Способ определения меди(ii) в сыворотке крови

 

Изобретение относится к медицине. Проводят определение меди(II) в сыворотке крови за счет проведения индикаторной реакции окисления гидрохинона пероксидом водорода в присутствии малонодинитрила (МН) на фильтровальной бумаге, модифицированной гексаметилендиамином. Полуколичественное определение меди(II) в сыворотке осуществляют визуально. Способ повышает экспрессность, уменьшает объем анализируемой пробы сыворотки, увеличивает количество параллельно анализируемых проб. Способ может применяться для диагностики вирусного гепатита. 3 ил.

Изобретение относится к физике и может быть использовано при определении меди(II) в сыворотке крови.

Известны способы определения меди(II) в сыворотке крови спектрофотометрическим и кинетическим методами [1, 2, 3].

Недостатком известных методов является необходимость предварительного отделения альбумина [1], озоления [3], затраты большого количества сыворотки и времени для анализа.

Указанные недостатки устранены в способе определения меди(II) в сыворотке крови, включающем последовательное нанесение буферного раствора (рН 5.6-6.8), сыворотки, растворов пероксида водорода, малонодинитрила (МН) и гидрохинона в середину бумажного фильтра, наблюдение цвета образовавшегося на фильтре пятна через 2-5 мин после нанесения гидрохинона и определение содержания меди(II).

Недостатком известного способа определения меди(II) в сыворотке крови является то, что способ полуколичественный и позволяет определять содержание меди(II), не связанной с церулоплазмином в образце сыворотки.

Технической задачей изобретения является повышение экспрессности и эффективности анализа, уменьшение объема анализируемой пробы сыворотки (с 100-200 до 0.5-1 мкл), увеличение количества параллельно анализируемых проб сыворотки.

Необходимая техническая сущность заключается в том, что в способе определения меди(II) в сыворотке крови, включающем последовательное нанесение буферного раствора (рН 5,6-6,8), сыворотки, растворов пероксида водорода, МН и гидрохинона в середину бумажного фильтра, наблюдение цвета образовавшегося на фильтре пятна через 2-5 мин после нанесения гидрохинона и определение содержания меди(II), индикаторную реакцию окисления гидрохинона пероксидом водорода в присутствии МН проводят на фильтровальной бумаге, модифицированной гексаметилендиамином (ГМДА), а полуколичественное определение содержания меди(II) в сыворотке осуществляют визуально по цвету образующихся в реакции продуктов.

Определение меди(II) в образце сыворотки визуальным методом с помощью цветной шкалы позволяет полуколичественно определять от 110^-5 до 0.5 мкг меди(II) в 1 мкл образца сыворотки,

Проведение цветной индикаторной реакции гидрохинон - медь(II) - пероксид водорода - МН на фильтровальной бумаге, модифицированной ГМДА, обеспечивает высокую чувствительность определения меди(II) за счет сорбционного концентрирования на носителе и активирования катализа ГМДА-группами, и упрощает методику за счет проведения индикаторной реакции непосредственно на сорбенте.

На графических приложениях изображены: на фиг.1 - хелатообразующие ГМДА-группы, привитые к фильтровальной бумаге;

фиг.2 - цветная шкала для определения 110^-5 - 0.5 мкг меди на ГМДА-фильтрах;

фиг.3 - схема определения меди(II) в сыворотке крови.

Пример выполнения способа (фиг.3): растворы реагентов каталитической индикаторной реакции гидрохинон - медь(II) - пероксид водорода - МН наносят в середину бумажного фильтра, модифицированного ГМДА (фиг.1), с помощью дозатора фирмы типа “Eppendorf”; после нанесения каждого раствора (кроме гидрохинона) фильтр высушивают потоком воздуха; а определение содержания меди(II) в образце сыворотки проводят визуально с помощью цветной шкалы (фиг. 2).

Способ осуществлен в клинической лаборатории центральной районной больницы г. Сургута.

При анализе сыворотки крови 50 здоровых людей при проведении способа отмечают розовое или оранжевое пятно на фильтре, что согласно цветной шкале соответствует содержанию 0.01 - 0.10 мкг/мл.

Это содержание характеризуют как нормативный показатель по меди(II).

При анализе сыворотки крови больных вирусным гепатитом отмечают серое или зеленое пятно на фильтре, что соответствует содержанию 1-10 мкг/мл меди(II) (фиг. 2).

Анализ крови 40 больных вирусным гепатитом с использованием способа определения меди(II) в сыворотке крови показал, что содержанием меди(II) в сыворотке является одним из диагностических показателей при заболеваниях вирусным гепатитом.

Технико-экономическая или иная эффективность:

1) повышение экспрессности и эффективности анализа;

2) уменьшение объема анализируемой пробы сыворотки;

3) увеличение количества параллельно анализируемых проб сыворотки.

Источники информации

1. Долманова И.Ф., Мельникова О.И., Цизин Г.И., Шеховцова Т.Н. Журн.аналит.химии, 1980, т.35, с.728.

2. Gantcheva S., Bontchev P.R., Talanta, 1980, v.27, p. 893.

3. Dong W., Zhang Z., Fenxi Huaxue, 1984, v.12, p. 186.

Формула изобретения

Способ определения меди(II) в сыворотке крови, включающий последовательное нанесение буферного раствора (рН 5,6-6,8), сыворотки, растворов пероксида водорода, малонодинитрила (МН) и гидрохинона на фильтровальную бумагу, наблюдение цвета образовавшегося на фильтре пятна через 2-5 мин после нанесения гидрохинона и определение содержания меди(II), отличающийся тем, что индикаторную реакцию окисления гидрохинона пероксидом водорода в присутствии МН проводят на фильтровальной бумаге, модифицированной гексаметилендиамином, а полуколичественное определение содержания меди(II) в сыворотке осуществляют визуально по цвету образующихся в реакции продуктов.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3