Способ диагностики нарушений развития новорожденного

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической практике для раннего и своевременного выявления нарушений развития новорожденного. Способ заключается в том, что исследуют плазму пуповинной крови в 3 периоде родов, определяют содержание внеэритроцитарного гемоглобина и активности глюкозо-6-фосфатазы, которые свидетельствуют о нарушениях обменного гомеостаза. При содержании внеэритроцитарного гемоглобина более 160 ммоль/л и активности глюкозо-6-фосфатазы выше 55 мкмоль/л-ч диагностируют нарушение обменного гомеостаза, что свидетельствует о нарушении развития новорожденного. Способ более точен и менее рискован по сравнению с известным. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической практике для раннего и своевременного выявления осложненного развития новорожденного.

В результате многих исследований доказано, что здоровье новорожденного в значительной степени определяется течением беременности. Наряду с этим, патология плода нередко усугубляется в процессе родов и может в последующем привести к нарушению развития ребенка как в раннем неонатальном, так и в более отдаленном периоде.

В настоящее время все большее внимание уделяют разработке биохимических способов диагностики, основанных на многозвеньевых межсистемных процессах, отражающих патогенетические, компенсаторные, адаптивные сдвиги, сопутствующие осложненному развитию новорожденного.

В настоящее время доказан высокий риск повреждения печени в ранний период развития новорожденного, как центрального органа, регулирующего обменный гомеостаз организма. При нарушении углеводного гомеостаза новорожденного накапливаются высокотоксичные продукты ПОЛ, нарушая структуру и функцию биомембран и связанных с ними ферментативных процессов окисления и ферментативного синтеза. В результате этого гиперпродукция физиологически активных веществ приводит к развитию целого ряда патофизиологических эффектов и в первую очередь нарушение кровообращения и микроциркуляции в жизнеобеспечивающих системах и органах, определяющие ведущие патологические синдромы в неонатальный период.

В осуществлении печенью гомеостатической регуляции сахара в крови существенную роль играет глюкозо-6-фосфатаза (гл-6-ф-за), связанная с мембраной и регулирующая процессы образования и расходования глюкозы. Состояние гипогликемии с формированием энергодефицита и высоким риском поражения ЦНС, с одной стороны, и состояние гипогликемии, особенно в условиях тяжелой гипоксии, способствующее накоплению лактата, снижению pH и патологическому воздействию гиперлактатацидемии, с другой - оказывает в равной степени неблагоприятное влияние на процессы постнатальной адаптации.

Переход фермента из микросом в цитоплазму и далее в кровь указывает на нарушение структуры клеток и повышение проницаемости цитомембраны, которое связано с "хаотропным" действием гипоксии, нарушающей конформационные отношения белок-липидных комплексов биомембран. Подтверждением изменения функционирования клеточных мембран может являться уровень внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ) в крови.

При изучении патентной и научно-медицинской литературы выявлен ряд способов для диагностики нарушений обменного гомеостаза с целью диагностики ранних нарушений развития новорожденного.

Известен способ определения состояния новорожденного (А.Т.Назыров, К.К. Алманиязова, А.с. СССР N 651790, кл. A 61 B 10/00), заключающийся в том, что с целью выявления непроявляющихся клинических форм гипоксий у недоношенных новорожденных авторы предлагают определять активность изоцитратдегидрогеназы в плаценте и по повышению активности фермента прогнозировать развитие осложнений и диагностировать гипоксическое поражение мозга. Недостаток этого метода в том, что определение изоцитратдегидрогеназы в плаценте достаточно сложно технически и требует значительных временных затрат, "специального оборудования и реактивов в связи с обработкой плаценты.

Известен способ прогнозирования пневмоний у новорожденных (И.И.Крукиер, Т. Н.Погорелова, А.Ф.Комаров, А.с. СССР N 1630790, М. кл. A 61 B 10/00), заключающийся в том, что с целью прогнозирования у новорожденных, перенесших хроническую внутриутробную гипоксию, в плаценте определяют содержание гексоз и нейраминовой кислоты и при величине их соотношения менее 30 прогнозируют нарушения обменного гомеостаза с риском последующего развития пневмонии. Однако этот способ имеет ряд недостатков: соотношение определяемых величин указывает только о развитии пневмонии, но не позволяет судить о состоянии обменного гомеостаза в целом; определение гексоз и нейраминовой кислоты в плаценте достаточно сложно технически, требует специальной обработки плаценты и значительных временных затрат.

Известен способ диагностики гипоксии плода в родах (В.В. Абрамченко, В. И. Фридман, А.с. СССР N 938939, кл. A 61 B 10/00), заключающийся в том, что авторы предлагают проводить измерение кислотности околоплодных вод за предлежащей частью плода в течение всего родового акта датчиком, введенным трансцервикально. Этот способ имеет ряд недостатков: не позволяет судить о постгипоксических нарушениях; необходимо динамическое наблюдение; требует больших временных затрат; введение трансцервикально датчика сопряжено с риском развития послеродовых инфекционных осложнений.

в качестве прототипа взят способ определения состояния новорожденного (В.С.Лебеденко, А.А.Зелинский, А.А.Шандра, Л.С.Годлевский, Р.Ф.Макулькин, Е. В.Никушкин, Г.Н.Крыжановский, А.с. СССР N 1416917, кл.G 01 N 33/48), который предусматривает непосредственно после рождения определение малонового диальдегида в плазме крови, взятой из пульсирующей артерии и вены пуповины, с последующим вычислением отношения первого показателя ко второму, и при величине 1,0 - 1,3 констатируют удовлетворительное состояние; 1,4 - 1,6 - состояние с высоким перинатальным риском; 1,7 и более - тяжелое и следовательно нарушение обменного гомеостаза. Однако этот способ имеет ряд недостатков: необходим двукратный забор крови (из артерии и вены); показатели ПОЛ изменяются при большом спектре патологических состояний, что делает метод менее точным и специфичным; в настоящее время определение малонового диальдегида считается не надежным показателем, по которому нельзя судить об интенсивности процессов ПОЛ, так как он быстро подвергается обменным превращениям (Ланкин В. З. Кардиология 1980, т.20, N 8, с.42-48); определение малонового диальдегида требует создания специальных условий; определение артериовенозной разницы по МДА требует учета скорости кровотока в плаценте, являющейся чрезвычайно изменчивой величиной.

Целью изобретения является упрощение, повышение точности и специфичности диагностики нарушений развития новорожденного.

Поставленная цель достигается путем исследования пуповинной крови плода в 3 периоде родов. В крови определяют содержание внеэритроцитарного гемоглобина, свидетельствующего о стабильности клеточных мембран, и активности гл-6-ф-азы, являющейся органоспецифичным ферментом печени и свидетельствующим об изменении функционирования печеночной клеточной мембраны, что позволяет судить о нарушении обменного гомеостаза новорожденного.

При концентрации в плазме крови, реагирующей первой на патологическое действие вредного фактора, ВЭГа до 160 ммоль/л и активности гл-6-ф-азы до 55 мкмоль/л-ч диагностируют нормальное состояние обменных процессов плода, что обеспечивает удовлетворительное развитие новорожденного; а при величине этих показателей более указанных величин диагностируют нарушение обменных процессов плода и, следовательно, высокую степень риска для раннего развития новорожденного.

Для проведения исследования необходимо 1,5 мл пуповинной крови, которую центрифугируют 30 мин при 1500 об/мин.

Определение содержания ВЭГ (по Каракашов В.А., Вичев С.П. Микрометоды в клинической лаборатории. -София, 1968, с.114-115).

В пробирку помещают 0,4 мл плазмы, куда добавляют 1,6 мл реактива Драпкина (50 мг KCN + 200 мг K₃ [FeCCN₆] + 140 мг KH₂PO₄ на 1 л H₂O).

Определяем на спектрофотометре интенсивность поглощения на длинах = 540 нм и = 680 нм. Контролем является вторая пробирка, в которой находится 0,4 мл H₂O + 1,6 мл р-ва Драпкина. Проводим расчеты: [E₅₄₀ - E₆₈₀] 373 = мг%, где E₅₄₀ - интенсивность поглощения на длине волны = 540 нм; E₆₈₀ - интенсивность поглощения на длине волны = 680 нм; 373 - коэффициент для расчета.

Для перевода результатов в систему СИ (ммоль/л) полученную величину необходимо умножить на переводной коэффициент 620,6 (согласно методике).

Определение активности глюкозо-6-фосфатазы (цит.по канд.дис. Микашинович З. И. "Некоторые показатели углеводно-фосфорного обмена в печени при гепатите. Ростов-на-Дону, 1969).

Берем две пробирки: 1 пробирка - контроль; 2 пробирка - опытная.

В опытную пробирку помещаем: 0,2 мл плазмы + 0,2 мл глюкозо-6-фосфатнатриевой соли + 0,2 мл цитратного буфера (pH 6,5).

В контрольную пробирку: 0,2 мл цитратного буфера + 0,6 мл 0,25%-ного р-ра ТХУ (для остановки реакции).

Пробирки инкубируем в течение 20 мин при Т=37^oC. Затем в опытную пробирку добавляем 0,6 мл 25%-ного р-ра ТХУ, а в контрольную - 0,2 мл плазмы. Центрифугируем пробирки 15 мин при скорости 1500 об/мин. Об активности гл-6-ф-азы судят по количеству отщепившегося неорганического фосфора, сравнивая с контролем, для чего к 1 мл центрифугата добавляют 0,5 мл 1%-ного р-ра аскорбиновой кислоты + 0,5 мл 1%-ного молибдата аммония (в каждую пробирку).

После 10 мин выдерживания в темноте развивается синее окрашивание, которое колориметрируют на ФЭК с красным светофильтром против контроля. Результаты выражают в мкмоль/л-час.

При концентрации в плазме крови, реагирующей первой на патологическое действие вредного фактора. ВЭГа до 160 ммоль/л и активности гл-6-ф-азы до 55 мкмоль/л-час диагностируют нормальное состояние обменных процессов плода, что обеспечивает удовлетворительное развитие новорожденного; а при величине этих показателей более указанных величин диагностируют нарушение обменных процессов плода и, следовательно, высокую степень риска для раннего развития новорожденного.

Пример 1. Первобеременная Н., 20 лет. Роды в срок, продолжительность 8 ч 30 мин, новорожденный мужского пола, массой 3350 г., длиной 52 см, оценка по шкале Апгар на 1 мин - 7 б., на 5 мин - 8 б., состояние врачом-неонаталогом расценено как удовлетворительное, во время осмотра клинических признаков патологии не установлено. Содержание в плазме пуповинной крови ВЭГ составило 170,3 ммоль/л, а активность гл-6-ф-азы - 66,8 мкмоль/л-ч, что свидетельствует о нарушении обменного гомеостаза плода и указывает на высокую степень риска развития новорожденного. Действительно, на 2 сутки состояние ребенка ухудшилось, у него отмечались при беспокойстве стридорозное дыхание, гипертонус конечностей, развилась картина тяжелой степени гипоксической энцефалопатии. Проводилась посиндромальная терапия. На 5 сутки приложен к груди, на 9 сутки выписан домой.

Пример 2. Повторнобеременная М., 26 лет. Роды вторые в срок, продолжительность 5 ч 30 мин, новорожденный женского пола, массой 3800 г, длиной 54 см, оценка по шкале Апгар на 1 мин - 7 б., на 5 мин - 8 б., состояние врачом-неонаталогом расценено как удовлетворительное, во время осмотра клинических признаков патологии не выявлено. Содержание в плазме пуповинной крови ВЭГ составило 124,4 ммоль/л, активность гл-6-ф-азы - 47,2 мкмоль/л-ч, что свидетельствует о нормальном уровне обменного гомеостаза плода и, следовательно, указывает на неосложненное течение неонатального периода. Период новорожденности протекал без осложнений, к груди приложен на 1-ые сутки, на 5-ые выписан домой.

Данным способом обследовано 42 ребенка на базе родильного дома муниципальной больницы N 20. Проведено определение диагностической ценности разработанного метода. Результаты исследований приведены в таблице N 1.

Нами проведено сравнение заявляемого способа и прототипа.

Как видно из представленной таблицы N 2, из-за наложения границ показателей артериовенозного коэффициента МДА, характеризующие физиологическое и патологическое развитие новорожденного, на величине 1,3 снижается чувствительность, специфичность и предсказательная ценность прототипа, что несомненно затрудняет его применение в практическом здравоохранении.

Таким образом, заявляемый способ по сравнению с прототипом обладает следующими преимуществами: 1. Заявляемый способ отличается тем, что для осуществления прототипа необходима двукратная пункция пуповины для дифференцированного забора крови из артерии и вены пуповины, а для осуществления заявляемого метода - смешанной, что упрощает способ.

2. При помощи заявляемого способа повышается точность диагностики нарушений развития новорожденного: чувствительность - 85,7%; специфичность - 90,48%; предсказательная ценность положительного теста - 90,00%.

3. Заявляемый способ позволяет не только фиксировать гипоксию, что осуществляет прототип, а делает возможным судить о степени выраженности постгипоксических сдвигов обменных процессов, ведущих факторов, которые определяют развитие новорожденного.

4. По изменению в плазме пуповинной крови, можно диагностировать нарушения обменного гомеостаза плода и оценить функциональное состояние печени и клеток крови, и, следовательно, удовлетворительное или с признаками нарушения развития новорожденного.

Формула изобретения

Способ диагностики нарушений развития новорожденного путем исследования крови, отличающийся тем, что в пуповинной крови определяют содержание внеэритроцитарного гемоглобина и активность глюкозо-6-фосфатазы и при величине этих показателей более 160 ммоль/л и 55 мкмоль/л - ч соответственно диагностируют нарушения развития новорожденного.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2