Применение планшетного иммуноферментного анализатора в качестве гемоглобинометра

 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и предназначено для количественного определения гемоглобина в крови человека или животных. Предложено применение планшетного иммуноферментного анализатора в качестве гемоглобинометра. Скорость измерения одного планшета с 96 лунками на иммуноферментном анализаторе, в которые вносят по 0,2 мл опытной пробы, приготовленной по способу Драбкина, составляет 5 с. Технический результат - сокращение времени исследования гемоглобина и удешевление его стоимости, так как исследование гемоглобина сокращается до 0,052 с вместо 20-30 с, а расход ядовитого трансформирующего раствора Драбкина на одно определение уменьшается до 0,2 вместо 5,0 мл. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, биологии и сельскому хозяйству, а именно для количественного определения гемоглобина в крови человека, животных и беспозвоночных.

В литературе описаны устройства, предназначенные для количественного определения гемоглобина в крови: гемоглобинометр фотоэлектрический ГФ-3, паспорт 2Т2. 853. 025 ПС, гемоглобинометр фотоэлектрический ГФ-Ц-04. Техническое описание и инструкция по эксплуатации. 2Т2. 853. 033 ТО, Минифотометр гемоглобина MF 1020. Техническое описание и инструкция по эксплуатации. Изготовитель - завод "Эксма", Литва, 2000 г. В таких гемоглобинометрах расход трансформирующего (рабочего) раствора на одно определение гемоглобина составляет 5,0 мл, а само определение гемоглобина осуществляется единичными измерениями в течение 20-30 с. Это удлиняет время исследования и повышает его стоимость.

Задачей изобретения является сокращение времени исследования гемоглобина и удешевление его стоимости.

Эта задача достигается применением известного планшетного иммуноферментного анализатора в качестве гемоглобинометра, например Мультискана EX с принтером Epson. Мультискан ЕХ представляет собой восьмиканальный вертикальный фотометр, работает со стандартными 96-луночными планшетами с плоским дном. При вертикальной фотометрии абсорбция света пропорциональна количеству абсорбирующего свет вещества в кювете (лунке). По результатам анализа стандартных растворов вещества строят калибровочную кривую, отражающую зависимость оптической плотности от концентрации вещества в лунке. Объем одной лунки 0,3 мл. Скорость работы Мультискана: время измерения концентрации вещества в 96 лунках одного планшета составляет 5 с, т.е. затрата времени на одно определение концентрации вещества составляет 0,052 с (5/96). Применение планшетного иммуноферментного анализатора в качестве гемоглобинометра сокращает время одного исследования гемоглобина в крови до 0,052 с вместо 20-30 с. Расход рабочего раствора составляет 0,2 вместо 5,0 мл. Это удешевляет стоимость определения гемоглобина в крови.

Изобретение осуществляют следующим образом.

Готовят 3 раствора гемоглобина известной концентрации на трансформирующем растворе Драбкина, вносят во 2, 3, 4 лунку колонки А 96-луночного планшета по 0,2 мл приготовленного раствора, а в 1 лунку той же колонки 0,2 мл трансформирующего раствора. Затем на Мультискане определяют оптические плотности растворов в лунках А 1, А 2, А 3, А 4.

Оптическую плотность трансформирующего раствора в лунке А 1 переводят в концентрацию гемоглобина в г/л. По введенным в память анализатора концентрациям гемоглобина в лунках А 1, А 2, А 3, А 4 Мультискан строит калибровочную кривую линейными отрезками от точки к точке, согласно которой значения абсорбции переводятся в концентрации гемоглобина в г/л. Если калибровочная кривая, построенная по стандартам, отклоняется от монотонности, на печати появляется запись "NON-MONO-TONOUS CURVE" и "Вычисленные результаты неточны". По полученной калибровочной кривой вычисляют фактор F (постоянное число), который вводят в память анализатора, где на вычисленный фактор F умножается значение абсорбции в опытной лунке, полученное произведение выдается на печать как концентрация гемоглобина крови в г/л. Линейность определения гемоглобина сохраняется от 10 до 200 г/л.

В таблице 1 показаны оптические плотности растворов в лунках А 1, А 2, А 3, А 4: - в А 1 оптическая плотность трансформирующего раствора равна 0,345; - в А 2 оптическая плотность стандартного раствора с концентрацией гемоглобина 69 г/л равна 0,856; - в А 3 оптическая плотность стандартного раствора с концентрацией гемоглобина 110 г/л равна 1,370; - в А 4 оптическая плотность стандартного раствора с концентрацией гемоглобина 155 г/л равна 1,912.

Фактор F вычисляют по формуле , где С - концентрация гемоглобина в г/л стандартного раствора, А - абсорбция стандартного раствора известной концентрации.

В таблице 2 показана калибровочная кривая, полученная на анализаторе по известным концентрациям гемоглобина.

В таблице 3 показано определение гемоглобина в 192 опытных пробах одного планшета с интервалом 17 с.

В колонках А, В, С, D - концентрация (содержание) гемоглобина в г/л у больного П. , а в колонках E, F, G, H - концентрация гемоглобина в г/л у больного Ю.

Значение концентрации гемоглобина в лунках колонок А, В, С, D колеблется от 68,5 г/л (С 7) до 71,7 г/л (В 9), что составляет 4,5% от среднего арифметического концентрации гемоглобина в лунках колонок А, В, С, D. А значение концентрации гемоглобина в лунках колонок Е, F, G, H колеблется от 150,6 г/л (Н 12) до 154,9 г/л (F 7), что составляет 2,8% от среднего арифметического концентрации гемоглобина в лунках колонок Е, F, G, Н.

Полученные проценты разброса среднего арифметического концентрации гемоглобина в крови свидетельствуют о правильности и воспроизводимости результатов.

Формула изобретения

Применение планшетного иммуноферментного анализатора в качестве гемоглобинометра.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3