Способ трансформации растений и линия клеток эмбриогенного каллюса zea mays

 

Изобретение относится к генетической инженерии и может быть использовано в селекции растений. Клетку или ткань растения обрабатывают Agrobacterium, содержащей вектор с представляющим интерес геном, в условиях, ингибирующих индуцируемый Agrobacterium некроз (АИН). Ингибирование АИН включает обработку температурным шоком либо наличие подходящего химического ингибитора или нуклеотидной последовательности, кодирующей мРНК или протеин, ингибирующий АИН. Обработка таким образом клеток и тканей предотвращает их некроз при трансформации с помощью Agrobacterium и повышает эффективность трансформации. 2 c. и 22 з.п. ф-лы, 13 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Формула изобретения

1. Способ трансформации растительной клетки или ткани представляющим интерес геном, включающий обработку растительной клетки или ткани Agrobacterium в условиях, которые ингибируют индуцируемый Agrobacterium некроз (АИН), причем Agrobacterium включает вектор, содержащий представляющий интерес ген, где ингибирующие АИН условия включают (а) контактирование растительной клетки или ткани с Agrobacterium после обработки температурным шоком; или (б) контактирование растительной клетки или ткани с Agrobacterium в присутствии агента, ингибирующего АИН, где этот агент включает (i) химический ингибитор, где химический ингибитор представляет собой соединение, выбранное из группы, включающей ингибиторы этилена за исключением нитрата серебра, ингибиторы синтеза этилена, антагонисты гиббереллина и ингибиторы фосфатазы; или (ii) нуклеотидная последовательность, кодирующая мРНК или протеин, ингибирующий АИН.

2. Способ по п.1, где условия, при которых ингибируется АИН, включают контактирование растительной клетки с Agrobacterium после обработки растительной клетки или ткани температурным шоком.

3. Способ по п.2, где обработка температурным шоком длится 2 - 10 мин.

4. Способ по п.3, где обработка температурным шоком длится 4 - 8 мин.

5. Способ по п.2, где обработку температурным шоком проводят при температуре 40 - 50С.

6. Способ по п.5, где обработку температурным шоком проводят при температуре 42 - 48С.

7. Способ по п.1, где условия, при которых ингибируется АИН, включают контактирование растительной клетки или ткани с Agrobacterium в присутствии химического ингибитора, где химический ингибитор представляет собой соединение, выбранное из группы, включающей ингибиторы этилена за исключением нитрата серебра, ингибиторы синтеза этилена, антагонисты гиббереллина и ингибиторы фосфатазы.

8. Способ по п.1, где условия, при которых ингибируется АИН, включают контактирование растительной клетки или ткани с Agrobacterium в присутствии нуклеотидной последовательности, кодирующей мРНК или протеин, ингибирующий АИН.

9. Способ по п.8, где нуклеотидная последовательность доставляется или экспрессируется в растительной клетке или ткани.

10. Способ по п.8, где нуклеотидная последовательность включает кодирующую последовательность, выбранную из группы, включающей ген р35, ген iap, ген dad-1, ген bcl и ген, способный подавлять болезненную реакцию в растениях.

11. Способ по п.10, где ген, способный подавлять болезненную реакцию в растениях, является nahG или mlo.

12. Способ по п.8, где нуклеотидная последовательность включает кодирующую последовательность, выбранную из группы, включающей ген р35, ген iap и ген dad-1.

13. Способ по п.1, где растительная клетка или ткань представляют собой растительную клетку или ткань злаковых.

14. Способ по п.13, где клетка растений или ткань являются клеткой или тканью кукурузы.

15. Способ по п.13, где клетка растений или ткань являются клеткой или тканью пшеницы.

16. Способ по п.1, где растительная ткань является эмбриогенным каллюсом.

17. Способ по п.1, где растительная клетка является незрелым эмбрионом.

18. Способ по п.1, дополнительно включающий получение регенеранта зрелого трансгенного растения из трансформированных растительных клеток или ткани.

19. Способ по п.18, где растительная клетка или ткань представляют собой растительную клетку или ткань злаковых.

20. Способ по п.19, где клетка растений или ткань являются клеткой или тканью кукурузы.

21. Способ по п.19, где клетка растений или ткань являются клеткой или тканью пшеницы.

22. Способ по п.18, где растительная ткань является эмбриогенным каллюсом.

23. Способ по п.18, где растительная клетка является незрелым эмбрионом.

24. Линия клеток НЕ/89 эмбриогенного каллюса Zea mays L., включающих кодирующую последовательность гена р35.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53