Производные гликопептидов или их фармацевтически приемлемые соли

 

Использование: в медицине, как соединения, которые могут быть полезны при лечении восприимчивых бактериальных инфекций, вызываемых грамположительными микроорганизмами. Сущность изобретения: N-алкильные и N-ацильные производные гликопептидов А82846А, А82846В, РА-42867А-А или их фармацевтически приемлемые соли. 11 табл.

Изобретение относится к новым производным гликопептида формулы (I) где R представляет собой водород или (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу формулы или глюкозильную группу формулы X водород или хлор; Y водород или хлор.

R₁, R₂ и R₃ независимо представляют водород, С₁-С₁₂-алкил, С₂-С₉-алканоил, или группу формулы n 1-3; R₄ водород, галоид, С₁-С₈-алкил, С₁-С₈-алкокси или группу формулы
-N
R₅ и R₆ независимо представляют водород или С₁-С₃-алкил;
Р 0-2; при условии, что, когда R представляет собой (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу, R₁, R₂ и R₃ все не являются водородом, и, когда R водород или глюкозильная группа, R₁ и R₂ оба не являются водородом; или их фармацевтически приемлемые соли.

Соединения формулы (I) получают взаимодействием соединения формулы
(II) где R₇ водород, (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильная группа формулы
или глюкозильная группа формулы

X водород или хлор;
Y водород или хлор; с а) альдегидом формулы
H R_x где R_x Н, С₁-С₁₁-алкил или группа формулы


n 1-3;
R₄ водород, галоид, С₁-С₈-алкил, С₁-С₈-алкокси или группа формулы
-N
R₅ и R₆ независимо представляют собой водород или С₁-С₃-алкил;
m 2 или 3 и r 3 m c образованием промежуточного Шиффова основания, которое затем восстанавливается, давая N-алкильное производное;
в) альтернативно с активированным сложным эфиром алкановокислотного производного с требуемой ацильной группой формулы
Z--R_y где R_y С₁-С₈-алкил или группа формулы
p 0 2 и Z активирующая группа.

Данное изобретение также относится к композициям для лечения восприимчивых бактериальных инфекций, включающим соединение формулы (I) в сочетании с приемлемым фармацевтическим носителем. Способы лечения восприимчивых бактериальных инфекций с помощью композиций с соединениями формулы (I) также являются частью данного изобретения.

Постоянно испытывается потребность в новых улучшенных антибиотиках, особенно для лечения заболеваний человека. Повышенная активность, расширенный спектр бактериального ингибирования, повышенная эффективность ин виво, и улучшенные фармацевтические свойства являются некоторыми из целей улучшенных антибиотиков.

Важными патогенными организмами человека являются энтерококки. Заражения, вызываемые энтерококками, обычно трудно поддаются лечению. Гликопептиды, такие, как ванкомицин и тейкопланин, стали важными терапевтическими средствами при лечении заражений, вызываемых энтерококками. Однако недавно выделены штаммы E.faecium и E. faecalis, которые устойчивы к ванкомицину. R. Jeclercg и др. "Plasmid mediated Resistence to vancomycin and Teicoplanin in Enterococcus Faecium", "The new England Gournal of Medicine", 319 (3), 157-110 (1988) и А. Н.С. Uttley и др. "Vancomycin Resistant Enterococci", Lancet, I, 57-58 (1988). Было найдено, что изоляты также устойчивы к другим антибиотикам.

Гликопептиды, такие, как ванкомицин и тейкопланин, проявляют различные степени связывания сывороточного белка. Сообщалось, что уровень связывания белка сыворотки человека для ванкомицина и тейкопланина составляет 55% и примерно 90% соответственно, R.Moellering и др. "Pharmacokinetics of Vancomycin in Normal Subjects and in Patients with Redused Renal Function", "Revicros of Infections Disease", 3 (Lupp.), S.230-S.235 (1981) и A.Assandri и A. Bernarregi, "Binding of Teicoplanin to Human serum Albumin", Enr. J. clinical Pharmacol. 33, 191-195 (1987). Процент связывания сывороточного белка, проявляемый тейкопланином, считается высоким уровнем связывания; однако уровень связывания сывороточного белка ванкомицином является относительно низким. Свободная или несвязанная форма антибиотика является формой, которая участвует в биологической активности. Поэтому связывание антибиотиков с сывороточными белками влияет на фармацевтические свойства антибиотика.

В поиске новых антибиотиков делались попытки структурных модификаций известных антибиотиков, когда это было возможным. Гликопептидные антибиотики имеют такие сложные структуры, что даже небольшие изменения являются затруднительными. Кроме того, трудно предсказать влияние этих изменений на антимикробные и физиологические свойства, т.е. будут ли оказывать влияние эти изменения на указанные свойства. Процессы модификации известных антибиотиков и новые активные производные, производимые с помощью таких процессов, продолжают представлять огромную важность.

Ранее были получены N-алкильные и N-ацильные производные гликопептидов ванкомицина, А51568А, А51568А, М43А и М43Д (патенты США 4639433, 4643987 и 4698327). Несколько из этих соединений обнаружили микробиологическую активность против устойчивых к ванкомицину изолятов T.Nicas и др. Antimicrobial Agents and Chemmotherapy, 1477-1481 (1989).

Согласно предлагаемому изобретению представляются новые гликопептидные производные, которые обладают в высокой степени желательными свойствами антимикробной активности против устойчивых к ванкомицину изолятов и относительно низкими уровнями связывания сывороточного белка.

Изобретение также представляет способ получения новых производных гликопептидов формулы (I), а также фармацевтические композиции, включающие эффективное количество новых производных гликопептида формулы I и подходящий фармацевтический носитель.

Соединения формулы I являются новыми представителями гликопептидной группы антибиотиков. Этими новыми соединениями являются N-алкильные и N-ацильные производные известных гликопептидов А82846, факторов А, В и С (ЕРО 265071 А1), и РА-42867-А (ЕРО 231111 А2). Представительные соединения формулы I проявляют антимикробную активность против устойчивых к ванкомицину изолятов. Новые соединения также не так сильно связываются с сывороточным белком, как другие гликопептиды. Уровни связывания белка сыворотки для соединений формулы I аналогичны уровням, обнаруживаемым ванкомицином. Данный уровень является гораздо более низким, чем уровень других высокоактивных гликопептидов, таких, как тейкопланин.

Термин "N-алкильное производное" означает производное А82846А, А82846В, А82846С или РА-42867-А, где атом водорода одной или более аминогрупп замещен алкильной или замещенной группой.

Термин "N-ацильное производное" означает производное А82846А, А82846В, А82846С или РА-42867-А, в котором атом водорода одной или более аминогрупп замещен алканоильной или замещенной алканоильной группой.

Термин "алкил" обозначает С₁-С₁₂-углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, н-гексил, 2-метилгексил, 3-метилгексил, н-гептил, 2-метилгептил, Н-октил, 2-метилоктил, 3-метилоктил, н-нонил, 2-метилнонил, н-децил, 2-метилдецил, н-ундецил, 2-метилундецил, или н-додецил. Когда термин "алкил" описан как С₁-С₈-алкил, данный термин обозначает, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, н-гексил, н-гептил, или н-октил. Когда термин "алкил" описывается как С₈-С₁₂ алкил, данный термин обозначает, например, н-октил, 2-метилоктил, 3-метилоктил, н-нонил, 2-метилнонил, н-децил, н-ундецил, 2-метилундецил или н-додецил. Когда термин "алкил" описывается как С₈-С₁₀-алкил, он обозначает, например, н-октил, 2-метилоктил, 3-метилоктил, н-нонил, 2-метилнонил или н-децил. Когда термин "алкил" описывается как С₁-С₃-алкил, данный термин обозначает метил, этил, н-пропил или изопропил.

Термин "С₂-С₉-алканоил" обозначает С₁-С₈-алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, как определено выше, присоединенную к карбонильной группе.

Термин "С₁-С₈-алкокси" обозначает алкильную группу С₁-С₈, как определено выше, присоединенную к атому кислорода, С₁-С₈-алкоксигруппа включает, например, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, изопентокси, н-гексилокси, н-гептилокси и н-октилокси.

Термин "галоид" обозначает галоген группы фтор, хлор, бром и йод. Предпочтительно термин "галоид" включает фтор, хлор и бром.

Фармацевтически приемлемые аддитивные соли соединений формулы (I) являются частью данного изобретения. Фармацевтически приемлемыми аддитивными солями являются соли, полезные в хемотерапии теплокровных животных, так, чтобы токсичность солевой формы не была выше, чем токсичность несолевой формы. Соединения формулы (I), каждое, имеют карбоксильную группу и одну или более аминогрупп, которые могут взаимодействовать с образованием различных солей. Кислотно-аддитивными солями, образованными с помощью стандартных реакций соединений формулы (I), как с органическими, так и с неорганическими кислотами, представлена предпочтительная группа солей. Примерами фармацевтически приемлемых солей являются соли, образованные при взаимодействии соединения формулы I с соляной, янтарной, лимонной, молочной, винной, фосфорной и уксусной кислотами.

Соединения формулы (I), в которой R представляет собой (4-эпиванкозаминил)-0-глюкозильную группу, получаются из А82846 антибиотиков, факторов А, В, и С, и из РА-42867-А. Структура этих антибиотиков показаны в формуле (III). Способы получения А82846А, А82846В и А82846С описываются в европейской патентной публикации 265071 А1. Способ получения РА-42867-А описан в европейской патентной публикации 231111 А2.

В табл. 1 показаны соединения формулы (III).

Соединения формулы (I), в которой R представляет водород или глюкозильную группу, получаются из продуктов кислотного гидролиза соединений А82846А, А82846В, А82846С и РА-42867-А. Структуры продуктов кислотного гидролиза показаны в формулах (IV) и (V). Способы получения продуктов кислотного гидролиза РА-42867-А, дез-(4-эпиванкозаминил)-РА-42867-А (IVd) и дез-(4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозил-РА-42867-А (Vd), описываются в европейской патентной публикации 231111 А2. Дез-(4-эпи-ванкозаминил) и дез-(4-эпи-ванкозаминилил)-0-глюкозил-производные А82846А, В и С получаются с помощью обработки А82846А, В или С трифторуксусной кислотой (TFA) при температуре примерно -10^оС до примерно 80^оС в течение периода около 1-60 ч (см. патент США 4552701 в отношении описания способов селективного удаления сахарных групп из гликопептидообразных антибиотиков). Короткие периоды реакции, например 1-2 ч, и низкие температуры, 0^оС, благоприятствуют образованию дез-(4-эпи-ванкозаминил)-производных А82846А, В и С, формулы (IVa-c).

В табл. 2 приведены соединения формул (IV) и (V).

N-алкильные производные данного изобретения получают с помощью реакции соединения формулы (II) c альдегидом с образованием промежуточного основания Шиффа. Реакция осуществляется в полярном органическом растворителе, таком, как диметилформамид, или в смеси полярных органических растворителей, такой, как смесь диметилформамида и метанола, при температуре около 25-100^оС. Реакция образования Шиффова основания предпочтительно осуществляется при температуре примерно от 60 до примерно 70^оС в течение от 30 мин до 2 ч в смеси диметилформамида и метанола.

Промежуточное основание Шиффа затем восстанавливается предпочтительно без выделения, давая N-алкильные производные. Восстановление основания Шиффа может проводиться с использованием химического восстанавливающего агента, такого, как металлборгидрид, например, боргидрид натрия или цианоборгидрид натрия. Реакция может осуществляться в полярном органическом растворителе, таком, как диметилформамид, или смеси полярных органических растворителей, такой как диметилформамид и метанол. Восстановление может осуществляться при температуре примерно от 25 до 100^оС в течение 1-5 ч. Восстановление предпочтительно осуществляется с использованием избытка цианоборгидрида натрия в смеси диметилформамида и метанола при температуре примерно 60-70^оС в течение 1-2 ч.

Альдегиды, которые могут использоваться в процессе для получения соединений предлагаемого изобретения, представлены следующей формулой:
H R_x где R_x представляет собой водород, С₁-С₁₁-алкил или группу формулы

n представляет собой число от 1 до 3; m 2 или 3, r m; и R₄представляет собой водород, галоид, С₁-С₈-алкил, С₁-С₈-алкокси, или группу формулы
-N
R₅ и R₆ независимо представляют водород или С₁-С₃-алкил;
p 0-2; m 2 или 3 и r 3 m.

Отношение альдегида к соединению формулы (II) и условия реакции определяют продукты реакции. Образованию моноалкилированных производных благоприятствует использование небольшого избытка альдегида, более короткое время реакции и более низкая температура. Моноалкилированные производные представляют собой N-алкильные производные, в которых атом водорода одной аминогруппы замещен алкилом или замещенной алкильной группой. Обычно аминогруппа (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильной группы, когда она присутствует, алкилируется первой, и получаются соединения формулы (I), в которой R₂ алкил или замещенный алкил и R₁ и R₃ водород. Большой избыток альдегида благоприятствует образованию диалкилированных и триалкилированных производных соединений формулы (II) и образованию диалкилированных производных соединений формул (IV) и (V). Диалкилированные производные представляют собой N-алкильные производные, в которых атом водорода двух аминогрупп замещен алкильной или замещенной алкильной группой. Обычно данная группа производных соединений формулы (III) включает соединения формулы (I), в которой R₂ или R₁ или R₃ представляет алкильную или замещенную алкильную группу и R представляет (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу. Диалкилированными производными соединений формул (IV) и (V) являются соединения формулы (I), в которой R₁ и R₂ представляют алкильные или замещенные алкильные группы, и R представляет глюкозильную группу и водород соответственно. Триалкилированными производными являются соединения формулы (I), в которой R представляет собой (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу и R₁, R₂ и R₃ представляют алкильные или замещенные алкильные группы.

N-алкильные производные данного изобретения включают соединения формулы I, в которой R₁, R₂ и R₃ независимо представляют собой (С₁-С₁₂) алкил или водород. Предпочтительными N-алкильными производными данной группы являются соединения, в которых R представляет (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу, R₁ и R₃ представляют водород, и R₂ представляет (С₈-С₁₂) алкил. Примерами предпочтительных N-алкильных производных являются соединения, в которых R₂ представляет собой н-октил, 2-метилоктил, 3-метилоктил, н-нонил, 2-метилнонил, н-децил, 2-метилдецил, н-ундецил, 2-метилундецил или н-додецил. Более предпочтительно Х и Y представляют хлор и R₂ представляет н-октил, н-нонил или н-децил.

N-алкильные производные данного изобретения также включают соединения формулы (I), в которой R₁, R₂ и R₃ независимо представляют собой водород или замещенную алкильную группу формулы

Когда n 1, примеры данной замещенной алкильной группы включают бензил, п-фторбензил, п-хлорбензил, п-бромбензил, п-иодбензил, м-фторбензил, м-хлорбензил, м-бромбензил, м-иодбензил, о-фторбензил, о-хлорбензил, о-бромбензил, о-иодбензил, п-метилбензил, п-этилбензил, п-пропилбензил, п-изопропилбензил, п-бутилбензил, п-пентилбензил, п-гексилбензил, п-гептилбензил, п-октилбензил, м-метилбензил, м-этилбензил, м-пропилбензил, м-изопропилбензил, м-бутилбензил, м-пентилбензил, м-гексилбен- зил, м-гептилбензил, м-октилбензил, о-метилбензил, о-этилбензил, о-пропилбензил, о-изопропилбензил, о-бутилбензил, о-пентилбен- зил, о-гексилбензил, о-гептилбензил, о-октилбензил, п-метоксибензил, п-этоксибензил, п-пропоксибензил, п-изопропоксибензил, п-бутоксибензил, п-пентоксибензил, п-гексилоксибензил, п-гептилоксибензил, п-актило- ксибензил, м-метоксибензил, м-этоксибензил, м-пропоксибензил, м-изопропоксибензил, м-бутоксибензил, м-пентоксибензил, м-гексилоксибензил, м-гептилоксибензил, м-октилоксибензил, о-метоксибензил, о-этоксибензил, о-пропоксибензил, о-изопропоксибен- зил, о-бутоксибензил, о-пентоксибензил, о-гексилоксибензил, о-гептилоксибензил, о-октилоксибензил, р-аминобензил, п-метилами- нобензил, п-диметиламинобензил, п-этиламинобензил, п-диэтиламинобензил, п-пропиламинобензил, п-дипропиламинобензил, м-аминобензил, м-метиламинобензил, м-диметиламинобензил, м-этиламинобензил, м-диэтиламинобензил, м-пропиламинобензил, м-дипропиламинобензил, о-аминобензил, о-метиламинобензил, о-диметиламинобензил, о-этиламинобензил, о-диэтиламинобензил, о-пропиламинобензил, или о-дипропиламинобензил.

Предпочтительно R₄ представляет галоид, С₆-С₈-алкил, С₆-С₈-алкокси, или ди-С₁-С₃-алкиламино. Предпочтительными примерами данной группы являются п-бромбензил, п-хлорбензил, п-фторбензил, м-хлорбензил, о-хлорбензил, п-октилбензил, п-октилоксибен- зил и п-диэтиламинобензил. Более предпочтительно замещенной алкильной группой является п-бромбензил, п-октилбензил, п-октило- ксибензил или п-диэтиламинобензил.

Предпочтительно, когда R₄ представляет галоид, С₆-С₈-алкил, С₆-С₈-алкокси или ди(С₁-С₃)алкиламино, Х или Y представляют хлор. Более предпочтительно R представляет (4-эпи-(ванкозаминил)-0-глюкозильная группа и R₁ и R₃ представляют водород. Наиболее предпочтительно R₂представляет собой п-бромбензил, п-октилбензил, п-октилоксибензил или диэтиламинобензил.

Когда n 2, примеры данной замещенной алкильной группы включают фенилэтил, (п-фторфенил)этил, (п-хлорфенил)этил, (п-бромфенил)этил, (п-метилфенил)этил, (п-этилфенил)этил, (п-метоксифенил)этил и (п-диметиламинофенил)этил.

Предпочтительно замещенной алкильной группой является фенилэтил (R₄- водород). Более предпочтительно R представляет собой (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу, R₂-фенилэтил, X и Y представляют хлор и R₁ и R₃ представляют водород.

Когда n 3, примеры данной замещенной алкильной группы включают фенилпропил, (п-фторфенил)пропил, (п-хлорфенил)пропил, (п-бромфенил)пропил, (п-метилфенил)пропил, (п-этилфенил)пропил, (п-метоксифенил)пропил и (п-диметиламинофенил)пропил. Предпочтительно замещенной алкильной группой является фенилпропил (R₄ водород).

N-ацильные производные данного изобретения получают с помощью взаимодействия соединения формулы (II) c активированным сложным эфиром алкановой кислоты с требуемой ацильной группой. Термин "активированный сложный эфир" означает эфир, который дает карбоксильную функцию ацилирующей группы, реакционноспособной к сочетанию с аминогруппой гликопептида. Реакция осуществляется в полярном органическом растворителе, таком, как диметилформамид, при температуре примерно от 50 до 110^оС, в течение 1-5 ч. Реакция образования N-ацильных производных предпочтительно осуществляется при температуре примерно 70-80^оС в течение примерно 2-4 ч.

Активированное сложноэфирное производное получают с помощью сложной этерификации свободной кислоты с желаемой ацильной группой с активирующими группами, такими, как п-нитрофенол, 2,4-динитрофенол, 2,4,5-трихлорфенол, 2-хлор-4,6-диметокси- триазин, N-хлорсукцинимид, N-хлормалеиновый имид, N-хлорфталимид, 1-гидроксибензотриазол или 1-гидрокси-6-хлор-1Н-бен- зотризол. Активированные сложноэфирные производные могут быть представлены общей формулой
Z R_y где R_y представляет собой С₁-С₈-алкил или группу формулы

p 0-2 и z представляет активирующую группу. Предпочтительным активированным сложноэфирным производным является сложный эфир 2,4,5-трихлорфенола.

Соотношение активированного сложного эфира и соединения формулы (II) и условия реакции определяют продукты реакции. Образованию моноацилированных производных благоприятствует использование легкого избытка активированного эфира и короткое время реакции. Моноацилированными производными являются N-ацильные производные, в которых атом водорода одной из аминогрупп замещен алканоильный или замещенной алканоильной группой. Обычно моноацилированными производными соединений формулы (III) являются соединения формулы (I), в которых R представляет (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу и любой из R₁ и R₃ представляет алканоильную или замещенную алканоильную группу. Моноацилированными производными соединений формулы (IV) или (V) являются соединения формулы (I), где R₁ или R₃, или R является алканоильной или замещенной алканоильной группой и R является глюкозильной группой или водородом соответственно. Диацилированные и триацилированные производные соединений формулы (III) и диацилированные производные соединений формулы (IV) и (V) получают с использованием большого избытка активного сложного эфира. Диацилированными производными являются N-ацильные производные, в которых атом водорода двух аминогрупп замещен алканоильной или замещенной алканоильной группой. Обычно данная группа производных соединений формулы (III) включает соединения формулы (I), в которой R представляет собой (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу, два из R₁, R₂ и R₃ представляют собой алканоильные или замещенные алканоильные группы. Диацилированными производными соединений формулы (IV) или (V) являются соединения формулы (I), в которой R₁ и R₃ оба представляют собой алканоильные или замещенные алканоильные группы, и R представляет глюкозильную группу или водород соответственно. Триацилированными производными являются производные соединений формулы (III), где R₁, R₂ и R₃ представляют алканоильные или замещенные алканоильные группы.

N-ацильные производные данного изобретения включают соединения формулы (I), где R₁, R₂ и R₃ представляют собой независимо (С₂-С₉)-алканоил или водород. Примерами ацильных производных являются, например, ацетил, пропионил, изопропионил, н-бутирил, н-пентаноил, н-гексаноил, н-гептаноил, н-октаноил и н-нонаноил. Предпочтительными ацильными группами являются н-бутирил, н-пентаноил, н-гексаноил и н-гептаноил. Предпочтительно R представляет собой (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильную группу, R₃ представляет водород, и или R₁ или R₂ представляет собой ацильную группу.

N-ацильные производные данного изобретения также включают соединения формулы I, где R₁, R₂ и R₃ представляют собой независимо водород или замещенную алканоильную группу формулы

Примерами данной замещенной ацильной группы являются бензоил, фенилацетил и фенилпропионил. Предпочтительно R является (4-эпи-ванкозаминил)-0-глюкозильной группой, R₃ является водородом, и или R₁ или R₂ представляет замещенную ацильную группу.

Примеры соединений, которые были получены и являются частью данного изобретения, перечислены в табл. 3-5 для соединений формулы (I).

Соединения формулы (I) имеют активность ин виво и ин витро против грамположительных патогенных бактерий. Минимальные ингибирующие концентрации (MIC) при которых соединения формулы (I) ингибируют некоторые бактерии, даны в табл. 6. Величины MIC определяли с использованием стандартных методик разбавления агара.

Соединения формулы (I) также показали антимикробную активность ин виво против вызванных экспериментальным путем инфекций у опытных животных. Когда две дозы испытуемого соединения назначались мышам, инфицированным экспериментально испытуемым организмом, измерялась наблюдаемая активность в виде величины ЕД₅₀ (эффективная доза в мг/кг для защиты 50% подопытных животных: см. работу W.Wick и др. I.Bacteriol. 81, 233-235 (1961). Наблюдаемые величины ЕД₅₀ для иллюстративных соединений даны в табл. 7.

Одним из важных аспектов антимикробной активности соединений формулы (I) является их активность против энтерококков, устойчивых к ванкомицину. Данная активность показана в табл. 8, в которой суммируется сравнение активности иллюстративных соединений против характерных устойчивых к ванкомицину и восприимчивых к ванкомицину энтерококков, определяемой с использованием метода разбавления агара. Конечные значения считывали после инкубации в течение 24 ч. Отношение вычисляли делением средней величины МИК соединения против устойчивых к ванкомицину штаммов на средние величины МИК соединения против штаммов, восприимчивых или чувствительных к ванкомицину. Высокое отношение указывает на то, что соединение является гораздо менее активным против устойчивых к ванкомицину штаммов по сравнению с восприимчивым к ванкомицину штаммами. Соединения формулы (I) являются обычно активными против устойчивых к ванкомицину штаммов, о чем свидетельствуют средние значения минимальной ингибирующей концентрации, находящиеся в интервале примерно от 2 до 10 мкг/мл.

Еще одним важным свойством соединений формулы (I) является низкое связывание соединений с белками сыворотки по сравнению с другими гликопептидными антибиотиками. Минимальные ингибирующие концентрации (MIC или МИК) измерялись для отобранных соединений против шести восприимчивых к ванкомицину штаммов стафилококков и энтерококков. Величины MIC измерялись как в отсутствие (-), так и в присутствии (+) человеческой сыворотки, в бульоне с добавлением человеческой сыворотки до 40% Величины MIC определялись по методике серийного разбавления с использованием объемов среды в 0,2 мл с примерно 105 бактерий на миллилитр. Результаты показаны в табл. 9. Соотношение MIC, измеренной в присутствии добавленной сыворотки, и MIC, измеренной в отсутствии добавления сыворотки ("соотношение") является показателем степени связывания сыворотки. Соотношение примерно 1 показывает, что присутствие сыворотки не оказывает влияния на антимикробную активность ин витро, и соединение не обнаруживает высокой степени связывания с сывороткой. Соотношение, которое больше чем 1, например около 10, указывает, что соединение обнаруживает высокую степень связывания с сывороткой.

Соединения формулы (I) показали неожиданно низкий уровень связывания сыворотки. Соотношение примерно 2 (см. табл. 9) указывает на то, что соединение примерно на 50% связано с сывороткой. Данный уровень связывания сходен с показателем, обнаруживаемым ванкомицином. Ранее было найдено, что N-алкильные производные ванкомицина проявляют более высокую степень связывания с сывороткой, соотношение в интервале от пяти до десяти, чем показатель, обнаруживаемый ванкомицином. Считалось, что алкилирование одной или более аминогрупп ванкомицина вызывает увеличение связывания с сывороточным белком. Однако соединения формулы (I) неожиданно проявляют тот же уровень связывания с сывороткой, что и основное соединение, т.е. А82846В.

Токсичность соединений формулы (I).

Предлагаемые соединения испытывались на лабораторных животных с экспериментально-вызванной инфекцией при значениях ЕД₅₀ в интервале от 0,1 до 5,0 мг/кг. Введение соединения в указанном интервале не оказывает никакого токсического действия, следовательно, настоящие соединения относятся к категории низкотоксичных.

Фармацевтические готовые формы препаратов соединений формулы (I) также составляют часть данного изобретения. Так, соединение, предпочтительно в форме фармацевтически приемлемой соли, может преобразовываться в препаративную форму для орального или парэнтерального назначения для терапевтической или профилактической обработки бактериальных инфекций.

Например, соединение может смешиваться с обычными фармацевтическими носителями и эксципиентами и использоваться в форме таблеток, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, вафель и аналогичных. Композиции, включающие соединение формулы (I), содержат примерно от 0,1 до 90% по весу активного соединения, и более обычно примерно от 10 до 30% Композиции могут содержать обычные носители и эксципиенты, такие, как кукурузный крахмал или желатин, лактозу, сахарозу, микрокристаллическую целлюлозу, каолин, маннит, дикальцийфосфат, хлористый натрий и альгиновую кислоту.

Дезинтеграторы, обычно используемые в готовых формах препаратов или препаративных формах данного изобретения, включают кроскармеллозу, микрокристаллическую целлюлозу, кукурузный крахмал, крахмальный гликолят натрия и альгиновую кислоту.

Связующие для таблеток, которые могут включаться, представляют камедь акации, метилцеллюлозу, натриевую карбоксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлозу, сахарозу, крахмал и этилцеллюлозу.

Смазочные агенты, которые могут использоваться, включают стеарат магния или другие стеараты металлов, стеариновую кислоту, силиконовую жидкость, тальк, воски, масла и коллоидную двуокись кремния.

Могут также использоваться вкусовые или ароматизирующие агенты, такие, как мята перечная, масло грушанки, вишневый ароматизатор или аналогичные.

Может быть желательным добавлять красящий агент, чтобы сделать форму дозировки более привлекательной на вид или помочь идентифицировать продукт.

Для внутривенного (IV) использования растворимая в воде форма антибиотика может растворяться в одной из обычно используемых внутривенных жидкостей и назначаться путем инфузии или вливания. Такие жидкости, как например, физиологический раствор, раствор Рингера или 5%-ный раствор декстрозы, могут использоваться.

Для получения внутримышечных препаратов стерильная готовая препаративная форма подходящей растворимой солевой формы соединения, например, гидрохлоридной соли, может растворяться и назначаться в фармацевтическом разбавителе, таком, как свободная от пирогенов вода (дистиллированная), физиологический раствор или 5%-ный раствор глюкозы. Подходящая нерастворимая форма соединения может приготавливаться и назначаться в виде суспензии в водном основании или фармацевтически приемлемом масляном основании, например сложном эфире жирной кислоты с длинной цепью, таком, как этилолат.

Для орального использования особенно полезной является стерильная готовая форма подходящей солевой формы антибиотика, например, гидрохлоридной соли, приготовленной в разбавителе, таком, как дистиллированная или деионизированная вода.

Альтернативно форма дозированной единицы или единичной дозы антибиотика может быть в виде раствора антибиотика, предпочтительно в его солевой форме, в подходящем разбавителе в стерильных герметически запаянных ампулах. Концентрация антибиотика в единичных дозах может варьировать, например, примерно от 1 до 50% в зависимости от частной формы антибиотика и его растворимости и от дозы, предназначаемой врачом.

В следующем аспекте данное изобретение предоставляет способ лечения инфекционных болезней, особенно болезней, вызываемых грамположительными микроорганизмами животных.

Соединения данного изобретения особенно полезны при лечении болезней, вызываемых устойчивыми к метипиллину стафилококками. Соединения также полезны при лечении инфекции, причиной которой являются энтерококки. Примерами таких болезней являются тяжелые или сильные стафилококковые инфекции, т.е. стафилококковый эндокардит и стафилококковый сепсис. Животное может быть или восприимчивым к заражению, или зараженным микроорганизмом. Способ лечения включает назначенное животному для приема количества соединения формулы (I), которое эффективно для данной цели. Обычно эффективным количеством соединения формулы (I) является доза примерно между 0,5 и 100 мг/кг. Предпочтительную дозу составляет количество примерно от 1 до 60 мг/кг активного соединения. Типичной суточной дозой для взрослого человека является доза примерно от 50 мг до 1,0 г.

При реализации данного способа на практике антибиотик может назначаться в виде единственной суточной дозы или в виде нескольких доз в день. Режим лечения может требовать назначения на протяжении продолжительных периодов времени, например в течение нескольких дней или в течение от одной до шести недель. Количество в назначаемой дозе или общее назначаемое количество зависит от таких факторов, как природа и тяжесть инфекции, возраст и общее состояние здоровья пациента, переносимость пациентом антибиотика и микроорганизм или микроорганизмы, являющиеся причиной инфекции.

Удобным методом осуществления способа лечения на практике является назначение антибиотика с помощью внутривенного вливания. Согласно данной процедуре стерильная препаративная форма подходящей растворимой соли антибиотика вводится в физиологическую жидкость, такую как 5%-ный раствор декстрозы, и получающийся в результате раствор вливается медленно (IV). Альтернативно может также использоваться "piggy-back", способ вливания IV.

Для того чтобы более полно проиллюстрировать осуществление данного изобретения, приводятся следующие примеры. Обычно соединения формулы (III) или (IV) получаются, как описано в примерах получения 1 и 2. N-алкильные производные получаются, как описано в примерах 1 и 2. Также N-ацильные производные получаются, как описано в примерах 3 и 4.

П о л у ч е н и е 1. Получение соединения (IIIa) и (IVa).

Соединение А82846А (500 мг, 0,32 ммоль) растворяли в трифторуксусной кислоте (100 мл), содержащей анизол (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч при комнатной температуре в атмосфере азота. Летучие растворители удаляли в вакууме, давая серо-желтый остаток. Остаток растирали со смесью диэтилового эфира и хлороформа (1:1, 50 мл х 2). Твердый материал, полученный таким образом, (соль трифторуксусной кислоты), растворяли в воде (примерно 50 мл), величину рН данного раствора доводили до 6,2 с помощью пиридина. Раствор фильтровали, фильтрат лиофилизировался, давая 426 мг не совсем белого порошка. Анализ жидкостной хроматографии высокой разрешающей способности (НРLO) показал два главных пика (в количествах примерно 23 и 43% ).

Два главных продукта разделяли с помощью обратнофазной ПРLC в препаративном масштабе с использованием колонки Prep-pak (Милфорд, Ма.), с элюированием 8 л градиентом 1%-ного водного ацетата пиридиния до смеси ацетонитрил (1%-ный водный ацетат пиридиния (1:3) с последующим элюированием 2 л последнего. Фракции, каждая по 250 мл, собирали при скорости потока 250 мл/мин и анализировали с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) и PHLC.

Фракции, содержащие (IIIa) (N 10-16), объединяли и лиофилизировали, давая 82 мг соединения (IIIa) в виде окрашенного в кремовый цвет твердого вещества, масс-спектр FAB /FAB-MS/ (M+1): 1414 (точная масса, вычислено для C₆₆H₇₇N₉O₂₄Cl 1414, 4770; найдено 1414,40).

Фракции, содержащие соединение (IVa) (N 27-29), также объединяли и лиофилизовали, давая 128 мг соединения (IVa) в виде окрашенного в кремовый цвет порошка.

(М+1): 1252, 1109 (вычислено для С₆₀Н₆₇N₉O₁₉Cl 1252, 4242; найдено: 1252, 4240).

П о л у ч е н и е 2. Получение соединений (IIIb) и (IVb).

А82846Е (1 г) растворяли в трифторуксусной кислоте (200 мл), содержащей анизол (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение примерно 2 ч в атмосфере азота.

Реакционную смесь обрабатывали, как описано в примере получения 1, давая 1,12 г смеси продукта, FAB-MS (M+1): 1448, 1305, 1286, 1252, 1142. Анализ с помощью жидкостной хроматографии высокой разрешающей способности показал, что данный материал содержит два главных или основных пика (в количествах примерно 42 и 43% соответственно).

Препаративная HPLC в обратной фазе с использованием условий, описанных в получении 1, давала 283 мг соединения (IIIb). FAB-MS (M+1): 1448 (вычислено для C₆₆H₇₆N₉O₂₄Cl₂ 1448, 4380; найдено 1448, 4375).

Препаративная обратнофазовая HPLC также дала 270 мг соединения IVb FAB-MS (P+1): 1286 (вычислено для C₆₀H₆₆N₉O₁₉Cl₂ 1286, 3852, найдено 1286, 3879).

П р и м е р 1 (способ А). Получение соединений 1, 2 и 3.

Свободное основание А82746А (293,5 мг, 0,19 ммоль) растворяли в смеси диметилформамида и метанола (10 мл каждого). Данный раствор обрабатывали н-октил-альдегидом (44,8 мг, 0,35 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч 45 мин при 70^оС. Раствор обрабатывали цианоборгидридом натрия (75 мг, 1,19 ммоль) и перемешивали в течение дополнительных 2 ч при 70^оС. Реакционный раствор концентрировали в вакууме, остаток разбавляли водой 25 мл, и данный раствор лиофилизовали. Продукты разделяли с помощью обратнофазной жидкостной хроматографии высокой разрешающей способности или высокоэффективной жидкостной хроматографии /HPLC/ с использованием колонки C18 Waters (19 x 150 мм) при элюировании 20 мин линейным градиентом смеси 15% ацетонитрил /0,05% водный триэтиламинфосфат (рН 3) до 60% ацетонитрил /0,05% водный триэтиламинфосфат (рН 3). Фракции, содержащие продукты, о которых свидетельствовали данные анализа HPLC, обессоливали с использованием смолы HP20SS в смеси метанол/0,1% уксусная кислота (8:2). Элюаты выпаривали досуха, обрабатывали водой и лиофилизовали, давая 36,6 мг соединения 1 (14,8% выход), 39,6 мг соединения 2 (выход 16,0%) и 11,7 мг соединения 3 (выход 3,5%).

П р и м е р 2 (способ B).

Получение соединения 38.

Свободное основание А82846В (1,1 г, 0,69 ммоль) растворяли в диметилформамиде (50 мл). Данный раствор обрабатывали н-октиловым альдегидом (195 мг, 1,52 ммоль) и перемешивали в течение 30 мин при 70^оС. Раствор обрабатывали цианоборгидридом натрия (162,6 мл, 2,5 ммоль) и перемешивали в течение 90 мин при 70^оС. После того как смеси давали возможность охладиться до комнатной температуры, реакционный раствор фильтровали. Остаток растворяли в 5%-ной уксусной кислоте в метаноле (50 мл), и раствор перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Данный раствор выпаривали досуха в вакууме, остаток обрабатывали водой (50 мл) и н-бутанолом (несколько капель), и лиофилизовали. Продукт очищали с помощью обратнофазной HPLC, с использованием колонки Rainin C₁₈ (5 x 35 см, Woburn, MA) c элюрованием 20 мин линейным градиентом смеси 20% ацетонитрил /1% водной ацетат пиридиния до 40% ацетонитрил /1% водный ацетат пиридиния, давая 120 мг соединения 38 (выход 10%).

П р и м е р 3 (способ С).

Получение соединений 28 и 29.

Свободное основание А82846А (100,5 мг, 0,06 ммоль) растворяли в диметилформамиде в 15 мл. Данный раствор обрабатывали 2,4,5-трихлорфениловым эфиром 3-фенилпропионовой кислоты (75 мг, 0,23 ммоль) и перемешивали в течение 2 ч при 70^оС. Раствор выпаривали досуха в вакууме; остаток обрабатывали водой и лиофилизовали. Остаток растирали с дихлорметаном для удаления непрореагировавшего активированного сложного эфира. Продукты разделяли с помощью HPLC в обратной фазе с использованием колонки Waters C₁₈ размером 19 х 150 мм, с элюированием 30 мин, линейным градиентом смеси 15% ацетонитрил /1% водный ацетат пиридиния до 40% ацетонитрил /1% водный ацетат пиридиния, давая 4,0 мг соединения 28 (выход 3,7%) и 3,6 мг соединения 29 (выход 3,3%).

П р и м е р 4 (способ D).

Получение соединения 69.

Свободное основание А82846В (195,4 мг, 0,12 ммоль) растворяли в смеси диметилформамида и метанола (по 10 мл каждого). Данный раствор обрабатывали 2,4,5-трихлорфениловым эфиром н-гептановой кислоты (53 мг), 0,17 ммоль, и перемешивали в течение 4 ч при 110^оС. Раствор выпаривали досуха в вакууме; остаток обрабатывали водой и лиофилизовали. Остаток растирали с дихлорметаном для удаления непрореагировавшего активированного сложного эфира. Продукт отделяли с помощью HPLC в обратной фазе с использованием колонки Waters C₁₈ размером 19 х 150 мм, с элюированием 20 мин, линейным градиентом 15% ацетонитрил /0,05% водный триэтиламинфосфат (рН 3) до 35% ацетонитрил/ 0,05% водный триэтиламинфосфат (рН 3). Фракции, содержащие продукт, объединяли и обессоливали с использованием смолы НР20SS, давая 7,6 мг соединения 69 (выход 3,6%).

П р и м е р 5.

В табл. 10 и 11 суммируется получение и некоторые физические характеристики проиллюстрированных примерами соединений. Выход продукта вычисляли с использованием количества соединения формулы (II), (III) или (IV) в качестве ограничительного реагента. В графе способа синтеза дается ссылка на способы, описанные в примерах 1-4. В графе эквиваленты реагенты дается ссылка на молярные эквиваленты или альдегида, или активированного сложного эфира для соответствующего N-алкильного или N-ацильного производного по отношению к количеству соединения формулы (II), (III) или (IV). Время удержания при высоко эффективной жидкостной хроматографии (HPLC) измеряли с использованием колонки Waters M. bondapak (4 x 300 мм, P(N 27324)), с элюированием 15 мин линейным градиентом смеси 5% ацетонитрил/0,2% водный триэтиламинфосфатный буфер (рН В) до 80% ацетонитрил/0,2% водный триэтиламинфосфатный буфер (рН 3) с использованием скорости потока 1 мл/мин и ультрафиолетовой детекции при 280 нм.

П р и м е р 6. Препаративная форма капсула.

Капсулы, содержащие 250 мг соединения 38, приготавливают с использованием следующих ингредиентов, мг: Соединение 38 HCl соль 255,4 Сыпучий порошок кукурузного крахмала 150 Кукурузный крахмал 144,6
Соединение 38 (HCl соль, 255,4 мг), сыпучий порошок кукурузного крахмала (150 мг) и кукурузный крахмал (144,6 мг) смешивают в подходящем смесителе до тех пор, пока смесь не будет гомогенной. Смесь используется для заполнения твердых желатиновых капсул, чистый вес исполнения 550 мг.

П р и м е р 7. Препаративная форма суспензия.

Стерильную нерастворимую форму соединения 38 измельчают или просеивают до размера частиц, подходящего для образования суспензии. Данный материал в виде частиц суспендируют в следующем носителе, Лецитан 1 Цитрат натрия 2 Пропилпарабон 0,015
Дистиллированная вода сколько необходимо до желаемого объема.

П р и м е р 8. Препаративная форма таблетка.

Таблетки, содержащие 250 мг соединения 38, приготавливают с использованием следующей композиции, мг: Соединение 38 HCl, соль 255,4 Микрокристаллическая целлюлоза 101,1 Натриевая кроскармелоза 12,0 Провидон 12,0 Стеарат магния 3,0 Стеариновая кислота 4,0 Очищенная вода 0,16 мл

Формула изобретения

1. Производные гликопептидов общей формулы I

где R - водород или (4-эпи-ванкозаминил)-О-глюкозильная группа общей формулы

или глюкозильная группа формулы

X - водород или хлор;
Y - водород или хлор;
R₁, R₂, R₃ - водород, С₁ - С₁₂-алкил, С₂ - С₉-алканоил или группа общей формулы


n = 1 - 3;
R₄ - водород, галоид, C₁ - C₈-алкил, C₁ - C₈-алкокси или группа общей формулы

где R₅ и R₆ - водород или С₁ - С₃ - алкил;
p = 0 - 2;
при условии, что когда R - (4-эпи-(ванкозаминил)-О-глюкозильная группа, R₁, R₂ и R₃ - не все являются водородом, и, когда R - глюкозил или водород, R₁ и R₃ оба не являются водородом,
или их фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что в нем R - (4-эпи-ванкозиминил)-О-глюкозильная группа, X и Y - хлор, R₁ и R₃ - водород и R₂ - С₈ - С₁₀-алкил.

3. Соединение по п.2, отличающееся тем, что в нем R₂ - н-октил.

4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что в нем R - (4-эпи-ванкозаминил)-О-глюкозильная группа, X и Y - хлор, R₁ и R₃ - водород и R₂ - группа общей формулы

5. Соединение по п.4, отличающееся тем, что в нем n =1 и R₄ - галоид.

6. Соединение по п.5, отличающееся тем, что в нем R₄ - хлор.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19