Способ получения биостимулятора

(В) RU (1Ц 2002428 С1 (51) 5 А23 К1 16

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ --- ..

К ПАТЕНТУ (21) 5015943/15 (22) 11.1 2.91 (46) 15.1193 Бюл. t4 41-42 (76) Зеленков Валерий Николаевич (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯТОРА (57) Область применения: кормопроизводство.

Сущность: для увеличения выхода целевого продукта и ускорения технологического процесса в способе получения биостимулятора путем гомогенизации измельченной ткани тимуса в химическом растворе, отделения осадка. обработки надосадочной жидкости ацетоном, растворения ацетонового осадка с ультрафильтрацией и стерилизацией целевого продукта, в качестве химического раствора при гомогенизации используют 2 — 4%-ный раствор уксусной кислоты в присутствии хлорида, цинка, гомогенизацию проводят в течение 36 — 72 ч растворение ацетонового осадка проводят в 0,85—

0,9%-ном водном растворе хлористого натрия, а ультрафильтрацию ведут на полых волокнах с номинальным удержанием 12000 — 30000 дальтон. 2 табл.

2002428

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к кормопроизводству, Известен способ получения биостимулятора путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса в химическом растворе, отделение осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном, растворения ацетонового осадка с.ультрафильтрацией и стерилизацией целевого продукта.

Однако способ длителен и недостаточно эффективен.

Целью предлагаемого. изобретения яв- ляется ускорение технологического процесса. увеличение выхода целевого продукта и повышение прироста живой массы.

Поставленная цель достигается в способе получения биостимулятора путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса в химическом растворе, отделения осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном, растворения ацетонового осадка с ультрафильтрацией и стерилизацией целевого продукта тем, что в качестве химического раствора при гомогенизации используют 2-4%-ный раствор уксусной кислоты в присутствии хлорида цинка, гомогенизацию проводят в течение 36-72 ч, растворение ацетонового осадка проводят в 0,85-0,9 -ном водном растворе хлористого натрия, ультрафильтрацию ведут на полых волокнах с номинальным удержанием

12000-30000 дал ьто н;

Заявленный способ промышленно осу-. ществим.

В научно-технической и патентной литературе не имеется технических решений, аналогичных заявляемому. Т.е..предложение соответствует критериям "новизна", "изобретательский уровень" и "промышленная применимость".

Изобретение поясняется на следующих примерах.

Пример 1. 5000 r замороженного тимусателят(-40 С)измельчаютна мясорубке. К полученному фаршу добавляют 25 л 3 ного раствора уксусной кислоты с предварительно растворенной в ней 25 r

ZnClz (pH 3,5-4,0), Экстракцию биоактивных веществ проводят в течение 48 ч при температуре 3-14 С при периодическом перемешивании осадка. По окончании экстракции субстрат отфильтровывают через бязь.

Фильтрат, освобожденный от жмыха, добавляют порциями в охлажденный до -5 С ацетон, Осаждение биоактивных компонентов ацетоном проводят при соотношении ацетон:фильтрат = 5;1, после чего дают осадку отстояться в течение 1 ч.

Фильтрацию ацетонового осадка проводят на путч-фильтре с использованием фильтра из капрона. Осадок на фильтре промывают ацетоном. Осадок высушивают на воздухе в вытяжном шкафу. Получают от 100 до 150 r сухого порошка белого цвета с желтоватым оттенком.

90 r полученного ацетонового порошка растворяют в 1 л 0,9 -ного раствора NaCI.

Центрифугируют полученный раствор в течение 20 мин при 3000 об/мин.

Надосадочную жидкость в количестве

900 мл пропускают через ультрафильтрационную установку на полых волокнах (УПВ-6) из ароматического полиамида с удержанием по глобулярным белкам более 15000 дальтон.

Полученный ультрафильтрат замораживают (-40 С) и хранят до проведения стерилизации методом фильтрации, Перед проведением стерилизации ультрафильтрат размораживают при комнатной температуре, разбавляют раствором 0,9%ного NaCI до концентрации компонентов не менее 100 мкг в 1 мл (контроль концентрации полипептидов проводят спектрофотометрически при 275 нм).

Стерилизацию проводят стандартным способом с использованием мембран с d =

30 02 мкм.

Выход препарата с концентрацией

0,01 13000 мл (13000 мг биологически активных пептидов).

Пример 2, Полученный ацетоновый порошок в соответствии с примером 1 в количестве 50 r растворяют в 1 л 0,9 -ного раствора NaCI, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, Полученный осадок отбрасывают, надосадочную жидкость

4ц пропускают через полые волокна на установке УПВ-6. Полученный ультрафильтрат в количестве 1,1 л (за счет разбавления 0,9

NaCl при работе УПВ-6) замсраживают при

-40 С до проведения стерилизации фильт45 рацией. Перед проведением стерилизации ультрафильтрат размораживают и разводят

0.9%-ным раствором Ма С! до концентрации

300 мкг в 1 мл.

Выход препарата 5 л (t5000 мг биологи50 чески активных пептидов), Полученные предложенным способом образцы препарата безвредны при испытаниях на белых мышах, апирогенны и биоактивны.

Определение биологической активности проводят по стандартной методике определения 50%-ного восстановления чувствительности лимфоцитов селезенки тимзктомированных мышей линии СяВ1/6 к азатиоп рину, Количество роэеткообразую2002428

Таблица 1

Таблица 2 щих клеток в пробах должно быть не более

50;, по отношению к значению контроля, В табл.1 приведены данные по определению биоактивности образцов, полученных по предлагаемому способу, Полученные образцы по предлагаемому способу соответствуют по биоактивности критериям биоактивности Тактивина медицинского (В Ф С-41-1550-85) и Т-активина ветеринарного (TY 10-09-18-89).

Хроматографический профиль образцов, полученных предлагаемым способом, снятый в геле Сефадекса Г-50. приведен в табл. 2, Для сравнения приведены профили коммерческих препаратов: медицинского

Тактивина (производство НИИВС им,Мечникова И.И.) и ветеринарного Т-активина (производство. завода биопрепаратов r.Ïîкров), снятые в тек же условиях.

Как видно из табл.2, для всех препаратов. высокомолекулярные примеси с мол.в.

30000 и более отсутствуют (соответственно фракции с М 8 и менее). Для всех препаратов характерен максимум в распределении по молекулярным весам, соответствующий

1ФМ фракций 15-16, Хроматографические профили этих препаратов сопоставимы друг с другом. Различия составляют лишь концентрации полипептидов в конечной препаративной форме при единстве для всех них минимальной границы по содержанию биоактивных пептидов не менее 0,01 мас.7;, Анализ УФ-спектров препаратов пока5 зал отсутствие различий и в этой характеристике. Максимум поглощения для всех образцов соответствует (275 -8) нм, Таким образом, предложенный способ позволяет получать полипептидный препа10 рат иэ тимуса молодняка KPC по качеству и характеристикам идентичный Т-активину.

По сравнению с прототипным способ проще в технологической реализации, не требует дорогостоящего оборудования (суб15 лимационные установки) и позволяет получать продукт с сохранением качества при повышении его выхода.

Так, с 1 кг тимуса можно получить предложенным способом от 2500 до 3000 мг це20 левого продукта биоактивных пептидов при выходе 110 мг в прототипе.

Препарат Т-активин, полученный предложенным способом, может использоваться как иммуномодулятор и биостимулятор в

25 практике животноводства и ветеринарии наряду с существующим препаратом, полученным другим способом, (56) Авторское свидетельство СССР

30 N 16958690 кл. А 23 К1/00, 1991.

2002428

Продолжение табл,2

Продолжение табл.2

Формула изобретения

Составитель В.Зеленков

Техред M.Ìîðråí Tàï Корректор О.Кравцова

Редактор А,Зробок

Заказ 3198

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯ-.

ТОРА путем измельчения исходного сырья, отделения осадка фильтрацией и стерилизации, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья используют ткань железы

- тимуса, измельчение ведут с добавлением

2 - 4, -ного раствора уксусной кислоты в присутствии хлорида цинка с последующей гомогенизацией в течение 36 - 72 ч, после отделения осадка надосадочную жидкость добавляют порциями в охлажденный до -5 С ацетон в соотношении 1: 5, осадок отстаивают, фильтруют, высушивают и полученный порошок растворяют в 1

5 л 0,9$,-ного раствора хлористого натрия, центрифугируют полученный раствор о течение 20 мин, а надосадочную жидкость подвергают ультрофильтрации на полых волокнах с номинальным удержанием 12

10 000 - 30 000 дальтон, причем перед стерилизацией ультрафильтрат замораживают при -40 С.