Патент ссср 189105
0 П И С А Н И Е I89I05
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Сок>з Соевтоких
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Зависимое от авт. свидетельства №
Кл. 22а, 14
Заявлено 12.Х1.1965 (№ 1037438/23-4) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 17.XI.1966. Бюллетень № 23
Дата опубликования описания ЗО.XII.1966
МПК С 09Ь
УДК 668.811.8(088.8) Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Автор изобретения
М. Н. Малев
3",ÿâèòåëü
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НИТРОСИНЕГО ТЕТРАЗОЛИЯ
Изобретение может быть использовано в качестве реактива для био- и гистохимических исследований различных биологических объектов с целью выявления ферментов окислительного обмеиа.
Известен способ получения нитросинего тетразолия взаимодействием бензальдегида
>г-нитрофенилгидразоиа, растворенного в смеси тетрагидрофурана и водного или спиртового раствора щелочи, с бисдиазотированным
О-дианизидином при — 20 — — 25 С. Полученную суспензию, содержащую смесь моноформазана и динитродиформазана, отфильтровывают, а осадок подвергают обработке диоксаном или беизолом в течение длительного времени — порядка двух педель. Получают динитродиформазаи с выходо I 55% и т. пл.
255 С
Дииитроднформазаи содержит примесь моноиитроформазаиа, от которого нельзя избавиться даже при во зоб новлешш очистки вышеописанной экстракцией. Полученный дииитродиформазаи подвергают окислению изсамплнитритом в смеси тетрагидрофурана ч диоксаиа в присутствии хлористого водорода. Полученный нитросиний тетразолий с выходом 75 — 80% имеет т. пл. 184 С (после перекристаллизации из метанола).
С целью повышения выхода, чистоты целевого продукта и сокращения времени синтеза процесса, по предлагаемому способу осадок — смесь моноформазана и динитродиформазана — обрабатывают кипящим диметилформамидом, применяемым в качестве растворителя, с последующим окислением динитродиформазана в среде безводного диоксана.
Пример. Способ получения нитросинего тетразолия. а) Получение динитродиформазана.
В фарфоровом стакане емкостью 500 мл суспендируют 18,8 г (0,06 М) тонко растертого солянокислого О-дианизидина в смеси
20 мл концентрированной соляной кислоты, 50 мл ледяной воды и 50 г толченого льда.
15 К полученной суспензии при — 5 — 0 С 30 мин добавляют по каплям раствор 9,2 г нитрита натрия в 30 мл воды. Реакционную массу размешивают в течение 1 час при 0 С и полученный раствор фильтруют на воронке Бюхнераа.
Одновременно в фарфоровом стакане емкостью 1 л растворяют 28,9 г (0,12 М) бензальдегида >г-иитрофенилгидразоиа в 350 мл тетрагидрофурана (или пиридина), добавляют раствор 28 г КОН в 150 мл метанола, Полученный раствор охлаждают до — 20— — 25 С и прибавляют по каплям приготовленный ранее бисдиазораствор в течение 1 час.
Затем реакционную массу продолжают раз30 мешивать еще 1 час без внешнего охлажде189105
Предмет изобретения
Составитель Г. Шаталов
Техред T. П. Курилко Корректоры: В. В. Крылова и Г. Е. Опарина
Редактор Л. А. Ильина
Заказ 3921/13 Тираж 600 Формат бум. 60X90 /з Объем 0,16 изд. л, Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изсбретенпй и открытий ирп Совете и1ннпстров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2
3 ния. Полученную суспензию отфильтровывают на воронке Бюхнера, промывают па фильтре-черный осадок 500 лл холодной воды, 1,5 л горячей и 1 л метанола. Полученный черный порошок является смесью монои диформазанов.
Для удаления моноформазана помещают порошок в круглодонную колбу емкостью
500 мл, снабженную обратным холодильником, добавляют 300 мл диметилформамида и нагревают колбу в масляной бане до начала кипения растворителя. На экстракцию кипящим диметилформамидом затрачивают 2—
3 час, после чего оставшийся в колбе продукт отфильтровывают на воронке Бюхнера. Эту операцию повторяют 4 раза. После последней экстракции осадок на фильтре промывают небольшим количеством ацетона. При отсутствии моноформазана проба испытываемого образца диформазана в ацетоне пе дает. окрашенного раствора.
Выход динитродиформазапа 24,1 г (54о, в расчете на О-дианизидин) с т. пл. 270 — 272 С.
Т. пл. дифсрмазана определяют введением капилляра в блок, предварительно подогретый до 260 — 265 С. б) Получение нитросинего тетразолия.
5 г тонко растертого динитродиформазана помещают в фарфоровый стакан емкостью
300 лл и суспендируют в 150 лл безводного диоксана (диоксан сушат над КОН, а затем отгоняют). К полученной суспензии добавляют 7 мл изоамилпитрата и пропускают ток сухого хлористого водорода (через склянку
Тищенко с концентрированной серпой кислотой за 1 мин проходит 60 пузырьков газа) при комнатной температуре пе ниже 20 С в течение 3 час. Затем в реакционную смесь по каплям добавляют еще около 2 лл изоамилнитрита и продолжают пропускать хлористый водород около 2 час. В результате окисления диформазана количество его в реакционной массе уменьшается, а соль тетразолия выделяется в виде светло-желтого осадка. За ходом реакции удобно следить, отбирая пробы стеклянной палочкой и нанося мазки па фильтравальпую бумагу.
Полученный зеленовато-желтый осадок отсасывают на воронке Бюхнера и растворяют в 30 мл метанола. Спиртовый раствор фильтруют от не вошедшего в реакцию диформазана (около 0,1 г), фильтрат помещают в коническую колбу и смешивают с 5 — 10кратным количеством сухого диоксана. На другой день отфильтровывают выделившийся светло-желтый осадок, промывают на фильтре
20 л л эфира и сушат при 40 — 50 С.
Выход нитросинего тетразолия 5,1 г (около
93,5 /о) с т. пл. 1 72 †1 С (с разл.). Т. пл. готового продукта определяют введением капилляра в блок, предварительно нагретый до
180 С. Нитросиний тетразолий кристаллизуется с 1 молекулой метанола и имеет мол. вес 849,70: C OH, вКьаОвСе, СНаОН.
После кристаллизации из метанола получают 4,7 г целевого продукта с т. пл. 187—
188 С.
Способ получения нитросинего тетразолия взаимодействием бензальдегида и-нитрофенилгидразона, растворенного в смеси тетрагидрофурана и спиртового раствора щелочи, с бисдиазотированным раствором О-дианизидина при — 20 — — 25 С, фильтрацией получепной суспензии — смеси моноформазана и дицитродиформазана — и обработкой осадка растворителем с последующим окислением полученного при этом динитродиформазана изоамилнитритом в среде растворителя в присутствии хлористого водорода, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода, чистоты
4о продукта и сокращения времени процесса, осадок обрабатывают кипящим диметилформамидом в качестве растворителя с последующим окислением динитродиформазана в среде безводного диоксана.
