Колостринин и его применение

 

Применение колостринина в качестве лекарства при лечении хронических расстройств центральной нервной системы, иммунной системы, неврологических, умственных расстройств, слабоумия, нейродегенеративных заболеваний, болезни Альцгеймера, мотонейронного заболевания, для лечения психоза или невроза, в качестве диетической добавки. Фармкомпозиция содержит колостринин, диетическую добавку, нанопептид. Изобретение позволяет реализовать указанное назначение. 12 с. и 12 з. п. ф-лы, 6 табл. , 1 ил.

Настоящее изобретение относится к колостринину и его использованию в качестве лекарства.

Молозиво представляет собой густую желтоватую жидкость, производимую грудными железами млекопитающих в несколько первых дней после родов. Через четыре или пять дней после родов оно заменяется зрелым молоком. По сравнению со зрелым молоком, производимым грудными железами, молозиво содержит меньше сахара. Однако молозиво богато липидами, протеинами, минеральными солями, витаминами и иммуноглобулином. Оно также содержит различные свободные блуждающие клетки, такие как гранулярные и стромальные клетки, нейтрофилы, моноциты/макрофаги и лимфоциты, и включает факторы роста, гормоны и цитокины.

Из молозива млекопитающих были выделены и охарактеризованы различные активные соединения. В 1974 году Janusz и др. (FEBS Lett., 49, 276-279) выделили из овечьего молозива полипептид, обогащенный пролином (пролин-обогащенный полипептид, PRP). Содержание этой статьи не связано с имеющейся здесь ссылкой. Было найдено, что молозиво других млекопитающих также содержит аналогичный PRP. Тогда PRP был назван колостринином и экспериментально идентифицирован как новый класс цитокинов.

Janusz и др. в "Proline-Rich Polypeptid (PRP)-Immunomodulatory Peptide from Ovin Colostrum" (Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1993, 41, 275-279) указывают, что PRP из овечьего молозива обладает иммунотропной активностью на мышах. Однако в этом документе нет указаний на то, что PRP может обладать каким-либо терапевтическим действием на любого другого животного. Следует учитывать, что наличие у композиции терапевтической активности в отношении мышей еще не означает, что она будет обладать таким же терапевтическим действием на любое другое животное.

В настоящем изобретении обнаружено, что колостринин обладает целым рядом до этого неизвестных терапевтических свойств. Обнаружено, что преимущественно он обладает иммунотропным и психотропным действием.

Одним из объектов данного изобретения является колостринин для использования в качестве лекарства. Колостринин может использоваться в качестве лекарства для млекопитающих, за исключением грызунов; найдено также, что колостринин особенно полезен в качестве медикамента при лечении человека.

Другим объектом данного изобретения является применение колостринина для изготовления лекарства для лечения расстройств центральной нервной системы или расстройств иммунной системы.

Преимущественно объектом данного изобретения является колостринин для использования при лечении расстройств центральной нервной системы, особенно хронических расстройств центральной нервной системы. Указанные расстройства центральной нервной системы, которые можно лечить колостринином, включают неврологические расстройства и психические расстройства.

В качестве примеров неврологических расстройств, которые с успехом можно лечить с помощью колостринина, можно назвать слабоумие, а также расстройства, которые вызывают слабоумие, такие как нейродегенеративные расстройства. Нейродегенеративные расстройства включают, например, старческое слабоумие и мотонейронные болезни; примером мотонейронной болезни, которую можно лечить с помощью колостринина, является болезнь Паркинсона. Было найдено, что колостринин особенно эффективен при лечении нейродегенеративной болезни, известной как болезнь Альцгеймера.

Примерами психических расстройств, которые можно лечить с помощью колостринина, являются психозы и неврозы. Например, колостринин можно использовать для лечения эмоциональных нарушений, особенно эмоциональных расстройств у психиатрических пациентов в состоянии депрессии - было найдено, что использование колостринина создает у пациента чувство благополучия и помогает стабилизировать настроение. Колостринин также может быть использован как вспомогательное средство при абстиненции в случаях лекарственной наркомании после периода детоксикации и для людей, зависимых от возбуждающих средств.

Другим объектом изобретения является колостринин для использования при лечении расстройств иммунной системы, особенно при лечении хронических расстройств. Найдено, что колостринин может использоваться при лечении болезней, требующих иммуномодуляции. В особенности колостринин полезен при лечении таких расстройств у не относящихся к грызунам животных, включая человека. Колостринин полезен при лечении различных иммунологических и инфекционных заболеваний. Например, колостринин может использоваться при лечении хронических заболеваний бактериальной или вирусной этиологии и при лечении приобретенного иммунологического дефицита, который развивается, например, после химиотерапии или радиотерапии новообразований. Изобретение особенно полезно при лечении хронических бактериальных и вирусных инфекций, требующих неспецифической иммуностимуляции и иммунокоррекции.

Хроническим расстройством считается такое расстройство, которое упорно сохраняется в течение длительного времени, обычно, по меньшей мере, в течение недели, обыкновенно, по меньшей мере, в течение месяца и часто, по меньшей мере, в течение 3 или 6 месяцев.

Настоящее изобретение относится также к применению колостринина для улучшения развития иммунной системы у новорожденных детей. Дальнейшей особенностью настоящего изобретения является применение колостринина для коррекции иммунодефицита у детей. Такое применение колостринина особенно полезно младенцам и детям, которые не получали молозива. Это относится, например, к младенцам и детям, которые не получали грудного питания; искусственное питание, которое получают такие младенцы и дети, не содержит колостринина.

Другим объектом изобретения является применение колостринина в качестве диетической добавки. Особенно полезно использование колостринина в качестве диетической добавки для младенцев и маленьких детей с целью коррекции недостаточного развития их иммунной системы. Как указывалось выше, такой дефицит развития иммунной системы может возникать у младенцев и детей, не получавших грудного питания после рождения. Колостринин может использоваться также в качестве диетической добавки для взрослых, прошедших курс химиотерапии или страдающих от истощения или потери веса в связи с хроническим заболеванием. Другим объектом изобретения является также диетическая добавка, содержащая пероральную композицию колостринина в сочетании с фармакологически приемлемым носителем. Диетическая добавка может быть выполнена в жидкой или твердой форме; она также может быть в форме таблеток.

В соответствии с настоящим изобретением, колостринин может назначаться с профилактической целью, чтобы предотвратить расстройства центральной нервной системы и иммунной системы.

Используемый в настоящем изобретении колостринин может быть как овечьим, так и неовечьим колостринином. Неовечий колостринин может быть выделен из молозива, например, человека, коров, кобыл, коз, свиней, яков, лам и ослиц. Обычно он содержится в молозиве этих животных в первые 1-4 дня после родов.

Используемый здесь термин "колостринин" означает полипептид, полученный в его естественной форме из молозива млекопитающих. Колостринин, известный иногда как "колостринайн", обладает следующими свойствами: (I) молекулярный вес от 16000 до 26000 дальтон; (II) он представляет собой димер или тример из субъединиц, каждая из которых имеет молекулярный вес от 5000 до 10000 дальтон, преимущественно 6000 дальтон; (III) он содержит пролин, и количество пролина в нем больше, чем количество любой другой аминокислоты.

Мы обнаружили также, что колостринин и составляющие его субъединицы являются неполярными.

Молекулярный вес можно определить с помощью электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия; наличие димера или тримера можно показать с помощью того же метода. Электрофорез в восстановленном или невосстановленном состоянии показывает, что связи между субъединицами являются нековалентными. Наличие пролина можно установить с помощью обычного аминокислотного анализа. Неполярность можно продемонстрировать путем хроматографии в неполярных условиях.

Используемый в настоящем изобретении колостринин может быть овечьим или неовечьим колостринином. Овечий колостринин имеет молекулярный вес около 18000 дальтон, состоит из трех нековалентно связанных субъединиц, имеющих молекулярный вес около 6000 дальтон каждая, и содержит около 22 вес.% пролина. Аминокислотная композиция состоит из следующего числа остатков на субъединицу: лизин - 2, гистидин - 1, аргинин - 0, аспарагиновая кислота - 2, треонин - 4, серин - 3, глутаминовая кислота - 6, пролин - 11, глицин - 2, аланин - 0, валин - 5, метионин - 2, изолейцин - 2, лейцин - 6, тирозин - 1, фенилаланин - 3 и цистеин - 0.

Как указывалось выше, природный колостринин получают из молозива млекопитающих. Из молозива млекопитающих колостринин можно выделить путем удаления из него липидов и большинства протеинов. Колостринин можно получить, например, из молозива крупных сельскохозяйственных животных, используя колоночную хроматографию и другие биохимические методы, а также он может быть получен с помощью генной инженерии.

Преимущественно колостринин получают из молозива млекопитающих, используя следующие стадии: (I) удаление липидов, например, центрифугированием; (II) удаление протеинов, таких как казеин, например, снижением рН; (III) отделение колостринина, связанного с иммуноглобулином, например, путем: (a) обработки сыворотки, полученной после удаления липидов и протеинов, с помощью ионообменной хроматографии и (b) элюирования соляным фосфатным буфером и сбора фракции, содержащей колостринин, связанный с иммуноглобулином, например, IgG2 овцы; (IV) отделение колостринина от иммуноглобулина, например, гель-хроматографией и
(V) дальнейшая очистка колостринина, преимущественно путем:
(a) обессоливания фракции с молекулярным весом ниже 30000 дальтон и
(b) введения антител против иммуноглобулинов и последующего удаления этого класса протеинов с получением целевого продукта.

Сказанное выше относится к природному колостринину млекопитающих, но термин колостринин включает здесь и его аналоги и фрагменты, обладающие по существу той же биологической активностью, что и колостринин млекопитающих, и его аналоги и фрагменты, полученные рекомендацией ДНК. Колостринин, как здесь использовано, также включает биологически активные полипептиды, по существу, того же состава, что и природный колостринин, полученные синтетическим путем.

Другим объектом изобретения является также способ лечения расстройств центральной нервной системы и иммунной системы с использованием колостринина. Расстройства, которые с успехом можно лечить описываемым в настоящем изобретении способом, указаны выше. Преимущественно колостринин назначают пациенту на первый период в количестве примерно от 1 до 2 терапевтических доз ежедневно с последующим вторым периодом, в течение которого колостринин не принимают. Первый период составляет обычно примерно от 2 до 4 недель, предпочтительно около 3 недель; и второй период составляет обычно примерно от 2 до 5 недель, преимущественно около 4 недель. Обычно этот цикл повторяют один раз, но желательно его осуществить более чем один раз.

Используемая в настоящем изобретении терапевтическая доза составляет обычно от 25 до 1000 мкг колостринина, предпочтительно от 50 до 100 мкг.

Колостринин может назначаться в любой фармацевтической форме. Например, это может быть пероральное, ректальное или парентеральное назначение. Более предпочтительно назначать колостринин в форме инъекций или в форме, пригодной для всасывания через слизистую оболочку ротовой носоглоточной полости, через пищеварительный тракт или через любую другую слизистую поверхность. Пероральные формы могут быть пригодны для глотания, но предпочтительно их выполнять в форме, пригодной для растворения в слюне с последующим всасыванием через слизистую оболочку ротовой носоглоточной полости. Пероральные формы могут быть выполнены в форме таблетки для перорального приема, лепешек (т. е. подслащенных таблеток, пригодных для длительного нахождения во рту и рассасывания), липких гелей для втирания в десну. Колостринин может быть сформован в виде липкого пластыря или накладки для прикрепления к деснам. Колостринин может быть выполнен в фармацевтической форме, пригодной для проникновения через слизистые оболочки мочеполовых органов.

Очевидно, что колостринин может назначаться в виде цельного молозива, но это нежелательно, так как цельное молозиво имеет неприятный вкус и его трудно хранить.

Пригодный для использования в настоящем изобретении колостринин может быть получен от любого млекопитающего, включая человека или животных, таких как коровы, лошади, козы, свиньи, яки, овцы, ламы или ослицы, верблюды и т. д.

Испытания были проведены колостринином овцы и человека. Овечий колостринин продается под торговой маркой Колостринин^ТМ (Colostrinin^ТМ).

В тестах на экспериментальных животных как in vivo, так и in vitro было найдено, что колостринин обладает иммунотропным действием, что следует из его способности к модуляции, развитию дифференцировки и созреванию тимоцитов до активных Т-клеток и способности стимулировать или ингибировать иммунологический ответ и индуцировать экспрессию различных поверхностных маркеров в тимоцитах. При внутрибрюшинном введении мышам колостринин ингибирует развитие гемолитической анемии у мышей линии NZB, ингибирует рост саркомы 180 и защищает мышей, подвергшихся воздействию гамма-излучения, от радиационной болезни.

Токсикологические исследования на мышах как при оральном, так и при парентеральном применении показало низкую токсичность - LD50 около 1,25 г/кг веса. Колостринин также обладает способностью стимулировать рост, созревание и дифференцировку иммунологически активных клеток как у человека, так и у животных. В культурах лимфоцитов периферической крови человека (включая культуры лимфоцитов, выделенных из пуповинной крови) колостринин стимулирует продукцию цитокинов, особенно гамма-интерферона (IFN-), фактора некроза опухоли (TNF-), интерлейкинов (например, IL-6 и IL-10) и различных факторов роста. Количественное определение полученных цитокинов осуществляют известными методами.

В естественных условиях аналоги овечьего колостринина, обладающие его биохимическими свойствами, присутствуют в молозиве человека и в молозиве всех млекопитающих, особенно крупных сельскохозяйственных животных, таких как коровы, лошади, козы, свиньи, яки, овцы, ламы или ослицы, верблюды и т. д. в первые 1-4 дня после родов. Колостринин попадает в организм новорожденных животных при сосании и глотании материнского молозива. Благодаря низкому молекулярному весу колостринин способен действовать на слизистую оболочку ротовой носоглоточной полости через клеточные рецепторы и даже в результате простой диффузии. Исследования показали, что, так как слизистая оболочка и эпителий верхнего отдела пищеварительного тракта содержат рецепторы некоторых иммуномодуляторов, колостринин может применяться в форме таблеток и подъязычных таблеток для сосания, таблеток и капсул для глотания, в форме адгезивных гелей и адгезивных пластырей для прикрепления к деснам. Колостринин может также вводиться через мембраны слизистой оболочки мочеполовых органов.

Научные исследования с целью объяснения биологической активности, индуцируемой колостринином, показали наличие аналогичной биологической активности колостринина человека, собранного у женщин в первые 1-7 дней после родов. Для выделения колостринина человека используют те же методы, которые используются при получении колостринина из молозива сельскохозяйственных животных, особенно из молозива овец. Было найдено, что молозиво, выделяемое молочными железами женщины в первые 1-7 дней после родов, содержит полипептидный колостринин, количество которого зависит от лактации и является оптимальным между 2-3 днями, когда его содержание составляет около 300 мг на литр молозива. Это количество колостринина человека совпадает с содержанием его в овечьем молозиве. Было показано также, что множество биологических свойств колостринина человека аналогичны, например, свойствам его овечьего аналога. Также найдено, что колостринин, полученный из молозива человека, стимулирует лимфоциты, присутствующие в молозиве, и лимфоциты пуповинной крови, к выделению цитокинов, включая главным образом интерферон (IFN-), фактор некроза опухоли TNF-, интерлейкины (IL-10 и IL-6) и другие цитокины. Эти цитокины вовлекаются в гуморальные и клеточные иммунные реакции.

Эти биологические свойства колостринина, как человеческого, так и животного происхождения, были определены известным методом, описанным в патенте Польши (PL 170592 В1) и Европейском патенте ЕР-В-0609225, pt: Testing Immunology.

Исследования на добровольцах показали, что после назначения таблеток для сосания, содержащих, по меньшей мере, 25 мг колостринина, в дозе, по меньшей мере, одну таблетку ежедневно в течение около 3 недель, никаких побочных неблагоприятных результатов не наблюдалось; с другой стороны, это ведет к состоянию гипореактивности к индукции интерферона IFN- и особенно фактора некроза опухоли TNF-. После прекращения приема колостринина состояние гипореактивности возвращается к норме. Полученные результаты являются следствием вовлечения цитокинов, производимых Th-1 и Th-2-лимфоцитами и клетками-хелперами.

Кроме того, при клинических исследованиях было показано, что колостринин обладает иммуномодуляторным действием и действием на центральную нервную систему, что можно использовать для профилактики и терапии следующих болезней, например, для предупреждения возникновения, развития и для ремиссии болезни Альцгеймера, старческого слабоумия иной природы и для лечения хронических иммунологических и инфекционных заболеваний.

Вместо колостринина можно использовать нонапептид, обозначаемый как NP и имеющий следующий состав и аминокислотную последовательность: Val-Glu-Ser-Tyr-Val-Pro-Leu-Phe-Pro. NP может быть получен путем ферментативного расщепления колостринина химотрипсином с последующим выделением с помощью колоночной хроматографии или путем химического синтеза. NP представляет собой пример полезного фрагмента колостринина. Также было найдено, что он обладает тем же биологическим действием, что и колостринин, и в особенности полезен при лечении хронических расстройств иммунной и центральной нервной системы, описанных выше, особенно болезни Альцгеймера. NP может использоваться для лечения любых описанных выше заболеваний. Он также может использоваться в качестве диетической добавки. Он может быть переработан в препаративные формы таким же образом, как и колостринин. NP полезен для лечения млекопитающих, особенно человека.

Для лучшего понимания ниже приводятся примеры, не ограничивающие настоящего изобретения.

Пример 1
В овечьем колостринине с молекулярным весом 18000 дальтон, построенном из трех нековалентно связанных субъединиц с молекулярным весом 6000 дальтон, каждая субъединица имела следующий аминокислотный состав (таблица 1).

Колостринин был получен из овечьего молозива, взятого после родов, через 24 ч после начала лактации. Для удаления жиров и части казеина материал центрифугировали при 35000 g. Полученную фракцию Ig пропускали через колонку с ДЭАЭ-целлюлозой для отделения иммуноглобулина IgG2, связанного в комплекс с полипептидным колостринином, элюированный из колонки колостринин был отделен от IgG2 с помощью колоночной хроматографии на Сефадексе G-100 и снова хроматографирован на Сефадексе G-75. Затем, для удаления следов примеси IgG2, фракцию этих полипептидов наносили на колонку с Сефарозой, конъюгированной с антителами против овечьего IgG2. Полученный препарат обессоливали с помощью Сефадекса G-25 и лиофилизовали, после чего хранили при температуре +4^oС или -20^oС.

Полученный колостринин получил торговую марку Colostrinin^ТМ (Колостринин^ТМ).

Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН) дает интенсивную полосу, соответствующую молекулярному весу 5800 дальтон, и две слабые полосы, соответствующие молекулярному весу 12400 дальтон и 18200 дальтон.

Пример 2
Нонапептид NP, имеющий следующий состав и аминокислотную последовательность: Val-Glu-Sеr-Tyr-Val-Prо-Leu-Phe-Pro, был получен из колостринина, полученного в примере 1.

50 мг колостринина ферментативно расщепляют с помощью 10 единиц активности протеолитического фермента химотрипсина в течение 20 ч при температуре 30^oС. Отделение от продукта расщепления осуществляют с помощью одного цикла хроматографии на колонке Сефадекс G-10. Полученный продукт лиофилизируют и хранят при температуре +4^oС или -20^oС. Выделенный нонапептид отделяют посредством определения N-концевой аминокислоты.

Пример 3
Единичная доза в форме таблетки для сосания имеет следующий состав (таблица 2).

Указанные выше компоненты суспендируют в 0,0001 М NaCl. Таблетки для сосания в первую очередь предназначены для лечения ранних или поздних стадий слабоумия, включая болезнь Альцгеймера, и разных стадий старческого слабоумия, хронических бактериальных и вирусных инфекций, требующих неспецифической иммуностимуляции и иммунокоррекции, и приобретенного иммунологического дефицита, вызванного различными агентами. Кроме того, они используются при эмоциональных нарушениях, особенно в состояниях депрессии у психиатрических больных, для улучшения общего самочувствия и стабилизации настроения и как вспомогательное средство при абстиненции в случаях лекарственной наркомании после периода детоксикации и для людей, зависимых от возбуждающих средств. Колостринин может также использоваться для восполнения недостатка питания у новорожденных и маленьких детей, связанного с искусственным вскармливанием.

Пример 4
Состав препарата в форме геля для применения к мембранам слизистой оболочки представлен в таблице 3.

На 1 мл гелевого носителя используют 0,0003 г полипептида колостринина (Colostriniп^ТМ) и 0,0015 г альбумина. Полученная таким образом дозированная единичная форма предназначена в первую очередь для курса лечения бактериальных и вирусных инфекций ротовой области и верхних дыхательных путей.

Пример 5
Препарат для внутримышечных, подкожных или внутривенных инъекций
Активный ингредиент: полипептид Colostrinin^ТМ, полученный в cоответствии с примером 1.

Стабилизатор: альбумин человека, свободный от примесей.

Носитель: стерильная, непирогенная (не повышающая температуру тела) вода.

На 1 мл ампулу используют 0,0003 г полипептида Coiostrinin^ТМ, 0,0015 г альбумина и, в качестве антибактериального агента, 0,001% мертиолата, т.е. натриевой соли этилмеркуртиосалициловой кислоты. Полученная дозированная единичная форма преимущественно предназначена для курса лечения бактериальных и вирусных инфекций.

Пример 6
Препарат для внутримышечных, подкожных или внутривенных инъекций
Активный ингредиент: NP, полученный в соответствии с примером II.

Стабилизатор: альбумин человека, свободный от примесей.

Носитель: стерильная, непирогенная вода.

На 1 мл ампулу используют 0,0003 г NP, 0,0015 г альбумина и, в качестве антибактериального агента, 0,001% мертиолата, т.е. натриевой соли этилмеркуртиосалициловой кислоты. Полученная дозированная единичная форма преимущественно предназначена для курса лечения бактериальных и вирусных инфекций.

Пример 7
Индукцию цитокинов полипептидом Colostrinin^ТМ in vitro в крови, взятой от здоровых и больных добровольцев, принимавших курс лечения препаратов в форме, указанной в примере III, осуществляли следующим образом.

Цельную кровь, содержащую 10 ед. гепарина на 1 мл, без консервантов, разбавляют в соотношении 1: 10 в культуральной среде RPMI 1640. Инкубацию осуществляют в той же культуральной среде без индукторов (негативный контроль) или в присутствии 1-100 мкг/мл полипептида Colostrinin^ТМ, или в присутствии 2 мкг/мл крови фитогемагглютинина (ФГА) и 2 мкг/мл крови липополисахарида (ЛПС) при температуре 37^oС в атмосфере 5% двуокиси углерода в течение 20 ч. Образцы со смесью ФГА и ЛПС представляют собой положительный контроль, т.к. они могут максимально стимулировать количество цитокинов. Полученные результаты представлены в таблицах 4 и 5. Они показывают, что Colostrinin^ТМ в концентрациях 1-100 мкг/мл стимулирует продукцию цитокинов дозозависимым образом. По отношению к негативному контролю (без индукторов) эти результаты являются статистически значимыми (р<0,0001). Пациенты с болезнью Альцгеймера обладают ослабленной способностью к продукции IFN и, в меньшей степени, TNF.

Индукция цитокинов под действием Colostrinin^ТМ (серии А 1993) от овцы в культурах лимфоцитов, присутствующих в цельной крови здоровых добровольцев или пациентов с болезнью Альцгеймера, представлена в таблице 4.

Группа здоровых добровольцев (22 человека) была неоднородна по возрасту (от 20 до 64 лет). Группа пациентов с болезнью Альцгеймера (50 человек) также была гетерогенна по возрасту (637,5 лет). Несмотря на большое стандартное отклонение (SD), различия между результатами контрольных испытаний без индукторов (отсутствие) и результатами испытаний с Colostrinin ^ТМ были статистически значимыми (р<0,001).

ТМ (серии А 1993) от овцы в экспериментах с использованием цельной крови здоровых добровольцев и пациентов с различными заболеваниями представлены в таблице 5.

Пример 8
Пуповинную кровь получали из отделения акушерства и гинекологии Вроцлавской областной больницы. Индукцию цитокинов под действием Colostrinin^ТМ in vitro в лимфоцитах пуповинной крови, взятой через 4-6 ч после родов, осуществляли следующим образом.

Лимфоциты выделяли в градиенте Фиколл-Пак, содержащего 5,7 г компонента Фиколл-400 и 9,0 г диатриазоата натрия на 100 мл. Выделенные лимфоциты суспендировали в культуральной среде RPMI-1640 при плотности 210⁶ лимфоцитов на 1 мл культуральной среды. К суспензии лимфоцитов добавляли Colostrinin^ТМ в концентрации 1-20 мкг/мл или фитогемагглютинин в концентрации 10 мкг/мл. Культуру инкубировали 20 ч при температуре 37^oС. Затем определяли уровень цитокинов в культуральных жидкостях биологическими методами. Типичный пример представлен в таблице 6. Colostrinin^ТМ в концентрации 1-100 мкг/мл способен стимулировать цитокины (IFN и TNF) подобно классическому индуктору IFN- - фитогемагглютинину.

Индукция цитокинов под действием Colostrinin^ТМ (серия А 1996) в культуре лимфоцитов, выделенных из пуповинной крови (ЛПК), представлена в таблице 6.

Так как пуповинная кровь обогащена незрелыми стволовыми клетками, которые способны репродуцировать кроветворные клетки и различные иммунологически активные клетки, полученные результаты показывают, что Coiostrinin^ТМ существенно ускоряет созревание стволовых клеток. Полученные результаты показывают возможность использования Coiostrinin^ТМ для лечения имуннодефицитов различных типов и для стимулирования кроветворной системы, например, после ушибов, инфекций, химиотерапии и радиотерапии. При биомедицинских исследованиях вещества природного происхождения с подобной активностью встречаются очень редко.

Пример 9
Способ лечения расстройств центральной нервной системы изучали на группе больных-добровольцев с болезнью Альцгеймера в легкой или средней стадии. Единичные дозы использовали в промежутках между приемами пищи в форме таблеток для сосания, содержащих 0,00015 г Coiostrinin^ТМ, указанных в примерах 1 и 3. Сначала применяли одну таблетку ежедневно в течение 3 недель, затем лечение прерывали на 2-4 недели и опять повторяли, назначая по 2 таблетки ежедневно в течение 3 недель. Было обнаружено, что при лечении Coiostrinin^ТМ возникает состояние гипореактивности или толерантности. Это является результатом неспособности синтезировать IFN и фактор некроза опухоли TNF-. Такое явление позволяет количественно измерить действие активного агента.

После прекращения принятия этих лекарств состояние толерантности спонтанно исчезает. Состояние временной толерантности к Colostrinin^ТМ является результатом вовлечения цитокинов, производимых Th1- и Тh2-лимфоцитами и клетками-помощниками, такими как моноциты, макрофаги, дендритные клетки, эндотелиальные клетки и их продукты. В результате у пациентов с болезнью Альцгеймера улучшается контактность и настроение.

На чертеже иллюстрируется появление и спонтанное исчезновение состояния гипореактивности (частичной толерантности) к индукции гамма-интерферона (TNF-), у пациентки (Дж.М.) с болезнью Альцгеймера, которая получала Colostrinin^ТМ в таблетках по 100 мкг каждый день в течение трех недель. Затем следовал 3-недельный перерыв в лечении (во время перерыва толерантность к индукции возвращалась к норме). Каждую неделю брали образцы крови для исследования стимуляции INF- колостринином (Colostrinin^ТМ) и контрольными индукторами (ФГА - 10 мкг/мл). Методика испытаний индукции цитокинов и их количественное определение описаны в предыдущих разделах.

Результаты определения уровней индуцированного INF- показали, что гипореактивность появляется в первую же неделю приема Colostrinin^ТМ (100 мкг/таблетку через день) и достигает максимума на третьей неделе приема. Состояние толерантности к индукции INF- спонтанно исчезает за время 3-недельного перерыва в лечении (т.е. на шестой неделе от начала лечения). Более того, на этой диаграмме показано, что "специфическая" гипореактивность в отношении овечьего Coiostrinin^ТМ (ОвКол) все еще сохраняется на шестой неделе, тогда как гипореактивность к ФГА полностью исчезает.

Пример 10
Способ лечения расстройств центральной нервной системы был исследован на группе больных-добровольцев с ранними стадиями болезни Альцгеймера. Единичные дозы принимали в промежутках между приемами пищи в форме таблеток для сосания, содержащих 0,00015 г NP, полученного в примере 2. Сначала принимают одну таблетку ежедневно в течение 3-х недель, затем лечение прекращают на 3 недели и повторяют снова, принимая по 2 таблетки ежедневно в течение 3-х недель. Было найдено, что лечение NP вызывает состояние гипореактивности или толерантности. Это является результатом неспособности синтезировать INF и фактор некроза опухоли TNF-. Такое явление позволяет количественно измерить действие активного агента.

После прекращения приема этих лекарств состояние толерантности спонтанно исчезает.

Состояние временной толерантности к NP является результатом вовлечения цитокинов, продуцируемых Th1- и Тh2-лимфоцитами и клетками-помощниками, такими как моноциты, макрофаги, дендритные клетки, эндотелиальные клетки и их продукты. В результате у пациентов с болезнью Альцгеймера улучшается контактность и настроение.

Формула изобретения

1. Применение колостринина для изготовления лекарственного средства для лечения хронических расстройств центральной нервной системы.

2. Применение колостринина для изготовления лекарственного средства для лечения неврологических расстройств и/или умственных расстройств.

3. Применение колостринина для изготовления лекарственного средства для лечения слабоумия и/или нейродегенеративных заболеваний.

4. Применение колостринина для изготовления лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.

5. Применение колостринина для изготовления лекарственного средства для лечения мотонейронного заболевания.

6. Применение колостринина для изготовления лекарственного средства для лечения психоза и/или невроза.

7. Применение колостринина для изготовления лекарственного средства для предотвращения или ингибирования развития болезни Альцгеймера у человека.

8. Применение по любому из пп.1-7, где указанный колостринин является неовечьим колостринином.

9. Применение по любому из пп.1-8, где указанное лекарственное средство представлено в виде пероральной дозированной формы в комбинации с физиологически приемлемым носителем.

10. Применение по любому из пп.1-9, где указанный колостринин представлен в выделенной форме.

11. Фармацевтическая композиция, включающая в себя пероральную дозированную форму, содержащую предварительно выбранное количество колостринина в комбинации с физиологически приемлемым носителем.

12. Фармацевтическая композиция по п.11, где колостринин является неовечьим колостринином.

13. Фармацевтическая композиция по пп.11 или 12 в форме, пригодной для всасывания через слизистую оболочку ротовой/носоглоточной полости, и/или в форме, пригодной для всасывания в пищеварительном тракте.

14. Фармацевтическая композиция по пп.11, 12 или 13 в форме таблетки, лепешки, геля, салфетки или пластыря.

15. Фармацевтическая композиция по любому из пп.11-14, включающая в себя от 25 до 1000 мкг колостринина.

16. Фармацевтическая композиция по любому из пп.11-15, включающая в себя от 50 до 100 мкг колостринина.

17. Фармацевтическая композиция по любому из пп.11-16, где указанный колостринин представлен в выделенной форме.

18. Применение колостринина в выделенной форме в качестве диетической добавки.

19. Применение по п.18 в качестве диетической добавки для младенцев, маленьких детей, взрослых людей, подвергшихся химиотерапии и/или страдающих от истощения или потери веса в результате хронического заболевания.

20. Применение по пп.18 или 19, где диетическая добавка представлена в твердой или жидкой форме.

21. Диетическая добавка, включающая в себя пероральную дозированную форму, содержащую колостринин в выделенной форме, в сочетании с физиологически приемлемым носителем.

22. Нанопептид, имеющий состав и аминокислотную последовательность Val-Glu-Ser-Tyr-Val-Pro-Leu-Phe-Pro, в качестве активного ингредиента для изготовления лекарственного средства для лечения хронических расстройств центральной нервной системы.

23. Нанопептид по п.22 в качестве активного ингредиента для изготовления лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.

24. Фармацевтическая композиция, содержащая пероральную дозированную форму, содержащую нанопептид, имеющий состав и аминокислотную последовательность Val-Glu-Ser-Tyr-Val-Pro-Leu-Phe-Pro, в сочетании с физиологически приемлемым носителем.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9