Косметическое средство

 

Изобретение относится к области косметологии и касается косметических средств, обладающих иммуномоделирующей активностью. Косметическое средство содержит активное начало и приемлемый носитель, при этом в качестве активного начала оно содержит доларгин, и может быть приготовлено в виде крема, маски, лосьона. Средство защищает кожные покровы от неблагоприятных воздействий повреждающих факторов, а также повышает способность организма бороться с чужеродными антигенами, заживляет раны, ожоги и трещины кожи. 1 з. п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к области косметологии и касается косметических средств, обладающих иммуномодулирующей активностью.

Основная функция косметических средств для ухода за кожей состоит в поддержании нормального физиологического состояния клеток ткани кожи, включая нормализацию обменных процессов, в том числе водно-солевого баланса, защите кожи от неблагоприятного влияния факторов внешней среды, устранении дефектов поврежденной ткани кожи путем активизации регенеративных процессов.

Известны сотни рецептур косметических средств для ухода за кожей, обладающих той или иной совокупностью благоприятных для ткани кожи характеристик. Как правило, косметические средства имеют сложный состав и включают природные соединения в виде экстрактов из материалов растительного или животного происхождения. Такие средства оказывают комплексное воздействие на ткани кожи, и влияние отдельных соединений на состояние кожных покровов не всегда прослеживается.

Известен, например, косметический крем для ухода за кожей, предотвращающий ее старение, содержащий фермент коллазу, инактивированную сперму петуха и/ или гонады морских ежей, и/или клеточный детрит бактерий Bifidobacterium bifidum, и/или фермент гиалуронидазу, выделенный из семенников животных [Патент РФ 2.139.039, А 61 К 7/48, 1999 г.].

Описано жидкое косметическое средство для ухода за кожей, обладающее тонизирующим действием, которое содержит касторовое масло, спирт и активные вещества корневища и корня дягиля, или корневища лапчатки, или травы череды, или корневища бадана [Патент РФ 2.134.102, А 61 К 7/48, 1999 г.].

Предложен крем для кожи лица, способствующий нормализации баланса жидкости в коже, содержащий биологически активную добавку-комплекс биологически активных веществ, выделенный из медицинских пиявок [Патент РФ 2.134.569, А 61 К 7/48, 1996 г.].

В качестве активных компонентов косметических средств, повышающих эластичность кожи и сглаживающих морщины, предложено использовать природный комплекс коллагенолитических ферментов, выделенный из пищеварительных органов гидробионтов [Патент РФ 2.141.31, А 61 К 7/48, 1997 г.].

Известно косметическое средство, обладающее тонизирующим, противовоспалительным, антибактериальным, иммуномодулирующим и омолаживающим действием, которое содержит в качестве активных начал лечебную грязь, сапропель, голубую глину и каолин [Патент РФ 2.180.213, А 61 К 7/48, 2002 г.].

Известен крем для кожи лица и тела, нормализующий обменные процессы в коже, обладающий противовоспалительным действием, стимулирующий местный иммунитет, который включает комплекс полипептидов, выделенный из кумыса [Патент РФ 2.137.467, А 61 К 7/48, 1999 г.].

Наиболее близким к предложенному может считаться косметическое средство, обладающее стимулирующей и ранозаживляющей активностью, содержащее в качестве основного активного начала экстракт торфа, которому приписывается иммуномодулирующая активность [Патент РФ 2.126.682, А 61 К 35/10, 1999 г.].

Целью настоящего изобретения является создание косметических средств, достоверно оказывающих на ткани кожи иммуномодулирующее действие и проявляющих по этой причине комплекс благоприятных свойств, включая способность оптимизировать функции клеток ткани кожи за счет нормализации обменных процессов в ткани кожи, защиты ее от неблагоприятных факторов внешней среды, активизации в ней регенеративных процессов.

Поставленная цель достигается в результате использования в составе косметических средств в качестве основного активного начала даларгина.

Технический результат, достигаемый в результате использования изобретения, состоит в расширении арсенала иммуномодулирующих средств, пригодных для эффективного применения в области косметологии.

Существо изобретения состоит в следующем.

Для придания косметическим средствам иммуномодулирующей активности в их состав вводят даларгин.

Даларгин - синтетическое производное природного опиоидного пептида лейэнкефалина, является синтетическим диацетилированным гексапептидом и имеет следующую первичную структуру: Туr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg.

Даларгин проявляет противоязвенное и гипотензивное действие, подавляет желудочную секрецию, способствует активизации репаративных процессов и ускорению заживления дефектов слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта. Он разрешен в установленном порядке для применения в медицинской практике и показан при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, облитерирующем эндартериите, облитерирующем атеросклерозе сосудов нижних конечностей, алкоголизме [Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. М, "РЛС-2001", 2001 г., стр. 253].

Предпосылками для создания настоящего изобретения послужили два научных факта.

С одной стороны, было установлено, что даларгин проявляет сродство к опиоидным рецепторам [Yu.A.Zolotarev et.al. The solid-state catalitic isotope exchange of hydrogen in Dalargin./Russian journal of Bioorganic Chemistry, 2000, v. 26, N 7, p.457-460] и способен модулировать процессы, связанные с функциональной, пролиферативной и дифференцировочной активностью клеток-мишеней иммунной системы [Зозуля А.А и др. Значение лигандов опиатных рецепторов в регуляции пролиферативной активности лимфоцитов. [ Фармакология и токсикология, 1987, т.5б N3, с.58-59].

С другой стороны, было выяснено, что клетки Лангенгарса, основные антигенпрезентирующие клетки кожи [J.Banchereau, R.M.Steinman. Dendric cells and the control of immunity. // Nature, 1988, v.392, p.245-252; В.Макаренкова и др. Система дендритных клеток: роль в индукции иммунитета и в патогенезе инфекционных, аутоиммунных и онкологических заболеваний. // Иммунология, 2002, т. 23, N 2, c.68-76], как и ряд других типов иммунокомпетентных клеток, экспрессируют на своей поверхности опиоидные рецепторы [А.А.Зозуля, С.Ф.Пшеничкин. Опиоиды и иммунитет. // В кн. "Нейроиммунология: молекулярные и клинические аспекты", Итоги науки и техники, серия "Иммунология", т.25, М. , 1990, с. 48-120; J.Hosoi et al. Beta-endorphin binding and regulation of cytokine expression in Langerhans cells. // Ann.N.Y.Acad.Sci., 1999, v.885, p.405-413].

Несмотря на априорную очевидность взаимодействия даларгина как агониста опиоидных рецепторов с опиоидными рецепторами клеток иммунной системы кожи, сведений о степени выраженности такого взаимодействия и о концентрациях даларгина, необходимых для проявления эффекта пептида при накожном применении, в научной литературе обнаружено не было.

Упомянутые факты дали основание предполагать способность даларгина вызывать иммуномодулирующие эффекты при местном, в частности при накожном применении.

Некоторые результаты экспериментального изучения иммуномодулирующих эффектов даларгина приведены ниже.

Даларгин нормализует пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови человека. При этом направленность нормализующего эффекта зависит отисходного состояния клеток.

Индуцированная поликлональными митогенами пролиферация лимфоцитов является одной из основных характеристик функционального состояния иммунокомпетентных клеток, отражающая их способность реагировать на чужеродные антигены. В связи с этим исследовано влияние даларгина на способность лимфоцитов включать ³Н-тимидин при стимуляции фитогемагглютинином.

Лимфоциты выделяли в системе фиколл-верографин из периферической крови здоровых доноров (34 человека) и доноров с вторичными иммунодефицитами (9 человек). Пролиферативную активность лимфоцитов оценивали известным образом.

В результате исследования влияния даларгина (0,1 нМ) на пролиферативную активность лимфоцитов продемонстрирован разнонаправленный, зависящий от исходного состояния, но неизменно нормализующий эффект препарата.

У здоровых доноров даларгин на 29% (р<0,01, t-критерий Стъюдента) снижает Пролиферативную активность лимфоцитов, стимулированных оптимальной дозы митогена. Этот эффект нельзя рассматривать в качестве проявления иммуносупрессии, поскольку стимулированная поликлональными митогенами пролиферация in vitro - искусственная ситуация, моделирующая гиперактивацию иммунного ответа in vitro.

Вместе с тем, при изучении эффектов даларгина на лимфоциты доноров с иммунодефицитными состояниями обнаружена прямо противоположная картина. В отсутствии пептида пролиферативная активность лимфоцитов этих доноров составляла 54% от таковой у здоровых доноров, в присутствии - 93% (эффект даларгина достоверен - р<0,01, t-критерий Стъюдента).

Таким образом, пептид стимулирует активированную митогеном пролиферативную активность лимфоцитов в том случае, когда пролиферация ниже нормального уровня и подавляет в условиях повышенной пролиферативной активности. То есть действие препарата направлено на поддержание гомеостаза.

Даларгин стимулирует гиперчувствительность немедленного и замедленного типа при внутрикожном введении.

В процессе исследования крыс-самцов Wistar весом 200-230 г иммунизировали подкожно в подушечку задней левой лапки бычьим сывороточным альбумином (БСА) в полном адъюванте Фрейнда. Животным опытной группы (10 крыс) проводили курс инъекций даларгина (1 мкг/кг массы в 50 мкл физиологического раствора), контрольной группы (11 животных) - физиологического раствора. Инъекции проводили на протяжении 14 дней (один раз в день в утренние часы) внутрикожно, в точки, находящиеся в непосредственной близости от места иммунизации.

Через 14 дней после подкожной иммунизации животным внутрикожно (в кожу спины) вводили 30 мкг БСА в 0,1 мл физиологического раствора и БЦЖ 1:10 в том же объеме физиологического раствора. Интенсивность реакции Артюса и гиперчувствительности замедленного типа оценивали с использованием кожного теста через 4 и 24 часа после разрешающей иммунизации БСА и tubercle bacille, входящих в состав полного адъюванта Фрейнда. При этом определяли диаметр зоны гиперемии (с точностью до 0,1 мм) и "степень воспаления" (наличие отека и инфильтрации), которую условно выражали по шкале от 0 до ++++.

В результате проведенного эксперимента показано, что курс инъекций даларгина стимулирует развитие гиперчувствительности немедленного типа (реакция Артюса) к БСА и tubercle bacille у крыс Wistar. Этот результат получен при определении среднего диаметра зоны гиперемии у животных, вторично иммунизированных как БСА (10,00,7 мм в контроле и 13,21,4 мм в опыте, р<0,05), так и tubercle bacille (4,90,4 мм в контроле и 6,70,7 мм в опыте, р<0,01). Кроме того, стимулирующий эффект пептида на интенсивность реакции Артюса подтвержден и при оценке степени воспаления. Инъекции даларгина увеличивают плотность гиперемированного участка на 35% (р<0,05) при разрешающей иммунизацией БСА и в 2,1 раза (р<0,01) при иммунизации tubercle bacille.

Незначительный, но достоверный (р<0,05) стимулирующий эффект отмечен также при изучении действия даларгина на гиперчувствительность замедленного типа к БСА и tubercle bacille.

Таким образом, действие препарата на клетки кожи повышает способность организма бороться с чужеродными антигенами. Можно предполагать, что один из механизмов стимуляции описанных иммуностимулирующих эффектов связан с прямым или опосредованным действием на важнейший класс антигенпрезентирующих клеток - дендритные клетки.

При системном введении даларгин стимулирует антителопродукцию (оцениваемую методом локального гемолиза в геле с использованием теста Ерне).

Даларгин (1нг/кг массы), растворенный в 0,5 мл физиологического раствора, вводили в хвостовую вену мышам (СВА/С57Вl₆)F1 через 30 мин после иммунизации эритроцитами барана. В контрольной серии экспериментов вместо даларгина иммунизированным мышам вводили 0,5 мл физиологического раствора. Эритроциты (10⁸/0,5 мл физиологического раствора), предварительно трижды отмытые физиологическим раствором (300 g, 10 мин при 4^oС), также водили в хвостовую вену. На пике иммунного ответа (на пятые сутки после иммунизации) животных забивали. Извлеченную селезенку гомогенизировали в гомогенизаторе стекло-стекло со слабо притертым пестиком. Клеточные взвеси готовили из расчета 10-50 мг сырого веса селезенки/мл среды и вносили по 0,1 мл в пробирки, термостатируемые при 43^oС. Пробирки содержали по 2,5 мл 0,5% раствора агарозы, приготовленного на растворе Хенкса (рН 7,2) и 7,5-10,010⁷ эритроцитов, трижды отмытых физиологическим раствором (300 g, 10 мин при 4^oС). После этого образцы переносили на чашку Петри и инкубировали 1 ч при 37^oС. По окончании инкубации в каждую чашку добавляли по 2,5 мл комплемента морской свинки, разведенного физиологическим раствором 1:5. Далее пробы вновь инкубировали 30 мин при 37^oС и проводили подсчет антителообразующих клеток селезенки.

Аналогично проводили эксперименты по изучению влияния даларгина на антите-лопродукцию, используя пептид в дозах 5 нг, 250 нг, 500 нг, 3,75 мкг, 5,00 мкг, 2,50 мг на 1 кг массы экспериментального животного. Полученные данные представлены в таблице в конце описания.

Радиорецепторное исследование дельта - опиоидных рецепторов дендритных клеток Радиорецепторный анализ позволяет определить аффинность и число мест связывания на клетках-мишенях, что в контексте проводимого исследования необходимо для научно-обоснованного выбора диапазона концентраций даларгина в косметическом средстве. В связи с этим с использованием меченного тритием синтетического аналога даларгина - ³H-ДАДЛЭ (d-Аla²-Lеu-энкефалин) изучены характеристики рецепторного связывания лигандов с опиоидными рецепторами дельта-типа, наиболее эффективных антигенпрезентирующих клеток, дендритных клеток мыши.

В результате анализа Скэтчарда кривой насыщения связывания ³H-ДАДЛЭ с рецепторами зрелых дендритных клеток определена равновесная константа - диссоциация рецепторного связывания, равная 4,81,0 нМ и максимальная плотность рецепторов - 303 фмоль/мг белка мембранной фракции дендринтных клеток.

Действующие концентрации лигандов, вызывающих биологический эффект, опосредованный рецепторами клеток мишеней, сопоставим с величиной равновесной константы диссоциации. Вместе с тем, сложность проникновения пептидов через ткани кожи [А.А.Марголина и др. Новая косметология. М., Косметика и медицина, 2000, 204 с; А.А.Зозуля и др. Клеточная терапия в косметологии: белково-пептидные комплексы фетальных тканей как действующее звено anti-age therapy в косметических средствах. // Косметика и медицина, 2001, N 4 (23), с. 32-39] , предшествующее взаимодействию с дендритными клетками, определяет необходимость увеличения действующих концентраций на порядки.

Представленные результаты позволяют определить диапазон концентраций даларгина, при котором наблюдается стимуляция иммунокомпетентных клеток кожи, и даже наблюдаются иммуномодулирующие эффекты, оптимизирующие иммунный статус целостного организма.

Полученные результаты позволяли рекомендовать примение даларгина в косметологии для повышения устойчивости тканей кожи к неблагоприятным внешним факторам и воздействиям, для заживления ран, ожогов и трещин кожи, для подавления аллергических реакций.

Особенно пригодны косметические средства, содержащие даларгин, для сухой и чувствительной кожи, в том числе для пациентов, склонных к аллергическим кожным реакциям.

Даларгин может быть включен в состав самых различных косметических средств - кремов, косметических масок, лосьонов, косметического молочка и других, а также может использоваться в составе средств для ухода за полостью рта, например, в составе зубных паст.

Эффективная концентрация даларгина в составе косметических средств может составлять 0,001-0,0150 вес.%.

Приводимые ниже примеры лишь иллюстрируют существо предложения и не должны носить ограничивающего характера.

ПРИМЕР 1. Для приготовления 200 кг косметического крема для увядающей кожи на поверхность 50 кг воды засыпают 0,45 кг карбопола Ультрез 10 и оставляют до получения однородной массы, не содержащей ненабухших комков карбопола.

Параллельно готовят эмульсию, смешивая 6 кг изопропилмиристата, 6 кг вазелинового масла, 0,1 кг витамина Е, 2 кг масла какао, 1,6 кг диметикона DC200,1 кг ланолина, 3 кг стеариновой кислоты, 4 кг полавакса, 3 кг глицерилмоностеарата, 2 кг миндального масла, 2 кг ПЭГ-8 стеарата, 0,25 кг масла арники, после чего массу нагревают в плавильном котле до 65^oС и перемешивают до образования однородного продукта.

В реактор заливают 10 кг воды, добавляют приготовленную эмульсию и еще 97,34 кг воды и смесь гомогенизируют. Затем добавляют набухший карбопол, 6 кг глицерина, 2 кг гермабена II, 0,2 кг пантенола и 0,45 кг триэтаноламина, после чего тщательно перемешивают.

Полученную гомогенную массу охлаждают до 40^oС, добавляют 0,2 кг отдушки Флеур де Матин, 0,05 кг аскорбилфосфата натрия и смесь 2 кг аквафтэма и 0,002 кгдаларгина. Готовый продукт перемешивают и доводят значение рН до величины 6,8 с помощью триэтаноламина.

ПРИМЕР 2. Для приготовлении 200 кг успокаивающего крема для чувствительной кожи на поверхность 50 кг воды засыпают 0,4 кг карбопола Ультрез 10 и оставляют для набухания до получения однородной массы. Параллельно готовят эмульсию, для чего смешивают 6 кг изопропилмиристата, 2 кг вазелинового масла, 2 кг цетилового спирта, 2 кг диметикона, 2 кг цетеарилоктоноата, 4 кг полавакса GP 200,4 кг миндального масла, 4 кг стеарата глицерина и ПЭГ-100 стеарата, 0,2 кг ВНТ и нагревают в плавительном котле до температуры 70^oС и перемешивают до получения однородной массы. В реактор заливают 10 кг нагретой воды, добавляют полученную эмульсию, вносят еще 97,56 кг нагретой воды, гомогенизируют. Добавляют набухший карбопол, 4 кг глицерина, 4 кг пропиленгликоля, раствор 0,4 кг проксанола в 4 кг воды, 2 кг гермабена II, 0,4 кг пантенола, 0,4 кг триэтонламина и включают мешалку. После получения гомогенной массы ее охлаждают до 45^oС, добавляют 0,35 кг отдушки Флер де Матин, 0,2 кг геля алоэ, раствор 0,03 кг даларгина в 2 кг аквафтема, 0,09 кг раствора красителя синего (0,18 г красителя на 90 г вводы) и вновь перемешивают до получения однородной массы, имеющей рН 6,9.

Использование в составе косметических средств даларгина для придания этим средствам иммуномодулирующей активности имеет то преимущество перед использованием других применяемых в косметологии иммуномодулирующих препаратов, что даларгин является синтетическим продуктом с определенной структурной формулой, что существенно облегчает стандартизацию готовых препаратов по их биологической активности. Поскольку даларгин может быть причислен к сравнительно новой группе иммуномодуляторов (опиоидные иммуномодуляторы), то расширяются возможности косметических средств, содержащих далларгин, за счет достижения иммуномодулирующего эффекта по иному механизму, чем это обеспечивалось ранее известными препаратами аналогичной направленности.

По сведениям заявителя, даларгин с этой целью в косметологии не использовался и априорно судить о его применимости и эффективности в этой области не представлялось возможным.

Известно, правда, что даларгин включался в состав крема для ухода за кожей, рекомендованного для снижения функции салоотделения и проявляющего противовоспалительное действие на кожу, склонную к угревой сыпи [Патент РФ 2.045.949, А 61К 7/48, 1995 г.].

В известном косметическом составе даларгин был использован на основе его иных функциональных свойств, механизм его действия не был раскрыт и возможность применения даларгина как иммуномолулирующего агента в косметологии не предвосхищалась.

Не опровергает новизны предложения и известность парэнтерального использования даларгина для лечения псориаза [Патент РФ 2.017.488, А 61 К 31/485, 1994 г.].

Заявитель полагает, что заявленное предложение соответствует всем требованиям, предъявляемым к изобретению.

Формула изобретения

1. Средство, защищающее кожные покровы от неблагоприятных воздействий повреждающих факторов, содержащее приемлемый носитель и активное начало, отличающееся тем, что в качестве активного начала содержит даларгин в концентрации от 0,001 до 0,0150 вес.%.

2. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно приготовлено в виде крема, маски, лосьона.

РИСУНКИ

Рисунок 1