Способ дифференциального подсчета гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов

 

Изобретение относится к медицине, в частности, к патофизиологии и терапии. Способ основан на заборе из пальца и окрашивании образца крови раствором метиленовой сини. Затем нагревают пробирку с исследуемым образцом на водяной бане при 98^oС в течение 10 мин. Вводят каплю окрашенного содержимого в камеру Горяева и подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах. Абсолютное количество лейкоцитов переводят в проценты и рассчитывают лейкоцитарную формулу по трем видам указанных клеток. Способ пригоден в научных исследованиях и для проведения учебных практических занятий со студентами, позволяет упростить технологию, в 2-4 раза сократить расход времени.

Изобретение относится к медицине, в частности к патофизиологии и терапии.

Известен способ дифференциального подсчета различных видов лейкоцитов (лейкоцитарной формулы), включающий забор крови, приготовление из нее мазка на предметном стекле, высушивание мазка на воздухе в течение 3-5 минут, фиксацию в метаноле или этаноле в течение 5 минут, высушивание на воздухе 10-20 минут, окраску азур-эозиновыми красителями (по способу Романовского или какому-нибудь другому) в течение 2-3 минут (быстрая окраска) или в течение 20-45 минут (обычная по длительности окраска), смыв краски и высушивание окрашенного мазка (10 минут и более); общий расход времени 30-52 минуты (см. "Справочник по клиническим лабораторным методам исследования" под редакцией проф. Е. А.Кост, издание 2-ое, М.: Медицина, 1975; стр.38-43). Недостатками данного способа являются необходимость приготовления мазков на предметных стеклах и последующей их окраски, двукратный смыв, высушивание, дополнительный отдельный подсчет общего числа лейкоцитов в счетной камере (Горяева или др.).

Технической задачей изобретения является упрощение способа дифференциального подсчета гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов за счет сокращения стадий процесса и времени исследования.

Решение указанной задачи достигается следующим путем: забирают из пальца в пипетку 0,02 мл крови, вводят ее в пробирку, содержащую 0,38 мл 3%-ной уксусной кислоты, промывают пипетку той же уксусной кислотой, встряхивают содержимое пробирки в течение 2 минут (для лизиса эритроцитов), добавляют 1-2 капли 1%-ного водного раствора метиленовой сини, нагревают пробирку в водяной бане при 98^oC в течение 10 минут, вводят каплю окрашенного содержимого пробирки в камеру Горяева и подсчитывают лейкоциты в ее 100 больших квадратах. Дифференциацию гранулоцитов (суммарно нейтрофилов, эозинофилов, базофилов), моноцитов и лимфоцитов проводят по признакам, описанным в литературе (см. Козловская Л.В., Мартынова М.А. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования (с элементами программирования), М.: Медицина, 1975; стр.59-71). Подсчет общего абсолютного количества отдельных видов лейкоцитов (грануло-, лимфо- и моноцитов) в 1 мкл крови (т.е. лейкоцитарный профиль) проводят по формуле: Количество изучаемого вида лейкоцитов в 100 больших квадратах камеры Горяева, деленное на количество малых квадратов, содержащихся в 100 больших квадратах, умноженное на коэффициент перевода 1 маленького квадрата и соответствующий ему объем в 1 мкм, и умноженный на разведение лейкоцитов в уксусной кислоте - 20 (0,02+0,38=0,4; 0,4:0,02= 20). Складывают найденные абсолютные количества всех видов лейкоцитов и получают общее число лейкоцитов в 1 мкл. Абсолютные количества отдельных лейкоцитов (т. н. редуцированный лейкоцитарный профиль) переводят в проценты и получают лейкоцитарную формулу по трем видам клеток (гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов).

Пример. У пациента Б. (история болезни N 6102/326) стерильным одноразовым ланцетом произведен забор 0,02 мл крови из пальца. Кровь помещена в пробирку, содержащую 0,38 мл 3%-ной уксусной кислоты, добавлены 2 капли 1%-ного водного раствора метиленовой сини, пробирка нагрета в водяной бане при 98^oC в течение 10 минут. Капля окрашенного содержимого пробирки внесена в камеру Горяева под покровное стекло. Произведен подсчет лейкоцитов в 100 больших квадратах по характерным для каждого вида лейкоцитов признакам по формуле: 2. 6 палочкоядерных гранулоцитов 50 = 300 палочкоядерных гранулоцитов в 1 мкм 3. 31 лимфоцит 50 = 1550 лимфоцитов в 1 мкм 4. 9 моноцитов 50 = 450 моноцитов в 1 мкм Сложив найденные абсолютные количества всех видов лейкоцитов, получают общее число лейкоцитов в 1 мкл.

Общее число лейкоцитов в 1 мкм крови: 4300+300+1550+450=6600 клеток/мкм.

Абсолютные количества отдельных лейкоцитов переведены в проценты, получена лейкоцитарная формула.

Общее количество затраченного времени - 14 минут.

Дифференциация клеток по предлагаемой методике легка и отличается высокой точностью, поэтому она пригодна не только для специальных научных исследований (например, для изучения генерации активных форм кислорода хемилюминесцентным методом), но и для проведения учебных практических занятий со студентами.

При применении предлагаемого способа дифференциального подсчета гранулоцитов, лимфоцитов и моноцитов упрощается технология, отпадает необходимость в изготовлении, высушивании, окрашивании и смыве мазков, в дополнительном подсчете общего количества лейкоцитов в счетной камере, что значимо сокращает расход времени в 2-4 раза.

Формула изобретения

Способ дифференциального подсчета гранулоцитов, лимфоцитов и моноцитов, включающий забор образца крови, окрашивание образца метиленовой синью в кислой среде и подсчитывание абсолютного количества лейкоцитов с использованием камеры Горяева, отличающийся тем, что окрашивание образца проводят при нагревании на водяной бане при температуре 98^oС в течение 10 мин, и после подсчета абсолютного количества лейкоцитов рассчитывают лейкоцитарную формулу по трем указанным видам клеток.