Фармацевтический состав для профилактики и лечения раковых заболеваний
Предметом изобретения являются фармацевтические составы для профилактики и лечения раковых заболеваний и способ их получения. Составы включают по меньшей мере три соединения, присутствующие в кровесной системе: по меньшей мере одну аминокислоту, по меньшей мере один витамин и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из аденина, 2-деокси-D-рибозы, D-маннозы, D-глюкозамина, яблочной кислоты, щавелевоуксусной кислоты и аденозинтрифосфата. Составы обладают пониженной токсичностью и более высокой эффективностью при профилактике раковых заболеваний, подавлении образования опухолей в случае СПИДа и трансплантациях, препятствуют образованию метастазов. 8 з.п. ф-лы, 9 ил, 2 табл.
Предметом данного изобретения являются фармацевтические составы для профилактики и лечения раковых заболеваний и способ их получения.
Наиболее часто применяемыми в раковой терапии методами являются хирургическое, химиотерапевтическое лечение и лечение облучением [1-3]. При лечении облучением, помимо широко применяемых ионизаций, в особых случаях, например при карциноме кожи, применяют фототерапию и локальную гипертермию в сочетании с облучением и химиотерапией. Распределенные по категориям по их действию, происхождению и структуре, среди средств химиотерапии могут встречаться также алкилирующие реагенты, растительные алкалоиды, антибиотики, антиметаболиты, другие лекарственные средства (например, аспарагиназа) и часто применяемые различные гормоны. Новыми применяемыми в химиотерапии направлениями являются следующие: комбинированная химиотерапия; длительное венозное и артериальное вливание малыми дозами химиотерапевтических препаратов для понижения токсичности; химиотерапия высокими дозами для преодоления устойчивости к лекарственным препаратам и терапия того же типа в сочетании с аутогенной пересадкой костного мозга: химиотерапевтические препараты в сочетании с модификаторами биологического ответа; применение в большей степени адъювантной и неоадъювантной химиотерапии. Наиболее часто применяемыми модификаторами биологического ответа являются: интерфероны, фактор некроза опухоли, лимфокины, например интерлейкин-2, и моноклональные антитела. Различные диетические методы, малоизученные сывороточные препараты и метод Simonton'a с применением психогенных эффектов принадлежат к применяемым в настоящее время методам в лечении опухолевых заболеваний, эффективность которых еще не установлена. Наиболее характерными недостатками применяемых в настоящее время методов, указанных в вышеприведенном перечне, являются: токсичность, значительные побочные действия, низкая опухолевая специфичность, развитие устойчивости и ограниченные пределы эффективности. Наиболее цитотоксичные препараты, применяемые в раковой терапии, не отличают относящиеся к опухоли клетки от нормальных пролиферирующих клеток; поэтому для того, чтобы избежать любой необратимой угрозы для живых клеток хозяина (например костного мозга, кишечника) препараты должны вводиться в дозах, которые обычно оказываются недостаточными для того, чтобы уничтожить все из имеющихся опухолевых клеток [4] . Лечение облучением может вызывать радиационное поражение, и в то же время оно не эффективно в отношении клеток, испытывающих кислородное голодание, и определенных типов опухолей. Препараты, применяемые в химиотерапии, обладают также различными токсичными побочными действиями. Они могут поражать центральную нервную систему, кроветворные органы, слизистые мембраны желудка и кишечника и все пролиферирующие клетки. Кроме того, они могут наносить ущерб печени, почкам, легким и сердечной мышце. Почти все эффективные противоопухолевые средства являются иммунодепрессивными [5]. Многие из них обладают тератогенным или онкогенным действием, иногда они могут вызывать бесплодие или увеличивать частоту вторичного образования опухолей. Посредством химиотерапии трудно или невозможно воздействовать на 60-70% опухолей, при этом в ходе лечения может также развиться устойчивость или перекрестная устойчивость. К сожалению, лечение с применением модификаторов биологического ответа с задействованием собственного защитного механизма организма имеет сходные недостатки, поскольку было обнаружено, что оно эффективно только против нескольких типов опухолей и, кроме того, оно также обладает токсичными побочными действиями [2]. Интерфероны также обладает многочисленными и тяжелыми побочными действиями и, среди прочего, кардиотоксичностыо [6]. Аналогичным образом, не оправдались надежды, связанные с моноклональными антителами [7]. Несмотря на то, что с 1980 года было проведено более 400 зарегистрированных клинических испытаний иммунотерапии, ни одно из них до сих пор не было принято как лечение для рака любого типа [8]. Известен [9] препарат, применяемый при лечении раковых заболеваний и содержащий L-цистеин, L-метионин, L-гистидин, L-фенилаланин, L-лизин, L-триптофан, L-валин, L-лейцин, L-треонин, L-яблочную кислоту и L-аскорбиновую кислоту. L-яблочная и L-аскорбиновая кислоты в качестве активаторов забуферивают и стабилизируют аминокислоты в их кислотной форме и таким образом вызывают изменение значения pH в крови в кислотную область ниже 6.8. В этой публикации отсутствуют данные, подтверждающие остановку роста или даже обратное развитие злокачественных опухолей. Известен [10] раствор аминокислот для внутривенного вливания, содержащий специфические аминокислоты, за исключением L-изолейцина, способный оказывать ингибирующее действие на увеличение опухолей. Возможное, но не доказанное действие этого препарата может базироваться на ограничении аминокислотой, например, изолейцином. Задачей настоящего изобретения является создание фармацевтических составов, включающих в себя природные вещества, для элиминации недостатков, например, токсичности, низкой специфичности и ограниченных пределов эффективности, известных составов и способов опухолевой терапии. Изобретение базируется на распознании пассивной защитной системы [здесь и далее называемой пассивной противоопухолевой защитной системой (ППЗС)] против опухолевых клеток в различных организмах. Эта система способна разрушить возникающие и уже существующие опухолевые клетки. Вещества, участвующие в ППЗС, являются эндогенными и экзогенными природными веществами, присутствующими в кровеносной системе, а именно аминокислотами, витаминами, нуклеиновыми основаниями, углеводами и продуктами клеточного метаболизма. Было установлено, что при совместном применении по меньшей мере трех из этих веществ (которые являются компонентами кровеносной системы и поэтому могут достигать всех клеток и проникать в них), они синергически усиливают действие друг друга и поэтому способны разрушать опухолевые клетки. Далее изобретение базируется на том, что выяснено, что благодаря синергизму будут существовать значительные качественные различия между нормальными и опухолевыми клетками в их поведении по отношению к участникам ППЗС, в силу чего два типа клеток становятся различимыми. В то время как классическая иммунная система может узнавать и селективно разрушать опухолевые клетки в силу их внешних отличий от нормальных клеток, то недавно открытый механизм пассивной противоопухолевой защиты может делать то же самое вследствие внутренних отличий. Далее изобретение базируется на том, что выяснено, что в зависимости от применяемой дозы и способа применения может быть достигнуто профилактическое или противоопухолевое действие для различных опухолевых клеток. В случае различных типов опухолей, которые отличаются от нормальных клеток в разной степени, на основании синергизма в качестве критерия может быть определен качественный и количественный состав наиболее эффективной смеси. Основываясь на вышеизложенном, изобретение предлагает фармацевтические составы для профилактики и лечения раковых заболеваний, которые содержат по меньшей мере три активных соединения, присутствующие в кровеносной системе: по меньшей мере одну аминокислоту, по меньшей мере один витамин и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из аденина, 2-деокси-D-рибозы, D-маннозы, D-глюкозамина, яблочной кислоты, щавелевоуксусной кислоты, аденозинтрифосфата и/или их фармацевтически приемлемых солей, при условии, что если состав содержит кроме аминокислоты(т) только яблочную кислоту и витамин, то витамин может быть любым, за исключением аскорбиновой кислоты. Составы могут содержать также носители, растворители и/или другие вспомогательные реагенты, обычно применяемые в фармакологии. Состав согласно изобретению может включать L-метионин, L-триптофан, L-тирозин, L-фенилаланин, L-аргинин, L-гистидин, L-бензоилглицин и/или их соль в качестве аминокислоты и d-биотин, пиридоксин, рибофлавин, рибофлавин-5'-фосфат, L-аскорбиновую кислоту, липоевую кислоту, оротовую кислоту и/или их соль в качестве витамина. Предпочтительный состав согласно изобретению включает L-триптофан, L-аскорбиновую кислоту, по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из аденина, 2-деокси-D-рибозы, D-глюкозамина и/или их фармацевтически приемлемых солей. Другой предпочтительный состав согласно изобретению включает L-аргинин, рибофлавин-5'-фосфат, по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из D-маннозы, яблочной кислоты, аденозинтрифосфата и/или их фармацевтически приемлемых солей. Другой предпочтительный состав согласно изобретению включает 30-44% по массе L-аргинина, 27-35% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 38-62% по массе яблочной кислоты и/или их фармацевтически приемлемых солей. Следующий предпочтительный состав согласно изобретению содержит 0,002-70% по массе по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из L-метионина, L-триптофана, L-тирозина, L-фенилаланина, L-аргинина, L-гистидина, N-бензоилглицина и/или их солей в качестве аминокислоты, 0,0004-80% по массе по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из d-биотина, пиридоксина, рибофлавина, рибофлавин-5'-фосфата, L-аскорбиновой кислоты, липоевой кислоты, оротовой кислоты и/или их солей в качестве витамина и 0,003-80% по массе по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из аденина, 2-деокси-D-рибозы, D-маннозы, D-глюкозамина, яблочной кислоты, щавелевоуксусной кислоты, аденозинтрифосфата и/или их фармацевтически приемлемых солей. Другой предпочтительный состав согласно изобретению включает 0,9-25% по массе L-метионина, 0,8-19% по массе L-триптофана, 1,1-48% по массе L-аргинина, 0,9-46% по массе d-биотина, 1,2-16% по массе пиридоксина, 0,03-42% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 0,05-18% по массе D-глюкозамина, 0,5-60% по массе 2-деокси-D-рибозы, 0,7-68% по массе яблочной кислоты, 0,6-40% по массе D-маннозы и/или их фармацевтически приемлемых солей. Очень эффективный состав по изобретению включает 0,005-34% по массе L-метионина, 0,002-25% по массе L-триптофана, 0,02-23% по массе L-тирозина, 0,04-30% по массе L-фенилаланина, 0,04-50% по массе L-аргинина, 0,03-34% по массе L-гистидина, 0,05-22% по массе N-бензоилглицина, 0,01-60% по массе d-биотина, 0,01-20% по массе пиридоксина, 0,0004-45% по массе рибофлавина, 0,0005-45% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 0,003-70% по массе L-аскорбиновой кислоты, 00004-15% по массе липоевой кислоты, 0,01-17% по массе оротовой кислоты, 0,001-10% по массе аденина, 0,01-63% по массе 2-деокси-D-рибозы, 0,08-42% по массе D-маннозы, 0,05-20% по массе D-глюкозамина, 0,01-80% по массе яблочной кислоты, 0,02-60% по массе щавелевоуксусной кислоты, 0,001-10% по массе аденозинтрифосфата и/или их фармацевтически приемлемых солей. Следующим предметом изобретения является способ получения вышеуказанного состава, который включает смешивание активных соединений, присутствующих в кровеносной системе, среди которых по меньшей мере одна аминокислота, по меньшей мере один витамин и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из аденина, 2-деокси-D-рибозы, D-маннозы, D-глюкозамина, яблочной кислоты, щавелевоуксусной кислоты, аденозинтрифосфата и/или их фармацевтически приемлемых солей в фармацевтический состав. К активному составу могут также быть добавлены носители, растворители и другие вспомогательные реагенты, широко применяемые в фармакологии, в количестве, необходимом для того, чтобы дополнить массу состава до 100%. Предпочтительная реализация способа по изобретению для получения фармацевтического состава включает смешивание L-триптофана, L-аскорбиновой кислоты, по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из аденина, 2-деокси-D-рибозы, D-глюкозамина и/или их фармацевтически приемлемых солей. Другая предпочтительная реализация способа по изобретению для получения фармацевтического состава включает смешивание L-аргинина, рибофлавин-5'-фосфата, по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из D-маннозы, яблочной кислоты, аденозинтрифосфата и/или их фармацевтически приемлемых солей. Следующий предпочтительный вариант реализации способа по изобретению для получения фармацевтического состава включает смешивание 30-44% по массе L-аргинина, 27-35% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 38-62% по массе яблочной кислоты и/или их фармацевтически приемлемых солей. Предпочтительный вариант реализации способа по изобретению для получения фармацевтического состава включает смешивание 0,002-70% по массе по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из L-метионина, L-триптофана, L-тирозина, L-фенилаланина, L-аргинина, L-гистидина, L-бензоилглицина и/или их солей в качестве аминокислоты, 0,0004-80% по массе по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из d-биотина, пиридоксина, рибофлавина, рибофлавин-5'-фосфата, L-аскорбиновой кислоты, липоевой кислоты, оротовой кислоты и/или их солей в качестве витамина и 0,003-80% по массе по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из аденина, 2-деокси-D-рибозы, D-маннозы, D-глюкозамина, яблочной кислоты, щавелевоуксусной кислоты, аденозинтрифосфата и/или их фармацевтически приемлемых солей. Другой предпочтительный вариант реализации способа по изобретению для получения фармацевтического состава включает смешивание 0,9-25% по массе L-метионина, 0,8-19% по массе L-триптофана, 1,1-48% по массе L-аргинина, 0,9-46% по массе d-биотина, 1,2-16% по массе пиридоксина, 0,03-42% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 0,05-18% по массе D-глюкозамина, 0,5-60% по массе 2-деокси-D-рибоы, 0,7-68% по массе яблочной кислоты, 0,6-40% по массе D-маннозы и/или их фармацевтически приемлемых солей. Наиболее предпочтительная реализация способа по изобретению для получения фармацевтического состава включает смешивание 0,005-34% по массе L-метионина, 0,002-25% по массе L-триптофана, 0,02-23% по массе L-тирозина, 0,04-30% по массе L-фенилаланина, 0,04-50% по массе L-аргинина, 0,03-34% по массе L-гистидина, 0,05-22% по массе N-бензоилглицина, 0,01-60% по массе d-биотина, 0,01-20% по массе пиридоксина, 0,0004-45% по массе рибофлавина, 0,0005-45% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 0,003-70% по массе L-аскорбиновой кислоты, 0,004-15% по массе липоевой кислоты, 0,01-17% по массе оротовой кислоты, 0,001-10% по массе аденина, 0,01- 63% по массе 2-деокси-D-рибозы, 0,08-42% по массе D-маннозы, 0,05-20% по массе D-глюкозамина, 0,01-80% по массе яблочной кислоты, 0,02-60% по массе щавелевоуксусной кислоты, 0,001-10% по массе аденозинтрифосфата и/или их фармацевтически приемлемых солей. Для терапевтического применения составы по изобретению формируют подходящим образом в фармацевтические составы так, чтобы после смешивания их с нетоксичными инертными твердыми или жидкими носителями, растворителями, связывающими реагентами и/или другими добавками, широко применяемыми в фармацевтической промышленности для энтерального или парентерального введения, они становились одной из обычных лекарственных форм. Носителями, растворителями и связывающими реагентами, удовлетворяющими вышеуказанным требованиям, являются, например, вода, желатин, лактоза, сахароза, крахмал, пектин, стеариновая кислота, стеарат магния, тальк, различные растительные масла, а также гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Фармацевтическими добавками и вспомогательными компонентами являются, например, консервирующие реагенты, такие как метил-4-гидроксибензоат, различные природные или синтетические эмульгаторы, диспергирующие и смачивающие реагенты, окрашивающие и ароматические реагенты, буферные вещества, а также реагенты, стимулирующие распад или растворение, и другие вещества, усиливающие желаемое действие. Обычные лекарственные формы является составами для перорального введения, получаемыми путем применения вышеуказанных фармацевтических добавок; эти составы могут представлять собой твердые формы, например, таблетки, капсулы, порошки, драже, пилюли или гранулы, или жидкие формы, например, сиропы, растворы, эмульсии или суспензии; кроме того, составы для ректального введения, такие как суппозитории; а также и составы для парентерального введения, например, растворы или настои для инъекций. Предпочтительная суточная доза состава согласно изобретению зависит от ряда факторов, таких как природа излечиваемого заболевания, состояния пациента, способа лечения и т.д. Предпочтительная суточная доза составляет 30-3000 мг/кг веса тела. Соответственно этому, приемлемо вводить ежедневно 1-4 таблетки, капсулы или драже, каждая из которых содержит 0,2-3 г активного состава или 0,5-3 л растворов для вливания, содержащих 10-200 г/л активного состава. Далее предметом изобретения является способ профилактики и лечения раковых заболеваний. Этот способ включает введение терапевтически эффективного количества состава согласно изобретению пациенту, проходящему курс лечения. Изобретение будет представлено более детально в следующих таблицах, чертежах и примерах. Клетки, использовавшиеся в следующих экспериментах, были получены из "Американской коллекции Типовых культур" (Rockville, MD, USA). В таблице 1 представлено убивающее опухолевые клетки действие и синергическое совместное действие компонентов составов из примеров 1-20, включающих четыре и пять активных компонентов соответственно, на Sp2/0-Ag14 клетки миеломы (АТСС CRL 1581). В таблице 2 показано, на основании примеров 21-37, усиление действия состава, включающего пять активных компонентов, на Sp2/0-Ag14 клетки при добавлении дополнительных компонентов. На фиг. 1 представлено действие и синергическое совместное действие компонентов составов, включающих четыре и пять активных компонентов соответственно, согласно примерам 1-20. На фиг. 2 представлено сравнение действия in vitro составов, включающих пять активных компонентов согласно примерам 102-106, и составов, включающих двадцать один активный компонент согласно примерам 107-111, на Sp2/0-Ag14 клетки мышиной миеломы в сравнении с соответствующей контрольной смесью. На фиг. 3 представлено действие составов, включающих двадцать один активный компонент согласно примеру 107, на Sp2/0-Ag14 клетки мышиной миеломы как функция времени в сравнении с необработанными клетками и соответствующей контрольной смесью. На фиг. 4 представлено действие in vitro составов, включающих двадцать один активный компонент согласно примерам 107-111, на K-562 клетки человеческого эритромиелоза (АТСС CCL 243) в сравнении с соответствующими контрольными смесями. На фиг. 5 представлено действие in vitro составов, включающих двадцать один активный компонент согласно примерам 107-111, на HeLa клетки человеческой эпителоидной карциномы шейки (АТСС CCL 2) в сравнении с соответствующими контрольными смесями. На фиг. 6 представлено действие составов, включающих двадцать один активный компонент согласно примерам 107-111, на НЕр-2 клетки человеческой эпидермоидной карциномы гортани (АТСС CCL 23) в сравнении с соответствующими контрольными смесями. На фиг. 7 представлено действие in vitro составов, включающих двадцать один активный компонент согласно примерам 107-111, на нормальные Vero клетки почки африканской зеленой обезьяны в сравнении с соответствующими контрольными смесями. На фиг. 8 представлено действие in vivo составов, включающих двадцать один активный компонент согласно примеру 112, на опухоль, развившуюся из Sp2/0-Ag14 клеток мышиной миеломы, введенных внутрибрюшинно BALB/c мышам, в сравнении с соответствующей контрольной группой. На фиг. 9 представлено in vivo действие составов, включающих двадцать один активный компонент согласно примеру 112, на твердую опухоль, развившуюся под кожей из HeLa клеток человеческой эпителоидной карциномы шейки, введенных подкожно BALB/c (nu/nu) мышам, в сравнении с соответствующей контрольной группой. Для экспериментов применяли следующие среды: в случае Sp2/0-Ag14 и K-562 клеток RPMI 1640 среду (Sigma Chemie GmbH, D-8024 Deisenhofen, Germany, номер продукта: R 6504), в случае НЕр-2, HeLa и Vero клеток минимальную поддерживающую среду MEM (Sigma Chemie GmbH, номер продукта: М 4655). Примеры 1-37 В аппарат, снабженный мешалкой, вносят активные реагенты в количествах, указанных в таблицах 1 и 2, затем к полученной порошкообразной смеси добавляют количества гидрокарбоната натрия, также указанные в таблицах 1 и 2, необходимые для нейтрализации компонентов кислотного типа. В ходе непрерывного перемешивания к смеси добавляют соответствующую среду для того, чтобы дополнить массу состава до 100%. Действие полученных таким способом растворов представлено в таблицах 1 и 2 и на фиг. 1. Примеры 38-67 Осуществляют также как примеры 1-37, с тем отличием, что для нейтрализации компонентов кислотного типа применяют соответствующие количества гидрокарбоната калия вместо гидрокарбоната натрия. Действие полученных этим способом растворов в любом случае не отличается существенно от действия растворов из примеров 1-37, представленного в таблицах 1 и 2 и на фиг. 1, соответственно. Примеры 68-97 Осуществляют также как примеры 1-37, с тем отличием, что для нейтрализации компонентов кислотного типа применяют соответствующие количества карбоната кальция вместо гидрокарбоната натрия. Действие полученных этим способом растворов в любом случае не отличается существенно от действия растворов из примеров 1-37, представленного в таблицах 1 и 2 и на фиг. 1, соответственно. Примеры 98-101 Осуществляют также как примеры 23, 24, 27 и 28, с тем отличием, что вместо L-аргинина, L-гистидина, L-метионина и L-тирозина, соответственно, применяемых в примерах 23, 24, 27 и 28, соответственно, применяют 0,053% по массе L-аргинина гидрохлорида, 0,052% по массе L-гистидина гидрохлорида, 0,009% по массе L-метионина гидрохлорида и 0,025% по массе тирозина гидрохлорида, соответственно. Во всех случаях соответствующее количество гидрокарбоната натрия составляло 0,054% по массе. Действие полученных этим способом растворов не отличается существенно от действия растворов из примеров 23, 24, 27 и 28, представленного в таблице 2. Пример 102 В аппарат, снабженный мешалкой, вносят 0,01% по массе L-триптофана, 0,034% по массе 2-деокси-D-рибозы, 0,003% по массе аденина, 0,065% по массе яблочной кислоты, 0,007% по массе L-аскорбиновой кислоты и 0,091% по массе гидрокарбоната натрия. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, в ходе непрерывного перемешивания к этой смеси добавляют соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2 для 100%-ного состава. Пример 103 Осуществляют также как пример 102, с тем отличием, что вносят только 80% количества каждого компонента. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, к этой смеси добавляют соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2 для 80%-ного состава. Пример 104 Осуществляют также как пример 102, с тем отличием, что вносят только 60% количества каждого компонента. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, к этой смеси добавляют соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2 для 60%-ного состава. Пример 105 Осуществляют также как пример 102, с тем отличием, что вносят только 40% количества каждого компонента. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, к этой смеси добавляют соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2 для 40%-ного состава. Пример 106 Способ согласно примеру 102, с тем отличием, что вносят только 20% количества каждого компонента. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, к этой смеси добавляет соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2 для 20%-ного состава. Пример 107В аппарат, снабженный мешалкой, вносят 0,011% по массе L-метионина, 0,01% по массе L-триптофана, 0,036% по массе L-тирозина, 0,041% по массе L-фенилаланина, 0,044% по массе L-аргинина, 0,039% по массе L-гистидина, 0,089% по массе N-бензоилглицина, 0,007% по массе L-аскорбиновой кислоты, 0,012% по массе d-биотина, 0,010% по массе пиридоксина, 0,0004% по массе рибофлавина, 0,0006% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 0,0006% по массе липоевой кислоты, 0,017% по массе оротовой кислоты, 0,003% по массе аденина, 0,034% по массе 2-деокси-D-рибозы, 0,090% по массе D-маннозы, 0,053% по массе D-глюкозамина, 0,065% по массе яблочной кислоты, 0,040% по массе щавелевоуксусной кислоты, 0,0015% по массе аденозинтрифосфата и 0,087% по массе гидрокарбоната натрия. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, в ходе непрерывного перемешивания к этой смеси добавляют соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2-7 для 100%-ного состава. Пример 108
Осуществляют также как пример 107, с тем отличием, что вносят только 80% количества каждого компонента. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, к этой смеси добавляют соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2-7 для 80%-ного состава. Пример 109
Осуществляют также как пример 107, с тем отличием, что вносят только 60% количества каждого компонента. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, к этой смеси добавляет соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2-7 для 60%-ного состава. Пример 110
Осуществляют также как пример 107, с тем отличием, что вносят только 40% количества каждого компонента. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, к этой смеси добавляют соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2-7 для 40%-ного состава. Пример 111
Осуществляют также как пример 107, с тем отличием, что вносят только 20% количества каждого компонента. Затем для того, чтобы дополнить массу состава до 100%, к этой смеси добавляют соответствующую среду. Действие полученного таким способом раствора представлено на фиг. 2-7 для 20%-ного состава. Пример 112
В аппарат, снабженный мешалкой, вносят 1,47% по массе L-метионина, 1,01% по массе L-триптофана, 0,036% по массе L-тирозина, 1,63% по массе L-фенилаланина, 1,71% по массе L-аргинина, 1,53% по массе L-гистидина, 0,18% по массе N-бензоилглицина, 1,94% по массе L-аскорбиновой кислоты, 1,21% по массе d-биотина, 2,02% по массе пиридоксина, 0,038% по массе рибофлавина, 0,05% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 0,02% по массе липоевой кислоты, 0,09% по массе оротовой кислоты, 0,068% по массе аденина, 1,32% по массе 2-деокси-D-рибозы, 1,8% по массе D-маннозы, 1,1% по массе D-глюкозамина, 1,32% по массе яблочной кислоты, 0,040% по массе щавелевоуксусной кислоты, 0,11% по массе аденозинтрифосфата, 1,34% по массе гидрокарбоната натрия и 0,04% по массе гидрокарбоната калия. Затем при непрерывном перемешивании к этой смеси добавляют 83,168% по массе буфера, содержащего 0,02% по массе KH2PO4 и 0,3% по массе Na2HPO4. Действие полученного таким способом раствора, применяемого для обработки животных, представлено на фиг. 8 и 9. Пример 113
В смеситель вносят 20% по массе L-триптофана, 62% по массе L-аскорбиновой кислоты и 18% по массе D-глюкозамина. Полученную в результате полного перемешивания порошкообразную смесь используют для превентивных экспериментов. Пример 114
Способ согласно примеру 113, с тем отличием, что применяют 32% по массе L-аргинина, 28% по массе рибофлавин-5'-фосфата и 40% по массе яблочной кислоты. Пример 115
Способ согласно примеру 113, с тем отличием, что применяет 23% по массе L-триптофана, 0,2% по массе пиридоксина, 17,8% по массе N-бензоилглицина и 59% по массе щавелевоуксусной кислоты. Пример 116
Способ согласно примеру 113, с тем отличием, что применяют 19% по массе L-тирозина, 61% по массе L-аскорбиновой кислоты, 0,2% по массе аденина и 19,8% по массе L-гистидина. Пример 117
Способ согласно примеру 113, с тем отличием, что применяет 31% по массе L-метионина, 53% по массе d-биотина, 0,2% по массе аденина и 15,8% по массе оротовой кислоты. Пример 118
Способ согласно примеру 113, с тем отличием, что применяет 27% по массе L-фенилаланина, 33% по массе рибофлавина, 0,2% по массе аденозинтрифосфата и 39,8% по массе D-маннозы. Пример 119
Способ согласно примеру 113, с тем отличием, что применяют 32% по массе L-гистидина, 9% по массе липоевой кислоты и 59% по массе 2-деокси-D-рибозы. Пример 120
Способ согласно примеру 113, с тем отличием, что применяют 12% по массе L-аргинина, 11% по массе пиридоксина и 77% по массе яблочной кислоты. Пример 121
В смеситель вносят 10% по массе L-метионина, 3% по массе L-триптофана, 0,02% по массе L-тирозина, 10,9% L-фенилаланина, 22,7% по массе L-аргинина, 10% по массе L-гистидина, 1,1% по массе N-бензоилглицина, 11,9% по массе L-аскорбиновой кислоты, 0,1% по массе d-биотина, 0,2% по массе пиридоксина, 0,05% по массе рибофлавина, 0,35% по массе рибофлавин-5'-фосфата, 0,1% по массе липоевой кислоты, 0,6% по массе оротовой кислоты, 0,3% по массе аденина, 0,9% по массе 2-деокси-D-рибозы, 11,5% по массе D-маннозы, 7% по массе D-глюкозамина, 8% по массе яблочной кислоты, 0,4% по массе щавелевоуксусной кислоты и 0,7% по массе аденозинтрифосфата. Полученную в результате полного перемешивания порошкообразную смесь применяет для превентивных экспериментов. Действие составов из примеров 1-37 и синергическое совместное действие активных ингредиентов (по сравнение с действием отдельных компонентов) изучали на Sp2/0-Ag14 клетках мышиной миеломы. В экспериментах применяли новейшие методы, описанные в научной литературе. В случае Sp2/0-Ag14 и K-562 линий из среды собирали клетки в логарифмической фазе роста и ресуспендировали их в 96-луночном планшете, используемом для клеточной культуры, до конечной концентрации 4
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/177.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
а) Применение адекватных доз составов может быть использовано для профилактики раковых заболеваний, для подавления образования опухолей в случае СПИДа и пересадок органов, для предотвращения образования метастазов и для прямой, вспомогательной или комбинированной обработки и лечения раковых заболеваний. б) Они не токсичны. Эксперименты по изучению токсичности, основанные на измерении потери веса тела животных, доказали, что соединения не являются токсичными. Согласно литературным данным, токсичность отдельный компонентов составов очень низка и даже эта низкая токсичность уменьшается при совместном применении этих веществ. Кроме того, приматы переносят эти вещества лучше, чем мелкие животные, использованные для определения показателей токсичности. Принимая во внимание все эти факты, можно констатировать, что составы следует считать нетоксичными. в) Они не обладают или обладают только незначительным побочным действием. Были проведены многочисленные наблюдения за побочным действием компонентов, так как почти все из них (за исключением 2-деокси-D-рибозы) применялись в разных видах терапии (в противораковой терапии - только аскорбиновая кислота) или в качестве пищевых добавок. Согласно накопленному в этой области опыту совершенно очевидно, что составы практически не обладают побочным действием. г) Они являются селективными. Селективность доказывают специальные эксперименты, показывающие, что составы, токсичные для различных раковых клеток, не токсичны для нормальных Vero клеток и для экспериментальных животных или их нормальных клеток, соответственно. Селективность усиливается из-за того, что имеется намного больше нормальных клеток, чем раковых клеток, и последние клетки аккумулируют компоненты составов, в то время как в случае нормальных клеток их поглощение регулируется. д) Они могут иметь широкое применение, их действие является общим. Действие составов было исследовано в случае клеточных линий мышиной миеломы (Sp2/0-Ag14), человеческой эритролейкемии (K-562), человеческой эпителоидной карциномы шейки (HeLa) и человеческой эпидермоидной карциномы гортани (НЕр-2). Эти клетки представляют широкий спектр, поскольку они включают как человеческие опухоли, так и опухоли животных, а из человеческих опухолей представлены лейкемия и две очень разных твердых опухоли. Результаты, полученные из экспериментов с этими клеточными линиями, подтверждают приведенное выше утверждение о том, что составы обладают общим действием и могут иметь широкое применение. е) Они могут быть легко получены. Компоненты составов являются веществами с низким молекулярным весом, легкодоступными, и поэтому их получение не представляет трудностей. ж) Они растворимы в воде и поэтому их легко дозировать. Источники информации
1. The Pharmacоlogical Basis of Therapeutics, Pergamon Press, Inc.. New York, pp. 1202-1263 (1990). 2. Harrison's Principles of Internal Medicine, 12th ed., In ternational Edition, McGraw-Hill, Inc., New York, Vol. 2, pp. 1587-1599 (1991). 3. Scientific American Medicine, Scientific American, Inc., New York, Vol. 2, 12(V), pp. 1-14 (1984). 4. Pharmac. Ther., 49, 43-54 (1991). 5. Proc. Roy. Soc. Med., 63, 1063-1066 (1970). 6. Chest, 99, 557-561 (1991). 7. Eur. J. Cancer, 27, 936-939 (1991). 8. J. R. Soc. Med., 84, 321 (1991). 9. PCT No. WO 86/025555. 10. Опубликованная заявка на патент Японии N 62-135 421. 11. American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas, 5th ed., pp. 15-16 (1985). 12. American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas, 5th ed., pp. 45-46 (1985). 13. Eur. J. Cancer. Clin. Oncol., 21, 1253-1260 (1988). 14. Europ. J. Cancer, 17, 129-142 (1981).
Формула изобретения
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12