Способ получения триходермина

 

Использование: сельскохозяйственная микробиология, производство средств защиты растений от возбудителей заболеваний, производство триходермина. Сущность изобретения: готовят стерильную питательную среду, содержащую, мас.%: глицерин 0,3-2,0; зеленая патока 0,5-3; гидролизат белково-витаминного концентрата 3-10; фосфаты 0,2-0,6; сернокислый магний 0,3-0,5; азотнокислый аммоний 0,3-0,6, вода остальное. Засевают штаммом гриба Trichoderma ligporum, культивируют при аэрации до максимального накопления мицелия или спорообразования. В процессе культивирования целесообразно при естественном снижении pH культуральной жидкости до 3,0-4,5 добавлять глицерин в количестве 0,3-1% . Полученную культуральную жидкость концентрируют до содержания сухих веществ (СВ) 6-10%. Для получения жидкого препарата в концентрат (СВ 6-10%) вводят 4-10% глицерина и 1-3% поливинилпироллидона или 0,1-1% полиэтиленоксида. Для получения препарата в сухом виде в концентрат культуральной жидкости (СВ 20-30%) вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или полыгорскита в соотношении 1:2 в количестве 10-30% к СВ, смесь гранулируют и высушивают. 3 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и касается производства средств защиты растений от болезней, в частности способа получения грибного препарата триходермина.

Известны способы получения триходермина путем глубинного культивирования микроскопического гриба вида Trichoderma на питательных средах, содержащих источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим концентрированием и сушкой концентрата [1] Наиболее близким техническим решением к изобретению является способ получения триходермина путем глубинного культивирования микроскопического гриба на питательной среде, содержащей кукурузный экстракт, мелассу, соли и воду, концентрирования культуральной жидкости, введения в концентрат естественного цеолита клиноптилолита, гранулирования смеси, высушивания и измельчения гранул [2] Недостатком известного способа является сравнительно низкое содержание в препарате активного начала за счет сравнительно низкой влагосвязывающей способности используемого клиноптилолита.

Целью изобретения является повышение содержания активного начала в препарате, а также получение триходермина как в сухом, так и в жидком виде.

Сущность способа заключается в следующем.

Готовят стерильную питательную среду, содержащую, мас. Глицерин 0,3-2 Зеленая патока 0,5-3 Гидролизат белко- во-витаминного концентрата (БВК) 3-10 Калий фосфорно- кислый 0,2-0,6 Сернокислый магний 0,3-0,5 Азотнокислый аммо- ний 0,3-0,6 Вода Остальное.

Засевают среду штаммов гриба вида Trichoderma lignorum и культивируют при перемешивании и аэрации. В процессе культивирования при естественном снижении рН культуральной жидкости до 4,5-3,0 добавляют глицерин в количестве 0,3-1,0% Культивирование осуществляют в течение 3-5 сут.

Для получения жидкого препарата культивирование осуществляют до максимального накопления мицелиальной массы или спорообразования, для получения сухого препарата до максимального спорообразования.

При получении жидкого препарата культуральную жидкость концентрируют до СВ 6-10% и в концентрат вводят 4-10% глицерина и 1-3% поливинилпироллидона или 0,1-1,0% полиэтиленоксида.

Для получения сухого триходермина в концентрат культуральной жидкости (СВ 20-30%) вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или палыгорскита в соотношении 1: 2 в количестве 10-30% к сухим веществам, полученную смесь гранулируют и высушивают.

П р и м е р 1. Готовят 3 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 0,3 Зеленая патока 3,0 Гидролизат БВК 5,0 Фосфаты 0,2 Сернокислый магний 0,3 Азотнокислый аммоний 0,6 Вода Остальное Засевают среду посевным материалом из расчета 5% от объема среды штамма гриба Trichoderma lignorum ТБ-10 и культивируют в ферментере объемом 5 м³ при аэрации и перемешивании, продолжительность культивирования 4 сут.

Получают культуральную жидкость с титром хламидоспор 110⁸ в 1 мл.

По известному способу получают 0,710⁸ спор/мл.

Культуральную жидкость разделяют на 2 части, одну из которых используют для получения жидкого препарата, а другую сухого.

Получение триходермина в жидком виде.

Полученную культуральную жидкость концентрируют фильтрацией (СВ 10%), получая 70 кг пасты, содержащей мицелий, остатки питательной среды и хламидоспоры (титр 210⁹ спор/г).

В пасту добавляют 10% (7 кг) глицерина и 0,1% (0,07 кг) смоченного полиэтиленоксида, перемешивают и охлаждают.

Полученный препарат, представляющий собой стойкую нерасслаивающуюся суспензию, имеет следующую характеристику: титр хламидоспор 1,0 10⁹ спор/мл, биологическая эффективность 70% против корневых гнилей огурцов и томатов, срок хранения до трех месяцев при температуре не выше 10^оС.

Получение препарата в сухом виде.

В пасту (СВ 20%) добавляют 2,5 кг (10%) смеси цеолита NaX и монтмориллонита в соотношении 1:2, выдерживают при перемешивании для перераспределения влаги и пропускают через гранулятор ГР-75, гранулы высушивают, фасуют и маркируют.

Полученный препарат представляет собой гранулы от светло-серого до темно-коричневого цвета, которые в процессе хранения и транспортирования не слеживаются. Биологическая эффективность препарата против корневых гнилей огурцов и томатов 65% титр хламидоспор 1,010⁹ спор/г.

П р и м е р 2. Готовят 3,0 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 2,0 Зеленая патока 0,5 Гидролизат БВК 10 Фосфаты 0,6 Сернокислый магний 0,3 Азотнокислый аммоний 0,3 Вода Остальное Процесс культивирования и концентрирования осуществляют, как описано в примере 1, но в процессе культивирования при снижении рН культуральной жидкости до 4,5 вводят глицерин в количестве 0,3% длительность культивирования 3 сут.

Из полученной культуральной жидкости готовят жидкий препарат триходермин, вводя в пасту 20 кг (10%) глицерина и 2 кг (1%) поливинилпироллидона.

Получают триходермин, представляющий собой устойчивую суспензию и имеющий следующую характеристику: титр жизнеспособных хламидоспор 0,5 10⁸ спор/мл,
биологическая эффективность 70% против корневых гнилей огурцов и томатов.

П р и м е р 3. Готовят 3,0 м³ стерильной питательной среды, содержащей, мас. Глицерин 1,5 Зеленая патока 2,5 Гидролизат БВК 3,0 Фосфаты 0,4 Сернокислый магний 0,4 Азотнокислый аммоний 0,5 Вода Остальное
Процесс культивирования и концентрирования осуществляют как описано в примере 2, но глицерин вводят при рН культуральной жидкости 3,0 в количестве 1,0% длительность культивирования составляет 5 сут.

Из полученной культуральной жидкости готовят сухой препарат как описано в примере 1, но в пасту вводят 15 кг (30%) смеси цеолита NaX и палыгорскита в соотношении 1:2.

Биологическая эффективность препарата против корневых гнилей огурцов и томатов 75% титр хламидоспор 2 10⁹ спор/г.

Как видно из приведенных примеров, предлагаемый способ позволяет увеличить содержание активного начала в сухом препарате с 0,8 10⁹ до 2 10⁹ спор/г и получать жидкий препарат, не уступающий по биологической активности сухому.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИХОДЕРМИНА путем глубинного культивирования микроскопических грибов Trichoderma lignorum на питательной среде, содержащей источники углерода, органического азота, фосфаты, сернокислый магний, азотнокислый аммоний и воду, с последующим концентрированием культуральной жидкости, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют глицерин и зеленую патоку, в качестве источника органического азота - гидролизат белково-витаминного концентрата при следующем соотношении компонентов в среде, мас.

Глицерин 0,3 2,0
Зеленая патока 0,5 3,0
Гидролизат белково-витаминного концентрата 3,0 10,0
Фосфаты 0,2 0,6
Сернокислый магний 0,3 0,5
Азотнокислый аммоний 0,3 0,6
Вода Остальное
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в процессе культивирования при естественном снижении pH культуральной жидкости до 3,0 4,5 дополнительно вводят глицерин в количестве 0,3 1 мас.

3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что культивирование гриба проводят до максимального накопления мицелиальной массы или спорообразования, концентрирование культуральной жидкости осуществляют до содержания сухих веществ 6 10% в концентрат вводят 4 10 мас. глицерина и 0,1 1,0 мас. полиэтиленоксида или 1 3 мас. поливинилпироллидона.

4. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что культивирование гриба проводят до максимального спорообразования, концентрирование культуральной жидкости осуществляют до содержания сухих веществ 20 30% в концентрат вводят смесь цеолита типа NaX и монтмориллонита или полыгорскита в соотношении 1 2 в количестве 10 30% к сухим веществам, полученную смесь гранулируют и высушивают.