Производные 2-амино-7-(chr2r3)-3н,5н-пирроло[3,2-d]- пиримидин-4-она, способы их получения и способ селективного ингибирования пролиферации т-лимфоцитов млекопитающего и не оказывающий воздействия на b-лимфоциты

 

Предложены производные 2-амино-7-(chr₂R₃)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-она формулы где R₁ - H, NH₂; R₂ - насыщенный пятичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома S или O, или шестичленный N-содержащий гетероцикл, которые могут быть замещены; R₃ - H, CH₂CN, CH₂CO₂H, CH₂CONH₂, CO₂CH₃, CO₂H или CH₂CH₂OH, или R₂ и R₃ вместе с CH образуют циклогексил- или циклогексенильную группу, которые являются ингибиторами пуриннуклеозидфосфорилазы. Предложены также способы их получения и способ селективного ингибирования пролиферации Т-лимфоцитов млекопитающего и не оказывающий воздействия на B-лимфоциты. 4 с. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к новым производным 2-амино-7-(CH₂R₂R₃)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидинам, обладающим свойствами селективного ингибитора Т-лимфоцитов, способам их получения и способу селективного ингибирования пролиферации Т-лимфоцитов млекопитающего и не оказывающего воздействия на B-лимфоциты.

Известно, что пуриннуклеозидфосфорилаза (PNP) катализирует фосфоролиз пуриннуклеозидов в обратимой реакции. У индивидуумов, лишенных PNP, проявляется ослабленное развитие Т-лимфоцитов, приводящее к пониженному межклеточному иммунитету, и нормальное развитие базофильного инсулоцита, приводящее к нормальному гуморальному иммунитету. Соответственно специфические ингибиторы PNP, которые селективно ингибируют развитие Т-лимфоцитов без нарушения гуморального иммунитета, могут быть потенциально эффективны против болезней, в которых активированные Т-лимфоциты являются патогенными.

В журнале (Science, 1981, v. 214) описаны 8-аминогуанозины, обладающие селективным действием на Т-клетки без воздействия на B-клетки.

Новые производные пирролопиримидинонов, в основе которых лежит бициклическая гетероциклическая система, неожиданно проявили свойство селективно ослаблять функции Т-лимфоцитов млекопитающего без ослабления влияния на гуморальный иммунитет и благодаря этим найденным и исследованным свойствам могут найти применение для лечения тяжелых заболеваний таких, как аутоиммунных нарушений, отторжение трансплантированных органов, а также в терапии онкологических заболеваний.

Согласно изобретению предлагаются производные 2-амино-7-(chr₂R₃)-3H, 5H-пирроло-[3,2-d]пиримидин-4-она формулы (I) где R₁ означает H или NH₂; R₂ означает насыщенный пятичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома серу или кислород, или шестичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома N, которые могут быть необязательно замещены (C₁-C₄)алкокси, трифторметилом или галогеном; (C₆-C₁₀)циклоалкил, незамещенный или галоидзамещенный фенил; R₃ означает H, (CH₂)_nCN, (CH₂)_nCOOH, CO₂CH₃, (CH₂)_nCONH₂, (CH₂)_nCO₂CH₃, (CH₂)_nOH, n 1-4, R₂ и R₃ вместе с CH-группой, к которой они присоединены, образуют циклогексил или циклогексенильную группу. Предпочтительны соединения, в которых R₂ и R₃ вместе с CH-группой, к которой они присоединены, образуют циклогексил или циклогексенил.

Предпочтительны соединения, где R₁-NH₂ группа, и соединения, где R₂ и R₃ вместе с прилегающей CH-группой образуют циклогексильное или циклогексенильное кольцо, либо R₂ фенил, соединения, где R₃-CH₂CN, CH₂COOH, CH₂CONH₂, либо соединения, где R₂ возможно замещенные C₁-C₄-алкокси, галогеном, трифторметилом, 3-пиперидинил, 2-тетрагидрофуранил, 2-тетрагидротиенил, 3-, 4-пиридинил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, 2-адамантил; либо фенил, 3-хлорфенил, 2,3,5-трихлорфенил.

Среди предпочтительных соединений можно назвать 2-амино-7(CH₂R)-3H,5H-пиролло[3,2-d] пиримидин-4-оны(I'), где R 2- или 3-тетрагидротиенил, 2-, 3- или 4-пиперидинил, 2- или 3-тетрагидрофуранил, 2-, 3- или 4-тетрагидрофуранил. В частности можно назвать соединения, предлагаемые согласно изобретению, выбранные из группы: 2-амино-7-(2-пиперидинилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IB), 2-амино-7-(3-пиперидинилметил)-3Н,5Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (I'C), 2-амино-7-(4-пипepидинилмeтил)-3H,5H-пиppoлo[3,2-d] пиримидин-4-он (I'D), 2-амино-7-(2-тетрагидрофуранилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4- -он (I'E), 2-амино-7-(3-тетрагидрофуранилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (I'F), 2-амино-7-(2-тетрагидротиенилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (I'G), 2-амино-7-(3-тетрагидротиенилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (I'H).

В указанных соединениях гетероциклический радикал R в положении 7 может быть замещен одним или двумя заместителями, выбранными из группы: галоген, (C₁-C₄)алкокси, трифторметил.

В качестве галогена предпочтительным является хлор или фтор. В качестве алкокси предпочтительными являются низший алкокси, метокси, этокси, пропокси и бутокси.

Среди соединений, охватываемых изобретением, можно назвать 2-амино-7-(CH₂R)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-оны (II), в которой R-пиридинил, в частности, соединения II, выбранные из группы, 2-амино-7-(3-пиридинилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IIA), 2-амино-7-(2-пиридинилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IIB), или 2-амино-7-(4-пиридинилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IIC), в которых пиридинил может иметь один или два заместителя, выбранных из группы, содержащей галоген, (C₁-C₄)алкокси или трифторметил. В качестве галогена предпочтительны хлор или фтор. В качестве алкокси предпочтительны метокси, этокси, пропокси и бутокси.

Другой группой предпочтительных соединений являются (III) 2-амино-7-(R)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-оны, в которых R 1-, 2- или 3- циклогексенил или циклогексил. Среди них можно назвать соединения III, выбранные из группы: 2-амино-7-(1-циклогексенил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IIIA), 2-амино-7-(2-циклогексенил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IIIB), 2-амино-7-(3-циклогексенил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IIIC) или 2-амино-7-(циклогексил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IIID).

Согласно изобретению предлагаются также 2-амино-7-(CH₂R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны (IV), в которых R однокольцевые циклопарафины, как, например, циклопентил, циклогексил и циклогептил; многокольцевые циклопарафины, как, например, 1- и 2-адамантил, 1-норборнанил, 2-экзо-норборнанил, 2-эндо-норборнанил, 1- и 2-бицикло[2.2.2]октанил, 1-, 2-, 3-, 6- и 8-бицикло[3.2.1] октанил, и 1-, 2- и 3-бицикло[3.3.1]нонанил, и циклоолефины, как, например, 1- и 2-норборненил. Примерами этой группы веществ (IV) являются 2-амино-7-(2-адамантилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IVA), 2-амино-7-(1-адамантилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVB), 2-амино-7-(циклопентилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IVC), 2-амино-7-(циклогексилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVD), 2-амино-7-(циклогептилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IVE), 2-амино-7-(1-норборнанилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он (IVF), 2-амино-7-(2-экзо-норборнанилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVG), 2-амино-7-(2-эндо-норборнанилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVH), 2-амино-7-(1-норборненилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVI), 2-амино-7-(2-норборненилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVJ), 2-амино-7-(1-бицикло[2.2.2] октанилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVK), 2-амино-7-(1-бицикло[3.2.1] октанилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVL) и 2-амино-7-(1-бицикло[3.3.1] нонанилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVM), и 2-амино-7-(1-норадамантилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (IVN).

Среди соединений, полученных согласно изобретению, можно назвать группу производных 2-амино-7-(chr₂R₃)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-она формулы (I), где R₁, R₂ имеют значения указанные выше, а R₃ является группой, выбранной из H, CH₂CN, CH₂CO₂H, CH₂CONH₂, CO₂CH₃, CH₂CH₂OH, CH₂CO₂CH₃.

Другим объектом изобретения является способ селективного ингибирования пролиферации Т-лимфоцитов млекопитающего, неоказывающий воздействия на B-лимфоциты, заключающийся в том, что млекопитающему вводят вышеуказанные соединения формулы (I) в эффективном количестве, при этом указанное соединение ингибирует пуриннуклеозидфосфорилазу и тем самым образование Т-лимфоцитов.

Возможно также введение млекопитающим эффективного количества соединения формулы (I), не оказывающего ослабляющего действия на гуморальный иммунитет и оказывающего селективное ослабляющее действие на Т-лимфоциты, с фармацевтически переносимым разбавителем.

Особенностью предлагаемого способа селективного ослабления функции T-лимфоцитов млекопитающего без ослабления влияния на гуморальный иммунитет, является то, что введение млекопитающему вещества формулы (I) ингибирует пуриннуклеозидфосфорилазу и тем самым образование T-лимфоцитов.

Для энтерального такого, как пероральное или ректальное, трансдермальное или парентеральное, введения млекопитающим, включая человека, которые пригодны для ингибирования активности пуриннуклеозидфосфорилазы и для лечения болезней, восприимчивых к ней, возможно введение эффективного количества фармакологически активного вещества изобретения одного или в комбинации с одним или более фармацевтически переносимыми носителями.

Предпочтительной используемой формой композиций являются таблетки и желатиновые капсулы, включающие активный ингредиент вместе с: а) разбавителями, например, лактозой, глюкозой, сахарозой, маннитом, сорбитом, целлюлозой и/или глицином; б) смазывающими веществами, например, двуоксидом кремния, тальком, стеариновой кислотой, ее магниевой или кальциевой солью и/или полиэтиленгликолем; для таблеток также с: в) связующими веществами, например, магнийалюмосиликатом, крахмальной пастой, желатином, трагакантом, метилцеллюлозой, натрий карбоксиметилцеллюлозой и/или поливинилпирролидоном; при желании: г) дезинтегрантами, например, крахмалами, агар-агаром, альгиновой кислотой или ее натриевой солью, или шипучими смесями; и/или д) абсорбентами, красителями, корригентами и подслащивателями. Вспрыскиваемые композиции являются предпочтительно водными изотоническими растворами или суспензиями, и суппозитории преимущественно приготавливают из жировых эмульсий или суспензий. Указанные композиции могут быть стерилизованными и/или содержать адъюванты такие, как например, предохраняющие, стабилизирующие, смачивающие или эмульгирующие агенты, растворенные промоторы, соли для регулирования осмотического давления и/или буферные растворы. Кроме того, они могут также содержать другие терапевтически ценные вещества. Указанные композиции приготавливают в соответствии со стандартными способами перемешивания, гранулирования или покрытия соответственно и они содержат обычно около 0,1-75,0% предпочтительно около 1-50% активного ингредиента.

Для трансдермального применения используют эффективное количество вещества изобретения с носителем. Полезные носители включают абсорбируемые фармакологически приемлемые растворители для того, чтобы помочь проходить в организм через кожу. Существенным является то, что трансдермальные аппараты могут иметь форму бандажа, включающего поддерживающую деталь, резервуар, содержащий предпочтительное вещество с носителями, перегородку для доставки вещества к коже организма с контролируемой и предварительно определенной скоростью в течение продолжительного периода времени, и средства для прикрепления аппарата к коже.

Предлагаемый способ селективного ингибирования активности пуриннуклеозидфосфорилазы может быть использован при лечении болезней и сред, восприимчивых к ним, например, при аутоиммунных нарушениях, отторжениях при трансплантации, псориазе.

Способ также пригоден для ингибирования фосфоролиза и метаболического расщепления противовирусных или противоопухолевых пуриннуклеозидов у млекопитающих путем введения соединения формулы (I) самостоятельно или с одним или более фармацевтически переносимыми носителями. В частности, это относится к способу ингибирования фосфоролиза и метаболического расщепления известных пуриннуклеозидов, например, 2'-дезоксигуанозина, 2',3'-дидезоксиинозина, 2',3'-дидезоксигуанозина или 2',3'-дидезоксиаденозина.

Таким образом, изобретение относится также к способу ингибирования фосфоролиза или метаболического расщепления противовирусного или противоопухолевого эффекта 2'- или 3'-монодезоксипуриннуклеозидов или 2',3'-дидезоксипуриннуклеозидов у млекопитающих, который включает введение млекопитающим при необходимости, или отдельно, или в комбинации с указанным нуклеозидом эффективного количества вещества изобретения, ингибирующего пуриннуклеозидфосфорилазу, предпочтительно в комбинации с одним или более фармацевтически переносимыми носителями. Более конкретно, это относится к способу активации или усиления влияния 2',3'-дидезоксипуриннуклеозидов, известных в технике, например, 2',3'- дидезоксиинозина, 2',3'-дидезоксигуанозина или 2',3'-дидезоксиаденозина для лечения ретровирусных инфекций, например, ВИЧ-ретровирусных инфекций (приобретенный иммунодефицитный синдром, AIDS). 2',3'-Дидезоксипуриннуклеозиды известны в качестве ингибиторов ВИЧ-ретровирусной инфекции и метаболически расщепляются посредством PNP, например, как описано в Biochemical Pharmacology, 22, 3797 (1987). Они вводятся в фармацевтически переносимой дозе, которая эффективна в ингибировании ВИЧ-ретровирусных инфекций. Предпочтительно используется самая низкая возможная эффективная доза.

Фармацевтически переносимая эффективная дозировка активного вещества изобретения, которую вводят, зависит от вида теплокровных животных (млекопитающих), веса тела, возраста, индивидуального состояния и от формы введения.

Фармацевтическая композиция может быть пероральной, парентеральной, суппозиторием или другой формой, которая доставляет вещество в ток крови млекопитающего, которое необходимо вылечить. Пероральная форма имеет от около 1 до около 150 мг активного вещества для взрослого человека (50-70 кг), которое смешивается вместе с фармацевтически переносимыми разбавителями, например, лактозой. В обычной капсуле 25 мг вещества смешивают вместе с 192 мг лактозы, 80 мг модифицированного крахмала и 3 мг стеарата магния. Возможно также использование форм, пригодных для вспрыскивания.

Использование соединений настоящего изобретения также возможно с другими терапевтическими средствами. Ежедневная дозировка для человека (весом 50-70 кг составляет 1-50 мг/кг) ингибирует метаболическое разрушение определенных противораковых средств, например, бета-2'-дезокси-6-тиогуаназина и противовирусных средств, например, 2',3'-дидезоксиинозина, анти-AIDS средства. Эти типы медикаментов, как известно, неустойчивы и разрушаются, теряя свою эффективность. Вещества изобретения способны уменьшить такую неустойчивость, что увеличивает эффективность других химиотерапевтических средств.

Объектом изобретения являются также способы получения производных 2-амино-7-(chr₂,R₃)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-онов общей формулы где R₁ означает H, NH₂; R₂ и R₃ означают незамещенный или галоидзамещенный фенил или циклогексил;
R₂ означает CH₂CN.

Один способ предназначен для получения соединений указанной формулы, где R₁ означает NH₂, а другой для соединений указанной формулы, где R₁ означает H.

Способ получения производных 2-амино-7-(chr₂R₃)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-она (способ A) формулы (I')

где R₁ NH₂;
R₂ фенил, незамещенный или замещенный галоидом, или циклогексил;
R₃ CH₂CN, заключается в том, что осуществляют следующие последовательные стадии:
а) реакцию соответствующего R₂-замещенного альдегида с циануксусной кислотой в присутствии ацетата аммония с получением 3(R₂)-замещенного пентандинитрила;
б) реакцию полученного 3(R₂)-пентандинитрила с алкиловым эфиром муравьиной кислоты в присутствии основания, с получением 3(R₂)-2-формилпентандинитрила,
в) который взаимодействует с гидрохлоридом метилового эфира глицина в присутствии ацетата натрия или аммония с получением метил-N-[(3(R₂)-2,4-дициано)-2-бутенил]глицина;
г) полученный при этом N-[(3(R₂)-2,4-дициано)-2-бутенил]глицин взаимодействует с алкиловым эфиром хлоруксусной кислоты в присутствии 1,5-диазабицикло[4.3.0]-нон-5-еном или 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-еном с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1-этил-1H-пирроло-1,2- дикарбоксилата;
д) получаемый метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1-этил-1H-пирроло-1,2- дикарбоксилат обрабатывают основанием с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1H-пирроло-2-карбоксилата;
е) последний подвергают взаимодействию с бензоилизотиоцианатом с получением N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил]тиомочевины;
ж) полученную N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил-1H-пиррол-3-ил] тиомочевину алкилируют галоидным алкилом с получением N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил-1H-пиррол-3-ил] -S-метилтиомочевины;
з) затем N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил-1H-пиррол-3-ил] -S-метилтиомочевины обрабатывают метанольным или этанольным раствором аммиака с получением смеси 3(R₂)-3-[2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил] пропаннитрила и 3(R₂)-3-[2-меркапто-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил]пропаннитрила.

Предпочтительно этот способ использовать для соединений I', где R₂ фенил.

Способ получения производных 7(chr₂R₃)-3H,5H-пирроло-[3,2-d]пиримидин-4-она формулы (I") (способ B)

где R₁ H;
R₂ фенил, незамещенный или замещенный галоидом, или циклогексил;
R₃ CH₂CN, заключается в том, что осуществляют последовательные стадии:
а) реакцию соответствующего циклического альдегида с циануксусной кислотой в присутствии ацетата аммония с получением 3(R₂)-замещенного пентандинитрила;
б) реакцию полученного 3(R₂)-пентандинитрила с алкиловым эфиром муравьиной кислоты в присутствии основания с получением 3(R₂)-2-формилпентандинитрила;
в) последний подвергают взаимодействию с гидрохлоридом метилового эфира глицина в присутствии ацетата натрия или аммония с получением метил-N-[(3(R₂)-2,4-дициано)-2-бутенил]глицина;
г) полученный метил-N-[(3(R₂)-2,4-дициано)-2-бутенил]глицин подвергают взаимодействию с алкиловым эфиром хлоруксусной кислоты в присутствии 1,5-диазабицикло[4.3.0] нон-5-ена или 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-ена с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1-этил-1H-пиррол-1,2- дикарбоксилата;
д) метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1-этил-1H-пиррол-1,2-дикарбоксилат обрабатывают основанием с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1H-пирроло-2-карбоксилата;
е) затем метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1H-пирроло-2-карбоксилат подвергают взаимодействию с диметилацеталем диметилформамида с получением метил-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-3-[N-(диметиламино-метилен)амино] -1H-пирроло-2-карбоксилата;
ж) метил-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-3-[N-(диметиламинометилен)амино]-1Н-пирроло-2-карбоксилат обрабатывают метанольным раствором аммиака с получением 3(R₂)-3-[4-оксо-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил] пропаннитрила. Более подробно способ для получения соединений формулы

где R₁ аминогруппа (способ A), проводится следующим образом.

Первая стадия способа включает реагирование соответствующего R₂-замещенного циклического альдегида с циануксусной кислотой при молярном отношении около 1: 1 до 1:5 в присутствии ацетата аммония при температуре около температуры кипения с обратным холодильником в течение около 10 ч до 8 дней с получением 3R₂-замещенного пентандинитрила в качестве промежуточного соединения. Во второй стадии 3(R₂)-замещенный пентандинитрил реагирует с алкиловым эфиром муравьиной кислоты, например, этиловым эфиром муравьиной кислоты, в присутствии сильного основания, например, металлсодержащего основания, гидрида натрия или алкоксида натрия, в частности метоксида натрия, при молярном отношении около 1-2:3-6:1-3 и при температуре около 20-65^oC в течение около 10 ч до 8 дней с получением 3(R₂)-2-формилпентандинитрила. Следующая стадия включает взаимодействие 3(R₂)-2-формилпентандинитрила с гидрохлоридом метилового эфира глицина и в присутствии ацетата натрия или аммония при молярном отношении около 1-2:1,5-4:1,5-4 и при температуре около 20-60^oC в течение около 10-48 ч с получением метил-N-[(3(R₂)-2,4-дициано)-2-бутенил] глицина в качестве промежуточного соединения. В последующей стадии метил-N-[(3(R₂)-2,4-дициано)-2-бутенил] глицин реагирует с алкиловым эфиром хлормуравьиной кислоты, например, этиловым эфиром хлормуравьиной кислоты, в присутствии 1,5-диазабицикло[4.3.0] нон-5-еном (DBN) или 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-еном (DBU) при молярном соотношении около 1-2:1,5-5:1,5-4 и при температуре около 0-50^oC в течение около 10 ч до 10 дней с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)этил)-1-этил-1Н-пиррол-1,2-дикарбоксилата в качестве промежуточного соединения. Следующая стадия включает взаимодействие метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)этил)-1-этил-1Н-пиррол-1,2-дикарбоксилата с основанием, например, карбонатом натрия, при молярном соотношении около 2:1 до 1:5 и при температуре около комнатной в течение около 10-48 ч с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)этил)-1H-пиррол-2-карбоксилата в качестве промежуточного соединения. В следующей стадии метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат реагирует с бензоилизотиоцианатом при молярном соотношении около 2:1 до 1:2 и при температуре около комнатной в течение около от 30 мин до 3 ч с получением N-бензоил-N-[4-(2-циано-1(R₂)этил)-2-метоксикарбонил-1H-пиррол-3-ил] тиомочевины в качестве промежуточного соединения. Следующую стадию взаимодействия N-бензоил-N-[4-(2-циано-1(R₂)этил)-2-метоксикарбонил-1H-пиррол-3-ил] тиомочевины с галоидным алкилом, например, йодистым метилом, проводят при молярном отношении около 1:1 до 1:6 и при температуре около 0-30^oC в течение от приблизительно 10 мин до 10 ч с получением N-бензоил-N-[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил]-S-метилтиомочевины в качестве промежуточного соединения. В следующей стадии N-бензоил-N-[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил] -S-метилтиомочевину (около 1-2 моль) обрабатывают метанольным или этанольным раствором аммиака при молярном соотношении около 1:1 до 1:20 и при температуре около 20-130^oC в течение около 16-60 ч с получением смеси 2-аминосоединения изобретения 3(R₂)-3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-7-ил) пропаннитрила и 3(R₂)-3-(2-метилмеркапто-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил)пропаннитрила, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения для получения другого вещества изобретения.

В другом способе получения соединений, где R¹ водород (способ B) метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1Н-пиррол-2-карбоксилат, полученный выше в способе A, обрабатывают диметилацеталем диметилформамида при молярном соотношении около 1:1 до 1:4 и при температуре около 25-100^oC в течение около 1-10 дней с получением метил-4-(2-циано-1(R₂)этил)-3-[N-(диметиламинометилен)амино] -1H-пирроло-2-карбоксилата в качестве промежуточного соединения. Следующая стадия включает обработку метил-4-(2-циано-1(R₂)этил)-3-[N-(диметиламинометилен)амино] -1H-пирроло-2-карбоксилата метанольным или этанольным раствором аммиака при молярном соотношении около 1: 1 до 1:20 и при температуре около 20-130^oC в течение около 10-68 ч с получением соединения изобретения 3(R₂)-3-(4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-пропаннитрила.

Итак, для получения соединений формулы (I) используют 3-замещенные пропионитрилы в качестве исходных веществ. Такие исходные вещества могут быть получены с помощью целого ряда способов, которые хорошо известны в литературе. Соединение формулы (I) получается затем из указанного исходного вещества с использованием ряда известных реакций (M.I.Lim, R.S.Klein and J.J. Fox, J. Org. Chem. 44,3826 (1979); M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, Tetrahedron Lett. 21,1013 (1980); M.I.Lim and R.S.Klein, Tetrahedron Lett. 22,25 (1981); M. I. Lim, W. I.Ren, B.A.Otter and R.S.Klein, J. Org. Chem. 48,780 (1983)).

Для получения группы соединений формулы (II), где R пиридинил, используют 3-(пиридинил)пропионитрил в качестве исходного вещества. Соответствующий 3-(пиридинил)пропионитрил может быть получен путем превращения соответствующего 3-(пиридинил)пропионилхлорида в соответствующий амид реакцией амминолиза, например, обработкой аммония, который затем дегидратируется в желаемый нитрил при дистилляции с дегидратирующим агентом, например, POCl₃ или SOCl₂. Либо исходное вещество получают конденсацией 3-альдегида с цианоуксусной кислотой с последующим декарбоксилированием с получением соответствующего замещенного акрилонитрила, который гидрируют для получения соответствующего 3-(пиридинил)пропионитрила или каталитически, или при растворении металлического магния в метаноле при 0^oC (Profitt, J. et al. J. Org. Chem. 40, 127 (1975)). Далее вещества (II) получают из указанного вещества по методике (M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, J. Org. Chem. 44,3826 (1979); M. I. Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, Tetrahedron Lett. 21,1013 (1980); M.I.Lim and R. S.Klein, Tetrahedron Lett. 22,25 (1981); M.I.Lim, W.I.Ren, B.A.Otter and R.S.Klein, J. Org. Chem. 48, 780 (1983)).

Возможно использование в качестве исходного вещества циклогексенилацетонитрила для получения соединений группы (III) в результате взаимодействия этого исходного вещества с использованием методики (M.I.Lim, R.S.Klein and J. J.Fox, J. Org. Chem. 44,3826 (1979); M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, Tetrahedron Lett. 21,1013 (1980); M.I.Lim and R.S.Klein, Tetrahedron Lett. 22,25 (1981); M.I.Lim, W.I.Ren, B.A.Otter and R.S.Klein, J. Org. Chem. 48, 780 (1983)). Каталитическое гидрирование одного из (IIIA), (IIIB) или (IIIC) дает вещество (IIID).

Способ получения группы соединений (IV) изобретения использует соответствующие 3-замещенные пропионитрилы в качестве исходных веществ. Такие исходные вещества могут быть получены посредством ряда способов, которые хорошо известны в литературе. Вещество (IV) затем получают из этого исходного вещества посредством использования методик (M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, J. Org. Chem. 44,3826 (1979); M.I.Lim, R.S.Klein and J.J.Fox, Tetrahedron Lett. 21,1013 (1980); M.I.Lim and R.S.Klein, Tetrahedron Lett. 22,25 (1981); M.I. Lim, W.I.Ren, B.A.Otter and R.S.Klein, J. Org. Chem. 48, 780 (1983)).

Как очевидно для специалистов в данной области техники, варианты перечисленных способов являются полезными при получении ряда веществ изобретения без отклонения от существа изобретения. Для реакций, включающих некоторые промежуточные соединения, требующие защиты атомов азота или кислорода в промежуточных соединениях, используют известные способы.

Чтобы более полно описать изобретение, ниже приводятся следующие примеры, не ограничивающие область его применения. В примерах все части и проценты даны в масс. за исключением особо оговоренных случаев. Пропорции смесей растворителей, использованных в качестве хроматографических растворителей для элюирования, даны по объему.

Испытания (как следует из материалов заявки) проводились на млекопитающих. В частности, в примерах, приведенных в описании, опыты проводились на крысах линии Lewis, которым делалось внутрибрюшинное введение полученных по изобретению веществ в виде инъекционных растворов с указанием дозировок, частоты инъекций и сравнительных опытов с контрольными группами животных. Результаты оговорены там же (примеры 22, 53, 65, 70, 81, 89 и др.), а также в приведенной табл. 1.

Пример 1. Способ получения 3-(3-пиридинил)пропионитрила. В трехгорлую колбу, снабженную магнитной мешалкой, термометром, капельной воронкой и обратным холодильником, вводят аргон через холодильник. Свежеизмельченный гидроксид калия (6,6 г, 0,1 моль) и безводный ацетонитрил (150 мл) загружают в колбу и нагревают до кипения с обратным холодильником, добавляют 3-пиридинкарбоксальдегида (10,7 г, 0,1 моль) в безводном ацетонитриле (50 мл) по каплям в течение около 5 мин и кипячение с обратным холодильником продолжают в течение следующих приблизительно 3 мин. Полученную горячую реакционную смесь выливают в смесь лед/вода (100 г) и полученный раствор экстрагируют с CH₂Cl₂ (3 x 100 мл), высушивают с Na₂SO₄ и выпаривают, получая сырой 3-(3-пиридинил)акрилонитрил, который очищают посредством колоночной хроматографии над силикагелем, используя CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования; выход 3,3 г (25,6%).

В атмосфере аргона перемешиваемый раствор акрилонитрила (2,662 г, 0,02 моль) в 99%-ном этаноле (100 мл) обрабатывают каплей 4%-ного водного гидроксида натрия, затем боргидридом натрия (0,378 г, 0,01 моль). Дополнительно боргидрид натрия (0,378 г) добавляют еще дважды с 4-часовыми интервалами. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, разбавляют водой, экстрагируют с EtOAc и высушивают Na₂SO₄. Растворитель удаляют при пониженном давлении, полученный сырой продукт хроматографируют через колонку с силикагелем, используя хлороформ: метанол (40:1) в качестве растворителя для элюирования, получая 2,2 г (84,6%) продукта в виде бесцветного масла.

3-(3-Пиридинил)пропионитрил, полученный в примере 1, используют далее для синтеза соединений изобретения.

Пример 2. В атмосфере сухого N₂ смесь 3-(3-пиридинил)пропионитрила (0,661 г, 5,0 ммоль), гидрида натрия (0,240 г, 10,0 ммоль) и этилового эфира муравьиной кислоты (1,11 г, 15,0 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) перемешивают в течение 48 ч с защитой от воздуха и влаги. Летучее вещество выпаривают и раствор твердого остатка в 15 мл холодной воды доводят при 0^oC до pH 6 с помощью холодной 6N HCl. Полученную маслянистую смесь экстрагируют CHCl₃, экстракт промывают водой, высушивают, используя Na₂SO₄, и выпаривают, получая темное масло, которое является смесью 2-формил-3-(3-пиридинил)пропионитрила и нитрила исходного вещества. Этот сырой продукт используют в следующей реакции без дальнейшей очистки.

Пример 3. Гидрохлорид метилового эфира глицина (0,942 г, 7,5 ммоль) и безводный ацетат натрия (0,615 г, 7,5 ммоль) добавляют к раствору сырого формильного производного (0,89 г) в MeOH/H₂O (4:1,50 мл). Спустя 24 ч MeOH выпаривают в вакууме, смесь воды и масла экстрагируют с CHCl₃. Слой CHCl₃ высушивают (Na₂SO₄) и выпаривают, получая янтарное масло, которое направляют в колонну с силикагелем. Элюирование с CHCl₃ дает два основных слоя: 3-(3-пиридинил)пропионитрил (использованный в качестве исходного вещества в предыдущей стадии); желаемый енамин.

Пример 4. В атмосфере азота этиловый эфир хлоруксусной кислоты (0,521 г, 4,8 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина (пример 3) (0,513 г, 3,2 ммоль) и 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ена (DBN, 1,37 г, 11,1 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (15 мл) с внешним охлаждением на ледяной бане. После перемешивания при 0^oC в течение 1 ч раствор оставляют при комнатной температуре в течение ночи. После проверки хода реакции с помощью ТСХ добавляют дополнительное количество ClCO₂Et (0,1 мл) и DBN (1,0 г) для завершения реакции, раствор выдерживают в течение 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме и вязкий остаток очищают в короткой колонке с силикагелем (главная цель которой удаление менее подвижного DBN), получая N-защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 5. К раствору N-защищенного пиррола примера 4 (0,635 г, 2,0 ммоль) в MeOH (50 мл) добавляют твердый Na₂CO₃ (0,212 г, 2,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч с выделением полученного деблокированного пиррола. Смесь упаривают досуха и остаток тщательно растирают в порошок с H₂O (25 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют с CHCl₃ (3 x 100 мл). Экстракт высушивают (Na₂SO₄) и выпаривают до получения вязкой смолы, которая кристаллизуется при высушивании в вакууме для использования в качестве промежуточного вещества без дальнейшей очистки. Более высокая очистка может быть проведена или колоночной хроматографией при использовании силикагель/CHCl₃, или перекристаллизацией из смеси толуол/циклогексан (1:3).

Пример 6. Бензоилизотиоцианат (0,232 г, 1,42 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 5 (0,290 г, 1,18 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (100 мл). После 1 ч при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток перемешивают в смеси Et₂O/циклогексан (1:1,20 мл). Полученную суспензию желтого твердого вещества отфильтровывают под давлением азота, и тиоуреидное соединение высушивают в вакууме над P₂O₅.

Пример 7. Йодистый метил (0,228 г, 1,61 ммоль) добавляют к раствору тиоуреида примера 6 (0,383 г, 0,94 ммоль) и DBN (0,140 г, 1,12 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (10 мл) при 0^oC. Раствор перемешивают при 0^oC в течение 15 мин при температуре окружающей среды в течение 1 ч и затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в CHCl₃ хроматографируют в колонне с силикагелем со смесью CHCl₃/метанол в качестве растворителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилтиозамещенного промежуточного соединения.

Пример 8.

Раствор метилтиосоединения примера 7 (0,358 г, 0,85 ммоль) в 100 мл MeOH, который был насыщен NH₃ при 0^oC, нагревают при 90-95^oC в течение 24 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь желаемого 2-аминопроизводного, бензамида и побочного продукта, представляющего собой 2-метилтиопроизводное. Смесь растворяют в метаноле и раствор выпаривают с силикагелем (около 5 г). Смесь затем осторожно наносят на верхнюю часть хроматографической колонки с силикагелем, которую затем элюируют смесью CHCl₃/MeOH (9: 1), получая побочное метилтиосоединение и желаемый 2-амино-7-(3-пиридинилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он, как промежуточное соединение. Дальнейшую очистку проводят перекристаллизацией из кипящего изопропилацетата в аппарате Сокслета.

Анализ: вычислено для C₁₂H₁₁N₅O: C 59,74; H 4,60; N 29,03; найдено: C 59,58; H 4,86; N 28,89.

MS (FAB): 242 (M+H)⁺; UV: 0,1 N HCl 233 (18,2), 269 (17,4); pH 7 233 (18,2), 269 (17,4); pH 7 233 (22,4); 269 (12,3); 0,1 N NaOH 227 (22,2), 263 (10,5), 290 (sh). IC₅₀(PNP) 25 nM.

Раствор пиридинилметильного промежуточного соединения в 0,1N HCl гидрируют на платиновом катализаторе при давлении H₂ 60 фунтов/дюйм² (4,2186 кг/см²). Катализатор генерируют посредством кратковременного гидрирования PtO₂ в 0,1N HCl. Когда реакция заканчивается, катализатор удаляют фильтрованием под давлением N₂ и фильтрат выпаривают. Остаток в минимальном количестве этанола разбавляют медленно большим количеством EtO₂ и получают гидрохлоридную соль в виде белого гигроскопичного твердого вещества (IC). Т.пл. (в ^oС) при 200^o размягчается.

MS (FAB) m/e 248 (M+H)⁺; UV 0,1 N HCl 234 (15,7), 273 (13,8) pH 7 буффер 232 (19,1), 271 (9,3), 0,1 N NaOH 229 (19,0), 266 (7,1), 288 (sh); ¹H-ЯМР (DNSO-d₆) 1,19, 1,61, 1,77 (m, 4H, H-4's and 5's пиперидина), 1,96 (m, 1H, H-3 пиперидина), 2,53 (d, 2H, -CH₂-), 2,69 (m, 2H, H-2's пиперидина), 3,14 (d, 2H, H-6's пиперидина), 7,25 (d, J 2,8, 1H, H-6), 7,76 (s, 2H, NH₂), 8,81, 9,18 (уш. 1 каждый, NH⁺ обменивается с D₂О), 12,24 (s, 1H, S-NH).

Анализ: вычислено для C₁₂H₁₇N₆O2,8HCl0,2 C₂H₆OH₂O: C, 39,55; H, 6,16; N, 18,60; Cl, 26,36; найдено: C 39,75; H 6,24; N 18,65; Cl 26,08.

IC₅₀ 1 мкМ.

Пример 9. Вещество (IC) примера 8 испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в котором изучают PNP активность (IC₅₀) для вещества, которую определяют радиохимически посредством измерения образования [¹⁴C]-гипоксантина из [¹⁴C] -инозина (Biomedicina, 33,39 (1980)), используя селезенку задней части голени в качестве источника энзима.

Примеры 10-14. Следующие вещества изобретения, представляющие собой 2-амино-7-(CH₂R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R группа означает следующее:
пример 10: R 2-метил-3-пиперидинил;
пример 11: R 2-хлор-3-пиперидинил;
пример 12: R 2-трифторметил-3-пиперидинил;
пример 13: R 2-метокси-3-пиперидинил;
пример 14: R 2-фтор-3-пиперидинил
получают, следуя способам, приведенным в примерах 1-8, используя соответствующие 3-(замещенные 3-пиридинил)-пропионитрилы в качестве исходных веществ.

Пример 15. 3-(2-Пиридинил)пропионитрил получают в этом примере, используя способ (V. Boekelheide, et al. J. Am. Chem. Soc. 75, 3243 (1953)). Раствор цианида калия (83,74 г) в воде (160 мл) добавляют к раствору свежеперегнанного 2-винилпиридина (67,59 г) в ангидриде уксусной кислоты (131,30 г) со скоростью, отрегулированной для поддержания осторожного кипения с обратным холодильником. Когда добавление заканчивают, полученную темно-красную смесь нагревают в течение примерно 17 ч при 105^oC в масляной бане с энергичным перемешиванием. Охлажденную реакционную смесь доводят до pH 8 насыщенным раствором Na₂CO₃. Смесь экстрагируют CHCl₃ (4150 мл), промывают водой, высушивают Na₂SO₄ и выпаривают до темного вязкого масла. Масло фракционированно перегоняют в вакууме через Vigreaux колонну. После малого предгона, содержащего 2-винилпиридин (0,35 г), желаемый 3-(2-пиридинил)пропионитрил собирают в виде прозрачного, флуоресцирующего желто-зеленого вязкого масла: выход 59,8 г; 70,4% т. кип. 86^oC при 1,0 ммHg.

Примеры 16-20. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(CH₂R)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-оны, в которых группа R имеет следующие значения:
пример 16: R 2-пиперидинил;
пример 17: R 4-пиперидинил;
пример 18: R 3-трифторметил-4-пиперидинил;
пример 19: R 3-метокси-2-пиперидинил;
пример 20: R 3-фтор-4-пиперидинил,
следуя способам, приведенным в примерах 1-8 и 15, используя соответствующие 3-(2- или 4-пиридинил)пропионитрилы в качестве исходных веществ.

Пример 21. Получают фармацевтическую композицию для интраперитональной инъекции для испытания вещества (IC). Для этого интраперитональный инъекционный раствор, содержащий вещество примера 8, растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.

Пример 22. Вводят интраперитонально в Lewis Rats композицию примера 21, содержащую вещество (IC) с дозой 30 мг вещества (IC) с инъекцией дважды в день. Используют контрольные группы, которые получают только наполнитель. Через определенное время после введения животных усыпляют и получают образцы плазмы. Плазму экстрагируют холодной 0,5N HClO₄ и нейтрализуют твердым NH₄HCO₃. После удаления перхлоратных солей экстракт подвергают HPLC (ЖХВД) жидкостная хроматография высокого давления) на колонне с обратимой фазой (Spherisorb ODSI). Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IC).

Примеры 23-33. Вещества, полученные в примерах 10-20, использованы для приготовления лекарственных средств в соответствии со способом приготовления примера 21. Полученные вспрыскиваемые растворы испытывают в соответствии со способом примера 22. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещества изобретения.

Пример 34. Получают 3-(2-фуранил)пропионитрил. В трехгорлую колбу, снабженную конденсатором и осушительной трубкой, добавляют магниевые стружки (20 г) к раствору 3-(2-фуранил)акрилонитрила (67,2 г) в сухом метаноле (2 л). Дополнительное количество магния добавляют по частям в зависимости от скорости реакции до тех пор, пока не будет добавлено все количество (145 г). Спустя около 5 ч растворитель выпаривают до тех пор, пока содержимое не образует твердую пасту, которую доводят до pH около 6,5 с помощью 6N HCl при охлаждении. Смесь экстрагируют с помощью нескольких порций CHCl₃, сушат с помощью Na₂SO₄ и концентрируют до темного масла. Перегонка в вакууме через короткую Vigreaux колонку дает пропионитрил в виде бесцветного масла; выход 49,5 г (72%); т. кип. 46,0-46,5^oC при 0,5 ммHg.

3-(2-Фуранил)пропионитрил из примера 34 далее используют в синтезах изобретения.

Пример 35. В атмосфере сухого N₂ пропионитрил (48,7 г), гидрид натрия (10,28 г), этиловый эфир муравьиной кислоты (32,74 г) и безводный тетрагидрофуран (200 мл) перемешивают при комнатной температуре с защитой от влаги в течение 18 ч. Летучее вещество затем выпаривают, полученное желтое твердое вещество растворяют примерно в 20 мл холодной воды с охлаждением на ледяной бане, раствор доводят до pH 6,0 с помощью холодной 6N HCl. Полученный тяжелый маслянистый осадок экстрагируют в CHCl₃ и экстракт промывают водой, высушивают с помощью Na₂SO₄ и выпаривают, получая жидкое масло, которое содержит сырое формильное производное; выход 53,06 г.

Пример 36. Гидрохлорид метилового эфира глицина (67,05 г) и безводный ацетат натрия (43,79 г) добавляют к раствору сырого формильного производного предыдущего примера (53,05 г) в MeOH/H₂O (4:1,1500 мл). Через 24 ч MeOH выпаривают в вакууме и смесь воды и масла экстрагируют с помощью CHCl₃. Слой CHCl₃ высушивают (Na₂SO₄) и выпаривают, получая янтарное масло (59,1 г).

Пример 37. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (43,68 г) добавляют по каплям к раствору янтарного масла примера 36 (59,1 г) и DBN (133 г) в сухом CH₂Cl₂ (400 мл) с внешним охлаждением на ледяной бане. После перемешивания при 0^oC в течение 1 ч раствор оставляют стоять при комнатной температуре в течение ночи. После проверки течения реакции с помощью ТСХ вводят дополнительное количество ClCO₂Et и DBN для завершения реакции и раствор оставляют стоять в течение 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на колонне с силикагелем (главная цель которой удаление менее мобильного DBN), получая N-защищенный пиррол, соответствующий пиррол без этоксикарбонильной защитной группы на пиррольном азоте и исходный пропионитрил.

Пример 38. К раствору N-защищенного пиррола примера 37 (11,66 г) в MeOH (200 мл) добавляют твердый Na₂CO₃ (4,23 г) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч с отделением полученного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха и остаток тщательно растирают в порошок с H₂O (200 мл) для растворения неорганических веществ, затем экстрагируют с помощью CHCl₃ (3 x 200 мл). Экстракт сушат (Na₂SO₄) и выпаривают, получая вязкую смолу, которая кристаллизуется при высушивании в вакууме, для использования в качестве промежуточного соединения без дальнейшей очистки. Более глубокая очистка может быть проведена колоночной хроматографией с использованием силикагель/CHCl₃, или перекристаллизацией из смеси толуол/циклогексан (1:3).

Пример 39. Бензоилизотиоцианат (4,58 г) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 38 (5,15 г) в сухом CH₂Cl₂ (75 мл). Через 1 ч при комнатной температуре раствор выпаривают, смолистый остаток растворяют в Et₂O (100 мл) с почти немедленным выделением кристаллического твердого вещества, которое собирают фильтрованием. Фильтрат Et₂O нагревают до кипения и разбавляют с помощью равного объема горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительное количество тиореидопроизводного.

Пример 40. Йодистый метил (8,70 г) добавляют к раствору тиоуреидопроизводного примера 39 (10,68 г) и DBN (4,15 г) в сухом CH₂Cl₂ (250 мл) при 0^oC. Раствор перемешивают при 0^oC в течение 15 мин, при температуре окружающей среды в течение 1 ч и затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в CHCl₃ хроматографируют в колонне с силикагелем с использованием CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилтиопромежуточного соединения.

Пример 41.

Раствор метилтиосоединения из примера 40 (0,80 г, 2,0 ммоль) в 25 мл MeOH, который был насыщен NH₃ при 0^oC, нагревают при 90-95^oC в течение 24 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь 2-аминосоединения, бензамида и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным. Смесь перемешивают энергично в течение нескольких минут с 30 мл смеси 2:1 Et₂O/циклогексан, и нерастворимое белое твердое вещество отфильтровывают и промывают Et₂O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиопроизводного. Раствор нерастворимого в смеси Et₂O/циклогексан твердого вещества (0,425 г) в MeOH выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносится равномерно на верх колонны с силикагелем, которая затем элюируется с помощью смеси CHCl₃/MeOH/HOAc (95:5:1), давая 2-метилтиоипроизводное как побочный продукт и желаемое фуранильное промежуточное соединение. Промежуточное соединение перекристаллизовывают экстракцией в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три порции и сушат в вакууме над P₂O₅ при 110^oC в течение 7 ч.

Раствор промежуточного соединения (116 г, 0,5 ммоль) в метаноле (50 мл) гидрируют с помощью 30%-ного палладия на древесном угле (40 мг) при давлении H₂ 62 фунта/дюйм (4,3592 кг/см) в течение около 36 ч. Катализатор удаляют фильтрованием под давлением N₂ и фильтрат выпаривают, затем повторно выпаривают с толуолом. Твердый остаток перекристаллизовывают экстракцией в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. 2-Тетрагидрофуранильное соединение (IE) получают в виде белого кристаллического твердого вещества, которое высушивают в вакууме над P₂O₅ при 110^oC в течение примерно 6 ч; выход 73 мг (61,8%); т.пл. 284-286^oC (разл.).

MS (FAB) m/e 235 (M+H)⁺, UV 0,1 N HCl 235 (17,1), 273 (14,7), pH 7 буффер 232 (20,0), 271 (10,5), 0,1 N NaOH 228 (20,2), 264 (7,0), 286 (6,2); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 1,50, 1,78 (m, 4H, H-3's и 4's тетрагидрофуранила), 2,52, 2,69 (2d, 2H, -CH₂R), 3,57, 3,76 (2m, 1H каждый, H-5's тетрагидрофуранила), 5,82 (s, 2H, NH₂), 6,97 (d, J=2,8, 1H, H-6), 10,34 (s, 1H, 3-NH), 11,18 (s, 1H, 5-NH).

Анализ: вычислено для C₁₁H₁₄N₄O₂: C 56,40; H 6,02; N 23,92; найдено: C 56,33; H 6,49; N 23,95.

Пример 42. Продукт примера 41 испытывают на ферментативную ингибирующую активность в соответствии со способом примера 9 и наблюдают PNP активность (IC₅₀ 11 мкМ) для вещества.

Пример 43. Приготавливают фармацевтическую композицию для интраперитональной инъекции для испытания вещества (IE). Для этого интраперитональный инъектируемый раствор, содержащий вещество примера 41, растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.

Пример 44. Используя способ примера 16, вводят интраперитонально в Lewis Rats композицию примера 43, содержащую вещество (IE) с дозой 30 мг вещества (IE), результаты анализируют по сравнению с контрольными. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IE).

Примеры 45-49. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(CH₂)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых группа R означает:
пример 45: R 3-тетрагидрофуранил;
пример 46: R 3-хлор-2-тетрагидрофуранил;
пример 47: R 3-трифторметил-2-тетрагидрофуранил;
пример 48: R 3-метокси-3-тетрагидрофуранил;
пример 49: R 3-фтор-2-тетрагидрофуранил.

Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 34-41, используя соответствующие 3-(фуранил)-акрилонитрилы в качестве исходных веществ.

Пример 50.

В атмосфере азота раствор тетрагидрофуранильного производного (IE) (500 мг), полученного в примере 41, и кристалл фенола в 2N HBr (20 мл) перемешивают в течение 18 ч при 40^oC. Растворитель выпаривают в вакууме при низкой температуре, остаток промывают с помощью нескольких мл Et₂O, декантацией удаляя любой трибромфенол. Т.пл. 311-313^oC.

MS (FAB) m/e 251 (M+H)⁺; UV 0,1 N HCl 234 (17,4), 274 (15,2), pH 7 буффер 232 (20,9), 272 (10,6), 0,1 N NaOH 228 (21,3), 265 (7,3), 287 (6,5); ИК (KBr) 3211, 3203, 3127, 3108, 2936, 1661, 1609, 1567, 1524, 1369 см^-1; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 1,62, 1,87, 2,01 (комплекс m, 4H, H-3'S и 4'S тетрагидротиенила), 2,72 (m, 4H, -CH₂-перекрывающий H-5'S тетрагидротиенила), 3,64 (p, 1H, 6-2 тетрагидротиенила), 5,82 (s, 2H, NH₂), 6,97 (d, J=3,0, 1H, H-6), 10,34 (s, 1, 3-NH), 11,17 (s, 1,5-NH);
Анализ: вычислено для C₁₁H₁₄N₄OS: C 52,78; H 5,64; N 22,38; найдено: C 52,56; H 5,64; N 22,50.

Из фильтрата получают 2-амино-1,5-дигидро-7-(1,2-дитиан-3-илметил)-4H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он; т.пл. 311-313^oC.

MS (FAB) m/e 283 (M+H)⁺; IR (KBr) 3139, 3135, 3131, 2926, 1673, 1658, 1609, 1569, 1523, 1370 см^-1; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) d 1,53, 1,67, 2,04 (комплекс m, 4H, H-4's и 5's дитиенила), 2,67 (m, 2H, -CH₂R); 2,75 (m, 2H, H-6's дитиенила), 3,17 (m, 1H, H'3 дитиенила), 5,84 (s, 2H, NH₂, 7,00 (d, J=3,0, 1H, H-6), 10,34 (s, 1H, 3-NH), ll,24 (s, 1H, 5-NH).

Анализ: вычислено для C₁₁H₁₄N₄OS₂: C 46,80; H 5,00; N 19,85; найдено: C 46,78; H 4,97; N 19,81.

Суспензию остатка в воде доводят до pH 7 1N NaOH, получая бромоспирт в виде свободного основания. Твердое вещество собирают, промывают холодной водой и высушивают при комнатной температуре.

Раствор бромоспирта в безводном диметилацетамиде охлаждают в ледяной бане и обрабатывают эквимолярной порцией PBr₃. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, затем диметилацетамид выпаривают в вакууме при низкой температуре, используя воздушный насос и ловушку с сухим льдом. Суспензию остатка в смеси лед/вода доводят до pH 7, используя 1N NaOH, и получают сырой продукт реакции, содержащий 1,4-дибромсоединение. После фильтрования, промывания холодной водой и высушивания при комнатной температуре полученный продукт кипятят с обратным холодильником с сульфидом натрия в смеси 50% этанол/вода, либо нагревают с Na₂S в растворе N,N-диметилацетамида; растворитель удаляют под вакуумом, остаток промывают водой для удаления NaBr и pH доводят до примерно 7 для осаждения 2-тетрагидротиенильного вещества (IG).

Пример 51. Вещество примера 50 испытывают на ферментативную ингибирующую активность, как в примере 9, и наблюдают PNP активность (IC₅₀ 11 nM) для вещества. IC₅₀ 18 nM для дитиан-3-ильного соединения.

Пример 52. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитональной инъекции для испытания вещества (IG). Интраперитональный инъекцируемый раствор, содержащий вещество примера 50, растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.

Пример 53. Используя способ примера 16, вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию примера 52, содержащую вещество (IG) с дозой 30 мг вещества (IG), результаты анализируют по сравнению с контрольными. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IG).

Примеры 54-58. Получают следующие вещества изобретения, 2-амино-7-(CH₂R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R означает:
пример 54: R 3-тетрагидротиенил;
пример 55: R 3-хлор-2-тетрагидротиенил;
пример 56: R 3-трифторметил-2-тетрагидротиенил;
пример 57: R 3-метокси-2-тетрагидротиенил;
пример 58: R 3-фтор-2-тетрагидротиенил.

Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 34-41 и 50, используя соответствующие 3-(фуранил)-акрилонитрилы в качестве исходных.

Пример 59. Используя способ примера 1, 3-(2-пирролил)-пропионитрил получают, применяя пиррол-2-карбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, промежуточное вещество 2-амино-7-(2-пирролилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 2-пирролидинильное вещество (II) получают восстановлением промежуточного вещества.

Пример 60. Используя способ примера 1, 3-(3-пирролил)-пропионитрил получают, применяя пиррол-3-карбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, промежуточное соединение 2-амино-7-(3-пирролилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 3-пирролидинильное вещество (IJ) получают восстановлением промежуточного вещества.

Пример 61. Используя способ примера 1, 3-(2-пиранил)-пропионитрил получают, применяя 2-пиранкарбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, промежуточное вещество 2-амино-7-(2-пиранилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 2-тетрагидропиранильное вещество (IL) получают восстановлением промежуточного вещества.

Пример 62. Используя способ примера 1, 3-(3-пиранил)-пропионитрил получают, применяя 3-пиранкарбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, промежуточное вещество 2-амино-7-(3-пиранилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 3-тетрагидропиранильное вещество (IM) получают восстановлением промежуточного соединения.

Пример 63. Используя способ примера 1, 3-(4-пиранил)-пропионитрил получают, применяя 4-пиранкарбоксальдегид в качестве исходного вещества. Следуя примерам 2-8, промежуточное вещество 2-амино-7-(4-пиранилметил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он получают из пропионитрила, из которого 4-тетрагидропиранильное вещество (IN) получают восстановлением промежуточного соединения.

Пример 64. Раствор метилтиопроизводного примера 7 (0,358 г, 0,85 ммоль) в 100 мл MeOH, который был насыщен NH₃ при 0^o, нагревают при 90-95^oC в течение 24 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь желаемого 2-аминопромежуточного вещества, бензамида, и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным. Смесь растворяют в метаноле и раствор выпаривают с силикагелем (около 5 г). Затем смесь осторожно наносят на верх хроматографической колонны с силикагелем, которую затем элюируют с помощью смеси CHCl₃/MeOH (9:1), получая метилтиопобочный продукт и желаемый 2-амино-7-(3-пиридинилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он, вещество (IIA). Дальнейшую очистку проводят перекристаллизацией из кипящего изопропилацетата в аппарате Сокслета.

Пример 65. Вещество (IIA) примера 64 испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в котором наблюдают PNP активность (IC₅₀) для вещества, определяемую радиохимически посредством измерения образования [¹⁴C]-гипоксантина из [¹⁴C] -инозина (Biomedicina, 33, 39, 1980), используя селезенку задней части голени в качестве источника энзима.

Примеры 66-67. Получают следующие вещества изобретения, 2-амино-7-(CH₂R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R означает:
пример 66: R 2-пиридинил;
пример 67: R 3-хлор-2-пиридинил.

Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 1-7 и 64, используя соответствующие 3-(пиридинил)-пропионитрилы в качестве исходных.

Пример 68. 2-Амино-4-оксо-3H,5H-7-[(4-пиридил)метил]пирроло[3,2-d]пиримидин гидрохлорид гидрат (2:4:1)

Метил 3-[(N-бензоил-S-метилизотиокарбамоил)амино]-4-[(4- пиридил)метил] -1H-пиррол-2-карбоксилат (BCX-180, 9,5 г, 23,25 ммоль) добавляют в 300-мл выложенный стеклянной футеровкой стеклянный сосуд высокого давления к 90 мл метилата аммония (полученного путем пропускания аммиака в безводный метанол при температуре 0-5^oC до насыщения) и реакционный сосуд закупоривают. Этот сосуд нагревают до температуры 85-90^oC в течение 12 ч и затем охлаждают до комнатной температуры. Летучие вещества выпаривают с помощью вращающегося испарителя и к полученному остатку добавляют 150 мл 1N HCl и 100 мл хлороформа. Полученную смесь энергично перемешивают и выделяют экстракт HCl. Экстракт HCl нейтрализуют, используя водный раствор карбоната натрия. Выпавшее в осадок твердое вещество выделяют путем фильтрации, высушивают на воздухе и экстрагируют 2 л этанола в аппарате Сокслета в течение 48 ч. Этанол выпаривают и образовавшийся светло-коричневый твердый остаток (3,1 г) размешивают с 20 мл деионизированной (DI) воды. Концентрированную (37%) соляную кислоту добавляют по каплям до тех пор, пока все твердое вещество не растворяется (2,1 мл, 25,7 ммоль). Прозрачный раствор обрабатывают активированным углем (700 мг) при температуре 50^oC в течение 5 мин и фильтруют через короткую колонку, заполненную цеолитом. Полученный фильтрат концентрируют на вращающемся испарителе при температуре 50- 55^oC с получением белого твердого вещества, высушивают сначало на воздухе, а затем в вакууме при температуре перегонки толуола. Масса полученного белого твердого вещества составляет 3,6 г (48%), т.пл. 340-342^oC.

Анализ: вычислено для C₁₂H₁₁N₅O2HCl0,5H₂O: C 44,59; H 4,67; N 21,67; найдено: C 44,59; H 4,57; N 21,47.

Пример 69. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитональной инъекции для испытания вещества (IIA). Для этого интраперитональный инъекцируемый раствор, содержащий вещество примера 64, растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.

Пример 70. Вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию примера 69, содержащее вещество (IIA), в дозе 30 мг вещества (IIA) инъекцией дважды в день. Используют контрольные группы, которые получают только наполнитель. Через определенное время после введения животных усыпляют и получают образцы плазмы. Плазму экстрагируют с помощью холодной 0,5N HClO₄ и нейтрализуют с помощью твердого NH₄HCO₃. После удаления перхлоратных солей экстракт подвергают ЖХВД на колонне с обратимой фазой (Spherisorb ODSI). Наблюдали значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IIA).

Примеры 71-73. Вещества такие, как в примерах 66-68, использованы для получения фармкомпозиций в соответствии со способом примера 69 и полученные инъекцируемые растворы испытаны в соответствии со способом примера 70. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у животных, получающих вещество изобретения.

Пример 74. 1-Циклогексенилацетонитрил используют в синтезах для получения соединений изобретения. В атмосфере сухого N₂ раствор 1-циклогексенилацетонитрила (9,2 г, 75,92 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (THF, 10 мл) добавляют к перемешиваемой смеси гидрида натрия (3,18 г, 132,86 ммоль) и этилового эфира муравьиной кислоты (30,14 г, 406,93 ммоль) в 50 мл THF, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение около 18 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме при комнатной температуре. Воду (30 мл) добавляют к остатку при 0^oC, раствор доводят до pH 6 добавлением по каплям 6N HCl. Полученный осадок в виде тяжелого масла экстрагируют CHCl₃. Экстракт промывают водой и высушивают с помощью Na₂SO₄, полученный органический слой выпаривают, получая сырое формильное производное в виде красно-коричневого масла (9,6 г).

Пример 75. Гидрохлорид метилового эфира глицина (16,68 г, 132,85 ммоль) и безводный ацетат натрия (10,89 г, 132,85 ммоль) добавляют к раствору сырого формильного производного (9,6 г) примера 74 без дальнейшей очистки в смеси MeOH/H₂O (4:1,150 мл). Спустя 24 ч MeOH выпаривают в вакууме и смесь воды и масла экстрагируют с помощью CHCl₃. Слой CHCl₃ высушивают (Na₂SO₄) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают на колонку с силикагелем. Элюирование с помощью CHCl₃ дает желаемый енамин: выход 4,5 г.

Пример 76. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (3,04 г, 28,06 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 75 (4,12 г, 18,70 моль) и 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ена (DBN, 6,96 г, 56,11 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (100 мл) с внешним охлаждением в ледяной бане. После перемешивания при 0^oC в течение 1 ч раствору дают постоять при комнатной температуре в течение ночи. После проверки хода реакции с помощью TCX вводят дополнительное количество ClCO₂Et (0,5 мл) и DBN (3,0 мл) для завершения реакции, затем раствор оставляют на 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на короткой колонке с силикагелем (главная цель которой удаление менее мобильного DBN), получая N-защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 77. К раствору N-защищенного пиррола примера 76 (3,0 г, 10,26 ммоль) в MeOH (100 мл) добавляют твердый Na₂CO₃ (2,71 г, 25,65 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч с отделением полученного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха, остаток тщательно растирают в порошок с водой (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют с помощью CHCl₃ (3 x 50 мл). Экстракт сушат (Na₂SO₄) и выпаривают до получения вязкой смолы, которую очищают на колонне с силикагелем, используя CHCl₃ в качестве элюента; выход 2,04 г; т.пл. 125^oC.

Пример 78. Бензоилизотиоцианат (0,76 г, 4,65 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 77 (0,91 г, 4,13 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (30 мл). Спустя 1 ч при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток растирают в порошок с метанолом, получая тиоуреидопроизводное; выход 0,70 г, т.пл. 170^oC.

Пример 79. Йодистый метил (0,678 г, 4,78 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидопроизводного примера 78 (0,630 г, 1,64 ммоль) и DBN (0,230 г, 1,85 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (50 мл) при 0^oC. Раствор перемешивают при 0^oC в течение 15 мин, при температуре окружающей среды в течение 1 ч, а затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в CHCl₃ хроматографируют на колонке с силикагелем с помощью CHCl₃ в качестве элюента, получая гомогенные фракции метилтиосоединения как промежуточного соединения; выход 0,7 г.

Пример 80.

Раствор метилтиосоединения примера 79 (0,70 г, 1,76 ммоль) в 50 мл MeOH, который был насыщен NH₃ при 0^oC, нагревают при 90-95^oC в течение 24 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь вещества (IIIA), бензамида и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным, в отличие от 2-аминосоединения (IIIA). Смесь энергично перемешивают в течение нескольких минут с приблизительно 50 мл Et₂O, нерастворимое белое твердое вещество отфильтровывают и промывают с помощью Et₂O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиопроизводного. Раствор нерастворимого в Et₂O твердого вещества (0,342 г) в MeOH выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносят равномерным слоем на верхнюю часть колонны с силикагелем, который затем элюируют с помощью смеси CHCl₃/MeOH/HOAc (95:5:1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое 2-аминосоединение (IIIA). Соединение (IIIA) перекристаллизовывают экстракцией в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три массы и высушивают в вакууме над P₂O₅ при 110^oC в течение 7 ч; выход 44% т.пл. 280^oC (разл.).

Анализ для C₁₂H₁₄N₄O0,6H₂O: вычислено: C 59,78; H 6,35; N 23,23; найдено: C 59,98; H 6,46; N 23,15.

Пример 81. Вещество примера 80 испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в котором определяют PNP активность для вещества радиохимическим измерением образования [¹⁴C]-гипоксантина из [¹⁴C]-инозина (Biomedicina, 33, 39, 1980), используя селезенку задней части голени в качестве источника энзима. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 1,9 мкМ, при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 19 мкМ.

Пример 82. Следуя способам, приведенным в примерах 74-80, вещества (IIIB) и (IIIC) получают, используя 2- и 3-циклогексенилацетонитрил соответственно в качестве исходных веществ. Вещества испытывают так, как в примере 81, и наблюдают значительную ферментативно-ингибирующую активность.

Примеры 83-87. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(R)-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R группа следующая:
пример 83: R 3-метил-2-циклогексенил;
пример 84: R 2-хлор-3-циклогексенил;
пример 85: R 3-трифторметил-1-циклогексенил;
пример 86: R 3-метокси-1-циклогексенил;
пример 87: R 2-фтор-3-циклогексенил.

Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 74-81, используя соответствующие циклогексенилацетонитрилы в качестве исходных.

Пример 88. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитонального введения для испытания вещества (IIIA). Интраперитональный инъекцируемый раствор, содержащий вещество (IIIA), растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.

Пример 89. Вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию, содержащую вещество (IIIA) примера 88, в дозе 30 мг вещества (IIIA) с инъекцией, дважды в день. Используют контрольные группы, которые получают только наполнитель. Через определенное время после введения животных усыпляют и получают образцы плазмы. Плазму экстрагируют с помощью холодной 0,5N HClO₄ и нейтрализуют с помощью твердого NH₄HCO₃. После удаления перхлоратных солей экстракт подвергают ЖХВД на колонке с обратимой фазой (Spherisorb ODSI). Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой из животных, получающих вещество (IIIA).

Примеры 90-94. Вещества, полученные так, как в примерах 83-87, использованы для приготовления лекарственных средств в соответствии со способом приготовления примера 88 и полученные инъекцируемые растворы испытывают в соответствии со способом примера 89. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у животных, получающих вещества изобретения.

Пример 95.

Вещество (IIID) получают, используя 2-амино-7-(1-циклогексенил)-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он в качестве промежуточного соединения. Раствор промежуточного соединения (0,2 г, 0,86 ммоль) в этаноле (50 мл) гидрируют с помощью 10%-ного Pd-C (50 мг) при давлении 45 фунтов/дюйм² в течение 16 ч и горячим фильтруют через цеолит. Фильтрат выпаривают досуха, остаток кристаллизуют из горячего этанола, получая вещество (IIID);
выход 157 мг (78%); т.пл. более 300^oC (разл.).

Анализ для C₁₂H₁₆N₄O0EtOH: вычислено: C 61,80; H 7,10; N 23,51; найдено: C 61,95; H 7,43; N 23,56.

Пример 96. Вещество (IIID), полученное в примере 95, испытывают на ферментативно-ингибирующую активность так, как в примере 81. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 1,3 мкМ, при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 145 мкМ.

Пример 97. 3-(2-Адамантил)-пропионитрил получают в этом примере, используя методику способа M. Ohno et al. J. Org. Chem. 53, 1285 (1988). Раствор 2-бромадамантана (20 г, 92,96 ммоль), Bu₃SnH (32,46 г, 111,5 моль), акрилонитрила (9,86 г, 185,92 ммоль) и AIBN (740 мг) в толуоле (280 мл) перемешивают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь промывают аммиачной водой (0,4 M, 500 мл), органический слой промывают водой, высушивают над MgSO₄ и выпаривают. Остаток перегоняют при температуре между 110-118^oC и около 0,2 mmHg; фракции соединяют, получая сырой образец загрязненного 3-(2-адамантил)- пропионитрила с комплексами олова, который очищают на колонне с силикагелем с помощью гексанов, за которыми следуют гексан/этилацетат 97:3 и гексан/этилацетат 95:5; выход 9,4 г (53,4%), т.пл. полутвердый.

Пример 98. 3-(2-Адамантил)-пропионитрил примера 97 используют далее для синтеза соединений изобретения. В атмосфере сухого N₂ смесь 3-(2-адамантил)-пропионитрила (7,0 г, 36,99 ммоль), гидрида натрия (1,7 г, 73,95 ммоль) и безводного тетрагидрофурана (75 мл) нагревают при 52^oC в водяной бане в течение 15 мин, раствор этилового эфира муравьиной кислоты (13,69 г, 184,89 ммоль) в THF (100 мл) добавляют в течение 45 мин. Через 2 ч при 50-55^oC вторую порцию NaH (0,8 г) и HCO₂Et (7,5 мл) добавляют и реакционную смесь перемешивают в течение примерно 2 дней. Третью порцию HCO₂Et (7,5 мл) и NaH (0,8 г) добавляют и оставляют при комнатной температуре в течение около 24 ч (непрореагировавший нитрил инертен в следующей стадии и может быть регенерирован в первой стадии очистки). Крутую пасту перемешивают в течение ночи и дают охладиться до комнатной температуры. Летучее вещество выпаривают при пониженном давлении, оставшуюся бледно-желтую корку растворяют в минимальном объеме холодной воды (приблизительно 150 мл) при 0^oC. Раствор доводят до pH 6,0 добавлением 6N HCl и экстрагируют с помощью CHCl₃ (3 x 100 мл). Экстракт промывают водой, высушивают над Na₂SO₄ и выпаривают в вакууме до густого янтарного масла. Этот сырой продукт используют в следующей реакции без дальнейшей очистки.

Пример 99. Гидрохлорид метилового эфира глицина (6,96 г, 55,46 ммоль) и безводный ацетат натрия (4,55 г, 55,46 ммоль) добавляют к раствору сырого формильного производного (8,0 г) в MeOH/H₂O (4:1,500 мл). Спустя 24 ч MeOH выпаривают в вакууме и смесь воды и масла экстрагируют CHCl₃. Слой CHCl₃ высушивают (Na₂SO₄) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают в колонку с силикагелем. Элюирование с помощью CHCl₃ дает два основных слоя: 3-(2-адамантил)-пропионитрил (использованный в качестве исходного вещества в предыдущей стадии) и желаемый енамин; выход 6 г.

Пример 100. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (2,82 г, 26,0 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 99 (5,0 г, 17,34 ммоль) и 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ена ("DBN", 6,46 г, 52,0 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (50 мл) с внешним охлаждением в ледяной бане. После перемешивания при 0^oC в течение 1 ч раствору дают отстояться при комнатной температуре в течение ночи. После контролирования хода реакции по TCX вводят дополнительное количество ClCO₂Et (1,81 мл) и DBN (3,23 г) для завершения реакции и раствор оставляют стоять в течение 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на короткой колонне с силикагелем (главная цель которой удаление менее мобильной DBN), получая N-защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 101. К раствору сырого N-защищенного пиррола примера 100 (6,0 г, 16,59 ммоль) в MeOH (100 мл) добавляют твердый Na₂CO₃ (4,39 г, 41,49 ммоль), реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч с отделением полученного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха, остаток тщательно растирают с водой в порошок (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют CHCl₃ (3100 мл). Экстракт сушат (Na₂SO₄) и выпаривают, получая вязкую смолу, которую кристаллизуют с помощью эфира; выход 4 г; т.пл. 162-163^oC.

Пример 102. Бензоилизотиоцианат (1,22 г, 7,47 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 101 (1,91 г, 6,62 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (50 мл). Спустя 1 ч при комнатной температуре раствор выпаривают, смолистый остаток растворяют в Et₂O (100 мл) с почти немедленным выделением кристаллического твердого вещества, которое отфильтровывают. Маточник Et₂O нагревают до кипения и разбавляют равным объемом горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительное количество тиоуреидопроизводного; выход 2,81 г (95%); т.пл. 193-194^oC.

Пример 103. Йодистый метил (2,46 г, 17,39 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидопроизводного примера 102 (2,7 г, 5,98 ммоль) и DBN (0,82 г, 6,57 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (50 мл) при 0^oC. Раствор перемешивают при 0^oC в течение 15 мин, при температуре окружающей среды в течение 1 ч и затем выпаривают в вакууме, получая сырой образец метилтиосоединения как промежуточного вещества; выход 2,78 г (сырой).

Пример 104.

Раствор метилтиосоединения примера 103 (2,78 г, 5,18 ммоль) в 150 мл MeOH, который был насыщен NH₃ при 0^oС, нагревают при 90-95^oC в течение 24 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь вещества (IVA), бензамида и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным в отличие от 2-аминосоединения (IVA). Смесь энергично перемешивают в течение нескольких минут с приблизительно 75 мл Et₂O и нерастворимое белое твердое вещество отфильтровывают с помощью Et₂O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиопроизводное. Раствор нерастворимого в Et₂O твердого вещества (1,38 г) в MeOH выпаривают с приблизительно 25 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносится равномерно на верхнюю часть колонки с силикагелем, которую затем элюируют с помощью CHCl₃/MeOH/HOAc (95:5:1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое 2-аминосоединение (IVA). (IVA) продукт перекристаллизовывают при экстракции в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три массы и высушивают в вакууме над P₂O₅ при 110^oC в течение 7 ч; выход 51,5% т.пл. более 350^oC (разл.).

Анализ для C₁₇H₂₂N₄O0,21MeOH0,22H₂O: вычислено: C 66,88; H 7,59; N 18,12; найдено: C 66,86; H 7,59; N 18,12.

Пример 105. Вещество примера 104 испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Для этого проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в котором определяют PNP активность (IC₅₀) для вещества радиохимическим измерением образования [¹⁴C]-гипоксантина из [¹⁴C]-инозина (Biomedicine, 33, 39, 1980), используя селезенку теленка в качестве источника энзима. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,090 мкМ и при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 2,5 мкМ.

Примеры 106-110. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(CH₂R)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R - замещенная 2-адамантильная группа:
пример 106: R 2-(1-метил)-адамантил;
пример 107: R 2-(1-хлор)-адамантил;
пример 108: R 2-(1-трифторметил)-адамантил;
пример 109: R 2-(1-метокси)-адамантил;
пример 110: R 2-(1-фтор)-адамантил.

Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 98-104, используя соответствующие 3-(2-адамантил)-пропионитрилы в качестве исходных веществ.

Примеры 111-116. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(CH₂R)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-оны, в которых R - следующая 1-адамантильная группа:
пример 111: R 1-(2-метил)-адамантил;
пример 112: R 1-(2-хлоро)-адамантил;
пример 113: R 1-(2-трифторметил)-адамантил;
пример 114: R 1-(2-метокси)-адамантил;
пример 115: R 1-(2-фтор)-адамантил;
пример 116: R 1-адамантил.

Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 98-104, используя соответствующие 3-(1-адамантил)-пропионитрилы в качестве исходных веществ.

Пример 117. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитонального инъекцирования для испытания вещества (IVA). Интраперитональный инъекцируемый раствор, содержащий вещество (IVA), растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.

Пример 118. Вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию, содержащую вещество (IVA) примера 117 в дозе 30 мг вещества (IVA) инъекцией дважды в день. Используют контрольные группы, которые получают только наполнитель. Через определенное время после введения животных усыпляют и получают образцы плазмы. Плазму экстрагируют с помощью холодной 0,5N HClO₄ и нейтрализуют твердым NH₄HCO₃. После удаления перхлоратных солей экстракт подвергают ЖХВД на колонке с обратимой фазой (Spherisorb ODSI). Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у животных, получающих вещество (IVA).

Примеры 119-129. Вещества, полученные как в примерах 106-116, использованы для приготовления лекарственных средств в соответствии со способом приготовления примера 117, полученные инъекцируемые растворы испытывают в соответствии со способом примера 118. Наблюдают увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у животных, получающих вещества изобретения.

Пример 130. В этом примере получают 3-циклопентилпропионитрил. 3-Циклопентилпропионитрил хлорид (57,7 г, 0,36 моль) добавляют по каплям к большому избытку концентрированного гидроксида аммония (400 мл), охлажденного в бане лед/соль. Тяжелую суспензию белого твердого вещества перемешивают в течение ночи, собирают фильтрованием, промывают холодной водой и перекристаллизовывают из примерно 2 л кипящей воды. Блестящие белые пластинки амида сушат в вакууме над P₂O₅; выход 31,6 г (62,3%), т.пл. 122^oC.

С защитой от атмосферной влаги раствор амида (23,5 г, 0,166 моль) в POCl₃ (150 мл) нагревают при 120^oC в течение 1 ч. Масляную баню охлаждают до около 70^oC, избыток POCl₃ отгоняют в вакууме, охлажденный остаток наливают на лед (около 300 г). Смесь нейтрализуют путем осторожного добавления твердого Na₂CO₃ и экстрагируют с помощью нескольких порций Et₂O. Высушенный над Na₂SO₄ экстракт выпаривают, получая прозрачное бледно-желтое масло, которое перегоняют в вакууме, получая желаемый нитрил; выход 16,86 г (82%), т.кип. 88,0-88,5^oC/8,7 мм. MS (EI): m/z 122 (M-H)⁺; ИК (сар. пленка), 2245 см^-1 (CN); ¹H ЯМР, 1,67 (q, 2, CH₂CH₂CN), 2,36 (t, 2, -CH₂CN), комплексные мультиплеты, центрированные около 1,11, 1,63, 1,86 (циклопентильные протоны).

Пример 131. 3-Циклопентилпропионитрил предыдущего примера далее обрабатывают в синтезах изобретения. В атмосфере сухого N₂ смесь 3-циклопентилпропионитрила (14,8 г, 0,12 моль), гидрида натрия (5,8 г, 0,24 моль) и безводного тетрагидрофурана (300 мл) нагревают при 52^oC на водяной бане в течение 15 мин, раствор этилового эфира муравьиной кислоты (13,3 г, 0,18 моль) в ТГФ (100 мл) добавляют в течение 45 мин. Через 2 ч при 50-55^oC добавляют вторую порцию NaH (1,9 г) и HCO₂Et (5,0 мл), за которой в течение 30 мин следует третья порция HCO₂Et (непрореагировавший нитрил инертен в следующей стадии и может быть регенерирован при первой стадии очистки). Крутую пасту перемешивают в течение ночи и дают возможность охладиться до комнатной температуры. Летучее вещество выпаривают при пониженном давлении, оставшуюся бледно-желтую корку растворяют в минимальном объеме холодной воды (около 150 мл) при 0^oC. Раствор доводят до pH 6,0 добавлением 6N НС1 и экстрагируют CHCl₃ (3 x 100 мл). Экстракт промывают водой, сушат над Na₂SO₄ и выпаривают в вакууме до густого янтарного масла. Этот сырой продукт (15,6 г) используют в следующей реакции без дальнейшей очистки.

Пример 132. Гидрохлорид метилового эфира глицина (19,31 г, 0,154 моль) и безводный ацетат натрия (12,61 г, 0,154 моль) добавляют к раствору сырого формильного производного предыдущего примера (15,6 г) в MeOH/H₂O (4:1, 500 мл). Через 24 ч MeOH выпаривают в вакууме, смесь воды и масла экстрагируют с помощью CHCl₃. Слой CHCl₃ высушивают (Na₂SO₄) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают на колонку с силикагелем. Элюирование с помощью CHCl₃ дает два основных слоя: 3-циклопентилпропионитрил (8,22 г, 66,7 ммоль или 55,6% нитрила, использованного в качестве исходного вещества в предыдущей стадии); желаемый енамин (3,45 г, 29,1% от теоретического выхода, с поправкой на количество нитрила, присутствующего в исходном веществе; MS (FAB): 223 (M+H)⁺).

Пример 133. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (2,53 г, 23,3 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина предыдущего примера (3,45 г, 15,5 ммоль) и DBN (5,78 г, 46,6 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (50 мл) с внешним охлаждением на ледяной бане. После перемешивания при 0^o в течение 1 ч раствор выдерживают при комнатной температуре в течение ночи. После проверки хода реакции по TCX вводят дополнительное количество ClCO₂Et (0,5 мл) и DBN (3,0 мл) для завершения реакции, раствор выдерживают в течение 24 ч. Летучее вещество испаряют в вакууме, вязкий остаток очищают на короткой колонке с силикагелем (главная цель которой - удаление менее мобильного DBN), получая N-защищенный пиррол (4,50 г, 98%), который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 134. К раствору N-защищенного пиррола предыдущего примера (4,50 г, 15,3 ммоль) в MeOH (100 мл) добавляют твердый Na₂CO₃ (1,62 г, 15,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч с отделением полученного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха, остаток тщательно растирают в порошок с H₂O (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют CHCl₃ (3 x 100 мл). Экстракт сушат (Na₂SO₄) и выпаривают, получая вязкую смолу, которую кристаллизуют при высушивании в вакууме; выход 2,97 г (87,4%) вещества, пригодного для использования в качестве промежуточного соединения без дальнейшей очистки. Более глубокая очистка может быть осуществлена колоночной хроматографией с применением силикагеля/CHCl₃ или перекристаллизацией из смеси толуол/циклогексан (1:3).

Пример 135. Бензоилизотиоцианат (2,62 г, 16,03 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 134 (2,97 г, 13,36 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (100 мл). Через 1 ч при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток растворяют в Et₂O (100 мл) с почти немедленным отделением кристаллического твердого вещества; выход 1,75 г. Фильтрат Et₂O нагревают до кипения и разбавляют с помощью равного объема горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительные 1,58 г тиоуреидопроизводного; общий выход 3,33 г (64,6%). Небольшое количество тиоуреидосоединения перекристаллизовывают из горячей смеси Et₂O/циклогексан (15 мл каждого); т.пл. 123-125^oC. MS (FAB): 386 (M+H)⁺.

Анализ для C₂₀H₂₃N₃O₃S0,45C₆H₁₂: вычислено: C 64,40; H 6,76; N 9,93; найдено: C 64,51; H 7,10; N 9,93.

Пример 136. Йодистый метил (2,60 г, 18,32 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидосоединения примера 135 (3,21 г, 8,33 ммоль) и DBN (1,24 г, 9,99 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (80 мл) при 0^oC. Раствор перемешивают при 0^oC в течение 15 мин при температуре окружающей среды в течение 1 ч, а затем испаряют в вакууме. Раствор остатка в CHCl₃ хроматографируют на колонне с силикагелем с помощью CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилтиосоединения как промежуточного продукта; выход 2,46 г (74%).

Пример 137.

Раствор метилтиосоединения примера 136 (2,07 г, 5,18 ммоль) в 150 мл MeOH, который был насыщен NH₃ при 0^oC, нагревают при 90-95^oC в течение 24 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь вещества (IVC), бензамида и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным в отличие от 2-аминосоединения (IVC). Смесь энергично перемешивают в течение нескольких минут с приблизительно 75 мл Et₂O и нерастворимое белое вещество отфильтровывают и промывают Et₂O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиосоединения. Раствор нерастворимого в Et₂O твердого вещества (1,13 г) в MeOH выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносят равномерно на верхнюю часть колонки с силикагелем, которую затем элюируют с помощью смеси CHCl₃/MeOH/HOAc (95:5:1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт (252 мг, MS (FAB): 264 (M+H)⁺) и желаемое 2-аминосоединение (IVC) (679 мг, 56,4%). (IVC) перекристаллизовывают при экстракции в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три порции и высушивают в вакууме над P₂O₅ при 110^oC в течение 7 ч; выход 540 мг (44,9%); т.пл. 324-326^oC (разл.); MS (FAB): 233 (M+H)⁺.

Анализ для C₁₂H₁₆N₄О: вычислено: C 62,05; H 6,94; N 24,12; найдено: C 62,04; H 7,11; N 24,48.

Пример 138. Вещество примера 137 испытывают на ферментативно-ингибирующую активность в соответствии со способом примера 9. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,029 мкМ и при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 1,8 мкМ.

Примеры 139-142. Получают следующие вещества изобретения: 2-амино-7-(CH₂R)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-оны, в которых R - замещенный циклопентил:
пример 139: R 3-метилциклопентил;
пример 140: R 2-хлороциклопентил;
пример 141: R 3-трифторметилциклопентил;
пример 142: R 3-метоксициклопентил.

Вещества получают, следуя способам, приведенным в примерах 130-137, используя соответствующие 3-(замещенные циклопентил)-пропионитрилы в качестве исходных веществ.

Пример 143. Готовят фармацевтическую композицию для интраперитонального инъекцирования для испытания вещества (IVC). Интраперитональный инъекцируемый раствор, содержащий вещество (IVC), растворяют в водном носителе, который содержит 10% DMSO.

Пример 144. Используя способ примера 112, вводят интраперитонально в Lewis Rats опытную композицию, содержащую вещество (IVC) примера 143 и результаты сравнивают с контрольными. Наблюдают значительное увеличение плазменного инозина в плазме, взятой у животных, получающих вещество (IVC).

Пример 145. Получают 3-циклогексилпропионитрил. Раствор циклогексанпропионовой кислоты (50 г, 0,32 моль) и хлористого тионила (152 г, 1,28 моль) в 100 мл бензола выдерживают в течение ночи и затем выпаривают до маслообразного остатка. Остаток добавляют порциями к 28%-ному водному раствору аммиака (270 мл) при 25^oC и смесь перемешивают в течение примерно 2 ч. Полученный продукт собирают фильтрованием, промывают холодной водой и перекристаллизовывают из около 2 л кипящей воды. Блестящие белые пластинки амида высушивают в вакууме над P₂O₅; выход 45,5 г.

С защитой от атмосферной влаги раствор амида (45,5 г, 0,293 моль) в SOCl₂ (200,3 г, 1,68 моль) кипятят с обратным холодильником в течение примерно 6 ч. Масляную баню охлаждают до около 70^oC и избыток SOCl₂ отгоняют под вакуумом, охлажденный остаток выливают на лед (около 300 г). Смесь нейтрализуют путем осторожного добавления твердого Na₂CO₃ и экстрагируют с помощью нескольких порций Et₂O. Высушенный (Na₂SO₄) экстракт выпаривают, получая прозрачное, бледно-желтое масло, которое перегоняют в вакууме, получая желаемый нитрил; выход 42,0 г.

Пример 146. 3-Циклогексилпропионитрил примера 145 далее используют в синтезе для получения соединений изобретения. В атмосфере сухого N₂ смесь 3-циклогексилпропионитрила (22,3 г, 0,16 моль), гидрида натрия (5,38 г, 0,224 моль) и безводного тетрагидрофурана (120 мл) нагревают при 52^oC на водяной бане в течение 15 мин, добавляют раствор этилового эфира муравьиной кислоты (55,4 г, 0,75 моль) в THF (50 мл) в течение 45 мин. Через 2 ч при 50-55^oC добавляют вторую порцию NaH (2,0 г) и HCO₂Et (5,0 мл) (непрореагировавший нитрил инертен в следующей стадии и может быть регенерирован при первой стадии очистки), реакционную смесь перемешивают в течение примерно 3 дней при 55^oC и затем дают охладиться до комнатной температуры. Летучее вещество выпаривают при пониженном давлении, оставшуюся бледно-желтую корку растворяют в минимальном количестве холодной воды (около 75 мл) при 0^oC. Раствор доводят до pH 6,0 добавлением 6N HCl и экстрагируют CHCl₃ (3 x 100 мл). Экстракт промывают водой, сушат над Na₂SO₄ и выпаривают в вакууме до густого янтарного масла. Этот сырой продукт используют в следующей реакции без дальнейшей очистки.

Пример 147. Гидрохлорид метилового эфира глицина (30,60 г, 0,24 моль) и безводный ацетат натрия (19,99 г, 0,24 моль) добавляют к раствору сырого формильного производного предыдущего примера (25,22 г) в смеси MeOH/H₂O (4: 1,500 мл). Спустя 24 ч MeOH испаряют в вакууме, смесь воды и масла экстрагируют CHCl₃. Слой CHCl₃ высушивают (Na₂SO₄) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают на колонку с силикагелем. Элюирование CHCl₃ дает два основных слоя: 3-циклогексилпропионитрил (использованный в качестве исходного вещества в предыдущей стадии); желаемый енамин; выход 16 г.

Пример 148. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (1,38 г, 12,7 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 147 (2,0 г, 8,46 ммоль) и DBN (2,1 г, 16,9 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (50 мл) с внешним охлаждением в ледяной бане. После перемешивания при 0^oC в течение 1 ч раствор выдерживают при комнатной температуре в течение ночи. После проверки хода реакции по TCX вводят дополнительное количество ClCO₂Et (0,5 мл) и DBN (1,5 мл) для завершения реакции, раствору дают постоять в течение 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на короткой колонне с силикагелем (цель которой удаление менее мобильного DBN), получая N-защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 149. К раствору N-защищенного пиррола примера 148 (2,6 г, 8,43 ммоль) в MeOH (100 мл) добавляют твердый Na₂CO₃ (2,23 г, 21,07 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч с отделением полученного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха, остаток тщательно растирают в порошок с водой (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют с помощью CHCl₃ (3 x 100 мл). Экстракт сушат (Na₂SO₄) и испаряют, получая вязкую смолу, которую очищают на колонне с силикагелем, используя CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования; выход 1,67 г (84%), т.пл. 73-74^oC.

Пример 150. Бензоилизотиоцианат (0,74 г, 4,02 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 149 (0,95 г) в сухом CH₂Cl₂ (20 мл). Спустя 1 ч при комнатной температуре раствор выпаривают и смолистый остаток растворяют в Et₂O (100 мл) с почти немедленным отделением кристаллического твердого вещества. Маточник Et₂O нагревают до кипения и разбавляют равным объемом горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительно тиоуреидопроизводное; выход 1,41 г (88%), т.пл. 156-157^oC.

Пример 151. Йодистый метил (1,1 г, 7,6 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидопроизводного примера 150 (0,96 г, 2,61 ммоль) и 1,5-диазабицикло[4.3.0] нон-5-ена (0,38 г, 3,0 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (20 мл) при 0^oC. Раствор перемешивают при 0^oC в течение 15 мин, при температуре окружающей среды в течение 1 ч и затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в CHCl₃ хроматографируют на колонке с силикагелем с CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилтиосоединения как промежуточного вещества; выход 0,92 г.

Пример 152.

Раствор метилтиосоединения примера 151 (0,8 г, 1,93 ммоль) в 50 мл MeOH, который был насыщен NH₃ при 0^oC, нагревают при 90-95^oC в течение 24 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь вещества (IVD), бензамида и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным, в отличие от 2-аминосоединения (IVD). Смесь энергично перемешивают в течение нескольких минут с приблизительно 75 мл Et₂, нерастворимое твердое белое вещество отфильтровывают и промывают с помощью Et₂O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиосоединения. Раствор нерастворимого в Et₂O твердого вещества (0,390 г) в MeOH выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносят равномерно на верхнюю часть колонки с силикагелем, которую затем элюируют смесью CHCl₃/MeOH/HOAc (95:5: 1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое 2-аминосоединение (IVD). (IVD) перекристаллизовывают при экстракции в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три порции и высушивают в вакууме над P₂O₅ при 110^oC в течение 7 ч; выход 49% т.пл. более 300^oC.

Анализ для C₁₃H₁₈N₄O: вычислено: C 63,39; H 7,36; N 22,74; найдено: C 63,50; H 7,74; N 22,67.

Пример 153. Вещество примера 152 испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 105. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,037 мкМ, при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 2,2 мкМ.

Пример 154. Вещество примера 152 испытывают для определения его эффективности по ингибированию токсичности 2'-дезоксигуанозина (d-GuO) (D.A. Schewach et al. Cancer es. 46, 519 (1986) и J.C.Sirear et al. Agents and tions, 21, 253 (1987)). Для этого выращивают CCRF-CEM клетки в RPMI-1640 среде. К суспендированным культурам этих клеток добавляют d-GuO при стационарной концентрации (5,62 мкМ) и вещество при переменной концентрации, определяют число клеток в Coulter счетчике через 24, 48 и 72 ч после этого. Из этих данных рассчитывают IC₅₀, равную 2,0 мкМ, как концентрацию вещества, требуемую для снижения роста числа клеток между 0 и 72 ч на 50% от клеток контрольных культур.

Пример 155.

Получают 2-амино-7-(3-метилциклогексилметил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он. Сначала используя способы, приведенные в примерах 146 152, но с 3-(3-метилбензил)-пропионитрилом в качестве исходного вещества, получают арильное производное 2-амино-7-(3-метилбензил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он. Раствор арильного производного (0,2 г, 0,78 ммоль) в трифторуксусной кислоте (TFA) (20 мл) гидрируют с помощью PtO₂ при давлении 60 фунтов/дюйм в течение 24 ч. Катализатор отфильтровывают через цеолитный слой и фильтрат выпаривают. Остаток растирают в порошок с помощью метанола и оставляют в холодильнике на ночь. Полученная кристаллическая трифторацетатная соль осаждается из раствора и собирается фильтрованием. TFA-соль суспендируют в 8 мл воды, доводя до pH 8 конц. NH₄OH, измельчают ультразвуком. Чистый продукт собирают, промывают водой и сушат; выход 165 мг (81%), т.пл. 282^oC.

Анализ для C₁₄H₂₀N₄O: вычислено: C 64,60; H 7,74; N 21,52; найдено: C 64,24; H 7,96; N 21,51%
Пример 156.

Способ, описанный в примере 155, повторяют для получения 2-амино-7-(3-трифторметилциклогексилметил)-3H, 5H-пирроло [3,2-d] пиримидин-4-она, используя 3-(3-трифторметилбензил)-пропионитрил в качестве исходного вещества; выход 69% т.пл. 165^oC.

Анализ для C₁₄H₁₇N₄OF₃0,6H₂O: вычислено: C 51,72; H 5,64; N 17,23; найдено: C 51,82; H 5,71; N 16,81%
Пример 157. Вещество, полученное в примере 155, испытывают на ферментативно-ингибирующую активность, как в примере 105. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,025 мкМ, при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 0,820 мкМ.

Пример 158. Вещество, полученное в примере 156, испытывают на ферментативно-ингибирующую активность, как в примере 105. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,020 мкМ, при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 0,740 мкМ.

Пример 159. В этом примере 3-циклогептилпропионитрил получают в соответствии со способом примера 97, используя раствор 2-бромциклогептана (25,57 г, 144,38 ммоль), Bu₃SnH (50,42 г, 173,26 ммоль), акрилонитрила (15,32 г, 288,77 ммоль) и AIBN (1,13 г) в толуоле (300 мл); выход 16 г в виде масла.

Пример 160. 3-Циклогептилпропионитрил примера 159 далее используют в синтезе для получения соединений изобретения. В атмосфере сухого N₂ смесь 3-циклогептилпропионитрила (8,5 г, 56,19 ммоль), гидрида натрия (2,6 г, 112,39 ммоль) нагревают на водяной бане в течение 15 мин, раствор этилового эфира муравьиной кислоты (20,81 г, 280,99 ммоль) в THF (100 мл) добавляют в течение 45 мин. Спустя 2 ч при 50-55^oC добавляют вторую порцию NaH (1,35 г) и HCO₂Et (10,4 г), за которой через 30 мин следует третья порция HCO₂Et (непрореагировавший нитрил инертен в следующей стадии и может быть регенерирован на первой стадии очистки). Густую пасту перемешивают в течение ночи и дают охладиться до комнатной температуры. Летучее вещество выпаривают при пониженном давлении, оставшуюся бледно-желтую корку растворяют в минимальном объеме холодной воды (около 150 мл) при 0^oC. Раствор доводят до pH 6,0 добавлением 6N HCl и экстрагируют с помощью CHCl₃ (3 x 100 мл). Экстракт промывают водой, высушивают над Na₂SO₄ и выпаривают в вакууме до густого янтарного масла. Этот сырой продукт используют в следующей реакции без дальнейшей очистки.

Пример 161. Гидрохлорид метилового эфира глицина (9,35 г, 74,47 ммоль) и безводный ацетат натрия (6,10 г, 74,47 ммоль) добавляют к сырому формильному производному примера 160 (8,9 г, 49,65 ммоль) в смеси MeOH/H₂O (4:1,250 мл). Спустя 24 ч MeOH выпаривают в вакууме, смесь воды и масла экстрагируют с помощью CHCl₃. Слой CHCl₃ сушат (Na₂SO₄) и выпаривают, получая янтарное масло, которое подают на колонку с силикагелем. Элюирование CHCl₃ дает два основных слоя: 3-циклогептилпропионитрил (использованный в качестве исходного вещества в предыдущей стадии); желаемый енамин, который перекристаллизовывают из смеси CHCl₃/Et₂O; выход 6,18 г, т.пл. 57-58^oC.

Пример 162. В атмосфере азота этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (4,01 г, 37,03 ммоль) добавляют по каплям к раствору енамина примера 161 (6,18 г, 24,69 ммоль) и DBN (9,19 г, 74,04 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (100 мл) с внешним охлаждением на ледяной бане. После перемешивания при 0^oC в течение 1 ч раствору дают постоять при комнатной температуре в течение ночи. После проверки хода реакции по TCX добавляют дополнительное количество ClCO₂Et (0,5 мл) и DBN (3,0 мл) для завершения реакции, раствору дают постоять в течение 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме, вязкий остаток очищают на короткой колонке с силикагелем (главная цель которой удаление менее мобильного DBN), получая N-защищенный пиррол, который используют для следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 163. К раствору N-защищенного пиррола примера 162 (7,8 г, 24,19 ммоль) в MeOH (100 мл) добавляют твердый Na₂CO₃ (6,41 г, 60,48 ммоль), реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч с отделением полученного деблокированного пиррола. Смесь выпаривают досуха, остаток тщательно растирают в порошок с водой (50 мл) для растворения неорганических веществ и экстрагируют с помощью CHCl₃ (3 x 100 мл). Экстракт сушат (Na₂SO₄) и выпаривают до получения вязкой смолы, которую очищают колоночной хроматографией, используя силикагель/CHCl₃; выход 4 г, т.пл. 88- 89^oC.

Пример 164. Бензоилизотиоцианат (1,5 г, 8,96 ммоль) добавляют по каплям к раствору деблокированного пиррола примера 163 (1,99 г, 7,95 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (50 мл). Спустя 1 ч при комнатной температуре раствор выпаривают и смолообразный остаток растворяют в Et₂O (100 мл) с почти немедленным отделением кристаллического твердого вещества. Маточник Et₂O нагревают до кипения и разбавляют равным объемом горячего циклогексана. При медленном охлаждении раствор дает дополнительное тиоуреидосоединение; выход 2,89 г (88% ), т.пл. 158-159^oC.

Пример 165. Йодистый метил (1,7 г, 11,96 ммоль) добавляют к раствору тиоуреидосоединения примера 164 (1,7 г, 4,1 ммоль) и DBN (0,56 г, 4,52 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (80 мл) при 0^oC. Раствор перемешивают при 0^oC в течение 15 мин, при температуре окружающей среды в течение 1 ч, затем выпаривают в вакууме. Раствор остатка в CHCl₃ хроматографируют на колонне с силикагелем с CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования, получая гомогенные фракции метилтиосоединения как промежуточного вещества.

Пример 166.

Раствор метилтиосоединения примера 165 (1,72 г, 4,02 ммоль) в 50 мл MeOH, который был насыщен NH₃ при 0^oC, нагревают при 90-95^oC в течение 24 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Содержимое охлажденной бомбы выпаривают в вакууме, получая смесь вещества (IVE), бензамида и побочного продукта, который является 2-метилтиопроизводным, в отличие от 2-аминосоединения (IVE). Смесь энергично перемешивают с приблизительно 75 мл Et₂O, нерастворимое белое твердое вещество отфильтровывают и промывают Et₂O. Фильтрат содержал большую часть бензамида и 2-метилтиосоединения. Раствор нерастворимого в Et₂O твердого вещества (0,850 г) в MeOH выпаривают с приблизительно 10 г силикагеля. Измельченный в порошок остаток наносят равномерно на верхнюю часть колонны с силикагелем, которую затем элюируют с помощью смеси CHCl₃/MeOH/HOAc (95:5:1), получая 2-метилтиопроизводное как побочный продукт и желаемое 2-аминосоединение (IVE). (IVE) продукт перекристаллизовывают при экстракции в кипящем изопропилацетате в аппарате Сокслета. Белые кристаллы собирают в три порции и высушивают в вакууме над P₂O₅ при 110^oC в течение 7 ч; выход 54% т.пл. более 300^oC (разл.).

Анализ для C₁₄H₂₀N₄O: вычислено: C 64,60; H 7,74; N 21,52; найдено: C 64,78; H 8,01; N 21,61.

Пример 167. Вещество примера 166 испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 105. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,030 мкМ, при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 0,840 мкМ.

Используя способ примера 97, из 1-бромнорборнана получают 3-(1-норборнанил)-пропионитрил, и из 2-бромнорборнана получают 3-(2-норборнанил)-пропионитрил (смесь 2-экз и 2-эндо). Следуя примерам 98-104, пропионитрилы превращают в вещества (IVF), (IVG) и (IVH).

Пример 169. Используя способ примера 97, 3-(1-бицикло[3.2.1]октанил)-пропионитрил, 3-(2-бицикло[3.2.1]октанил)-пропионитрил, 3-(3-бицикло[3.2.1] октанил)-пропионитрил и 3-(8-бицикло[3.2.1] октанил)-пропионитрил получают соответственно из 1-бромбицикло[3.2.1] октана, 2-бромбицикло[3.2.1]октана, 3-бромбицикло[3.2.1] октана и 8-бромбицикло[3.2.1] октана. Следуя примерам 98-104, пропионитрилы превращают в вещество (IVI) и родственные 2-бицикло[3.2.1]октанил-; 3-бицикло[3.2.1]октанил- и 8-бицикло[3.2.1]-октанилпроизводные.

Пример 170. Используя методику способа, описанного в D. Farcasiu, Synthesis, 615 (1972), 6-бицикло[3.2.1]октанкарбоксальдегид получают реакцией бицикло[3.2.1] октан-6-она с триметилсульфоксоний йодидом с образованием промежуточного эпоксида, который затем превращают в альдегид обработкой эфиратом трифторида бора. Следуя способу Netherlands Pat. 6, 610, 204, альдегид конденсируют с циануксусной кислотой при кипячении с обратным холодильником в растворе пиридин/толуол с каталитическим количеством ацетата аммония в течение 48-72 ч, получая соответствующий акрилонитрил. Акрилонитрил затем гидрируют, используя палладий-на-угле как катализатор, в метаноле, как описано Profitt et al. в J. Org. Chem. 40, 127, (1975), для получения 3-(6-бицикло[3.2.1] октанил)-пропионитрила. Следуя примерам 98-104, пропионитрил превращают в 6-бицикло[3.2.1]октанильное производное, аналогичное веществу (IVL).

Пример 171. Используя способ примера 97, 3-(1-бицикло[3.3.1]нонанил)-пропионитрил и 3-(3-бицикло[3.3.1]нонанил)-пропионитрил соответственно получают из 1-бромбицикло[3.3.1] нонана и 3-бромбицикло[3.3.1]нонана. Следуя примерам 98-104, пропионитрилы превращают в вещество (IVM) и родственное 3-бицикло[3.3.1]нонанилпроизводное.

Пример 172. Следуя способу примера 171, бицикло[3.3.1]нонан-9-он реагирует с образованием соответствующего альдегида, из которого получают соответствующий 3-замещенный пропионитрил, который затем превращают в 9-бицикло[3.3.1]нонанильное производное, аналогичное веществу (IVM).

Пример 173. Следуя способу примера 170, 2-бицикло[3.3.1]нонанкарбоксальдегид реагирует с образованием соответствующего 3-замещенного пропионитрила, который затем превращают в 2-бицикло[3.3.1]нонанильное производное, аналогичное веществу (IVM).

Пример 174. Используя способ примера 97, 3-(1-норадамантил) -пропионитрил получают из 1-бромнорадамантана и 3-(2-норадамантил)-пропионитрил получают из 2-бромнорадамантана. Следуя примерам 98-104, пропионитрил превращают в конечное вещество (IVN).

Пример 175. Следуя способу примера 170, 3-норадамантанкарбоксальдегид реагирует с образованием соответствующего 3-замещенного пропионитрила, который затем превращают в 3-норадамантильное производное, аналогичное веществу (IVN).

Пример 176. Следуя способу примера 170, норадамантан-7-он реагирует с образованием соответствующего альдегида, из которого получают соответствующий 3-замещенный пропионитрил, который затем превращают в 7-норадамантильное производное, аналогичное веществу (IVN).

Пример 177. Используя способ примера 97, 3-(1-бицикло[2.2.2]октанил)-пропионитрил получают из 1-бромбицикло[2.2.2]октана и 3-(2-бицикло[2.2.2]октанил)-пропионитрил получают из 2-бромбицикло[2.2.2]октана. Следуя примерам 98-104, пропионитрилы превращают в вещество (IVK) и аналогичное 2-бицикло[2.2.2]октанильное производное.

Пример 178. Используя способ примера 97, 3-(1-норборненил)пропионитрил получают из 1-бромнорборнена. Следуя примерам 98-104, пропионитрил превращают в вещество (IVI).

Пример 179. Следуя способу примера 170, 5-норборнен-2-карбоксальдегид (смесь 2-эндо и 2-экзо) реагирует с образованием соответствующего 3-замещенного пропионитрила, который затем превращают в вещество (IVJ).

Пример 180.

Приведенное выше промежуточное соединение получают в этом примере по методике способа Schiemenz G.P. Engelhard Н. (Chem. Ber. 1962, 95, 195).

Смесь циануксусной кислоты (25,38 г, 298,38 ммоль), 2,3,5-трихлорбензальдегида (25,0 г, 119,35 ммоль), ацетата аммония (500 мг), толуола (120 мл) и пиридина (65 мл) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 16 ч в колбе, снабженной ловушкой Дина-Старка и холодильником. Растворители выпаривают в вакууме, остаток экстрагируют с помощью CHCl₃, промывают его водой, высушивают (Na₂SO₄), выпаривают, получая сырой продукт, который очищают колоночной хроматографией с силикагелем, используя смесь гексан-EtOAc в качестве растворителя для элюирования. Выход 23,69 г (73%), т.пл. 90-91^oC.

Пример 181.

В этом примере получают упомянутое промежуточное соединение. К перемешиваемой смеси NaH (1,56 г, 65,05 ммоль) и этилового эфира муравьиной кислоты (14,78 г, 199,51 ммоль) в THF (100 мл) добавляют замещенный пентандинитрил примера 180 (10,17 г, 37,17 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота, полученную реакционную смесь перемешивают в течение 24 ч. Летучее вещество выпаривают в вакууме при комнатной температуре. Воду (50 мл) добавляют к остатку при 0-5^oC и раствор доводят до pH 5-6 20%-ной концентрации HCl (о/о). Тяжелое масло экстрагируют этилацетатом, промывают водой (1 x 100 мл) и высушивают (MgSO₄). Слой этилацетата выпаривают, получая красно-коричневое масло (11,0 г), которое используют в следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 182.

В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. Гидрохлорид метилового эфира глицина (8,17 г, 65,06 ммоль) и ацетат натрия (5,33 г, 65,06 ммоль) добавляют к раствору сырого формильного соединения примера 181 (11,0 г) в смеси MeOH (80 мл) и воды (20 мл), полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 22 ч. После испарения растворителя при комнатной температуре остаток экстрагируют этилацетатом. Промытый (H₂O) и высушенный (MgSO₄) органический слой выпаривают, получая масло. Испарительная колоночная хроматография (силикагель), использующая CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования, дает чистый желаемый енамин в виде смеси цис-транс изомеров, которые перекристаллизовывают из MeOH; выход 10,41 г (75%), т.пл. 142-143^oC.

Пример 183.

В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. Раствор енамина примера 182 (10,0 г, 26,84 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (100 мл) охлаждают до 0^oC и обрабатывают 1,5-диазабицикло[4.3.0] нон-5-еном (10,53 г, 84,79 ммоль) в атмосфере азота, за которым следует этиловый эфир хлормуравьиной кислоты (6,90 г, 63,57 ммоль). Раствор перемешивают при 0^oC в течение 1 ч, затем при комнатной температуре в течение 48 ч. Летучие вещества испаряют в вакууме, получая вязкую темную смолу, которую очищают испарительной колоночной хроматографией над силикагелем, используя CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования. Все фракции, содержащие желаемый N-защищенный пиррол, объединяют и выпаривают, получая пенистое, легкое, бледно-желтое вещество, которое перемешивают в MeOH (100 мл), получая кристаллическое вещество, которое перекристаллизовывают из CHCl₃-MeOH; выход 8,92 г (74,7%), т.пл. 160-161^oC.

Пример 184.

В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. Суспензию N-защищенного пиррола примера 183 (8,6 г, 19,34 ммоль) в MeOH (300 мл) обрабатывают Na₂CO₃ (5,12 г, 48,34 ммоль), реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 17 ч с отделением деблокированного пиррола в течение первого часа. Твердый карбонат натрия удаляют фильтрованием и хорошо промывают MeOH. Фильтрат уменьшают до объема 25 мл, выдерживают в холодильнике в течение 1 ч, получая 5,23 г кристаллического продукта. Дальнейшая концентрация маточного раствора дает дополнительные 0,14 г чистого продукта; общий выход 6,45 г (89,5%), т.пл. 178-181^oC.

Пример 185.

В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. К суспензии пиррола примера 184 (5,83 г, 15,64 ммоль) в дихлорметане (100 мл) добавляют бензоилизотиоцианат (2,88 г, 17,64 ммоль) при комнатной температуре под азотом. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин с отделением желаемого тиоуреидосоединения. Добавляют дополнительное количество бензоилизотиоцианата (0,5 мл) и снова перемешивают в течение 30 мин. Растворитель выпаривают досуха и легкий желтый остаток растирают в порошок с метанолом. Белое кристаллическое вещество выделяют фильтрованием и перекристаллизовывают из смеси хлороформ - эфир, получая требуемое тиоуреидопроизводное в виде аналитически чистого образца; выход 7,71 г (92%), т.пл. 210-211^oC.

Пример 186.

В этом примере получают приведенное промежуточное вещество. Раствор тиоуреидопроизводного примера 185 (6,75 г, 12,6 ммоль) и 1,5-диазабицикло[4.3.0] нон-5-ена (1,76 г, 14,20 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (200 мл) охлаждают до 0^oC и обрабатывают йодистым метилом (5,20 г, 36,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0^oC в течение 10 мин и затем в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают при комнатной температуре, остаток экстрагируют CHCl₃, промывают водой (2 x 50 мл), сушат (Na₂SO₄) и выпаривают, получая стекловидную пену (6,95 г), которую используют в следующей стадии без очистки.

Пример 187.

В этом примере получают приведенные вещества A и B. Вещество A вещество настоящего изобретения, вещество B промежуточное соединение. Раствор метилтиопроизводного промежуточного вещества примера 186 (6,90 г, 12,54 ммоль) в MeOH (200 мл) насыщают при 0^oC аммиаком и нагревают при 100^oC в течение 20 ч в футерованной стеклянными плитками бомбе из нержавеющей стали. Реакционную смесь доводят до комнатной температуры и растворитель выпаривают при комнатной температуре. Очистка сырой смеси испарительной колоночной хроматографией над силикагелем, используя CHCl₃ в качестве растворителя для элюирования, дает 8B (1,1 г, 21%), т.пл. 290-291^oC, затем CHCl₃-MeOH (95:5) дает чистый 8A (2,76 г, 57,5%), т.пл. 284-285^oC.

MS (EI) 381 (M⁺), 346 (381-Cl)⁺, 341 (381-CH₂CN)⁺; ИК (KBr) 3323, 3180, 3162 2255, 1685, 1630, 1604, 1558, 1525, 1414, 1393; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 3,27-3,50 (m, 2H, CH₂CN), 4,86 (t, 1H, CH-CH₂CN), 5,90 (s, 2H, NH₂), 7,15 (d, J= 2 Hz, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,57 (d, J=1,5 Hz, ароматич. CH), 7,79 (d, J= 1,7 Hz, 1H, ароматич. CH), 10,50 (s, 1H, NH-CO), 11,58 (s, 1H, пиррольное кольцо NH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₁₀Cl₃N₅O: C 47,08; H 2,63; N 18,30; найдено: C 46,92; H 2,94; N 17,05.

Пример 188. Вещество изобретения примера 187 испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Проводят ферментативный анализ пуриннуклеозидфосфорилазы (PNP), в котором определяют PNP активность (IC₅₀) для вещества (8A) посредством радиохимического измерения образования [¹⁴C]-гипоксантина из [¹⁴C]-инозина (Biomedicine, 1980, 33, 39), используя селезенку теленка в качестве источника энзима. При 1 mM фосфата IC₅₀ составляет 0,64 мкМ, при 50 mM фосфата IC₅₀ составляет 10 мкМ.

Пример 189.

Следуя способу, приведенному в примерах 180-187, 3-(3-хлорфенил)-3-(2-амино-4-оксо-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил)пропаннитрил получают, используя 3-(3-хлорфенил)-пентандинитрил в качестве исходного вещества; выход 54,5% т.пл. 157-158^oC.

MS(FAB), m/z 314(M+H)⁺, 273 (313-CH₂CN)⁺; ИК (KBr) 3313, 3166, 3148, 2920, 2240, 1682, 1625, 1596, 1573, 1525; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 3,24-3,48 (m, 2H, CH₂CN), 4,41 (t, 1H, CH-CH₂CN), 5,88 (s, 2H, NH₂), 7,13 (d, J=3,5 Hz, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,20-7,50 (m, 4H, ароматич. CH), 10,44 (s, 1H, NHCO), 11,45 (d, 1H, пиррольное кольцо NH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₁₂ClN₅O0,2MeOH: C 57,02; H 4,03; N 21,87; найдено: C 57,03; H 3,95; N 21,88.

Пример 190. Следуя способу, приведенному в примерах 180-187, могут быть получены следующие группы веществ (1-9) общей формулы:

3-Aрил-3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d]-пиримидин-7-ил)пропаннитрил
Где Ar имеет одно из следующих значений: (1) фенил, 2,3-дихлорфенил, 3-метилфенил и 3-метоксифенил; (2) тиенил (2- и 3-); (3) фуранил (2- и 3-); (4) пиридинил (2-, 3- и 4-); (5) пирролил (2- и 3-); (6) тиазолил (2-, 4- и 5-); (7) 2-пиразинил; (8) пиридазинил (3- и 4-); (9) пиразолил.

Пример 191. Следуя способу, приведенному в примерах 180-187, могут быть получены следующие вещества 10-14 и 21, исходя из соответственно замещенного пентандинитрила. Вещества 15-20 и 22 получают из соответствующих ненасыщенных Ar аналогов в примере 190. В этом способе нитрильная группа в ненасыщенном аналоге превращается в амидную группу гидролизом, катализируемым кислотой или основанием, затем ненасыщенную Ar группу переводят в насыщенную R₂ группу с помощью каталитического гидрирования, за которым следует вновь превращение амида в нитрил с помощью известных способов дегидратации.

3-(Замещенный)-3-(2-амино-4-оксо-3H, 5H-пирроло[3,2-d] -пиримидин-7-ил)пропаннитрил
где R₂ означает: (10) 1-адамантил; (11) 2-адамантил; (12) циклогексил; (13) циклогептил; (14) циклопентил; (15) тетрагидрофуранил; (16) тетрагидротиенил; (17) тетрагидропиранил; (18) пиразолидинил; (19) тиазолидинил; (20) пиперазинил; (21) морфолинил; (22) гексагидропиридазинил.

Пример 192.

В этом примере получают приведенное вещество 3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил)-3-фенилпропаннитрил. Раствор вещества A, полученного в примере 187 (2,0 г, 5,22 ммоль), в горячем этаноле (250 мл) и диметилформамиде (DMF) (150 мл) гидрируют над 30%-ным Pd/C катализатором (1,0 г) в присутствии триэтиламина (2,64 г, 5,0 эквивалентов) при атмосферном давлении. Спустя 5 ч реакция завершается и катализатор отфильтровывают под давлением N₂. Твердое вещество, полученное после испарения фильтрата, растирают в порошок, разрушают ультразвуком с H₂O и высушивают; выход 1,28 г (88%), т.пл. 168-170^oC.

MS (FAB), m/z280 (M+H)⁺, 239 (280-CH₂CN)⁺; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 3,20-3,46 (m, 2H, CH₂CN), 4,37 (t, 1H, CHCH₂CN), 5,86 (s, 2H, NH₂), 7,05 (d, J=1,5 Hz, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,21 (t, 1H, ароматич. CH), 7,30 (t, 2H, ароматич. CH), 7,39 (d, J=7,5 Hz, 2H, ароматич. CH), 10,41 (s, 1H, NHCO), 11,40 (s, 1H, пиррол NH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₁₃N₅O: C 64,50; H 4,69; N 25,07; найдено: C 64,68; H 4,57; N 25,19.

Пример 193. Вещество, полученное в примере 192, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,023 мкМ, а при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 4,7 мкМ.

Пример 194.

В этом примере получают приведенное вещество 3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил)-3- фенилпропановую кислоту. Раствор вещества, полученного в примере 192 (0,200 г, 0,72 ммоль) в 6N HCl (3,0 мл) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 18 ч. Растворитель выпаривают в вакууме, остаток растирают в порошок с H₂O (6 мл), доводят до pH 10 концентрации гидроксидом аммония. Нерастворимое вещество собирают фильтрованием, фильтрат повторно доводят до pH 6,8. Белое вещество, которое осаждается, собирают, промывают водой и высушивают; выход 0,19 г (89%), т. пл. 290^oC (разл.).

MS (FAB), m/z 299 (M+H)⁺; ИК (KBr) 3187, 3181, 1688, 1636, 1557, 1524, 1495, 1398, 1376; UV 0,1 N HCl 234 (17,15), 273 (15,05); pH 7 231 (20,05), 272 (10,72); 0,1 N NaOH 227 (22,3), 264 (7,29), 288 (6,66); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 2,86-3,0 (dd, 1H, -CHH-), 3,02-3,14 (dd, 1H, -CHH-), 4,47 (t, 1H, CH-CH₂CN), 5,85 (s, 2H, NH₂), 6,95 (d, J=3 Hz, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,14 (t, 1H, ароматич. CH), 7,24 (t, 2H, ароматич. CH), 7,33 (d, J 7,0 Hz, 2H, ароматич. CH), 10,38 (плечо, 1H, NHCO), 11,25 (плечо, 1H, пиррольное кольцо NH), 11,1-12,1 (очень широкий, виден в интеграле, 1H, COOH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₁₄N₄O₃0,3H₂O: C 59,38; H 4,85; N 18,45; найдено: C 59,42; H 5,04; N 18,56.

Пример 195. Вещество, полученное в примере 194, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,012 мкМ, а при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 0,19 мкМ.

Пример 196.

В этом примере получают приведенное вещество 3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил)-3- фенилпропанамид. Раствор вещества, полученного в примере 192 (0,200 г, 0,72 ммоль) в концентрированной H₂SO₄ (0,5 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч, затем выливают на дробленый лед (5,0 г) и доводят до pH 6,8 посредством концентрации NH₄OH. Осажденное твердое вещество собирают, промывают водой и высушивают; выход 0,180 г, т.пл. 199-201^oC (разл.).

MS(FAB), m/z 298 (M+H)⁺; ИК (KBr) 3324, 3259, 3185, 3178, 1670, 1626, 1561, 1524, 1411; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 2,60 (dd, 1H, -CHH-), 2,86 (dd, 1H, -CHH-), 4,52 (t, 1H, CH-CH₂, 5,98 (плечо, 2H, NH₂, 6,67 (s, 2H, CONH₂), 6,99 (d, J 2,5 Hz, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,06-7,31 (m, 5H, ароматич. CH), 10,60 (очень широкий, 1H, NHCO), 11,37 (плечо, 1H, пиррольное кольцо NH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₁₅N₅O₂0,8H₂O: C 57,80; H 5,36; N 22,46; найдено: C 57,89; H 5,18; N 22,36.

Пример 197. Вещество, полученное в примере 196, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,20 мкМ, при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 6,6 мкМ.

Пример 198.

В этом примере получают вышеприведенное вещество 3-(2-амино-4-оксо-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил)-3-(3-хлорфенил)пропановую кислоту, метиловый эфир. Хлористый тионил (0,2 г, 0,17 ммоль) добавляют к перемешиваемому метанолу (4,0 мл) при 0^oC. Вещество, полученное в примере 194 (0,2 г, 0,67 ммоль), добавляют, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель удаляют на водном аспираторе (30^oC) и вакуумном насосе (лиофилизация), получая полутвердую массу, которую очищают на колонне с силикагелем, используя CHCl₃-MeOH в качестве растворителя для элюирования; выход 0,1 г, т.пл. 302-303^oC (разл.)
MS (FAB), m/z 347 (M+H), 273 (346-CH₂CO₂CH₃)⁺; UV 0,1 N HCl 220 (sh), 232 (sh), 273 (15,1), pH 7 буффер 232 (18,1), 270 (7,4), 0,1 N NaOH 262 (6,5), 288 (5,9); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 3,15 (dd, J, 2H, CH₂CO₂CH₃), 3,48 (s, 3H, CH₂CH₃), 4,48 (t, 1H, -CHCH₂-), 5,83 (s, 2, NH₂), 7,06 (d, J, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,19, 7,26, 7,39, (комплекс m, 4H, хлорфенил CH), 10,36 (s, 1H, 3-NH), 11,30 (d, J, 1H, 5NH).

Анализ: вычислено для C₁₆H₁₅ClN₄O₃0,3CH₃OH: C 54,93; H 4,58; N 15,72; найдено: C 54,99; H 4,78; N 15,85.

Пример 199. Вещество, полученное в примере 198, испытывают на ферментативную ингибирующую активность. Обнаружена значительная активность (IC₅₀ 55 nM).

Пример 200.

В этом примере получают 3-(2-амино-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-циклогексанпропановую кислоту. Раствор вещества, полученного в примере 194 (83 мг, 0,28 ммоль) в трифторуксусной кислоте (TFA) (15 мл) гидрируют с помощью PtO₂ (83 мг) при давлении 60 фунтов/дюйм² в течение 24 ч. Катализатор отфильтровывают через слой цеолита, фильтрат выпаривают при 25^oC. Остаток суспендируют в воде (8 мл), доводят до pH 8,5 концентрированной NH₄OH и фильтруют через Whatman фильтровальную бумагу для удаления примесей коричневого цвета. Бесцветный фильтрат доводят до pH 6,8, осажденное вещество фильтруют, промывают водой и высушивают; выход 65 мг (77%), т. пл. более 300^oC.

MS(FAB), m/z 305 (M+H)⁺; ИК (KBr) 3330, 3194, 2926, 2852, 1683, 1639, 1557, 1522, 1401, 1377; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 0,85, 1,06, 1,60 (m, 11H, циклогексил H), 2,56 (m, 2H, CH₂CO₂H), 3,05 (m, 1H, CH-CH₂), 5,79 (s, 2H, NH₂), 6,89 (d, J 2,5 Hz, 1H, пиррольное кольцо CH), 10,31 (плечо, 1H, пиррол NH), 11,16 (s, 1H, NHCO), 11,76 (плечо, 1H, пиррол NH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₂₀N₄O1,75H₂O: C 53,64; H 7,05; N 16,68; найдено: C 54,03; H 6,71; N 16,30.

Пример 201. Вещество, полученное в примере 200, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,097 мкМ, а при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 1,0 мкМ.

Пример 202. Получают вещество изобретения, в котором R₂-CH₂OPO(OH)₂. Нитрильную группу вещества примера 192 превращают в соответствующий амид посредством обработки серной кислотой. Используя реакцию дегидратации по Гофману, амид превращают в соответствующий амин, который затем переводят в соответствующую пиридиниевую соль, используя пиррилиевую соль. Превращение соли в соответствующую соль галоидоводородной кислоты достигают, используя бромид натрия, которую затем превращают в эфир фосфиновой кислоты, используя триэтилфосфит. Гидролиз эфира с использованием триметилсилилбромида дает соответствующую фосфиновую кислоту.

Пример 203. В этом примере получают вещество изобретения посредством изменения числа углеродных атомов. Нитрильную группу вещества примера 192 переводят в соответствующий альдегид, который затем превращают в соответствующий спирт. Используя трехбромистый фосфор, спирт превращают в соответствующий алкилбромид, который затем превращают в ацетонитрил, используя цианид калия.

Пример 204. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R₂ CH₂OP(O)(OH)₂. Спирт, полученный в качестве промежуточного соединения в предыдущем примере, превращают в соответствующий диэтилфосфонометиловый эфир, используя диэтилхлорметилфосфонат. Удаление этильной группы эфира выполняют, используя триметилсилилбромид, с получением фосфиновой кислоты.

Пример 205. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R₂ CH₂NHSO₂NH₂. Нитрильную группу вещества примера 192 восстанавливают до амина, используя стандартное каталитическое гидрирование с помощью палладия в кислой среде (обычно 0,01N до 1N HCl), который затем превращают в сульфамид, используя сульфамоилхлорид.

Пример 206. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R₂ CH₂NHCH₂COOH, путем реакции промежуточного метиламиносоединения, полученного в предыдущем примере, с хлоруксусной кислотой.

Пример 207. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R₂ CH₂NHPO(OH)₂, реакцией промежуточного производного метиламина, полученного в примере 206, с диэтилхлорметилфосфонатом и обработкой полученного продукта с триметилсилилбромидом.

Пример 208. В этом примере получают соединение изобретения, в котором R₃ OSO₂NH₂, реакцией промежуточного спирта, полученного в примере 203, с сульфамоилхлоридом.

Пример 209. В этом примере получают соединение изобретения, в котором R¹ Н, R² фенил, R³ CH₂CN. Используют методику способа, описанного в Mu Ill Lim. et al. J. Org. Chem. vol.44, N 22, 3826 (1979). Вещество примера 184 и диметилацеталь диметилформамида взаимодействуют при комнатной температуре в течение 2 дней и затем выпаривают досуха в вакууме. Остаток кристаллизуется, давая чистое производное N-(диметиламино)метилена, которое циклизуют в присутствии насыщенного метанольного раствора аммиака, получая желаемый конечный продукт.

Пример 210. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R¹ OCH₃, R² фенил, R³ CH₂CN. Используя вещество B примера 187, S-метильную группу окисляют до метилсульфона, который затем превращают в конечное метоксисоединение обработкой метоксидом натрия в метаноле.

Пример 211. В этом примере получают соединение изобретения, в котором R² тетразол. Вещество примера 192 обрабатывают азидом лития в присутствии хлорида аммония в качестве катализатора в диметилформамиде (DMF) при 100^oC, получая желаемый тетразол.

Пример 212. В этом примере получают соединение изобретения, в котором R² триазол. Вещество примера 198 обрабатывают гидратом гидразина, получая соответствующий гидразид, который затем обрабатывают иминоэфиром, получая желаемый триазол.

Пример 213. Вещество, полученное в примере 189, испытывают на ферментативную ингибирующую активность как в примере 188. При 1 mM фосфата IC₅₀ равно 0,012 мкМ, а при 50 mM фосфата IC₅₀ равно 2,0 мкМ.

Пример 214. В этом примере получают вещество изобретения, в котором R₃ в приведенной общей формуле CNH(NH₂). Вещество A из примера 187 взаимодействует с метоксидом натрия в метаноле при комнатной температуре в течение примерно 2 дней, образуя промежуточное вещество метил-имидат. Промежуточное вещество затем реагирует с аммиаком в метаноле, образуя соответствующий имидин.

Пример 215. 2-амино-7-(3-хлорФенил-3-гидроксипропил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он

Размешанную суспензию метилового сложного эфира примера 198 (6,00 г, 17,3 ммоль) и сухого (NH₄)₂SO₄ (100 мг) в гексаметилдисилазане (400 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 8 ч, одновременно обеспечивая защиту от атмосферной влаги. Прозрачный раствор уменьшают в объеме до приблизительно половины его первоначального объема путем дистиллирования при атмосферном давлении, а оставшиеся гексаметилдисалазаны выпаривают в вакууме, получая триметилсилилпроизводное в виде вязкой смолы, которую затем высушивают над P₂O₅. Сырой продукт затем используют в последующей реакции без дальнейшей очистки: MS (FAB), m/z 491 (M+H)⁺.

Раствор LiAlH₄ в тетрагидрофуране (26 мл 1М, 26 ммолm) добавляют по каплям в раствор триметилсилилированного сложного эфира (предположительно 17,3 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (200 мл). После размешивания в течение 1 ч избыток гидрида разрушают путем добавления EtOAc (100 мл) и все растворители выпаривают в вакууме. В размешанную суспензию остатка в холодной H₂O (200 мл) добавляют разведенную HCl до тех пор, пока pH не достигнет 1 и по истечении 15 мин pH доводят до 7 с помощью раствора NaOH. Твердое вещество собирают фильтрованием, промывают холодной H₂O, слегка высушивают в вакууме, затем порошкуют путем размешивания со смесью 1:1 (100 мл) циклогексана и Et₂O. Твердое вещество отфильтровывают и частично высушивают в воронке под потоком N₂. Раствор твердого вещества в горячем MeOH выпаривают досуха с силикагелем (отверстия 230-400 меш, 50 г), смесь осторожно наносят на верх колонны с силикагелем, затем элюируют с помощью смеси CHCl₃/MeOH в соотношении 17: 3 и 4:1, получая желаемый спирт (4,65 г, 84%). С помощью двух перекристаллизаций из H₂O/EtOH в соотношении 2:1 получают белые кристаллы, которые затем высушивают в вакууме над P₂O₅ в течение 30 ч при 110^oC; выход 3,36 г (61%).

MS(FAB), m/z319 (M+H)⁺; 321 (Cl изотопный пик 319)⁺, 301 (318-OH)⁺, 151 (B + 2H)⁺; UV 0,1 NHCl 233 (17,9), 274 (15,7), pH 7 буффер 230 (22,3), 272 (10,6), 0,1 N NaOH 266 (7,3), 288 (6,7); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 2,07, 2,21 (2 секстета 1H каждый, -CHCH₂CH₂OH), 3,29 (m, 1H, -CH₂OH), 4,17 (t, 1H, -CHCH₂CH₂OH), 4,45 (t, 1H, -CH₂OH), 5,79 (s, 2H, NH₂), 7,09 (d, J, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,18, 7,27, 7,34 (комплекс m, 4H, хлорфенил CH), 10,36 (s, 1H, 3-NH), 11,29 (d,J, 1H, 5-NH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₁₅ClN₄O₂: C 56,52; H 4,74; N 17,58; найдено: C 56,51; H 4,84; N 17,49.

Пример 216. 2-амино-7-(1-циклогексил-3-гидроксипропил)-3H, 5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он

Раствор спирта из примера 215 (100 мг, 0,314 ммоль) в CF₃COOH (20 мл) гидрогенизируют путем размешивания с платиновым катализатором (100 мг PtO₂) в аппарате Парра при первоначальном давлении в 60 фунтов/дюйм. Катализатор удаляют путем фильтрации через тонкий слой цеолита под N₂. Фильтрат выпаривают, остаток дважды растворяют в MeOH (5,0 мл), а раствор выпаривают. Мутному раствору остатка в H₂O/конц. NH₄OH (20 мл, 1:1) дают постоять в течение 4 ч при комнатной температуре, прежде чем подвергнуть его фильтрованию и выпариванию досуха. Раствор остатка в H₂O (30 мл), содержащий 2 капли 1N NaOH нейтрализуют 1N HCl и охлаждают до 5^oC. Осадившееся белое твердое вещество собирают фильтрацией, промывают холодной водой и высушивают в вакууме над P₂O₅ при температуре 110^oC в течение 6 ч; выход 63 мг (67%), т.пл. 181-186^oC.

MS(FAB), m/z 291 (M+H)⁺; UV 0,1 N HCl 236 (16,2), 275 (14,9), pH 7 буффер 231 (18,8), 274 (12,1), 0,1 N NaOH 230 (19,6), 268 (7,8), 288 (плечо); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 0,85, 1,08, 1,59 (комплексные мультиплеты, 11H, циклогексил CH), 1,78 (m, 2Н, -CHCH₂CH₂OH), 2,62 (m, 1H, -CHCH₂CH₂OH), 3,14, 3,17, 3,24 (комплексные мультиплеты, 2Н, -CH₂OH), 4,25 (уш. 1H, -CH₂OH), 5,82 (s, 2Н, -NH₂, 6,86 (d, J, 1H, H-6), 10,35 (уш. 1H, 3-NH), 11,17 (d, J, 1H, 5-NH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₂₂N₄O₂0,5H₂O: C 60,18; H 7,74; N 18,71; найдено: C 60,09; H 7,68; N 18,73.

Пример 217. 2-Амино-7-[2-карбокси-1-(3-хлорфенил)этил] -3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он

2-Амино-7-[2-циано-1-(3-хлорфенил)этил] -3H, 5H-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-он (20 г, 63,75 ммоль) гидролизуют до получения соответствующей кислоты с помощью способа, описанного в примере 194. Выход: 18 г (84,9%), т.пл. 295-296^oC.

MS(FAB), m/z 333 (M+H)⁺; ИК(KBr) 3182, 3170, 1686, 1639, 1596, 1572, 1525, 1477, 1402, 1377; UV 0,1 N HCl 235 (17,2), 273 (15,42); pH 7 233 (20,2), 272 (1058), 0,1 N NaOH 231 (20,9), 263 (7,2), 288 (6,67); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 2,96 (m, 2H, CH₂CN), 4,48 (t, 1H, CH-CH₂CN), 6,06 (уш. 2H, NH₂), 7,11 (d, J 2,6 Hz, 1H, пиррольное кольцо CH), 7,21 (d, J 8 Hz, 1H, ароматич. CH), 7,25-7,46 (m, 3H, ароматич. CH), 10,3-11,0 (очень широкий, виден в интеграле, 1H, NH или COOH), 10,42 (уш. 1H, пиррольное кольцо NH), 11,7-12,3 (очень широкий, виден в интеграле, 1H, NH или COOH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₁₄N₄O₃0,3H₂O: C 59,38; H 4,85; найдено: C 59,42; H 5,04; N 18,56.

Пример 218. 7-[2-циано-1-(3-хлорфенил)этил]-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-он

К раствору 3-(2-метилтио-4-оксо-3H,5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)-3-(3-хлорфенил)пропаннитрила (1,0 г) в этаноле (100 мл) добавляют 30% Pd/C и образовавшуюся суспензию кипятят с обратным холодильником в течение нескольких минут. Затем при постоянном помешивании добавляют гидрат гидразина (300 мл), реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 дней. Затем добавляют дополнительные порции гидрата гидразина (300 мл) и Pd/C (0,5 г) и реакционную смесь кипятят с обратным холодильником еще 4 дня. Катализатор удаляют фильтрацией, фильтрат уменьшают в объеме до 75 мл, фильтруют и выпаривают, получая желаемый продукт в виде белого твердого вещества; выход 0,82 г (94,7%); т.пл. 230^oC.

MS(FAB), 299 (M+1)⁺; ИК (KBr) 3166, 3155, 3150, 3142, 3133, 3093, 2248, 1673, 1595, 1414; UV (0,1N HCl), 237 (27,8); pH 7; 262(9,9), 233(31,l); 0,1N NaOH, 268(8,9); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 3,3-3,52 (m, CH₂CN), 4,6 (t, 1H, CHCH₂-CN), 7,24-7,56 (m, ароматич. CH и H-6), 7,84 (s, H-2), 11,95 (s, NHCO), 12,11 (s, пиррол NH).

Анализ: вычислено для C₁₅H₁₁ClN₄O: C 60,31; H 3,71; N 18,75; найдено: C 60,19; H 3,92; N 18,41.

IC₅₀ для PNP 10 nM.

В таблице приведены данные по ингибированию пролиферации Т-лимфоцитов ^a.

^aCCRF-CEM лейкемические Т-лимфоциты.

^bКонцентрация, необходимая для ингибирования пролиферации 50% клеток по сравнению с необработанными клетками контрольных опытов.

Вышеуказанные соединения не были способны ингибировать пролиферацию B-лимфоцитов в концентрации 100 мкМ, тем самым демонстрируя присущую им селективность по отношению к Т-лимфоцитам.

Формула изобретения

1. Производные 2-амино-7-(chr₂R₃)-3H,5H- пирроло[3,2-d]пиримидин-4-она формулы

где R₁ Н или NH₂;
R₂ насыщенный пятичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома серу или кислород, или шестичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома N, и которые могут быть необязательно замещены С₁ С₄-алкокси, трифторметилом или галогеном, С₆ - С₁₀-циклоалкил, незамещенный или галоидзамещенный фенил;
R₃ H, (CH₂)_nCN, (CH₂)_nCO₂H, (CH₂)_nCONH₂, CO₂CH₃, (CH₂)_nCO₂CH₃ или (CH₂)_nOH, где n 1-4, или R₂ и R₃ вместе с CH-группой, к которой они присоединены, образуют циклогексил- или циклогексенильную группу.

2. Соединение по п. 1, где chr₂R₃ образуют вместе циклогексил-или циклогексенильную группу.

3. Соединение по п. 1, где R₁ NH₂.

4. Соединение по п. 1, где R₂ фенил.

5. Соединение по п. 1, где R₃ CH₂CN, CH₂COOH или CH₂CONH₂.

6. Соединение по п. 1, где R₂ возможно замещенные С₁ - С₄-алкокси, галогеном или трифторметилом 3-пиперидинил, 2-тетрагидрофуранил, 2-тетрагидротиенил, 3-, 4-пиридинил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, 2-адамантил, фенил, 3-хлорфенил, 2,3,5-трихлорфенил.

7. Способ селективного ингибирования пролиферации Т-лимфоцитов млекопитающего и не оказывающий воздействия на B-лимфоциты, отличающийся тем, что млекопитающему вводят соединения по любому из пп. 1 6 в эффективном количестве.

8. Способ получения производных 2-амино-7-(chr₂R₃)-3Н,5Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-4-она формулы

где R₁ NH₂;
R₂ фенил, незамещенный или замещенный галогеном, или циклогексил;
R₃ CH₂CN,
отличающийся тем, что осуществляют следующие последовательные стадии: а) реакцию соответствующего R₂-замещенного циклического альдегида с циануксусной кислотой в присутствии ацетата аммония с получением 3(R₂)-замещенного пентандинитрила, б) реакцию полученного 3(R₂)-замещенного пентандинитрила с алкиловым эфиром муравьиной кислоты в присутствии отнования с получением 3(R₂)-2-формилпентандинитрила, в) последний взаимодействует с гидрохлоридом метилового эфира глицина в присутствии ацетата натрия или аммония с получением метил-N-[(3(R₂)-2,4 -дициано)-2-бутенил]-глицина, г) полученный при этом метил N -[(3(R₂)-2,4-дициано)-2-бутенил]-глицин взаимодействует с алкиловым эфиром хлоруксусной кислоты в присутствии 1,5-диазабицикло [4.3.0]нон-5-ена или 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-ена с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)- 1-этил-1Н-пиррол-1,2-дикарбоксилата, д) полученный метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)этил)-1-этил-1Н-пиррол-1,2 -дикарбоксилат обрабатывают основанием с получением метил-3-амино-4- (2-циано-1(R₂)этил)-1Н-пирроло-2-карбоксилата, е) последний подвергают взаимодействию с бензоилизотиоцианатом с получением N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R₂)-этил) -2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил] тиомочевины, ж) полученную N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил -1Н-пиррол-3-ил] тиомочевину алкилируют галоидным алкилом с получением N-бензоил-N'-[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н -пиррол-3-ил]-S-метилтиомочевины, з) затем N-бензоил-N' -[4-(2-циано-1(R₂)-этил)-2-метоксикарбонил-1Н-пиррол-3-ил] -S -метилтиомочевину обрабатывают метанольным или этанольным раствором аммиака с получением смеси 3(R₂)-3-[2-амино-4-оксо-3Н, 5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил]пропаннитрила и 3(R₂)-3 -[2-метилмеркапто-4-оксо-3Н,5Н-пиролло[3,2-d]пиримидин-7-ил] -пропаннитрила.

9. Способ по п. 8, где R₂ фенил.

10. Способ получения производных 7-(chr₂R₃) -3Н,5Н-пиррило[3,2-d]пиримидин-4-она формулы I

где R₁ H;
R₂ фенил, незамещенный или замещенный галоидом, или циклогексил;
R₃ CH₂CN,
отличающийся тем, что осуществляют следующие последовательные стадии: а) реакцию соответствующего циклического альдегида с циануксусной кислотой в присутствии ацетата аммония с получением 3(R₂)-замещенного пентандинитрила, б) реакцию полученного 3(R₂)-пентандинитрила с алкиловым эфиром муравьиной кислоты в присутствии основания с получением 3(R₂)- 2-формилпентандинитрила, в) последний подвергают взаимодействию с гидрохлоридом метилового эфира глицина в присутствии ацетата натрия или аммония с получением метил-N-[(3(R₂)-2,4-дициано) -2-бутенил] глицина, г) полученный при этом метил -N-[(3(R₂)2,4-дициано)-2-бутенил] глицин подвергают взаимодействию с алкиловым эфиром хлоруксусной кислоты в присутствии 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ена или 1,8-диазабицикло[5.4.0] ундек-7-ена с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂) -этил)-1-этил-1Н-пиррол-1,2-дикарбоксилата, д) метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-1-этил-1Н-пиррол -1,2-дикарбоксилат обрабатывают основанием с получением метил-3-амино-4-(2-циано-1(R₂) -этил)-1Н-пиррол-2-карбоксилата, е) затем метил-3-амино-4- (2-цикло-1(R₂)этил)-1Н-пирроло-2-карбоксилат подвергают взамиодействию с диметилацеталем диметилформамида с получением метил-4-(2-циано-1(R₂)-этил)-3-[N-(диметиламинометилен)амино] - 1Н-пирроло-2-карбоксилата, и ж) метил-4-(2-циано-1(R₂) этил)-3-[N-(диметиламинометилен)амино] -1Н-пирроло-2-карбоксилат обрабатывают метанольным раствором аммиака с получением 3(R₂)3- [4-оксо-3Н,5Н-пирроло[3,2-d] пиримидин-7-ил]пропаннитрила.

Приоритет по признакам:
31.10.89 N 429,097 соединения по п.1, где R₂ необязательно замещенная гетероалициклическая группа, N 429,098 соединения по п. 1, где R₂ необязательно замещенный циклогексенил или циклогексил, N 429,100 соединения по п. 1, где R₂ необязательно замещенный пиридинил, N 429,099 соединения по п. 1, где R₂ необязательно замещенная алициклическая группа;
29.11.89 соединения по п. 1, где R₂ необязательно замещенная циклическая группа, необязательно содержащая гетероатом, R₃ водород, CO₂H, CH₂CONH₂, CO₂CH₃, CH₂CN, CH₂CO₂H.

РИСУНКИ

Рисунок 1