Аддукты оротовой кислоты с аминокислотами или аминами, проявляющие гепатозащитный эффект
Использование: в медицине, химии и сельском хозяйстве. Сущность изобретения: предложены аддукты оротовой кислоты с аминокислотами или аминами ф-лы 1, проявляющие гепатозащитный эффект NH2R -остатки Бета аланина, -аминоэнантовой кислоты, метилового эфира изолейцина, D глутаминовой кислоты, амида глутаминовой кислоты, аспарагина, l лизина, фурфуриламина, 2-(3,4-диоксифенил)этиламина, гуанидина, D-(-)-трео-n-нитрофенил-2-амино-пропандиола-1,3. Реагент 1: оротовая кислота. Реагент 2: бета аланин. Условия реакции: температура до 80°С перемешивание, охлаждение и кристаллизация. Выход 69% от теории. Структура ф-лы 1:
1 табл.
Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, в частности к производным оротовой кислоты, и может быть использовано в медицине, химии и в сельском хозяйстве.
Известно использование в медицине для защиты печени от интоксикаций, профилактики и лечения гепатита препаратов эссенциале (ФРГ), легалон (СФРЮ), лив-52 (Индия), оротат калия (СНГ) [1] и ряда симптоматических средств. Арсенал лекарственных средств гепатопротекторного действия очень ограничен. Так перечисленные средства часто мало эффективны, обладают побочными действиями и в основном зарубежного производства. Установлено, что эссенциале усиливает жировую дистрофию печени, недостаточно эффективен и в настоящее время он закупается только странами СНГ. Основным показанием для клинического применения калия оротата является стимулирование анаболических процессов и белкового обмена, например, при дистрофии миокарда, элиментарной дистрофии у детей, прогрессирующей мышечной дистрофии. В меньшей степени препарат используется при хронических гепатитах и циррозе печени. В связи с перечисленным, калия оротат не нашел широкого применения в гастроэнтерологии [2] а чаще используется в качестве стимулятора анаболических процессов. По химической структуре и по биологическому эффекту наиболее близким к заявляемым соединениям аналогом можно считать калия оротат, который выбран нами за прототип [1] и служил эталоном (препаратом сравнения) при экспериментальном изучении гепатозащитного действия заявляемых соединений (наряду с эссенциале и силибором). Целью изобретения является создание новых потенциальных гепатопротекторов, близких к метаболитам организма, и их аналогам, обладающим высоким гепатозащитным эффектом. Указанная цель достигается синтезом новых аддуктов оротовой кислоты с аминокислотами или аминами общей формулы:






аддукты оротовой кислоты с аминами (соединения ЛОС-10-87, ЛОС-9-88, ЛОС-1-88, ЛОС-15-88). Заявляемые соединения синтезированы впервые, в литературе они не описаны. Синтез их осуществлялся двумя основными способами: взаимодействием оротовой кислоты с аминокислотой или амином в водной среде (либо в отдельных случаях в органических растворителях) при комнатной температуре или при нагревании либо путем проведения обменной реакции между предварительно приготовленной, но невыделяемой из водного раствора в чистом виде водорастворимой триэтиламинной соли оротовой кислоты и хлоргидратом соответствующей аминокислоты или амина, полу-ченным, в свою очередь, из эквимолярных количеств соляной кислоты и соответствующего амина. Приготовленные такими способами соединения являются аддуктами состава 1:1, строение и состав которых подтверждены данными элементарного анализа, ИК- и ПМР-спектроскопии. Оценку гепатозащитной активности исследуемых соединений проводили на моделях острого и хронического токсического активного гепатита у мышей и крыс в диапазоне доз 5-50 мг/кг при внутрибрюшинном введении испытуемых образцов и препаратов сравнения. Использовались следующие методы и получены следующие результаты исследований гепатозащитного эффекта заявляемых соединений. 1. Оценка гепатозащитной активности на модели острого токсического гепатита у мышей. Испытания химических соединений проводили на беспородных мышах-самцах массой 20-22 г на модели острого токсического гепатита, который вызывали однократным внутрибрюшинным введением четыреххлористого углерода (ССl4) в дозе 1,5 ДЛ50 в виде 50%-ного раствора на вазелиновом масле. Испытуемые химические соединения вводили однократно внутрибрюшинно за 1 ч до введения ССl4 в дозе 50 мг/кг. В качестве препаратов сравнения использовали отечественный гепатопротектор силибор и эссенциале (Германия, "Наттерманн"). Испытуемые химические соединения и препараты сравнения вводили в крахмальной слизи. Гепатозащитный эффект оценивали по выживаемости мышей в течение 3-4 сут. Степень гепатозащитного эффекта выражали в процентах и определяли отношением числа выживших к общему числу использованных животных. 2. Оценка гепатозащитной активности на модели хронического токсического активного гепатита у крыс. Исследования проводили на беспородных крысах-самцах массой 180-200 г. Гепатозащитное действие испытуемых химических соединений оценивали на модели хронического токсического активного гепатита (ХТАГ). Для моделирования ХТАГ животным внутрибрюшинно вводили ежедневно в течение 4 дней ССl4 в дозе 0,2 мл 40%-ного раствора на вазелиновом масле на 100 г массы тела животного. Испытуемые химические соединения вводили в зависимости от МПД (5-25 мг/кг) внутрибрюшинно ежедневно за час до введения гепатотоксина в течение 6 дней. Забой животных осуществляли через 24 ч после последнего введения испытуемого химического соединения. После забоя животных извлекали печень и проводили гистологическую обработку материала стандартными методами с окраской гематоксилин-эозином. На гистологических препаратах оценивали в баллах (от 0 до 2) степень альтерации ткани печени. Основное внимание обращали на степень жировой и белковой дистрофии гепатоцитов, состояние микроциркулярного русла печени, активность воспалительного процесса паренхимы. Препаратами сравнения служили эссенциале, калия оротат и силибор, которые вводили по указанной выше схеме. 1. Оценка гепатозащитного эффекта на модели острого токсического гепатита у мышей. В результате проведенных первичных испытаний новых производных оротовой кислоты было выявлено, что почти все (11 из 12) испытанные соединения по сравнению с препаратами-стандартами (эссенциале, силибор) повышали выживаемость мышей при отравлении ССl4 (см.таблицу). Наибольшая степень выживаемости (70-80% ) была при использовании соединений ЛОС-15-88 и ЛОС-9-88). Несколько ниже был эффект у соединений ЛОС-11-88, ЛОС-10-87 и ЛОС-1-88. Однако и в этом случае гепатозащитная активность в 2 раза превосходила препараты сравнения эссенциале и силибор, применяемые в клинической практике. 2. Оценка гепатозащитной активности на модели хронического токсического активного гепатита у крыс. Изучение гепатозащитной активности химических соединений проводили на модели хронического токсического активного гепатита у крыс, вызываемого курсовым введением четыреххлористого углерода. На 8-е сутки забоя у нелеченных животных после гистологического изучения паренхимы печени в ткани печени наблюдались выраженные признаки токсического поражения: центролобулярная резко выраженная вакуольнокапельная жировая дистрофия, занимающая большую часть дольки, белковая дистрофия, потеря белочной структуры, кариолизис отдельных гепатоцитов, в портальных полях крупно- и мелкоочаговые воспалительные инфильтраты, состоящие из лимфоцитов, расширение центральных вен и синусоидов. Морфометрический показатель поражения печени (ИПп) был равен 1,03



Слабее гепатозащитный эффект (30%) наблюдался при использовании соединения ЛОС-10-87. При этом мелкокапельная дистрофия занимала 1/4 дольки. Среди гепатоцитов и в синусоидах встречались клетки РЭС. Больше их было в портальных полях. Однако отсутствовала крупнокапельная жировая дистрофия, некрозы, отек паренхимы, диффузия и портальная инфильтрация. Следует отметить, что в аддуктах оротовой кислоты с аминокислотами при переходе от аминокислоты с длиной алкильной цепи, состоящей из двух метиленовых групп (ЛОС-3-88), к аддукту с аминокислотой, содержащей 6 метиленовых групп (ЛОС-8-88) гепатозащитный эффект полностью исчезает. Такая же закономерность проявляется при замене одной карбоксильной группы в оротате глутаминовой кислоты (ЛОС-2-88) на карбоксамидную группировку (ЛОС-6-88). Таким образом, в результате проведенных испытаний новых аддуктов оротовой кислоты на моделях острого и хронического токсического гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом, выявлено наличие высокой гепатозащитной активности у химических соединений ЛОС-3-88, ЛОС-2-88 и ЛОС-5-88, в несколько раз превышающей препараты сравнения эссенциале, калия оротат и силибор. Учитывая низкую токсичность изученных соединений и сходство по структуре с эндогенными веществами, можно заключить, что указанные соединения представляют собой перспективные новые химические соединения, на базе которых могут быть созданы оригинальные эффективные лекарственные препараты. П р и м е р 1. Получение аддукта оротовой кислоты и



Формула изобретения




X CH (CH2)n Z
где X H, COOH, COOAIk, Z H, COOH, NH2, CONH2, n 0 5,
проявляющие гепатозащитный эффект.
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 19.06.2008
Извещение опубликовано: 27.06.2010 БИ: 18/2010