Способ моделирования регенерации печени

K ЦАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации но ттатентам и товарным знакам (21) 4064383/14 (22) 07.09.90 (46) 30.11.93 Бвл. ¹ 43-44 (71) Горьковский медицинский институт им.С.M.Кирова (72) Солопаева И.M.; Максимов Н.В. (73) Максимов Николай Виссарионович (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕГЕНЕРА(51) 5 А 61 К 35 б

ЦИИ ПЕЧЕНИ (57) Изобретение относится к экспериментальной медицине. Цель — повышение темпов регенерации печени в эксперименте. Для этого резецируют печень в объеме 65- 70% массы органа, вводят подкожно хорионический гонадотропин и дополнительно интрагастрально — МИГИ вЂ” К в дозе 5 мл/кг массы лабораторного животного. 1 табл.

2003339

Изобретение относится к области био- сле начала введения указанных препаратов

norw и касается увеличения количества на тест-площадь препарата печени. окренормальных гепатоцитов крыс, что является шенного гематоксилином с докрашиванием актуальным, т.к, связано с актуальной про- эозином, обнаружилось 14,0 0,5 нормальблемой клеточного размножения; роста и 5 ныхгепатоцитов, чтооказалосьдостоверно дифференцировки клеток, больше(Р меньше 0,01), чем в печени крыс, Предлагаемую модель усиления образо- подвергавшихся только резекции печени вения гепатоцитов достаточно широко мож- (8,5й0,60), а также получавших после резекно использовать е экспериментах по. ции печени гонадотропин хорионический биологии, фармакологии и токсикологии для 10 (10,3й 0,68) или гидролизат из мидий пищеизучения е условиях интенсивного образо- вой (10,7++ 0,39), вводимых в тех же дозах и вания гепатоцитов тем же курсом, как и при одновременном динамики состояния различных клеточ- введении этих препаратов в комплексе (табных структур (ядра, цитоплазмы, АЗР,. ГЭР, . лица). митохондрий и др.);: 5 К нормальным гепатоцитам относили динамики различных биохимических клетки с хорошо структурированным ядром, процессов в печени(синтез белке, фермен- неповрежденной клеточной мембраной. с тов, липидов, углеводов и др.); достаточным количеством цитоплазмы. для испытания препаратов на способ-: .. Гидролиэетиз мидий пищевой(МИДИ-К) ностьихтормозитьилиусиливатьклеточное 20 разрешен в качестве пищевой добавки, что размножение; согласовано с Министерством здравоохрадля изучения токсичности препаратов, в нения СССР (hb 143-5/169-12 от 15.09.89 r). ° частности, для изучения их влияния не раэ- Таким образом; изобретение отвечает личные процессы, связанные с клеточным критериям. "новйзна" и "существенные отразмножением. - -: 25 личия", т.к. найдено новое применение раИзвестно влияние резекции печени на -нее известного препарате гонадотропина восстановительныепроцессывпечени(б,П.,: хорионического в комплексе с МИДИ-К, Солопаев, Регенерация нормальной и пато- . причем эте новая область использования логически измененной печени, Дисс. докт. комплекса этйх препаратов с очевидностью мед; наук. М.,1962). 30 не вйтекает из ранее известных свойств

Наиболее близким по техническойсущ" : МИДИ-К и комплекса его с гонадотропином ности является способ увелйчения количе- хорионическим и основано на новом свойстстьа нормальных гепатоцитов йутем ве комплекса этих препаратов. введения хорионического гонадотропииа . Общее количество нормальных гепатопосле резекции печени. (ИМ. Солопаева. 35 цидов(НГ) на тест-площадь препаратов пе: Хорионический гонадотропин как стимула- чени. Увеличение 90х1,5х10. тор регенерации печени и перспективы его В работе использовано30самцов белых использования. В кн.: Сб, н. трудов ГМИ беспородных крыс, которые были разделе"Регенерация, адаптация и гбмеостез", ны не 4 группы: 1-8 крыс, подвергавшихся

Горький, 1990, с. 16). Количество нормаль- 40 только резекции 65-707 массы печени; 2-7 . ных гепатоцитов е печени через 48 ч увели- крыс, которым после резекции печени в чивается как после резекции печени в этом же объеме вводили через зонд в желуобьеме 65-70 массы органа (6.9+ 0,23), док 2 мл 75 водного раствора МИДИ-К, т.е. так и после введения коммерческого гонадот- 1,5 мл МИДИ-К на животное; 3-9 оперированропине после резекции печени(9,8ч 0,31), но 45 ных крыс, получавших сразу после резекции это увеличение нормальных гепатоцитов печени гонадотройин хорионический под коменьше, чем при использовании предлегае- жу один рез в день в течение 2 дней в дозе от мого способа моделирования увеличения 75 до 85 ЕД на 100,0 массы тела; 4 — 6 крыс, образования нормальных гепатоцитов. получавших после резекции печени гонадотЦелью изобретения является увеличе- 50 ропин хорионический и одновременно миние количества нормальных гепатоцитов в дийный гидролизат в тех же дозах и тем же печени на тест-площадь. препарате. курсом, как и животные 2 и 3 групп. Гибели

Поставленная цель достигается приме- животных после введения препаратов не нением гонадотропина хорионического было. (отечественного препарата хорионического 55 Гонадотропин хорионичеекий вводят 2

1онедотропина) в комплексе с гидролизатом дня подряд под кожу один раз в день в дозе из мидий пищевым (МИДИ-КК) сразу после 75-85 ЕД на 100,0 массы тела. Такая доза пезекции 65-707ь массы органа у самцов гормона была выбрана потому, что дает бибелых беспородных крыс, Через два дня по- ологический эффект. Однократное ежеднееЮ03339

50 ное введение препарата производили потому, что введенный s организм этот гормон распадается и выводится из организма в течение 24 часов. Введение гонадотропина хорионического в течение двух дней подряд обусловлено тем, что этот гормон в укаэанных дозах эа этот срок обеспечивает деление большинства готовых к делению гепатоцитав (Н,Л. Иванова, Действие хорионического гонадотропина человека на печень крыс с хроническим токсическим гепатитом, Дисс. канд, биол. наук. M., 19ВЗ), Резекцию печени делали для того, чтобы стимулировать регенерационный процесс в печени, который использовали как эталон регенерации, на фоне которого можно достоверно выявить действие веществ, способствующих увеличению или уменьшение количества нормальных гепатоцитов.

Резекцию печени делали у животных всех групп для того, чтобы исследование проходило в равных условиях для всех групп, кроме воздействия исследуемых препаратов, Способ моделирования увеличения количества нормальных гепатоцитов с помощью комплекса гонадотропина хорионического с МИДИ-К осуществляется следующим образом, Животным делают резекцию печени в обьеме 65-707, массы органа, Сразу после операции и на следующий день после нее (всего два дня) крысам один раз в день вводят падкожно гонадотропин хорионический в дозе от 75 до 85 ЕД на 100,0 массы тела, и в желудок через зонд вводят по 2 мл 757, водного раствора МИДИ-I, т.е. по 1 5 мл гидролиэата на крысу, Через 48 ч после начала введения гидрализата и гормона у животных берут для исследования печень, Кусочки печени фиксируют в 10 j Iф1Iоoрpм а л и нHеe, после чего готовят парафиновые срезы печени толщиной

5 — 6 мкм и окрашивают их гематоксилином с докрашиванием эозином. При увеличении светового микроскопа 90х1.5х10 на тест-площадь препарата подсчитывают количество нормальных одноядерных и двухъядерных нормальных гепатоцитов с заданной степенью достоверности при Р=0,05 с использованием таблиц Стрелкова (Р.Б. Стрелков.

Метод вычисления стандартной ошибки и доверительных ин-гервалов средних арифметических величин с помощью таблицы, Сухуми. Алашари, 1966). Статистическую обработку полученных данных делали по

Стьюденту (Л.С. Каминский, Статистическая обработка лабораторных и клинических данных. Медицина. Ленинградское отделение, 1964).

ЗО

Пример 1. Крысе ¹ 5 делали резекцию печени в объеме 65 — 70 g, массы органа, Через 48 ч после операции у животного брали кусочек печени для приготовления парафиновых срезов голщиной 5-6 мкм, которые окрашивали гематоксилинам с дакраской эозином. На световом микроскопе при увеличении 90х1,5х10 на тест-площадь препарата подсчитываRè количество одноядерных и двухъядерных нормальных гепатоцитов, сумма которых составила общее количество гепатоцитов, которая у крысы М 5 равнялась 7,2 0,72.

П-р и м е р 2. Крысе N 15 делали резекцию печени в объеме 65-707 массы органа и сразу после операции и на следующий день после нее вводили в желудок через зонд 2 мл 757ь водного раствора МИДИ-К один раз в день.

Через 48 ч после операции и начала введения МИДИ-К у животного брали кусочек печени для приготовления парафиновых срезов толщиной 5 — 6 мкм, которые окрашивали гематоксилином и докрашивали зозином. На световом микроскопе при увеличении

90х1,5х10 на тест-площадь препарата печени подсчитывали количество одноядерных и двухъядерных гепатоцитов, сумма которых составила общее количество нормальных гепатоцитов, которая у крысы ¹ 15 равнялась 9,8 0,98.

Пример 3. Крысе № 24 делали резекцию печени в обьеме 65 — 707 массы тела и сразу после операции и на следующий день вводили гонадотропин хорионический под кожу один раз в день в дозе 75 ЕД на 100,0 массы тела, Через 48 ч после операции и начала введения гормона у живатнага брали кусочек печени для приготовления парафиновых срезов толщиной 5-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином с последующим до крашиванием зазином. На световом микроскопе при увеличении 90х1,5х10 на тест-площадь препарата печени подсчитывали количество одноядерных и двухъядерных гепатоцитов, сумма которых составляла общее количество-нормальных гепатоцитов на тест-площадь препара",à,,которая у крысы N 24 оказалась равной 9,2+- 0,90.

Пример 4. Крысе N.. 29 делали резек. цию печени в объеме 65 — 70 $ массы органа сразу после операции и на следующий день после нее вводили гонадотропин харионический под кожу один раз в день в дозе 75

ЕД íà 100,0 массы тела и 2 мл 75,i; водного раствора МИДИ-К в желудок <ереэ эанд.

Через 43 ч после операции и начала введения гормона и МИДИ-К у животнога

2003339 достоверное по сравнению с другими воздействиями (резекция печени, введение мидийного гидролиэата или гонадотропина хорионического раздельно) увеличение количества нормальных гепатоцитов в печени, что можно испольэовать как модель увеличения .количества нормальных гепатоцитов для изучения различных вопросов, связанных с интенсивным процессом образования

10 гепатоцитов, а также различных вопросов в области фармакологии и токсикологии, связанных с процессами образования гепатоцитов. (56) Солопаееа И,M. В кн. Регенерация, адаптация и гомеостаз, Горький, 1990, с. 16.

Общее количество нормалц ых гепатоцитов (Z НГ) на тестплощадь препаратов печени. Увеличение 90 х 1,5 х 10, hhN. к ыс

Г ппык ыс

10,7 «-0.39

18

19

21

22 . 23

24 брали кусочек печени для приготовления парафиновых срезов толщиной 5-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином с докрашиванием зозином. На световом микроскопе при увеличении 90х1,5х10 на тестплощадь препарата печени подсчитывали количество одноядерных и двухьядерных гепатоцитов. сумма которых составляла об.щее количество нормальных гепатоцитов, которая у крысы М 29 была равна 14,7«. 1,16, Таким образом, полученные результаты доказывают, что через 48 ч после одновременного введения гонадотропина хорионического и мидийного гидролизата в указанных дозах и указанным курсом животным после резекции печени достигается

Крысы после резекции печени (РП);

Крысы, получавшие после РП гидролиэат из мидий

Крысы, получавшие после Pll гонадропин хорионический

2

4

6

9

11 .12

13

14

16

10,5+0 89

9,7"=0,98

8, 1, 0,78

7.2 «+0,74

7 2«072

6,9+0,65

8,3+0,82 .

10,4+-0,96

8,5» 0,60

11.6"-1,45

10,1» 0,98

11,7+1,02

8,8 -0,75

10,8 +0,82

12,7 «-0,98

9,8+0,98

10,5»-0,90

10.3 «-Î,QÎ

10,8»-0,98

9,4 "-0,86

8,3»-0,82

11.9»-0,98

12,8 «-1,18

10,0»-0,82

9,2+ 0,90

10,3 0,68

2003339

Продолжение таблицы

Примечание: Р:между1 и 4группами<0,01

P между 2 и 4 группами <0,01

Р между 3 и 4 группами <0,01

Составитель И. Солопаева

Редактор Т. Пилипенко Техред М,Моргентал: Корректор. В. Петраш

Тираж Подписное

НПО "Поиск Роспатента

113035, Москва, Ж-36, Раушскаа.наб.. 4/6

Заказ 3291

Производственно-издательский комбинат "Патент", t, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Формула изобретения

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕГЕНЕРАЦИИ ПЕЧЕНИ, включающий резекцию печени е объеме 65 - 70ф, от массы органа и подкожное введейие хорионического гонадотропина, отличающийся тем, что, с целью повышения темпов регенерации, дополнительно осуществляют интрагастральное введение МИГИ-К в дозе 5 мл/кг массы лабораторного животного.