных устройств. Стандартные устройства для введения в легкие и дыхательную систему описаны в патентах US №№5607915, 5238683, 5292499 и 5364615, а также в "Aerosol delivery of liposomal ATRA to the lungs," Parthasarathy R., Gilbert B.M. и Mehta K., Cancer Chemotherapy Pharmacol, 43: 277-283, 1999.
Согласно изобретению лекарственные средства, например, в форме фармацевтической композиции для системного введения агонистов RARγ применяют также в виде композиции, предназначенной для одновременного или последовательного введения в сочетании с другим действующим веществом для усиления клиренса из реснитчатого эпителия слизистой оболочки дыхательных путей или уменьшения вязкости слизи. Репрезентативные действующие вещества, усиливающие клиренс из реснитчатого эпителия, включают, например, блокаторы натриевых каналов (например, амилорид) или антибиотики (например, дурамицин, низин или субтилин). Репрезентативные действующие вещества, уменьшающие вязкость слизи, включают N-ацетилцистеин, гомоцистеин и фосфолипиды.
Агонисты RARγ обычно вводят в виде фармацевтических композиций в смеси с фармацевтически приемлемым нетоксичным носителем. Как указывалось выше, можно приготавливать такие композиции для парентерального введения (подкожного, внутримышечного или внутривенного) прежде всего в форме растворов или суспензий; для перорального или буккального введения прежде всего в форме таблеток или капсул; для интраназального введения прежде всего в форме порошков, капель или аэрозолей для носа; и для ректального или трансдермального введения. Можно применять любой обычный носитель. В качестве носителя можно применять любой органический или неорганический носитель, такой как вода, желатин, гуммиарабик, лактоза, крахмал, стеарат магния, тальк, полиалкиленгликоли, вазелин и т.п.
Жидкие композиции для парентерального введения или для перорального введения могут содержать в качестве эксципиентов стерильную воду или физиологический раствор, алкиленгликоли, такие как пропиленгликоль, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения, гидрогенизированные нафталины и т.п.Они могут включать слабо кислые буферы, имеющие значение рН в диапазоне от приблизительно 4 до приблизительно 6. В качестве буферов можно применять ацетатный, аскорбатный и цитратный буферы в концентрациях от приблизительно 5 до приблизительно 50 мМ. Эффективность композиций, предназначенных для перорального введения, можно усиливать путем добавления солей желчных кислот или ацилкарнитинов.
Композиции для буккального введения могут находиться в твердой форме и могут содержать в качестве обычных эксципиентов сахара, стеарат кальция, стеарат магния, предварительно желированный крахмал и т.п.
Твердые формы для перорального введения включают таблетки, твердые и мягкие желатиновые капсулы, пилюли, саше, порошки, гранулы и т.п. Каждая таблетка, пилюля или саше может содержать от приблизительно 5 до приблизительно 200 мг агониста RARγ, предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 50 мг. Предпочтительными твердыми пероральными дозируемыми формами являются таблетки, капсулы с твердой оболочкой, состоящие из двух частей, и мягкие гибкие желатиновые капсулы (МГЖ). МГЖ-капсулы представляют собой особый интерес, поскольку они обладают выраженными преимуществами по сравнению с двумя другими формами (см. Seager H., "Soft gelatin capsules: a solution to many tableting problems, "Pharmaceutical Technology, 9: (1985)). Конкретными преимуществами МГЖ-капсул являются: а) однородность распределения дозы в МГЖ-капсулах является оптимальной, поскольку лекарственное средство растворяют или диспергируют в жидкости, которую можно вносить в капсулы в строго определенных дозах; б) лекарственные средства, приготовленные в виде МГЖ-капсул, обладают хорошей биологической доступностью, поскольку лекарственное средство растворяют, солюбилизируют или диспергируют в смешивающейся с водой или маслянистой жидкости и поэтому при высвобождении в организме растворы растворяются или эмульгируются, образуя дисперсии лекарственного средства, которые имеют большую площадь поверхности; и в) разложение лекарственных средств, которые чувствительны к окислению при продолжительном хранении, предотвращается благодаря наличию твердой оболочки.
Композиции для назального введения могут быть твердыми и могут содержать эксципиенты, например лактозу или декстран, или могут находиться в виде водных или маслянистых растворов, которые применяют в форме капель для носа или дозируемого спрея. Конкретные назальные композиции включают сухие порошки, которые можно вводить с помощью обычных ингаляторов для сухих порошков (DPI), жидкие растворы или суспензии, которые можно распылять, и содержащие пропеллент композиции, которые можно вводить с помощью ингаляторов с дозировочной шкалой (MDI).
Абсорбцию назальной слизистой мембраной композиции, предназначенной для назального введения, можно увеличить с помощью кислот, представляющих собой поверхностно-активные вещества, таких, например, как гликохолевая кислота, холевая кислота, таурохолевая кислота, этохолевая кислота, дезоксихолевая кислота, хенодезоксихолевая кислота, дегидрохолевая кислота, гликодезоксихолевая кислота, циклодекстрины и т.п., которые включают в состав композиции в количестве от приблизительно 0,2 до 15 мас.%, предпочтительно от приблизительно 0,5 до 4 мас.%, наиболее предпочтительно приблизительно 2 мас.%.
Введение в организм пациента соединений по настоящему изобретению в течение продолжительных периодов времени, например в течение периодов времени от одной недели до одного года, можно осуществлять путем однократного введения системы с контролируемым высвобождением, содержащей количество действующего вещества, достаточное для требуемого периода высиобождения. Для этой цели можно использовать различные системы с контролируемым высвобождением, такие как монолитные микрокапсулы или микрокапсулы резервуарного типа, имплантаты депо, осмотические насосы, везикулы, мицеллы, липосомы, трансдермальные бляшки, ионофоретические устройства и другие инъецируемые дозируемые формы. Дополнительной особенностью некоторых приспособлений для контролируемого высвобождения, которая может оказаться полезной при лечении определенных заболеваний, является то, что их можно разместить в том месте, в которое требуется вводить действующее вещество.
Ниже приведены репрезентативные фармацевтические композиции, предназначенные для применения согласно настоящему изобретению агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ, с целью стимуляции опосредуемого эластином восстановления матрикса и образования альвеолярных перегородок.
Композиция в форме таблетки
Перечисленные ниже ингредиенты тщательно смешивают и прессуют, получая отдельные таблетки с насечкой. Количество на одну таблетку, содержащую 1,0-50 мг действующего вещества
Ингредиент | Количество на одну таблетку, мг |
агонист RAR кукурузный крахмал кроскармелоза натрия лактоза стеарат магния | 10 50 25 120 5,0 |
Композиция в форме капсулы Перечисленные ниже ингредиенты тщательно смешивают и полученной смесью заполняют капсулы с твердой желатиновой оболочкой. Количество на одну капсулу, содержащую 5 мг действующего вещества: | |
Ингредиент | Количество на одну капсулу, мг |
агонист RAR лактоза, высушенная распылением стеарат магния | 5 148 2 |
Композиция в форме суспензии
Перечисленные ниже ингредиенты смешивают, получая суспензию, предназначенную для перорального введения:
Ингредиент | Количество |
агонист RAR фумаровая кислота хлорид натрия метилпарабен пропилпарабен гранулированный сахар сорбит (70%-ный раствор) Veegum К (фирма Vanderbilt Со.) корригент красители дистиллированная вода | 1,0-50 мг 0,5 г 2,0 г 0,15 г 0,05 г 25,5 г 12,85 г 1,0 г 0,035 мл 0,5 мг q.s. до 100 мл |
Композиция для введения путем инъекции Перечисленные ниже ингредиенты смешивают, получая композицию, предназначенную для введения путем инъекции: | |
Ингредиент | Количество |
агонист RAR буферный раствор ацетата натрия, 0,4М НСl (1 н.) или NaOH (1н.) вода (дистиллированная, стерильная) | 100 мг 2,0 мл q.s. до требуемого рН q.s. до 20 мл |
Композиция для назального введения
Перечисленные ниже ингредиенты смешивают, получая суспензию, предназначенную для назального введения
Ингредиент | Количество |
агонист RAR | 20 мг/мл |
лимонная кислота | 0,2 мг/мл |
цитрат натрия | 2,6 мг/мл |
бензалконийхлорид | 0,2 мг/мл |
сорбит | 35 мг/мл |
таурохолат или гликохолат натрия | 10 мг/мл |
Представленные ниже композиции и примеры даны с целью более подробного пояснения изобретения и для того, чтобы специалисты в данной области могли осуществить его на практике. Они не направлены на ограничение объема изобретения и служат только в качестве иллюстративных и репрезентативных примеров.
В указанных примерах используют один или несколько агонистов RAR, перечисленных в приведенной ниже таблице
Таблица I Агонисты RAR, используемые в примерах | |
Агонист RAR | Структура |
1 | ![]() |
2 | ![]() |
3 | ![]() |
4 | ![]() |
5 | ![]() |
6 | ![]() |
7 | ![]() |
8 | ![]() |
9 | ![]() |
10 | ![]() |
Пример 1
Трансактивация с помощью RAR гена тропоэластина в стационарном состоянии
Трансактивацию гена тропоэластина в фибробластах легкого здорового человека (CCD-16Lu) осуществляли согласно описанному ниже методу. Клетки выращивали до конфлуэнтности, после чего к основной культуре добавляли свежую среду, содержащую ATRA или ретиноид или без них, обладающий избирательным действием. ATRA и/или ретиноиды, обладающие избирательным действием, использовали в концентрации 1×10-7М. Слой клеток лизировали с помощью буфера на основе гуанидиния (TRIZOL/фирма Sigma) для осуществления экстракции РНК и проведения анализа. Амплификацию тропоэластина и РНК GAPDH (глицеральдегид-фосфат-дегидрогеназа) осуществляли с помощью стандартной количественной ОТ-ПЦР (TAQMAN, фирма Perken/Elmer) с использованием соответствующих селективных праймеров. Уровень экспрессии гена тропоэластина стандартизовали по отношению к уровню экспрессии стандартного гена “домашнего хозяйства” (GAPDH).
Опыты по исследованию образцов проводили в трех повторностях. Результаты представлены ниже в таблице II. Эти результаты свидетельствуют о том, что ATRA (агонист RAR №4) приводит к слабому усилению индукции гена тропоэластипа по сравнению с контролем, а агонист, обладающий избирательным действием в отношении RARγ (агонист RAR №3), существенно усиливает индукцию гена тропоэластина. При этом агонисты, обладающие избирательным действием в отношении RARα и RARβ (агонисты RAR №1 и №2) не вызывают индукции гена тропоэластина.
Таблица II RARγ стимулирует экспрессию гена тропоэластина в фибробластах легкого человека | ||||
Компоненты, добавленные к клеточной культуре | Трансактивация EC50 (нМ) | Связывание IC50 (НМ) | Экспрессия тропоэластина (эластин/GAPDH)×105 | |
агонист RAR №1 | α | 16,5 | 300 | |
β | 10000 | 10000 | 13,93 | |
γ | 10000 | 10000 | ||
агонист RAR №2 | α | 2000 | 1000 | |
β | 39 | 28 | 1,85 | |
γ | 160 | 300 | ||
агонист RAR №3 | α | 1000 | 2700 | |
β | 88 | 3000 | 68,58 | |
γ | 15 | 210 | ||
ATRA агонист RAR №4 | α | 6,7 | 14 | |
β | 3,8 | 14 | 35,50 | |
γ | 2,5 | 14 | ||
контроль CCD-16Lu | α | NA | 30,90 | |
β | NA | |||
γ | NA |
Пример 2
Исследование агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RAR, с использованием легкого крыс
Проводили оценку воздействий полностью транс-ретиноевой кислоты (ATRA) и агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RAR, на восстановление альвеол с использованием в качестве модели индуцируемой эластазой эмфиземы легкого крыс (Massaro G. и Massaro D., Nature, том 3, № 6: 675-677 (1997)). Животных разделяли на группы с различной обработкой приблизительно по восемь особей в группе. У самцов крыс линии Sprague Dawley индуцировали воспаление легких и повреждение альвеол путем инстилляции чластазы поджелудочной железы (полученной из свиней, фирма Calbiochem) и количестве 2 ед./г веса тела.
Через три недели после повреждения ATRA или агонист, обладающий избирательным действием в отношении RAR, растворяли в ДМСО (20 мг/мл) и помещали на хранение при -20°С. Свежие рабочие растворы приготавливали ежедневно путем разбавления в кукурузном масле до конечной концентрации 2 мг/мл. Животным, подвергавшимся обработке с помощью ATRA и агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RAR, вводили внутрибрюшинно указанные соединения (0,5 мг/кг ip) один раз в день, начиная с дня 21 после повреждения. Животным из контрольной группы вводили эластазу и через 21 день их обрабатывали носителем (ДМСО/ЗФР) в течение 14 дней. Через 24 ч после введения последней дозы животных умерщвляли путем кровоизвлечения при глубокой анестезии. В процессе кровоизвлечения отбирали образцы крови с целью анализа изменений химического состава крови, происходящего в результате соответствующих обработок.
Легкие заполняли 10%-ным забуференным до нейтрального значения рН формалином путем внутритрахеального его введения с постоянной скоростью (1 мл/г веса тела /мин). Легкое вырезали и погружали в фиксирующий раствор на 24 ч перед обработкой. С помощью стандартных методов готовили парафиновые срезы толщиной 5 мкм. Срезы окрашивали с использованием гематоксилина и эозина (Н%Е). Для определения среднего размера альвеол и количества альвеол проводили компьютерный морфометрический анализ.
Результаты представлены ниже в таблице III. Эти результаты свидетельствуют о том, что ATRA (агонист RAR №4) индуцировал восстановление альвеол, приводя к реверсии повреждения альвеол, вызванного обработкой эластазой. Агонисты, обладающие избирательным действием в отношении RARγ и RARγ/β (агонисты RAR №№3, 5, 6 и 7), вызывали существенное восстановление альвеол. При этом агонисты, обладающие избирательным действием в отношении RARβ и RARα (агонисты RAR №1,2 и 9), не индуцировали восстановление альвеол.
Кроме того, делали световые микрофотографии срезов легкого. Делали микрофотографии здорового легкого крысы, легкого крысы, поврежденного эластазой и после этого обработанного агонистом RAR №1 (обладающим избирательным действием в отношении RARα), легкого крысы, поврежденного эластазой и после этого обработанного агонистом RAR №2 (обладающим избирательным действием в отношении RARβ), и легкого крысы, поврежденного эластазой и после этого обработанного агонистом RAR №3 (обладающим избирательным действием в отношении RARγ). Микрофотографии позволили выявить значительные структурные различия в легких, подвергавшихся обработке тремя различными субстанциями. При сравнении микрофотографии легкого, обработанного агонистом, обладающим избирательным действием в отношении RARγ, с микрофотографией здорового легкого крысы видно, что площадь альвеол в нем близка к площади альвеол здорового легкого крысы. На микрофотографии легкого, обработанного агонистом, обладающим избирательным действием в отношении RARα, и на микрофотографии легкого, обработанного агонистом, обладающим избирательным действием в отношении RARβ, видно, что обработка этими субстанциями не приводит к реверсии изменений, вызванных обработкой эластазой.
Таблица III. Исследование агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RAR, с использованием легкого крысы | |||||
Вид обработки | Трансактивация ЕС50 (нМ) | Связывание IC50 (нМ) | Площадь альвеол | % восстановления | |
Не обработанные эластазой | α | н.о. | |||
β | н.о. | 1637±153 | н.о. | ||
γ | н.о. | ||||
эластаза + носитель | α | н.о. | |||
β | н.о. | 3570±319 | н.о. | ||
γ | н.о. | ||||
ATRA агонист RAR №4 | α | 6,8 | 14 | ||
β | 3,8 | 14 | 2607±191 | 50 | |
γ | 2,5 | 14 | |||
агонист RAR №1 | α | 16,5 | 300 | ||
β | 10000 | 10000 | 3058±160 | <20 | |
γ | 10000 | 10000 | |||
агонист RAR №2 | α | 2000 | 1000 | ||
β | 39 | 28 | 3653±550 | <20 | |
γ | 160 | 300 | |||
агонист RAR №3 | α | 1000 | 2700 | ||
β | 88 | 3000 | 1929±150 | >70 | |
γ | 15 | 210 | |||
агонист RAR №5 | α | 10000 | 2300 | ||
β | 10000 | 5400 | 2502±243 | 56 | |
γ | 104 | 770 | |||
агонист RAR №6 | α | 10000 | 3100 | ||
β | 16 | 2100 | 1909±207 | >70 | |
γ | 15 | 2410 | |||
агонист RAR №7 | α | 2700 | 6500 | ||
β | 2300 | 4600 | 1817±241 | >70 | |
γ | 9 | 310 | |||
агонист RAR №9 | α | 3 | 39 | ||
β | 25 | 870 | 3323±406 | <20 | |
γ | 40 | 4500 |
Пример 3
Влияние пан-агониста RAR и ретиноидных агонистов, обладающих избирательным действием в отношении RARγ и RARγ/β, на уровни триглицеридов в плазме
У крыс индуцировали экспериментальную эмфизему согласно методу, описанному в примере 2. Через три недели после повреждения животных обрабатывали носителем (раствор Capmul) или ретиноидами, растворенными в Capmul, которые вводили перорально в дозе 1, 3 и 10 мг/кг веса тела. Животных обрабатывали в течение 14 дней до завершения исследования. Удаление легкого и отбор образцов крови осуществляли согласно процедуре, описанной в примере 2.
Количественную оценку уровня триглицеридов в плазме крыс проводили на основе стандартных методов с использованием клинического лабораторного оборудования. В целом метод заключался в том, что триглицериды, находящиеся в плазме, превращали в дигидроксиацетон и Н2О2 путем последовательной обработки плазмы с помощью липазы и глицерокиназы согласно инструкциям производителя, прилагаемого к набору триглицериды/GPO (фирма Boehringer Mannheim №1488872). Количество Н2О2 оценивали колориметрическим методом с помощью химического анализатора типа Hitachi 911 Chemistry Analyzer. Нормальные уровни триглицеридов у крыс составляли 75-175 мг/дл.
Результаты представлены ниже в таблице IV. Эти результаты свидетельствуют о том, что пан-агонисты RAR (агонисты RAR №4 (ATRA), №8 и №10) приводили к таким уровням триглицеридов, которые находились либо на верхней границе диапазона нормальных значений, либо превышали его. В отличие от этого ретиноиды, обладающие избирательным действием в отношении RARγ (агонисты RAR №№3, 7 и 5), и ретиноиды, обладающие избирательным действием в отношении RARγ/β (агонист RAR №6), не вызывали повышения уровней триглицеридов; при введении этих ретиноидов, обладающих слабой активностью в отношении RARα, концентрации триглицеридов оставались полностью в диапазоне от среднего до нормального нижнего уровня. Таким образом, избирательная активность в отношении RARα, по-видимому, связана с повышенными уровнями триглицеридов.
Таблица IV RARγ стимулирует восстановление альвеол и снижает уровень триглицеридов | |||
Вид обработки | Избирательность в отношении рецептора | % восстановления | [концентрация триглицеридов] мг/дл |
ATRA агонист RAR №4 | α,β,γ | 37,6 | 182 |
агонист RAR №8 | α,β,γ | 57,1 | 178 |
агонист RAR №10 | α,β,γ | 58,3 | 273 |
агонист RAR №6 | γ,β | 39 | 140 |
агонист RAR №3 | γ | 73,7 | 92 |
агонист RAR №7 | γ | 66 | 114 |
агонист RAR №5 | γ | 40 | 119 |
Пример 4
Исследование в клинических условиях
Для участия в данном эксперименте привлекались пациенты мужского и женского пола в возрасте от 45 до 75 лет, которые страдали эмфиземой и которые прекратили курить по меньшей мере за 6 месяцев до начала исследования. Кроме того, пациент должен был удовлетворять по меньшей мере 2 из 3 приведенных ниже критериев, характеризующих функцию легких:
ОЕЛ (общая емкость легких) после применения бронхолитического средства ≥110% предсказанной емкости (что является показателем чрезмерного растяжения легкого)
ОФВ1 (односекундный объем воздуха при форсированном выдохе) после применения бронхолитического средства ≤70% предсказанного объема (что является показателем обструкции дыхательных путей средней тяжести).
ДЛСО (диффузионная способность легких для СО) ≤65% предсказанной способности (что является показателем разрушения альвеолярных структур от средней до тяжелой степени).
Кроме того, пациенты должны были иметь полученное с помощью компьютерной томографии (КТ) доказательство наличия эмфиземы от малой до средней степени, нормальную функцию почек и печени и нормальное состояние костного мозга.
Пациентов не допускали к участию в эксперименте, если выполнялся один или несколько из следующих критериев:
ОФВ1 <0,8 л; в течение года наблюдалась обусловленная невыясненными причинами потеря веса, составляющая >10% нормального веса тела; происходили повторные легочные инфекции с частотой > 2 в год, сопровождающиеся выделением мокроты в количестве, превышающем 3 столовые ложки/день; выявлено наличие бронхоэктаза, нестабильной стенокардии, избыточного количества триглицеридов (>300 мг%), гиперхолестеринемии (>220%); имелась зависимость от принимаемых пероральным путем стероидов; пациент подвергался конкурентному лечению лекарственными средствами, в отношении которых известно, что они влияют на системы печени, связанные с цитохромом Р450; выявлена острая или хроническая болезнь печени, обусловленная чрезмерным потреблением алкоголя; или выявлена аллергия к ретиноидам.
План исследования | |||
Группа | N | Доза | Режим |
А | 60 | плацебо | 5 дней в неделю |
В1 | 60 | 1 мг/кг | 5 дней в неделю |
В2 | 60 | 1 мг/кг | 1 день в неделю |
С1 | 60 | 0,1 мг/кг | 5 дней в неделю |
С2 | 60 | 0,1 мг/кг | 1 день в неделю |
Все пациенты проходили обследование в течение 3 месяцев после завершения фазы активного лечения для оценки остаточного улучшения состояния легких или выявления токсического действия. Через каждые 3 месяца проводили тест на функциональную способность легких (ТФСЛ) и системный опрос, касающийся состояния пациента. HRCT проводили только при начале процедуры отбора и после завершения лечения. У пациентов, получавших высокую дозу или возможно низкую дозу ретиноида, можно было выявить один или несколько из следующих результатов: снижение скорости уменьшения ОФВ1 с 63 мл/год до 31 мл/год; начальное 5%-ное улучшение ОФВ в течение первого года лечения; улучшение ДСЛСО (5-10%); улучшение качества жизни по данным стандартного опроса.
Пример 5
Оценка легочного газообмена
Перед завершением исследований у крыс, имеющих повреждения, вызванные эластазой, как подвергавшихся обработке ретиноидом, так и не подвергавшихся такой обработке, определяли содержание газов в кровеносной системе легких и в артерии. Крыс подвергали глубокой анестезии пентобарбиталом (50 мг/кг, i.p.) и им в трахею вводили канюлю (РЕ 240). Крыс подвергали искусственной вентиляции (f=90, TV=приблизительно 0,5 мл/100 г массы тела) с помощью небольшого респираторного насоса для животных (Harvard). Для каждой крысы параметры насоса регулировали таким образом, чтобы парциальное артериальное давление СО2 в легочной артерии (РСО2) составляло 30-35 Торр. Образцы артериальной крови (приблизительно 0,2 мл) брали из брюшной аорты (АО2) и немедленно проводили анализ газа рНОх в крови. Результаты представлены в виде процента (%) восстановления по отношению к соответствующим данным, полученным для крыс, обработанных эластазой и носителем.
Как следует из представленных ниже данных табл.5, обработка ретиноидами крыс, имеющих повреждения, вызванные эластазой, улучшала газообмен. В частности, агонист №3, обладающий избирательным действием в отношении RARγ, оказался более эффективным и обладал более сильным действием, чем пан-агонист (ATRA). Этот результат согласуется с воздействием на восстановление структуры альвеол, продемонстрированным в предыдущих примерах. Улучшение газообмена кореллирует с уменьшением частоты дыхания, обусловленным эмфиземой. Таким образом, лечение пациента с помощью агониста, обладающего избирательным действием в отношении RARγ, приводит к облегчению одного из основных симптомов эмфиземы.
Таблица 5 | ||||
Соединение | Доза мг/кг | РСO2 | РO2 | АO2 |
ATRA агонист №4 | 3,0 | 69,1 | 49,1 | 74,8 |
агонист RAR №3 | 0,01 | 84,6 | 49,8 | 100 |
Для целей более ясного понимания изобретение было проиллюстрировано с помощью примеров. Специалисту в данной области должно быть очевидно, что при осуществлении на практике могут быть сделаны изменения и модификации, подпадающие под объем формулы изобретения. Поэтому следует иметь ввиду, что приведенное выше описание служит для иллюстрации, но не направлено на ограничение объема изобретения. Таким образом, объем изобретения должен определяться приведенной ниже формулой изобретения, а также всеми эквивалентами, названными в пунктах этой формулы.
1. Применение агониста RARγ для приготовления лекарственного средства, содержащего один или несколько таких агонистов, предназначенного для лечения эмфиземы, где агонист RARγ выбирают из соединений формулы I
где R1 обозначает остаток формулы
или
или
или
R2 обозначает С2-С8алканоил, С2-С8алкил, С2-С8алкенил, С2-С8алкинил или -OCH2R3;
R3 обозначает водород, С1-С6алкил, С2-С6алкенил или С2-С6алкинил;
R4-R9 каждый независимо друг от друга обозначает водород или С1-С6алкил или R8 и R9 вместе обозначают (CRaRb)n, Ra и Rb независимо друг от друга обозначают водород или С1-С6алкил, n равно 1, 2 или 3 и R4-R7 имеют указанные выше значения;
R10 обозначает карбоксил, С1-С6алкоксикарбонил или моно- или ди(С1-С6алкил)карбамоил;
и их фармацевтически приемлемых солей или из соединений формулы VI
где R1 обозначает C(O)R6 или СН2ОН (где R6 обозначает гидрокси или С1-С6алкокси);
R2 обозначает водород, С1-С15алкил, С1-С6алкокси или циклоалифатическую группу;
R3 обозначает водород, гидрокси, С1-С6алкил, дигидрокси С1-С6алкил, С1-С10алкокси или циклоалифатическую группу и
R4 и R5 независимо друг от друга обозначают водород, гидрокси, С1-С6алкил, С1-С6алкокси;
или из соединения формулы VIII
2. Применение по п.1, где агонист RARγ представляет собой соединение формулы VII
3. Применение по п.1, где агонист, обладающий избирательным действием в отношении RARγ, связывается с рецептором RARγ и трансактивирует его, при этом значение ЕС50 составляет по меньшей мере 200 нМ.
4. Применение по п.1, где избирательность в отношении рецептора RARγ агониста, обладающего избирательным действием в отношении RARγ, по меньшей мере в 20 раз превышает его избирательность в отношении рецепторов RARα и RARβ.