Способ определения степени инфицирования крови

 

Использование: в области медицины, в частности может применяться в клинической практике. Сущность изобретения: при проведении люминесцентного исследования мазка крови со специфическими иммунофлуоресцирущими сыворотками, дополнительно определяют количество микробных клеток и фагоцитирующих клеток в мазке и количество лейкоцитов и процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в 1 мл периферической крови оптическим способом. Степень инфицирования (количество микробных клеток в 1 мл крови) находят по формуле C=(ЛФМ)/(K100), где Л - количество лейкоцитов в 1 мл крови, Ф - процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в 1 мл крови, М - количество микробных клеток в мазке крови, К - количество фагоцитирующих клеток в мазке при люминесцентной микроскопии крови, 100 - коэффициент перевода относительных чисел в абсолютные. При 0<C 7 устанавливают низкую степень инфицирования крови, при 7 < С < 30 - среднюю, а при C 30 - высокую степень. Способ прост в исполнении и позволяет ускорить определения степени инфицирования крови.

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к способам диагностики, и может быть использовано в клинической практике.

Известны способы культуральной диагностики инфицирования различных сред организма и биологических жидкостей: спинномозговой жидкости [1] , мокроты [2] , мочи [3] , плевральной жидкости [4] .

Известен также способ определения инфицирования крови, основанный на посевах крови на специфические питательные среды [5] . Данный способ является дорогостоящим, требующим предварительного приготовления питательных сред, специальных условий проведения исследования (t, влажность) и дает достаточно низкую диагностику.

Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является способ определения инфицирования крови методом люминесцентной микроскопии периферической крови, включающий качественное определение наличия микробных клеток [6] .

Однако данный способ не дает возможности определить количественное содержание микробных клеток в единице объема крови. В практической деятельности клиницистов интересует не только микробное присутствие, но в большей мере степень инфицирования, которая может быть определена по содержанию микробных клеток в единице объема исследуемой среды, жидкости, крови. Это позволило бы оценить тяжесть процесса, планировать лечение и контролировать его эффективность, прогнозировать течение заболевания. Следовательно, существующий способ является недостаточно точным.

Целью изобретения является количественная оценка инфицирования крови за счет нахождения количества микробных клеток в единице объема периферической крови.

Указанная цель достигается тем, что при проведении люминесцентного исследования мазка крови со специфическими иммунофлюоресцирующими сыворотками, дополнительно определяют количество фагоцитирующих клеток и количество микробных клеток, дополнительно определяют количество лейкоцитов и процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в 1 мл периферической крови оптическим способом. Степень инфицирования крови находят из формулы C= , где Л - количество лейкоцитов в 1 мл периферической крови; Ф - процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов (фагоцитирующие клетки) в периферической крови; К - количество фагоцитирующих клеток при люминесцентной микроскопии мазка крови; М - количество микробных клеток в мазке при люминесцентной микроскопии; 100 - коэффициент перевода относительные в абсолютные числа.

Способ осуществляется следующим образом. У больных кровь берут из вены в стирильный шприц с гепарином. На обезжиренные стекла наносят каплю крови, делают тонкий мазок. Мазки делают в количестве 3-6 на каждого больного. Мазки сушат, обрабатывают 96^о спиртом 15, высушивают на воздухе. Мазки обрабатывают кроличьей диагностической сывороткой (специфической), помещают на 1 ч во влажную камеру, чтобы не высохла сыворотка (в чашки Петри кладется фильтровальная бумага с каплей буфера). Через 1 ч буфером смывают с мазков оставшуюся сыворотку, дважды по 10 мин в буфере. Мазки сушат 20-30 мин. Красят ослиным глобулином. После окраски во влажной камере в чашке Петри мазки промывают дважды по 10 мин в забуферном физиологическом растворе. После всех красок мазки промывают еще проточной холодной водой, высушивают. Используют различные специфические диагностические сыворотки, позволяющие типировать различные микробные клетки. Просматривают мазки на люминесцентном микроскопе МБИ - 15 без покровных стекол. Каплю иммерсионного масла наносят на мазок. Объектив 90^х, апертура 1,25, окуляр 10^х, сила тока 4,5 А.

При проведении люминесцентной микроскопии определяют и подсчитывают количество светящихся микробных клеток (М), находящиеся внутриклеточно и внеклеточно, одновременно подсчитывают количество фагоцитирующих клеток - сегментоядерные нейтрофилы и моноциты (К).

Количество лейкоцитов (Л) и лейкоцитарную формулу определяют традиционным оптическим способом [7] . После определения лейкоцитарной формулы находят процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов (Ф). Степень инфицирования находят из формулы C= микробных клеток/мл периферической крови.

П р и м е р 1. Больная И. 53 лет. История болезни 2021, 1991 г. Диагноз: Ревматизм, А2, ревмокардит, рестеноз, васкулит церебральных, легочных сосудов. Осложнения: Н2, мерцательная аритмия.

Первое обследование проведено 1.03.91. Количество лейкоцитов в 1 мл периферической крови равно 5000. Лейкоцитарная формула эозинофилы - 3% , нейтрофилы - палочкоядерные 2% , сегментоядерные 49% , лимфоциты - 44% , моноциты - 2% . Процентное содержание фагоцитирующих клеток: Ф = 49% (сегментоядерные нейтрофилы) + 2% (моноциты) = 51% .

Методом люминесцентной микроскопии крови выявлено присутствие стрептококка (строго специфическое свечение микробных клеток). При подсчете в одном мазке установлено 2 микробных клетки (М) и 560 фагоцитирующих клеток (К). Следовательно, степень инфицирования, оцениваемая по количеству микробных клеток в единице объема крови, определяется по формуле C= = микробных клеток/мл крови.

Проведено лечение антибиотиками (ампициллин), нестероидными противовоспалительными средствами. При повторном обследовании через три недели в периферической крови микробные клетки не обнаружены, инфицирование крови отсутствует. Таким образом, степень инфицирования может являться одним из критериев эффективности лечения.

П р и м е р 2. Больная Г. , 35 лет. История болезни 2044, 1991 г. Диагноз: ревматизм, А2, ревмокардит, митральный стеноз, недостаточность митрального клапана, осложнение: Н1.

Первое обследование проведено 27.02.91. Количество лейкоцитов в 1 мл периферической крови равно 7300 (Л), процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов 64% , моноцитов 3% , Ф = 64% + 3% = 67% .

Методом люминесцентной микроскопии в мазке крови обнаружены микробные клетки (стрептококк) в количестве 2 (М) при 560 фагоцитирующих клетках крови (К). Следовательно, степень инфицирования крови, определяемая по формуле, равна C= = = 17 мкб/мл Больной проводилась антибактериальная, противовоспалительная терапия, однако сохранялась высокая степень активности процесса, субфебрильная температура, появились признаки поражения легких. Повторное обследование через две недели. При люминесценном исследовании мазка крови вновь обнаружены микробные клетки (стрептококк) - 1 в мазке (М), при 302 фагоцитирующих клетках крови в мазке (К). Количество лейкоцитов (Л) в 1 мл крови равно 9500, содержание сегментоядерных нейтрофилов 75% и моноцитов 2% . Ф = 75% + 2% = 77% . Степень инфицирования крови равна C= = = 24 мкб/мл
У больной выявлено увеличение степени инфицирования крови, что совпадает с ухудшением в течение процесса, поражении новых органов. Таким образом установлена высокая информативность способа, позволяющая быстро в процессе наблюдения за больным контролировать степень инфицирования крови, эффективность лечения у двух больных (примеры 1 и 2) при проведении люминесцентного исследования мазка крови обнаружены по 2 микробные клетки с одинаковым соотношением с фагоцитирующими клетками (по 560 в мазке). Однако степень инфицирования (количество микробных клеток в единице объема) крови отличается, что связано с различным количеством фагоцитирующих клеток в периферической крови.

Достоинством способа является более точная диагностика степени инфицирования крови с определением количества микробных клеток, находящихся в 1 мл крови. Это позволяет проводить динамическое наблюдение за течением процесса, оценивать эффективность лечебных мероприятий. Способ прост в исполнении, не требует питательных сред, сложной аппаратуры. (56) 1. Руководство по инфекционным болезням. Под ред. В. И. Покровского, К. М. Лобана. - М. : Медицина, 1986, с. 370-371.

2. Вишнякова А. А. , Путов Н. В. Тер. архив, 1990, N 3, с. 15-18.

3. Справочник по нефрологии. Под ред. И. Е. Тареевой, Н. А. Мухина. - М. : Медицина, 1986, с. 41-42
4. Руководство по пульмонологии. Под ред. Н. В. Путова, Г. Б. Федосеева, Л. : Медицина, 1984, с. 422-423.

5. Демин А. А. и Демин Ал. А. Бактериальные эндокардиты. М. : Медицина, 1978, с. 93-98.

6. Забужицкий Ю. Н. Метод люминесцентной микроскопии. Л. : Медицина, 1964, с. 154.

7. Справочник по функциональной диагностике. Под ред. И. А. Кассирского, М. : Медицина, 1970, с. 308-315.

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ИНФИЦИРОВАНИЯ КРОВИ, включающий обнаружение микробных клеток при проведении люминесцентного исследования мазка крови со специфическими иммунофлуоресцирующими сыворотками, отличающийся тем, что при проведении люминесцентного исследования мазка крови дополнительно определяют количество фагоцитирующих клеток и количество микробных клеток и одновременно количество лейкоцитов и процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в 1 мл периферической крови, а степень инфицирования крови (С) рассчитывают по формуле
C=
где Л - количество лейкоцитов в 1 мл периферической крови;
Ф - процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов (фагоцитирующие клетки) в 1 мл периферической крови;
М - количество микробных клеток в мазке крови при люминесцентном исследовании;
К - количество фагоцитирующих клеток в мазке крови при люминесцентном исследовании;
100 - коэффициент перевода относительных чисел в абсолютные, и при 0 < С 7 устанавливают низкую, при 7 < С < 30 - среднюю, при С 30 - высокую степень инфицирования крови.