Способ определения трипсина в крови

 

Использование: в медицине и биологии, в частности в иммунохимии для количественного определения трипсина. Сущность изобретения: к твердой фазе, сенсибилизированной трипсином, добавляют исследуемый образец или стандарт, поликлональные антитела к трипсину, затем выявляют количество связавшихся с твердой фазой антител с помощью белка А стафилококка, меченного пероксидазой хрена, и по калибровочной кривой определяют содержание трипсина в исследуемом образце, Способ позволяет упростить анализ. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s G 01 N ЗЗ/543

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4863831/14 (22) 03.09.91 (46) 07.05.93. Бюл. ЬЬ 17 (71) Научно-исследовательский институт охраны материнства и детства М3 ТаджССР (72) В.Я.Гаврилов и Р.А.Пилосов (56) Инструкция к набору Trypslnogen EJA

Kit фирмы Agen Biochemical limited, 1988, Австралия. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИПСИНА

В КРОВИ Изобретение относится к медицине и биологии, а.именно к иммунохимии.

Цель изобретения — упрощение способа определения трипсина в крови, Способ осуществляют следующим образом.

В качестве твердой фазы используют лунки 96-гнездного планшета, сенсибилизированного трипсином, в качестве антител— кроличью антисыворотку без предварительного выделения очищенных антител против трипсина, в качестве метки — белок "А" стафилококка, конъюгированный с пероксидазой хрена. К твердой фазе добавляют исследуемый образец или стандарт (содер° жит известное количество трипсина, ингибированного контрикалом) и антисыворотку против трипсина, инкубируют в течение ночи. Комплекс — иммобилизованныйтрипсинантитело-промывают, добавляют белок "А", меченный пероксидазой хрена, инкубируют

2 ч, промывают, вносят субстрат для фермента, через 30 мин останавливают.реакцию добавлением серной кислоты и определяют оптическую плотность раство,„!Ы,„, 1814075 А1 (57) Использование: в медицине и биологии, в частности в иммунохимии для количественного определения трипсина. Сущность изобретения: к твердой фазе, сенсибилизированной трипсином, добавляют исследуемый образец или стандарт, поликлональные антитела к трипсину, затем выявляют количество связавшихся с твердой фазой антител с помощью белка нАн стафилококка, меченного пероксидазой хрена, и по калибровочной кривой определяют содержание трипсина в исследуемом образце, Способ позволяет упростить анализ, 1 табл, ра, Строят стандартную кривую и по ней определяют концентрацию трипсина в исследуемом образце.

Определение трипсина в крови

1. В лунки планшета вносят по 0,05 мл стандартной концентрации трипсина или ® исследуемой сыворотки и по 0,1 мл антисыворотки к трипсину. Инкубируют в течение Д ночи при 20-25 С, С)

ll, Промывают 3-4 раза буферным раствором. (л

ill. В лунки вносят по 0 1 мл раствора бенка "А",меченного перохсидааоа хрена.

И н куб ируют 2 ч и ри 20 — 25 С.

И. Промывают 3 — 4 раза буферным pacmech тво ром.

V. В лунки вносят по 01 мл раствора, содержащего ортофенилендиамин и перекись водорода, инкубируют 30 мин в темноте.

Затем останавг ивают реакцию добавлением

0,2 мл 1 M раствора серной кислоты, Vl. Определяют оптическую плотность содержимого лунок, Обозначение проб в опыте.

1814075

Результаты опрделения трипсина в крови

Составитель В. Гаврилов

Редактор Н. Рожкова Техред M.Mîðãåíòàë Корректор А. Мотыль

Заказ 1827 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина 101

Ao — Ав - - пробы калибровочной кривой, 1, 2, 3... — пробы исследуемых образцов.

Vil. Затем, как видно из таблицы, определяют отношение оптической плотности проб калибровочной кривой и исследуемых образцов по отношению к Ао(в которой концентрация трипсина равна "0") в процентах, по этим значениям строят калибровочную кривую, Экстраполируя на кривую результаты исследуемых сывороток, находят количество трипсина в пробе, Таким образом, упрощение способа определения трипсина в крови достигается использованием препаратов антител, не требующих дополнительной очистки. т Ф

Формула изобретения

Способ определения трипсина в крови, включающий проведение твердофазного анализа с последующей регистрацией оптической плотности образца и расчетом концентрации трипсина по калибровочной кривой,отлича ющийсятем,что,сцелью упрощения способа, при проведении имму. ноферментного анализа осуществляют сенсибилизацию твердой фазы трипсином, в качестве антисыворотки используют поликлональные антитела к трипсину, а в качестве выявляющего антитела оеагента используют белок "А""стафилококка, меченый пероксидазой хрена,