Набор реактивов для определения первичных ароматических аминов в растворах и биологических жидкостях
Использование: в области медицины, в частности при определении химических веществ в растворах и биологических жидкостях. Сущность изобретения: набор для определения первичных ароматических аминов, содержащий пять флаконов в соответствующих упаковках с трихлоруксусной кислотой, натрием азотнокислым, аммонием сульфаминовокислым, N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлоридом и стандартом анализируемого амина. Набор позволяет упростить определение и повысить ее точность. 1 табл.
Изобретение относится к методам определения химических веществ в растворах и биологических жидкостях.
Известно, что выполнение любой методики количественного определения веществ состоит из двух основных этапов: приготовления растворов веществ, необходимых для определения и серии последовательных операций в соответствии с методикой. Выполнение первой части весьма трудоемко, требует особо точных измерений и высокой квалификации от исполнителя, что может осуществляться ни в каждой производственной и исследовательской лаборатории. Вместе с тем, от качества выполнения этой работы во многом зависит конечный результат анализа, поэтому для многих широко используемых методик биохимического анализа соответствующие реактивы изготавливаются в специализированных лабораториях и продаются в виде наборов. Такие наборы существуют в продаже для определения ряда веществ в крови с целью диагностики при обследовании больных. Такие наборы имеются для определения общего белка, сахара, холестерина, мочевины, кальция, фосфора, железа. Вместе с тем, имеется еще много методик, используемых в клинической биохимии, для которых не существует соответствующих наборов реактивов, что значительно затрудняет и замедляет обследование больных, снижает точность и сопоставимость получаемых результатов. Это особенно негативно сказывается при определении показателей, используемых в качестве генетических маркеров, поскольку при этом необходимы массовые популяционные обследования в различных регионах при хорошей сопоставимости результатов. К таким тестам относится и определение N-ацетилтрансферазной активности (КФ 2.3.1.5; N-AT). Она определяется по степени ацетилирования сульфадимезина и некоторых других сульфаниламидов. Количественное определение сульфаниламидов необходимо и в других случаях, связанное с их применением в лечебных целях. Данная методика может быть использована и для определения других первичных ароматических аминов, применяемых в различных областях народного хозяйства и оказывающих воздействие на организм человека. Известен метод определения сульфаниламидлов и первичных ароматических аминов, который используется при выявлении N АТ активности (Буловская Л.Н. Борисенко Г. Н. Дробаченко О.А. Определение фенотипа N-ацетилтрансферазной активности. Лабораторное дело, 1989, N 10, с.28 30). Для определения по этому методу приготовляют следующие растворы: 20% трихлоруксусная кислота (ТХУ), 0,2% натрий азотистокислый (свежеприготовленный! ), 0,1% аммоний сульфвминовокислый и 0,1% N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорид (НЭД) и стандартный раствор анализируемого вещества в концентрации 180 мкмоль/л. Приготовленные растворы используют в следующем порядке в ходе определения: к 0,1 мл цельной крови, сыворотки или другой исследуемой жидкости приливают 1,4 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 20% трихлоруксусной кислоты для осаждения белков. Пробы центрифугируют. В центрифугате определяют путем диазотирования натрием азотистокислым и азосочетания с N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлоридом сульфаниламиды или другие ароматические амины, которые содержались в пробе. Однако комплектование реактивов для этой методики затруднено тем, что требует объединения разнообразных дефицитных реактивов, основной реагент НЭД импортируется, а аммоний сульфаминовокислый изготавливается по заказу. Целью изобретения является повышение точности метода, стандартизация, унификация, упрощение, что достигается путем комплектования набора реактивов с соответствующей инструкцией их использования для количественного определения сульфаниламидов и других первичных ароматических аминов. Набор содержит в соответствующих упаковках: навеску трихлоруксусной кислоты (ТХУ), которая при растворении в 50 мл дистиллированной воды дает раствор, осаждающий белки; полоски бумаги с натрием азотистокислым, приспособленные для получения раствора диазотирования непосредственно перед определением (ex tempore); навеску аммония сульфаминовокислого, которая при растворении в 25 мл дистиллированной воды дает раствор для связывания избытка натрия азотистокислого; раствор N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорида (NЭД) для получения окрашенного азосоединения; полоски бумаги, содержащие 0,018 мкмоль стандартного анализируемого амина. Авторы впервые предлагают комплектование набора реактивов для определения в растворах, биологических жидкостях соединений, относящихся к первичным ароматическим аминам. Полный комплект реактивов освобождает от необходимости поиска дефицитных реактивов: N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорида и аммония сульфаминовокислого, полностью исключает взвешивание реактивов. Используя предлагаемый набор реактивов, легко приготавливают необходимые растворы, добавляя известные объемы дистиллированной воды по инструкции. Приготовленные растворы хранятся в холодильнике 4oC и используются для последующих определений, кроме того, наличие в наборе полосок хроматографической бумаги с известным содержанием стандартов и натрия азотистокислого полностью исключает не только их отвешивание в день опыта, но и напрасный расход реактивов по известному способу, когда неиспользованный остаток, растворенного нитрита и стандарта не может быть повторно использован и выливается. Нанесенные же на бумажку и высушенные они хранятся длительно. Уменьшение объемов в известном способе ведет к потере точности приготовления раствора из-за малых количеств взвешиваемого вещества. Авторы полностью описывают приготовление реактивов, ход определения и расчет результатов в прилагаемой к набору инструкции. Набор рассчитан на 100 определений. Результаты при определении с использованием набора имеют прекрасные совпадения в параллельных пробах, хорошую воспроизводимость метода и соответствие результатам при известном исследовании. Набор компактен, удобен для перевозок, что значительно расширяет и облегчает возможности его использования в лабораториях, различных по оснащению, и особенно при массовых популяционных исследованиях. Набор состоит из пяти флаконов, содержащих следующие компоненты: Флакон N 1 трихлоруксусная кислота (10 г) Флакон N 2 полоски хроматографической бумаги, содержащие 4 мг нитрита натрия Флакон N 3 аммоний сульфаминовокислый (250 мг) Флакон N 4 раствор N-(I)-нафтилэтилендиаминодигидрохлорида (4 мл 0,1%) Флакон N 5 полоски хроматографической бумаги, содержащие определяемый сульфаниламид или другой ароматический амин в дозе 0,0180 мкмоль. Реактивы после их неполного использования хранятся в холодильнике. Определение сульфаниламидов и первичных ароматических аминов согласно инструкции, прилагаемой к набору, осуществляется следующим образом: Приготовление реактивов из набора: Содержимое флакона N 1 растворяем количественно в 50 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона N 3 растворяем в 25 мл дистиллированной воды. 1 мл раствора (NЭД) из флакона N 4 разводим в 10 раз. Бумажки со стандартными дозами испытуемого вещества измельчают и экстрагируют дистиллированной водой в объеме 1,5 мл. Ход определения. К пробе с исследуемым материалом добавляем до 1,5 мл дистиллированной воды, приливаем 0,5 мл 20% ТХУ и центрифугируем 20 мин 3000 об/мин. К 0,5 мл центрифугата приливаем 0,1 мл 4 н. соляной кислоты. (В состав набора не входит, т. к. имеется в каждой лаборатории). Пробы охлаждаются в течение 30 мин при 4oC. В этот период полоска с нитритом из флакона N 2 измельчается и экстрагируется в объеме 2 мл дистиллированной воды. 0,1 мл этого раствора используется для диазотирования охлажденной пробы в течение 4 мин. Избыток нитрита натрия связывается 0,1 мл 1% аммония сульфаминовокислого. Для получения окрашенного азопроизводного через 2 мин прибавляют 0,2 мл NЭД. Полоски со стандартом анализируемого вещества измельчаются и приливается 1,5 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 20% ТХУ. Дальнейшее определение стандартного раствора проводилось в 0,5 мл центрифугата аналогично, как описано для исследуемых растворов. После прибавления NЭД стандартные и анализируемые пробы оставляются на один час в темноте и фотометрируются на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм при толщине слоя 1 см против контрольной пробы на реактивы. Для определения ацетилированных производных первичных ароматических аминов необходимо проводить гидролиз после добавления соляной кислоты в течение 45 мин на кипящей водяной бане. Результаты рассчитывают по формуле:
Dоп и Dст оптические плотности опытной и стандартной проб;
0,180 ммоль/л концентрация стандартного раствора. Пример 1. Определение сульфадимезина в растворе. Приготовляют, как описано в инструкции, к набору реактивы. К 0,1 мл анализируемого раствора сульфадимезина приливают 1,4 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 20% ТХУ. Перемешивают, центрифугируют. К 0,5 мл центрифугата приливают по 0,1 мл 4 н. соляной кислоты, охлаждают 30 мин 4oC. В это время полоску с нитритом натрия измельчают и приливают к ней 2,0 мл дистиллированной воды. К охлажденным пробам приливают 0,1 мл раствора нитрита натрия для диазотирования. Через 4 мин приливают 0,1 мл аммония сульфаминовокислого, связывая избыток нитрита натрия и через 2 мин приливают 0,2 мл раствора NЭД, разведенного в 10 раз. Пробы помещают в темноту на час. Фотометрируют при длине волны 540 нм, с толщиной слоя 1 см. Полоску со стандартной дозой сульфадимезина (СД) 0,018 мкмоль измельчают, экстрагируют в 1,5 мл воды, приливают 0,5 мл ТХУ и далее определение проводят аналогично анализируемому веществу. Концентрация сульфадимезина составила 0,179


Оптические плотности параллельных негидролизованных проб анализируемой сыворотки: 0,198; 0,180; 0,240, в среднем 0,194






Оптическая плотность опытных негидролизованных проб в среднем составила 0,375




Формула изобретения
РИСУНКИ
Рисунок 1
Похожие патенты:
Способ диагностики степени тяжести диссеменированного внутрисосудистого свертывания крови // 2096784
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и конкретно к способам диагностики диссеменированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдрома)
Изобретение относится к медицине, а именно к аппаратным методам диагностики
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для выявления злокачественных новообразований разной локализации на ранних стадиях их развития
Изобретение относится к медицине и медицинской технике и может быть использовано для определения пропанона-2 в выдыхаемом воздухе, для определения и диагностики гиперкетонемии
Изобретение относится к медицине, а именно предназначено для скринингового определения активности аланин-амотрансферазы (АлАТ) в сыворотке или плазме крови в терапевтических и инфекционных стационарах, а также в учреждениях службы крови
Изобретение относится к медицине, разделу биологии
Изобретение относится к области моделирования в медицине и биологии, в частности к способам определения среднесмертельных концентраций (доз) химических веществ при пероральном и ингаляционном воздействии по данным их энтальпии (удельной теплоты образования)
Изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии
Изобретение относится к медицине, к биохимическим методам исследования крови
Изобретение относится к микробиологии, медицине, ветеринарии и аналитической химии и может быть использовано при исследовании окружающей среды, а также при санитарно-гигиенических исследованиях в больницах и госпиталях
Изобретение относится к медицине
Изобретение относится к медицине, а именно к настольным устройствам для содержания медицинского инструмента
Изобретение относится к медицине, к принадлежностям для диагностических инструментов , а именно как средство для защиты медицинских диагностических инструментов
Контейнер для стерилизации шприцев // 1648433
Изобретение относится к медицинской технике и может быть использовано для исключения распространения инфекции при применении шприцев
Укладочный медицинский ящик // 1604674
Изобретение относится к таре, в частности,для хранения медицинского имущества
Держатель хирургических инструментов // 1519680
Изобретение относится к медицинской технике и может быть использовано в операционных для размещения и закрепления хирургических инструментов