Способ обезвоживания гистологического материала
Авторы патента:
Использование: в области медицины, в частности в гистологии. Сущность изобретения: животную ткань проводят по спиртам гистологической батареи, содержащей медный купорос, причем обработку проводят в бумажных кассетах, а медный купорос помещают в тканные мешки и размещают вокруг кассет, а спирт используют в объемном соотношении к животной ткани 2:1. Способ позволяет сократить расход реактивов при сохранении качества гистологического препарата.
Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и касается способов обезвоживания гистологического материала.
Известен способ обезвоживания животных тканей (1) путем выдерживания их в двух порциях 96o и абсолютного спирта по 24 ч в каждой. Способ предполагает наличие двух емкостей объемом до 200 мл, на дно которых насыпают медный купорос слоем 1-2 см и закрывают его фильтровальной бумагой. В емкость заливают по 100 мл спирта 96o, предварительно подготовленного, абсолютного и используют для обезвоживания 15 20 кусочков ткани. Расход спирта при этом составляет около 5 объемов на 1 объем ткани. Недостатками данного способа является большой расход реактивов, в частности спирта, а также длительность процедуры предварительной подготовки абсолютного спирта. Задача предлагаемого изобретения экономное расходование реактивов при сохранении качества гистологического препарата. Определенный в задаче технический результат изобретения достигается за счет реализации следующих приемов способа: обезвоживание ткани осуществляют, поместив ее в бумажную кассету; медный купорос упаковывают в тканные мешочки, укладывают их на дно емкости и вокруг бумажных кассет, при этом расход спирта составляет 2 объема к одному объему ткани. Сокращение объема спирта при сохранении его обезвоживающего свойства возможно за счет 1. выполнения обработки в бумажных кассетах, когда бумага сорбирует на себя значительную (основную) часть жиров и они не попадают в спирт, т.е. проведение обработки в бумажных кассетах продлевает рабочую способность спиртов; 2. помещения медного купороса в тканные мешки, когда, во-первых, увеличивается площадь контакта спирта с медным купоросом и процесс присоединения воды к купоросу идет активнее; во-вторых, тканные мешки сорбируют часть жиров, которые не осели на бумажной кассете. 3. оптимальное рабочее соотношение объемов спирта и ткани 2:1 установлено экспериментальным путем: наращивание количества одновременно обрабатываемых кусочков ткани проводилось постепенно под контролем качества спиртов, предлагаемая технология обработки позволила сократить соотношение объемов с 5:1 до 2:1 при сохранении качества гистологического препарата. Дальнейшее наращивание количества одновременно обрабатываемых кусочков приводит к быстрому помутнению спирта и снижению качества гистологического образца, т.е. соотношение 2:1 является оптимальным. Таким образом, перечисленные признаки изобретения позволяют добиться желаемого технического результата экономного расхода спирта на единицу объема обрабатываемой животной ткани и являются существенным для данного изобретения. Способ выполняется следующим образом. Перед проведением этапа гистологической обработки обезвоживания, кусочки ткани, предварительно обработанные фиксирующим составом, помещают в гистологические кассеты любой известной конструкции (2), но выполненные из бумаги. Для одной проводки берут 600 700 кусочков ткани объемом по 1 3 мл. Кассеты помещают в емкости 1,2 1,4 л. Предварительно по дну емкости выкладывают обезвоживающие патроны мешки с медным купоросом из расчета 1 объем купороса на 4 5 объемов спирта. Затем емкость заливают спиртом 96o. Расход спирта равен 2 объема спирта к 1 объему ткани. Кусочки выдерживают в течение 24 ч, затем, не вынимая кусочки тканей из кассет, переносят их во вторую емкость со спиртом 96o и обезвоживающими патронами и выдерживают еще 24 ч, далее процесс гистологической обработки проводят по общепринятой методике: промывают образцы в бензоле и заливают в парафин. Качество гистологических образцов соответствует требованиям стандартов. Контролем степени насыщенности рабочих спиртов жирами служит проба с водой. После первой проводки по предлагаемой нами технологии проба с водой практически не дает помутнения. После замены патронов с медным купоросом на новые спирт еще раз используют для проводки 500 кусков тканей по 1 2 мл каждый. Качество гистологических препаратов после данной проводки соответствует требованиям стандартов. Приводим примеры конкретного выполнения способа для получения гистологических препаратов из различных животных тканей. Пример 1. С целью исследования митотической активности эпителия разных органов (языка, пищевода, кишечника) в 1 л емкости гистологической батареи - кассетами концентрируют 500 органов и создают соотношение 2 мл среды на 1 кусочек; перекладывание по емкостям гистологической батареи осуществляют в кассетах с сохранением соотношения (2:1), контролируют качество обезвоживающих патронов (их смена в случае посинения медного купороса); после одномоментного заключения всех органов в парафин, в кассетах вычленяют парафиновые кубики; срезы и покраску митозов производят по общеизвестным методикам; качество окрашенных срезов позволяет учитывать фигуры нормальных и патологических митозов согласно существующим критериям цитологической оценки делящихся клеток (И.А.Алов, 1972). Пример 2. С целью исследования гистологической структуры легкоразрушаемых паренхиматозных органов (например, надпочечники) на всех этапах гистологической обработки в 1 л емкости гистологической батареи кассетами концентрируют 500 органов и создают соотношение 2 мл среды на один кусочек; перекладывание по емкостям гистологической батареи осуществляют в тех же кассетах с сохранением соотношения (2:1); контролируют качество обезвоживающих патронов (их смена в случае посинения медного купороса); после одномоментного заключения всех органов в парафин в кассетах вычленяют парафиновые кубики, срезы и покраску производят по общеизвестным методикам; микроскопическим исследованием выявляют (дифференцируют) все признаки послойного строения надпочечников. Пример 3. С целью исследования внутриклеточных структур тучных клеток языка, пищевода (белых крыс) и кожи человека кусочки органов концентрируют кассетами в емкостях гистологической батареи в соотношении 2 мл рабочей среды на 1 кусочек на всех этапах гистологической обработки; перекладывание по емкостям гистологической батареи осуществляют в тех же кассетах с сохранением соотношения (2: 1), контролируют качество обезвоживающих патронов (их смена в случае посинения медного купороса); после одномоментного заключения всех органов в парафин в кассетах вычленяют парафиновые кубики, микроскопическим исследованием дифференцируют структуру и разные формы тучных клеток, при этом коэффициент дегранулирующих тучных клеток обычный для изучаемого органа. Технический результат изобретения выражается в следующем. 1. Предлагаемая технология позволяет сократить затраты реактивов, в частности спирта, в 2,5 раза при однократном их использовании и в 5 раз при двукратном после отрицательного контроля на насыщенность спирта жирами. 2. Упаковка медного купороса в тканные мешки помимо прямого эффекта - повышения обезвоживающих свойств создает дополнительное удобство в процессе замены отработанного купороса: мешки вынимаются из емкости, заполненной спиртом в процессе проводки и заменяют на новые. 3. Использование бумажных кассет, помимо прямого эффекта сорбции жира на стенки кассеты позволяет изготовлять их непосредственно в лаборатории и не зависеть от их промышленного выпуска. 4. Применение предлагаемой технологии позволяет получать гистологические препараты нужного качества с сохранением всех гистологических структур.Формула изобретения
Способ обезвоживания гистологического материала, включающий его проводку по спиртам гистологической батареи, содержащей медный купорос, отличающийся тем, что обработку проводят в бумажных кассетах, а медный купорос помещают в тканые мешки и размещают вокруг кассет, причем спирт используют в объемном соотношении спирт:животная ткань 2:1.
Похожие патенты:
Способ отбора пробы пульпы // 2065594
Изобретение относится к области химического воздействия на исследуемую поверхность материала для исследования макро- и микроструктуры материалов наблюдением оптических эффектов на поверхности продольных, поперечных или косых срезов (с предварительной шлифовкой и полировкой, из-за чего приготовленные срезы называются шлифами)
Способ обнаружения иммуноглобулина // 2064174
Изобретение относится к медицине и биологии, конкретнее к гистологическим методам выявления иммуноглобулинов
Изобретение относится к горной промышленности и может быть использовано при разработке россыпных месторождений, позволяет повысить надежность работы с увеличением при этом точности опробования
Изобретение относится к области исследования физико-химических свойств материалов, в частности опробованию металлов и сплавов, и может быть использовано для пробоотбирания благородных металлов
Устройство для отбора и ввода проб // 2061236
Изобретение относится к опробыванию сыпучих материалов из движущегося потока, например, на ленточном конвейере и может быть использовано для отбора пробы с других агрегатов
Пробоотборник в.а.седунова // 2100793
Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии
Изобретение относится к анализу экологического состояния и мониторинга окружающей среды, в частности воздушного бассейна
Способ отбора проб жидкости из трубопровода // 2103669
Изобретение относится к технике отбора проб сжатых газов и воздуха при контроле в них содержания примесей масла, влаги, окиси углерода, двуокиси углерода и других примесей преимущественно линейно-колористическим методом с использованием индикаторных трубок
Изобретение относится к медицине, а именно к нейрогистологическим методам исследования
Изобретение относится к медицине, а именно к нейрогистологическим методам исследования
Изобретение относится к медицине, точнее к технике изготовления гистологических образцов различных тканей, и может быть использовано при дифференциальной диагностике патологических состояний организма