Лекарственное средство для лечения ретровирусных инфекций

 

Использование: ветеринария и медицина. Сущность изобретения: изобретение относится к лекарственному средству для лечения ретровирусных инфекций, которое содержит безбактериальные и безбелковые экстракты из Escherichia coli и при необходимости экстракты зеленых и желтых листьев Ginkgo biloba. 7 з.п. ф-лы.

Изобретение касается применения лекарственного средства на основе безбактериальных и безбелковых экстрактов из Escherichia coli для лечения ретровирусных инфекций.

Ретровирусы являются шарообразными, покрытыми оболочкой, РНК-вирусами, из которых два подсемейства патогенны для человека и животных. Характерным признаком ретровирусов является обратная транскриптаза, РНК-зависимая ДНК-полимераза. При репликации однонитевая вирусная РНА транскрибируется обратной транскриптазой в двуниточную промежуточную ступень ДНК и последняя встраивается в качестве провируса в геном хозяйской клети. Провирус через регулярную транскрипцию начинают образование РНК - содержащих вирусных частиц, которые покидают хозяйскую клетку после отпочкования. Ретровирусы вызывают лейкемии, аутоиммунные болезни, а также иммунодепрессии, а именно у человека, в частности, СПИД и ARS, (т.е. aids relafed Syndrome = синдром, родственный или близкий спиду), являющийся предварительной ступенью к полной картине болезни при спиде. Извлечение ретровирусных инфекций у человека до сегодняшнего дня невозможно, так как все попытки создать вакцину против вируса до сих пор оканчивались неудачей из-за его очень высокой скорости мутации. Терапевтически до сих пор применяются медикаменты, которые ингибируют обратную транскриптазу, при этом речь идет большей частью о замещенных дезоксинуклеозидах гуанозина, цитидина и тимидина. До сих пор наиболее известным активным веществом является А Т, который, правда, лишь в состоянии замедлять симптомы ретровирусной инфекции, но не излечивать болезнь.

Совершенно неожиданно было установлено, что известные сами по себе безбактериальные и безбелковые экстракты из Escherichia Coli, возможно в сочетании с экстрактами из Ginkgo biluba, в состоянии заметно замедлять развитие ретровирусных инфекций, не проявляя побочных действий, известных по терапевтическим средствам на основе нуклеозидов. Экстракты из Coli могут применяться вместе с экстрактами из Ginkgo как таковые, но также возможно комбинировать экстракты с лечением терапевтическими средствами, содержащими нуклеозиды, причем возможно уменьшение дозы нуклеозидов и тем самым ожидаемых побочных действий.

Экстракты из листьев Ginkgo biloba применяются уже продолжительное время для терапии периферийных и церебральных артериальных расстройств кровообращения. Способ получения экстрактов из зеленых листьев известен, например, из DE-PS 1767098, 2117429, а также EP-A O 324197, EP-A O 330567 и DE-OS 3940091. Еще один способ получения экстрактов из желтых осенних листьев Ginkgo biloba jgbcfy d EP-A O 352146.

Листьев Ginkgo biluba содержат ряд различных соединений, среди которых преобладают так называемые гинкгофлавонгликозиды. Типичным представителем этого класса веществ является 5, 7, 3', 4'- тетрагидрокси-флавоно-3-O- рамнопиранозил-4-O- -D- (6'''-транскумароил)-глюкопиранозид. В меньших количествах содержатся терпенлактоны, как, например, глинкголиды (Ginkgolide) более подробно описанные, например, Okabe at al., J. Chem. Soc. (1967), 2201-2206. Близко родственным с терпенлактонами является также билобалид, применение которого известно для лечения нейропатий и подобных заболеваний из US-PS 4571407.

Кроме того, листья Ginkgo biloba содержат еще так называемые гинкголевые кислоты, т.е. 6-алкилсалициловые кислоты, имеющие алкильные остатки с 13-19 C-атомами и 0-3 двойными связями. Из этих гинкголевых кислот можно получить биогенетически или переработкой листьев соответствующим образом замещенный фенол, известный как аллергизирующее вещество. Способы получения экстрактов различаются в основном попытками по возможности исключить нежелательные компоненты или сопровождающие вещества, в особенности, если экстракты позже должны применяться в инъецируемой форме. Из известной литературы в расположении специалиста имеется, однако, ряд способов отделения нежелательных компонентов.

Имеющиеся сегодня в продаже экстракты Ginkgo поэтому, как правило, хорошо переносимы также и в инъецируемой форме; такие продукты выпускаются в продажу, например, фирмой Dk Wilmfr Schwabe Gmbtt & Co. D-7500 в Карлсруэ под маркой "Tebonin" .

EP-B-O 352 146 упоминает уже, что экстракты из желтых листьев Ginkgo biloba в состоянии понижать повышенный уровень гамма-глобулина у млекопитающих, как он например, наблюдается также у больных СПИДом. В этой публикации, однако, не содержатся более подробные данные относительно того, может ли этот экстракт и с каким успехом действительно применяться при СПИДе.

Безбактериальные и безбелковые экстракты из культур Escherichia coli применяют уже давно в терапевтических целях, а именно с одной стороны, при нарушениях подвижности и проницаемости слизистой оболочки кишечника, но также и при воспалениях, как то болезнь Крона (Morous Crohn) или после антибиотической, химио- или лучевой терапии. Другой областью применения экстрактов Coli являются аллергии, как то сенный насморк, крапивница, экзема, пищевые аллергии и астма. Наконец, еще одной терапевтической областью применения является их применения при лечении угрей и мигрени и кроме того, эти экстракты, как описано в DE-PS 3816298 являются анаболически активными и приводят к стимуляции иммунной защиты, неспецифической для возбудителя. Способы получения между прочем описаны также в DE-PS 3816298. Безбактериальные и безбелковые экстракты из Escherichia coli содержат относительно короткоцепные олигопептиды и, как следует из исследований, опубликованных в Drug Res. 23, 829-830 (1973), полисахаридную составляющую из преимущественно глюкозы, галактозы, и ксилозы, а также небольшую долю жирных кислот. Однако, нуклеиновые кислоты не были обнаружены. Бросается в глаза, что проводившиеся до сих пор количественные исследования на этих пептидах подтвердили отсутствие ароматических аминокислот, за исключением гистидина.

Такого рода бесклеточные и безбелковые экстракты из культур Escherichia coli могут вводиться перорально или также в виде инъекций. Соответствующие препараты выпущены уже в продажу, например, фирмой Fa.Laves Arzneimittel Gmbtt, Барбараштрассе, 14, 3003, Ронненберг, под маркой Colibiogen. .

Действие экстрактов Coli, в частности в комбинации с экстрактами из Ginkgo, при ретровирусных инфекциях в настоящее время не может еще получить однозначного научного объяснения. Правда, клинические опыты четко показали, что при назначении таких лекарств сохраняется и даже большей частью однозначно увеличивается доля T₄ -лимфоцитов. Согласно недавно разработанной рабочей гипотезе (WO, A 9214478), наблюдаемое выпадение специфической иммунной защиты предположительно обусловлено тем, что инфекции ретровирусами приводят к уменьшению T₄-лимфоцитов и позже также к уменьшению T₈-лимфоцитов. Основанное на этом перепроизводство "невыпрямленных" иммуноглобулинов B - лимфоцитами должно способствовать тогда ослаблению специфической иммунной защиты и ее развалу. Из клинических наблюдений есть основания для предположения, что активные вещества в экстракте Coli и Ginkgo уменьшают или, соответственно, тормозят увеличенное производство "невыпрямленных" иммуноглобулинов.

Оказалось, кроме того, что при приеме экстрактов Coli и Ginkgo может быть уменьшена доза ретровирусоспецифических лекарств, благодаря чему существенно уменьшается опасность побочных действий, в частности вторичных анемий. Снижение дозы, кажется, лишь отчасти основано на лучшей восприимчивости к нуклеозидной терапии.

Лекарственные средства согласно изобретению могут вводиться перорально, предпочтительно, однако, в виде инъекции. Оказалось, что экстракты Coli и Ginkgo могут приниматься совместно с нуклеозидными терапевтическими средствами, но что, с другой стороны, имеет также преимущество, если экстракт Coli или Ginkgo применяется заблаговременно перед приемом нуклеозидного терапевтического средства, причем это временное смещение может составлять от нескольких часов до 1-2 дней. Поэтому изобретение касается также так называемого набора (Kit), содержащего отдельные активные вещества для перорального или парентерального применения в пространственно разделенной форме.

Дозировка составляет для одной дозиметрической единицы экстракта безбелковых и бесклеточных продуктов обмена 4-9 10¹² микроорганизмов, в то время как у экстракта Ginkgo дозиметрическая единица содержит 50-200 мг сухого экстракта. Ежедневная доза должна устанавливаться для каждого пациента индивидуально. И при длительном лечении до сих пор также не было выявлено никаких побочных действий.

Изобретение ниже поясняется подробнее на примерах.

пример 1. Экстракт Coli получают по способу, подробнее описанному в DE-PS 3816298, прививая бульонным культурам штамм желаемых серотипов E.coli и инкубируя по меньшей мере 5 дней при 37^oC. Предпочтительно применяют серотип 02:K1:K6. Из этой бульонной культуры с прибл. от 4 до 9 10¹² образующих колонию единиц на мл затем получают известным способом при стерильных условиях безбактериальные и безбелковые фильтры, которые могут быть либо переработаны известным способом в инъекционные растворы либо применены как таковые для введения в виде пероральных лекарств. Кроме того, экстракты могут быть с помощью щадящей вакуумной сушки освобождены от воды и известным способом переработаны в капсулы и таблетки.

Пример 2. Для получения экстрактов Ginkgo зеленые или желтые листья Ginkgo biloba тонок измельчают и известным способом экстрагируют с ацетоном иди этанолом, в частности смесью воды с ацетоном или этанолом в соотношении 50: 50 в течение нескольких часов при температурах 40 и 60^oC. После экстракции жидкость отжимают из листьев, и она может быть подвергнута дальнейшей экстракции. Полученный белый экстракт экстрагируют на первой ступени очистки не смешивающимся с водой растворителем, предпочтительно циклогексаном. Водно-кетонную фазу затем перерабатывают, неполярную фазу выбрасывают. Затем водно-кетонную фазу сгущают приблизительно до половины ее объема и выпавший осадок отфильтровывают. Профильтрованный раствор смешивают известным способом с сульфатом аммония и экстрагируют бутанолом. Полученный экстракт после сушки над сульфатом натрия сгущают под уменьшенным давлением и в заключение исчерпывающе экстрагируют этанолом. Этот остаток затем сгущают под вакуумом для сушки.

Этот экстракт, который затем известным образом может быть превращен в готовый продукт, содержит в среднем прибл. 25% гинкгофлавонгликозидов и прибл. 5% терпенлактонов (эти величины могут колебаться прибл. на 10% вверх или вниз в зависимости от происхождения и возврата листьев).

Пример 3. Проводившиеся до сих пор клинические опыты показывают, что у пациентов с ARS при ежедневной оральной даче одной чайной ложки экстракта Coli перорально или одной инъекции экстракта Coli уже через 2 дня наблюдается заметное улучшение общего самочувствия и увеличение популяции T₄-лимфоцитов. Если дополнительно к экстракту Coli давали по одной ампуле экстракта Ginkgo с содержанием сухого экстракта 50 мг, то даже в самых тяжелых случаях достигалось увеличение количества T₄-лимфоцитов до более 400/мкл. При дополнительной даче экстрактов Coli и Ginkgo при лечении нуклеозидными препаратами наблюдалось значительно меньше субъективных и объективных побочных действий, так что при длительной терапии теперь впервые можно было предпринять уменьшение дозы.

Формула изобретения

1. Применение лекарственного средства на основе безбактериальных и безбелковых экстрактов из Escherichia coli для лечения ретровирусных инфекций.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что дополнительно содержит экстракты из зеленых или желтых листьев Ginkgo biloba.

3. Применение по п.1 или 2, отличающееся тем, что дозиметрическая единица экстракта E.coli содержит продукты обмена веществ из приблизительно 4 9 10¹² микроорганизмов.

4. Применение по пп.1 3, отличающееся тем, что дозиметрическая единица экстракта Ginkgo biloba содержит 50 200 мг экстракта из сухих листьев.

5. Применение по пп.1 4, отличающееся тем, что в сухом экстракте соотношение гинкгофлавонгликозидов к терленлактонам составляет приблизительно 5 1.

6. Применение по пп.2 5, отличающееся тем, что лекарственное средство содержит экстракты E.coli или соответственно Ginkgo biloba в пространственно-разделенной форме.

7. Применение по пп.1 6, отличающееся тем, что лекарственное средство дополнительно содержит химиотерапевтическое средство против ретровирусных инфекций.

8. Применение по пп.1 7, отличающееся тем, что лекарственное средство существует в инъецируемой форме.