Способ оценки качества корма
Использование: 8 микробиологии пищеварения жвачных животных Сущность изобретения: подсчет протеина в корме ведут путем помещения обработанного формальдегидом корма в среду, содержащую испытуемый корм, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, натрий хлористый, магний сернокислый , кальций хлористый, натрий серноватистокислый, дрожжи, циаеин солянокислый, натрий двууглекислый , дистилированную воду, в которую инокулируют приготовленную культуру Str. bovis, инкубируют в термостате при 39°С в течении 24 ч проводят подсчет количества бактериальных клеток, на основании этого рассчитывают содержание протеина 5 табл.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН
Комитет Росеийской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 4936913/15 (22).1605.91 (4Щ 15.1193 бюл. Na 41-42
P1) Всесоюзный начато-исследовательсай инсти.тут физиологии, биохимии и питания сельскохозяй(РЮ долгов ИА„долгова МС. (ЩДолгов Иван Абаксимович (64) СПОСОВ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА КОРМА (67) Истюльзование: в микробиологии пищеварения жвачных животных, Сущность изобретения: подсчет лротеина в корме ведут лутем помещения об(ls) )Щ (щ 200242á Cl (51) 5 АЗЗКМ 00 работанного формальдегидом корма в среду, содержащую испытуемый корщ калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, натрий хлористый, магний сернокислый, кальций хлористым натрий серноватистокисльщ дрожхщ цистеин солянокисльщ натрий двууглеиислый, дистилированную воду, в которую инокулируют приготовленную культуру Str. bovis, инкубируют в термостате лри 39 С в течении 24 ч, проводят подсчет количества бактериальных клеток на основании этого рассчитывают содержание лротеина 5 табл.
2002426
Изобретение относится к микробиологии пищеварения и может быть использовано в практике кормления жвачных животных для контроля эффективности использования протеина карма в преджелудках, а также научно-производственной практике.
Известен способ определения распадаемасти протеина корма, основанный на инкубации мешочков в условиях Ь vitro в камере "искусственный" рубец. В колбу объемом 150 мл, снабженную дефлегматором, вносят 100 мл содержимого рубца, добавляют 20 мл подогретого до 39 С фосфатно-ацетатного буфера рН 7 2 7 3 (в 1 л дистиллированной воды содержится, г; натрий хларистый 0,5; натрий уксуснокислый
1,5; калий фосфорнакислый двузамещенный 1,0; калий фосфарнокислый однозамещенный 0,3; магний сернокислый 0,1; кальций хларистый 0.1) и помещают по 1 r исследуемого корма в нейлоновых мешочках. Инкубацию проводят в течение 7 ч в водяной бане при 39 С и постоянном встряхивании (Аитова M,Ä. и Романова Н.Г.—
Бюл. ВНИИФБ и П с.-х. животных, 1989; вы п,2(94).
Наиболее широкое распространение получил метод с использованием нейлоновых мешочков, помещенных в рубец жвачных (Турчинский В.В., Курилов Н.В„Фицев
А.M. и Воронкова Ф.В. — Определение растворимости и распадаемости протеина кормов — Методические указания, Боровск, 1987).
Однако эти методы требуют наличия подопытных животных„а следовательно, и затрат на их содержание и уход, При определении количества нерасщепленнаго белка не учитывается примесь микробных белков в пробе. Так, количество. азота бактерий при инкубации мешочков в течение 12 ч может достигать 207 ат всего содержащегося вмешочках азота,,а после 18 -42, В процессе инкубации могут наблюдаться потери за счет вымывания. из мешочков мелких кормовых частиц, содсржащих основную часть протеина, При промывании водой извлеченных из рубца мешочков наблюдаются также потери протеина. При этом необходимо учитывать пористость используемой для изготовления мешочков ткани и степень измельчения карма. С увеличением пористости значительно возрастает приток частиц корма в просвет мешочка, чта может привести к занижению истинной величины распада протеина корма. Трудно контролировать и измельчение проб. На достоверность и васпраизводимость результатов, полученных методом нейлоновых мешочков, существенное влиянием оказывает порядок закладывания мешочков в рубец, Известен также способ оценки биологической полноценности рациона с использованием в качестве тест-объекта тетрахимена пириформис (Бинев P.Ã. и соавт. — Оценка биологической полноценности рациона с использованием тест-объекта тетрахимена пирифармис и аппарата "Ис-. кусственный рубец". Производство и использование растительного белка, Краснодар, 1981). Однако инфузории этого вида являются строгими аэробами и не являются симбионтами жвачных животных.
Поэтому этот способ мала приемлем для проведения оценки эффективности "защи15 ты" протеина корма ат разрушения в рубце жвачных животных, так как рубец — анаэрабная система (Прототип).
Следует также отметить,.чта ни один из этих методов не позволяет точно прогнозировать интенсивность синтеза бактериальной массы в преджелудках жвачных при скармливании кормов с различной распадаемостью протеина.
Цель изобретения — повышение точно25 сти у чувствительности способа оценки качества протеина карма, позволяющего учитывать интенсивность синтеза бактериальной массы и использовать в качестве индикаторной культуры Str. bovis, 30 выделенный из преджелудков жвачных животных.
Цель достигается тем, что в качестве единственного источника азота в среде использовали испытуемый корм, а в качестве
35 индикаторной стандарт ой культуры стрептококки, относящиеся к аиду
З г;Ьойз. Характерной особенностью
Str.bovis является способность использовать как органические, так и неорганиче40 ские источники азота.
Пример 1, В колбочки емкостью 100 мл в качестве единственного источника азота вносили 1,0 г испытуемого корма — подсолнечного шрота, обработанного
45 формальдегидом из расчета от 0,2 до 1,0 от массы протеина корма и добавляли среду следующего состава, мас. :
Калий фосфорнакислый однозамещенный 0.02
Калий фосфорнокислый двухзамещенный . 0,05
Натрий хлористый 0.1
Магний сернокислый 0.01
Кальций хлористый 0,01
Натрий серноватистакислый 0,03
Дрожжи 0.05
Цистеин салянакислый 0.01
Натрий двууглекислый 0,4
Дистиллированная вода О i альное
2002426
25
40
Перед засевом среду в течение 1 мин насыщали углекислым газом и колбочки закрывали резиновыми пробками с дефлегматорами. В качестве посевного материала использовали суточную культуру стрептокакков, которую вносили в среду и инкубировали при 39 С в течение 24 ч. Затем готовили ряд разведений и учитывали численность бактерий под микроскопом. Кроме того, подсчет количества бактерий проводили также после выращивания их на крахмально-пептанно-дрожжевом агаре с последующим пересчетом на вес сухой биомассы, которую определяли па калибровочной кривой.
Установлено, что содержание протеина в биомассе Str.bovls является величиной постоянной и составляет 49,ба.
Интенсивность синтеза биомассы
Str.bovts на средах с подсолнечным шротом, обработанным различными дозами формвльдегида и содержание протеина в биомассе представлены в табл.1.
Из таблицы следует, что с увеличением дозы формальдегида интенсивность роста стрептакокков уменьшается, т.е. между этими показателями наблюдалась обратная зависимость. Уже при дозе формальдегида
0,2 биосинтез бактериальной массы достоверно снижался. С увеличением дозы формальдегида до 0,5% интенсивность синтеза биомассы Str.bovls снижалась на
60,67, практически полное прекращение развития бактерий наблюдалось при повышении концентрации фармальдегида до
0,9 — 1,0% от массы протеина.
Расчеты па определению эффективности "защиты" протеина корма вели следующим образом; так, если накопление биомассы Str.bovis при выращивании на среде с нативным подсолнечным шротам принять эа 100 (, то при выращивании на среде с обработанным формальдегидам шротом в дозе 0,2: 0.3; 0,4; 0,5: 0.6; 0,7; 0.8;
0,9 и 1,0 г/100 г протеина накопление биомассы будет составлять соответственна
68.2; 65,2: 59,1; 39,4: 31,8: 24,3: 18,2; 9,1 и
4,5%, а эффективность "защиты" протеина составит 31,8; 34.8; 40,9; 60,6; 68,2; 75,7;
81,8; 90,9 и 95,5-",ь соответственно. Следовательно, наивысшая эффективность "защиты" протеина корма имеет место при обработке подсолнечного шрота формальдегидом в дозе 0,9-1,0 r/100 г.
Пример 2. Культивирование проводили как в примере 1, но вместо обработанного формальдегидом подсолнечного шрата испольэовали в качестве субстрата нативные и обработанные формальдегидам концентраты. Согласно имеющимся литературным данным известно, что обработка шрота фармальдегидом в концентрации 0,5% от массы сырого протеина корма является оптимальной для микробной и ферментативной фаз переваривания (Phillips., J.Anlrn.Sci, 1981, 53,6, 1616-1622).
В связи с этим были испытаны четыре комбикорма. Комбикорма М 1 и 2 были идентичными по составу, но входящий в комбикорм
hL 2 подсолнечный шрот был обработан фармальдегидам из расчета 0,5 от массы протеина. Комбикорма ЬЬ 3 и 4 состояли из одних и тех же ингредиентов, но последний был подвергнут формальдегиднай обработке в дозе 0,5) от массы протеина.
Результаты исследований по изучению интенсивности роста Str.bovls на средах с различными комбикормами представлены в табл.2.
Исследованиями установлено, чта наиболее интенсивный рост Str,bovls обеспечивается на средах с обычными комбикормами NN 1 и 3, тогда как формальдегидная обработка подсолнечного шрота комбикорма М 2 и всего комбикорма Q 4 уменьшила интенсивность роста стрептокакков на 34 и 547 соответственно.
Подобная закономерность получена и с суммарной микрофлорой рубца при ее инкубации с испытуемыми кормами (табл.3). Как и в опытных с чистыми культурами Str.bovis, обработанные фармальдегидам комбикорма hL 2 и 4 в сравнении с контрольными не обеспечивали адекватнага роста амилолитических, молочнокислых, протеолитических, пектолитических и усваивающих азат мочевины бактерий, т.е. формальдегидная обработка комбикорма снижала доступность протеина корма для микрофлары ру6ца. Скармливание вышеуказанных комбикормов коровам в составе рациона более полно удовлетворяло потребности микрофлоры в питательных веществах за счет грубых и сочных кормов рациона.
Пример 3. Культивирование проводили как в примере 1, но вместо абрабатанного формальдегидом подсолнечного шрота в качестве субстрата в среду вносили нативный и обработанный теплом (автоклавированный при 110 С и экструдированный) подсолнечный шрот.
Интенсивность синтеза биомассы
Str.bovls на средах с нативным и обработанным теплом подсолнечном шроте в качестве единственного источника азата п редст а влены в табл.4. Из таблицы следует. чта наиболее интенсивный рост стрептакокков был на средах с необработанным подсолнечным шротом, При включении в среду обработанного автаклавираванием в течение 1 ч при
2002426
Таблица 1
110 С подсолнечного шрота биосинтез бактериальной массы уменьшался на 34$. Аналогичная картина наблюдалась и при использовании зкструдированного подсолнечного врата.
Пример 4. Культивирование проводили как в примере 1, но вместо обработанного формальдегидом подсолнечного шротэ в качестве единственного источника азоте в среде использовали традиционные корма с различной естественной дегрэдируемостью протеина (табл,5). При составлении рационов для жвачных животных полученные результаты позволят прогнозировать интенсивность синтеза бактериальной масcbt и регулировать течение микробиологических процессов в преджелудках.
Предложенный способ позволяет сравнительно быстро и надежно проводить оценку качества протеина корма, а также прогнозировать интенсивность синтеза
5 бактериальной массы и регулировать течеwe микробиологических процессов в преджелудках жвачных животных.
Способ сравнительно прост в исполнении, не требует дорогостоящей аппаратуры, 10 исключается использование животных, а следовательно, затраты нэ их содержание. (56) Бинев Р.Г. Оценка биологической полноценности рациона с использованием в ка15 честве тест-обьекта тетрахимену пириформис и аппарата "Искусственный рубец". Производство и использование расти. тельного белка. Краснодар, 1981.
2002426
Таблица 2
Таблица 3
2002426
Таблица 4
Таблица 5
0,02
Составитель И. Долгов
Техред M.Mîðãåíòàë Корректор А. Обручар
Редактор А. Зробок
Заказ 3197
Тираж Подписное
НПО "Поиск" Роспатента
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент" ° г. Ужгород, ул.Гагарина. 101
Формула изобретения
СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА КОРМА, предусматривающий обработку испытуемого корма формальдегидом с последующим подсчетом содержания протеина в корме, отличающийся тем, что перед подсчетом содержания протеина i корме помещают обработанный формальдегидом корм в среду следующего состава, мас, $, Фосфорнокислый однозамещенный калий
Фосфорнокислый двузамещенный калий 0,05
Хлористый натрий 0,1
Сернокислый магний 0.01
Хлористый кальций 0.01
Сврноватистокислый натрий 0,03
Дрожжи 0,05
Солянокислый цистеин 0,01
Двууглекислый натрий 0,4
Дистиллированная вода Остальное вводят в испытуемый корм культуру
Str.bovls, выдерживают в течение суток. а о содержании протеина судят по количеству бактериальных клеток, подсчитанных по стандартному методу.
