Моноклональное антитело ико25, специфичное к антигену мис1, противоопухолевое средство

 

Изобретение относится к иммунологии и медицине и может быть использовано для иммунотерапии злокачественных опухолей. Моноклональное антитело ИКО25, специфичное к антигену МИС1, относится к IgG1 и имеет константу ассоциации 310^-5 М, определенную на модели клеток культуры рака легкого человека ОАТ75. На основе моноклонального антитела ИКО25 создают противоопухолевое средство, которое содержит моноклональное антитело ИКО25 0,5%, полисорбат-80 2,0% и фосфатно-солевой буфер остальное. Изобретение позволяет избирательно воздействовать на опухолевые клетки путем внутривенного введения препарата. 2 с. и 1 з.п. ф-лы.

Группа изобретений относится к медицине и представляет собой лекарственный препарат, предназначенный для иммунотерапии злокачественных опухолей, основным действующим веществом которого является моноклональное антитело (далее МКАт), и способ применения лекарственного препарата.

Известны попытки использовать антитела, направленные к опухолевым антигенам, как противоопухолевое лекарственное средство. Данный подход основан на том, что при взаимодействии с опухолевой клеткой антитела могут оказывать непосредственно цитотоксический эффект либо стимулировать реакции противоопухолевого иммунитета в зависимости от специфичности и типа клетки-мишени. В последнем случае развитие опосредованных гуморальных и клеточных цитотоксических реакций может приводить к гибели опухолевой клетки.

В настоящее время известно МКАт BW835, взаимодействующее с полиморфным эпителиальным муцином - антигеном, ассоциированным с опухолями молочной железы, предстательной железы, яичника и легкого (патент США N 5695758). Заявляемое лекарственное средство от известного МКАт отличает иная специфичность относительно антигенной детерминанты.

Известно моноклональное мышиное антиидиотипическое антитело и фармацевтический состав на его основе для терапевтической иммунизации против рака эпителиального происхождения (заявка, публ. 21.01.97). Описанное ниже лекарственное средство от известного препарата отличают иные специфичность и природа антитела, а также иная направленность терапевтического воздействия.

Известен метод уничтожения опухолевых клеток-мишеней с помощью иммунотоксина, синтезированного на основе МКАт, направленного к антигену, кодируемому геном MUC1 (заявка 98118574, публ. 20.07.2000). Заявляемое лекарственное средство отличает от известного иммунотоксина то, что его действующим началом является неконъюгированное антитело, сохраняющее иммунные свойства, необходимые для реализации лечебного эффекта иммунотерапии.

В онкологии известно два потенциальных лекарственных препарата на основе МКАт. Это - Мабтера производства компании Генентек (США), предназначенный для лечения рецидивирующей В-клеточной неходжкинской лимфомы низкой степени злокачественности и фолликулярной В-клеточной неходжкинской лимфомы (Maloney и соавт. , "Blood" 1997a; 90(6): 2188-95), а также Герцептин (производства той же компании) для лечения рака молочной железы в случаях гиперэкспрессии антигена Her2/neu (Slamon и соавт., "Proc. Am. Soc. Clin. Oncol.", 1998; 17: 98а). Лекарственное средство от Мабтера в отличии от заявляемого лекарственного средства не предназначено для лечения опухолей эпителиального генеза. От Герцептина заявляемое лекарственное средство отличает иная специфическая направленность антитела и иной (предположительно опосредованный) механизм терапевтического действия.

Известна также фармацевтическая композиция для лечения онкологического заболевания, содержащая конъюгат моноклонального антитела и выполненная в виде раствора для инъекций или вливания (патент РФ 2125889, публ. 10.02.99. Бюл. N 4). Заявляемое лекарственное средство от известной композиции отличает использование неконъюгированного антитела и иная специфичность используемого антитела.

Известен способ терапевтической иммунизации против рака эпителиального происхождения путем введения пациенту эффективного количества антиидиотипического моноклонального антитела (заявка 94046321, публ. 21.01.97). Заявляемый способ лечения от известного отличает иная природа и специфичность используемого в качестве действующего начала антитела.

Известен также способ лечения онкологического заболевания путем введения в виде инъекций или вливания раствора конъюгата антитела, действующего на клетки-мишени (патент РФ 2125889, публ. 10.02.99. Бюл. N 4). Заявляемый способ лечения от известного отличает использование неконъюгированного антитела, иная специфичность используемого антитела.

Заявляемая группа изобретений направлена на решение единой задачи - создания высокоэффективного, безопасного биологического препарата для иммунотерапии злокачественных новообразований эпителиального происхождения и разработки методики лечения указанных заболеваний.

Использование в фармацевтической и клинической практике заявляемого МКАт, препарата на его основе и способа его применения позволяет достичь нескольких технических и лечебных результатов: - высокая избирательность воздействия на опухолевые клетки; - отсутствие тяжелых токсических и побочных эффектов; - возможность системного воздействия на организм путем внутривенного введения препарата.

Указанные единые технические и лечебные результаты при осуществлении группы изобретений по объекту МКАт достигаются за счет того, что заявляемое МКАт, так же как известное, взаимодействует с антигеном, специфичным для клеток эпителия и опухолей эпителиального происхождения. Особенность заявляемого МКАт, полученного согласно SU 1698287, заключается в том, что оно является мышиным моноклональным антителом ИКО25, полученным к высокоочищенному мембранному эпителиальному муцину MUC1, выделенному из мембран жировых глобул женского молока, и представляет собой иммуноглобулин класса IgG1 с константой ассоциации 310^-9, определенной на модели клеток культуры рака легкого человека ОАТ75, и характеризуется следующей аминокислотной и нуклеотидной первичной структурой N-концевых областей тяжелых (Н) и легких (L) цепей: Vh: DVQLQQSGPDLVKPS Vl: DVLTQSPASLAVSLG Указанные единые технические и лечебные результаты при осуществлении группы изобретений по объекту противоопухолевое средство достигаются за счет того, что заявляемый лекарственный препарат так же, как известный, содержит МКАт и фармацевтически приемлемый носитель. Особенность заявляемого противоопухолевого средства заключается в том, что его основой является МКАт ИКО25, имеет состав, мас.%: Моноклональное антитело ИКО25 - 0,5 Полисорбат-80 - 2,0 Фосфатно-солевой буфер - Остальное
и представляет раствор для внутривенного введения.

Указанные единые технические и лечебные результаты при осуществлении группы изобретений по объекту способа лечения достигаются за счет того, что заявляемый способ так же, как известный, представляет собой иммунотерапию онкологических заболеваний. Особенность заявляемого способа заключается в том, что иммунотерапию осуществляют путем системного введения лекарственного средства, содержащего мышиное МКАт ИКО25. При этом заявляемый способ используют при лечении злокачественных опухолей эпителиального генеза путем внутривенного ведения заявляемого лекарственного препарата.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Предлагаемый способ терапевтического воздействия основан на применении мышиных моноклональных антител к муцину MUC1.

В норме муцин MUC1 синтезируется клетками железистого эпителия и локализуется в апикальной мембране клеток. В клетках большинства злокачественных новообразований имеет место увеличение синтеза муцина MUC1, что связывают с увеличением числа копий гена MUC1. Кроме того, в опухолевых клетках наблюдается высокое содержание MUC1 в цитоплазме и по всей клеточной мембране. За счет перераспределения антигена и увеличения его экспрессии в клетках муцин в злокачественных опухолях может быть эффективной мишенью для цитотоксических антител. В то же время антигены, входящие в состав муцина в нормальных клетках, практически недоступны для контакта с антителами и клетками иммунной системы, что снижает вероятность развития побочных реакций при использовании МКАт данной специфичности в терапевтических целях.

По данным иммуногистохимического анализа МКАт ИКО25 взаимодействует с клетками нормального эпителия молочной железы, легкого, слюнных желез, потовых желез кожи, желез языка, пищевода, желудка, кишечника, эпителием органов мочеполовой системы (почек, мочеточников, мочевого пузыря, матки, маточных труб), эпителием поджелудочной железы, предстательной железы, эпителием желчного пузыря и выводящих желчных протоков печени.

МКАт ИКО25 взаимодействует с клетками злокачественных новообразований эпителиального происхождения в молочной железе, легком, яичнике, желудке, толстой кишке, слюнных железах, органах мочеполовой системы, органах оро-фарингеальной зоны.

Антитела не взаимодействуют с клетками крови, соединительной ткани, сосудами и мышечными волокнами, нервной тканью, а также с клетками злокачественных опухолей неэпителиального происхождения.

В нормальном эпителии МКАт ИКО25 взаимодействует с апикальной мембраной клеток. В клетках злокачественных опухолей (в зависимости от типа новообразования) наблюдается окрашивание мембраны протоковоподобных и сосочковых структур, мембранное и цитоплазматическое окрашивание.

Представленные выше сведения подтверждают такие потенциальные преимущества лекарственного средства на основе МКАт ИКО25, как высокая избирательность воздействия на опухолевые клетки эпителиального генеза и отсутствие токсических и побочных эффектов.

Особенность заявляемого МКАт также заключается в том, что оно представляет собой иммуноглобулин класса IgG1 с уникальной специфичностью относительно антигенной детерминанты, с константой ассоциации 310^-9, определенной на модели клеток культуры рака легкого человека ОАТ75.

Изотип иммуноглобулина МкАт ИКО25 был определен методом двойной иммунодифузии в агаре по Оухтерлони с использованием антисыворотки к следующим изотипам иммуноглобулинов: IgG₁, IgG_2a, IgG_2b, IgG₃, IgM. Линия преципитации выявлена в результате взаимодействия антител с антисывороткой к изотипу иммуноглобулина IgG₁. С антисыворотками к другим изотипам образование преципитатов не выявлено. Таким образом, МкАт ИКО25 имеет изотип IgG₁.

Аффинность антител была определена по стандартной методике (D. Rodbard, 1973) на клетках линии ОАТ75, по результатам которой МКАт ИКО25 характеризуются относительно высокой константой ассоциации - 310^-9 М. Число сайтов связывания на клетку (ОАТ75) достигает 610⁷.

Данные, характеризующие первичную структуру МкАт ИКО25, получены в результате анализа N-концевых аминокислотных последовательностей Н- и L-цепей антител, а также секвенирования соответствующих генетических продуктов (клонированные кДНК материалы цепей) из ИКО25 гибридомных клеток.

Лекарственное средство для иммунотерапии злокачественных опухолей эпителиального генеза представляет собой стерильный раствор иммуноглобулинов в 0,015 М фосфатно-солевом буфере, рН 7,5, содержащем 25 мг МКАт ИКО25 в концентрации 5 мг/мл и 2% полисорбат-80. Это бесцветная, слегка опалесцирующая жидкость без запаха. Применяется в виде стерильного 0,025% раствора, который следует готовить непосредственно перед введением. Растворитель - 0,9% раствор хлористого натрия.

Заявляемый способ иммунотерапии злокачественных опухолей может быть использован для лечения рака толстой кишки и иных локализаций злокачественных опухолей эпителиального генеза. Курс лечения состоит из 2-кратного или 4-кратного внутривенного введения препарата в разовой дозе от 5 до 500 мг/кг с интервалом между инфузиями 7 дней. Продолжительность курса лечения, дозировку определяют в зависимости от тяжести заболевания, локализации опухоли проводимых ранее курсов лечения и других индивидуальных особенностей пациента.

Формула изобретения

1. Моноклональное антитело ИКО25, специфичное к антигену МИС1, отличающееся тем, что представляет собой иммуноглобулин класса IgGI с константой ассоциации 310^-9 М, определенной на модели клеток культуры рака легкого человека ОАТ75, и характеризуется следующей аминокислотной структурой N-концевых областей тяжелых (Н) и легких (L) цепей:
Vh: D V Q L Q Q S G P D L V K P S
VI: D V L T Q S P A S L A V S L G
2. Противоопухолевое средство, включающее моноклональное антитело и фармацевтически приемлемый носитель, отличающееся тем, что содержит мышиное моноклональное антитело ИКО25 по п.1 и имеет состав, мас.%:
Моноклональное антитело ИКО25 - 0,5%
Полисорбат-80 - 2,0%
Фосфатно-солевой буфер - Остальное
3. Противоопухолевое средство по п.2, отличающееся тем, что представляет собой раствор для внутривенного введения.