Синтетическая среда для разбавления и хранения спермы баранов в охлажденном состоянии

 

Использование: сельское хозяйство, в частности - искусственное осеменение овец. Сущность изобретения: для повышения биологической полноценности сперматозоидов в состав среды входят этилендиаминтетрауксусная кислота и трис-(-оксиметил)-аминометан в оптимальном соотношении. 3 табл.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, например, овец.

Известны синтетические среды для разбавления и хранения спермы баранов в охлажденном до плюсовых температур состояния, в состав которых входят различные сахара, соли, буферные компоненты, желток куриных яиц [1, 2] Однако недостатком данных сред является то, что они не обладают высокими буферными свойствами и не обеспечивают достаточно продолжительного периода сохранения высокой оплодотворяющей способности сперматозоидов барана, сохраняемых в охлажденном до 4^oC состоянии. Вследствие этого, оплодотворяющая способность спермы баранов, сохраняемой при данной температуре, резко снижается через 12-24 ч хранения. Кроме того, данные не позволяют сохранять разбавленную сперму при комнатной температуре (16-18^oC), что очень важно с практической точки зрения, так как позволило бы хранить разбавленную сперму при данных температурах в условиях отдаленно расположенных овцеводческих ферм.

Наиболее близкой по составу к нашему изобретению является среда для разбавления и хранения спермы баранов в охлажденном состоянии [3] которая содержит следующие компоненты: (мас.) Глюкоза 0,8 Цитрат натрия трехзамещенный пятиводный 2,8 Желток куриного яйца 20 Вода дистиллированная Остальное Недостаток этой среды в том, что она не обеспечивает высоких буферных свойств разбавленной сперме баранов, не позволяет сохранять высокую оплодотворяющую способность спермы при хранении более 12-24 ч при 4^oC и не оказывает высоких протективных свойств на сперму, сохраняемую при более высоких (16-18^oC) температурах.

Целью изобретения является повышение биологической полноценности спермы, сохраняемой в охлажденном состоянии.

Поставленная цель достигается тем, что среда, включающая глюкозу, желток куриного яйца, антибиотики и воду, дополнительно содержит двунатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты и трис-(оксиметил)-аминометан при следующем соотношении ингредиентов, (мас.) Глюкоза 2,1-2,8 Трис-(оксиметил)-аминометан 0,34-0,45 Двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 1,32-1,89
Желток куриного яйца 2,0-4,0
Вода дистиллированная Остальное
Ранее комплексное применение данных веществ в составе среды для хранения спермы баранов в охлажденном состоянии не использовалось.

Положительное действие двунатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты заключается в том, что она связывает двухвалентные металлы, блокирует действие окислительных ферментов, стабилизирует акросомную мембрану сперматозоидов и предотвращает стимуляцию перекисного окисления липидов в сперме.

Трис-(оксиметил)-аминометан устойчиво удерживает кислотно-щелочное равновесие в сперме и снижает активность гликолитических и дыхательных процессов в сперматозоидах.

Предлагаемая среда повышает биологическую полноценность и оплодотворяющую способность спермы, сохраняемой в охлажденном до 16^oC состоянии. Кроме того, вследствие того, что сперма не охлаждается ниже 16-18^oC, в ее состав можно вводить в 5-6 раз меньше желтка куриных яиц по сравнению с хранением при 4^oC. А это значительно удешевляет стоимость сред.

Допустимые граничные значения концентраций компонентов в заявленной среде приведены в табл. 1.

Если содержание ингредиентов выходит за границу крайних нижних или верхних значений предлагаемой среды, то это дает худшие результаты и не приводит к достижению поставленной цели (см. табл.2).

Пример приготовления среды. В чистую химическую колбу вносят по рецепту глюкозы, трис-(оксиметил)-аминометан и двунатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты заливают прокипяченной дистиллированной водой (80-90^oC) и полностью растворяют все компоненты. Затем раствор охлаждают до 40^oC и вносят туда желток куриного яйца.

Свежеприготовленная среда перед разбавлением спермы должна исследоваться по внешнему виду, цвету и периодически по показателю pH и осмотическому давлению. Предлагаемая синтетическая среда по физико-химическим свойствам должна отвечать следующим требованиям: внешний вид однородная эмульсия без осадка и механических примесей, цвет светло-желтый, без запаха, pH 6,7 0,1, осмотическое давление 7,0-9,0.

Приготовленную среду используют для разбавления спермы в течение 3-4 ч. Хранят при температуре 16^oC, перед употреблением нагревают до 30^oC. При использовании среды к 1 объему спермы добавляют 1-2 объема среды в зависимости от концентрации сперматозоидов.

Оптимальный (второй) состав предлагаемой среды (мас.): глюкоза 2,4; трис-(оксиметил)-аминометан 0,42; двунатриевая соль этилентетрауксусной кислоты 1,76; желток куриного яйца 3,0; вода дистиллированная до 100, имеет более высокие протективные свойства в сравнении с другими вариантами и прототипом и повышает биологическую полноценность спермы при хранении при 16^oC. Абсолютный показатель живучести сперматозоидов в данной среде при хранении при 16^oC составляет 554 усл.ед. против 334 усл.ед. в контроле (прототип).

Указанный оптимальный состав среды испытан комиссией в производственных условиях на оплодотворяющую способность спермы, сохраняемой в течение 24 ч при 16^oC, при двукратном осеменении овец в течение эструса в Хакасской республике. Результаты испытаний представлены в табл. 3.

Испытания показали, что предложенная среда обладает более высокими защитными свойствами на сперматозоиды: суягность овец при двухкратном осеменении возросла на 8,2% по сравнению с контролем.

Преимуществами заявленной среды над прототипом является повышение живучести сперматозоидов и их оплодотворяющей способности при хранении спермы в охлажденном до 16^oC состояния.

Источники информации
1. Ав.св. СССР N 302118 A 61 D 7/02, 1971.

2. Овцеводство, 1971, N 10, C. 36-37.

3. Справочник по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных. М. Россельхозиздат, 1977, с. 150-151.

Формула изобретения

Синтетическая среда для разбавления и хранения спермы баранов в охлажденном состоянии, включающая глюкозу, желток куриного яйца и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что среда дополнительно содержит трис-(оксиметил)-аминометан и двунатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующем соотношении ингредиентов, мас.

Глюкоза 2,1 2,8
Трис-(оксиметил)-аминометан 0,34 0,45
Двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 1,32 1,89
Желток куриного яйца 2,0 4,0
Вода дистиллированная Остальноен

РИСУНКИ

Рисунок 1