Способ получения три- и дифосфатов аденозина и гулнозинл
О П И С А Н И Е l83I4 j!
ИЗОБРЕТЕИИЯ
Союз Советских
Социалистических
Ресг!ублик
К ПАТЕНТУ
Зависимый от патента )чо
1х,7. 12р. 7, 10
Заявлено 05,!.1965 (№ 93699<1/31-! 6) с присоединением заявки М. П1х С 07(!
Приоритет
Но)ките) ло делам изобретений и открытий гри Совете Министров
СССР
О! убликовано 09Л 1,1966, Б!Ог!г!Стен! N 12 х :.I,l, 5-1/.857,7:615 012 (088.8), 1,ата! онубликовгишя описания 16Х 11.1966
Авторы и«обpcTC!!1! II
Иностранцы
Сукно Киносита, Кит)оси Накаяама, Такаси Нара, Зеироку
Наруо Танака
Иностранная фирма Канова Хакко Когио Ко., Лимитед (<>> i ii «j
3 II !3 1 1 гс. Ь
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИ- И ДИФОСФАТОВ
АП,ЕНОЗИНА И ГУАНОЗИНЛ
Изобретение относ))тся к способам получения три- и дифосфатов аденозина и гуанозина путем ферментативного культивирования микроорганизмов на питательной среде.
Известны способы получения аденозинтрифосфата н iденозиндифосфата путем ферменTаTII«II0ã0 культивирования большого количества дро)кжей в среде, содер)кащей аденозии фосфат. Однако выход целевогo продукта нри этих способах его получения весьма низок.
По предлагаемому способу, с целью повышения выхода целевого иродуi(Ta, используюг микроорганизм штамма Brevibacterium ammoniagenes.
В качестве питательной применяют любую среду, содержащу!о источники углерода (в ви,!с углеводов) и азота, а также неорганиче(. кие соли.
Пример 1. Кузьтуру Brcvibacteriuni
lI1Tlnloniagenes АТСС М 6872 размножают в среде, содержащей 2Р/р г;покозы, 1Р/р пептона, 1 Р/р дрожжевого экстра кта, 0,3",р N aCI и
30 !!кг/>т биотина в тече)ше 24 ча(при 30 С.
10Р/р полученной культуры засе )ак)7 в ферментативную среду следующего состава: глюкоза
100 г, мочевина 6 г, КНРеОт 1О г, Кв>НРОк 10 г, .Iрожжевой экстракт 10 г, бнотин 30 л)кг, СаС1, 2Н>О О,! г. Все компоненты растворяют в воде, доводят до 1 л, à pll ферментативной среды до стерилизации — до 8 с помонгью <х)!!01-1. Порции ферме«г;!тии;!Ой срс,!:
20 и!л помещают в эрленмейсровские колбы !
» 250 .!! т и используют нос.че стерилнз: цин « автоклавс нод дав7ett!Ie I 1 кг/c.!l- в гсченис
l0 лен, После выращивания культуры в тсче-!
I!I(72
2 л:/«1,1 ферментатн!)ной среды. После дагп— сйшего 1)ыращивання в течение 24 час в п !та10 тельной сре7е получают 2,98 аденозинтрифосфата и 0,85,!)г/,!! аденозиндифосфата. Beni! i!tI« pl I подле!)жи!)аlОТ между нейграгlьной il с. !<100к!)C !ОЙ 1)Ос.lе Дооа13 !сl!1!<и )I;!e)li!!! 15 0.8 !«(Овцс 13I>!pa ul II!)a IIII)1, (! II 7 hTp;!7, IIO 1 V Icll:!ый после фи I«TpOD;!Ill:ÿ этой ферм "IIT;tT!!13lloi! iI(lI;, êocTè, пропускают через колонку с сиг!ь-! l0 0cIIoI3IIoH аннонообме)шой смолой (нанрнlcp, Io!3c«c 1, х 2/х lop! I,7I!Oго типа) . I le;ic!Iой 20 I!родукт получаloт нр. I элюнрова11nè рltaба«ле!I i<0!! с0,7Я ной I(IIC,70TÎ!i с ItetITP П р н м е р 2. Используют культуру Brevib;!25 с!с! !(п71 ITII71011!aget1cs АТСС,х))) 6872. Размноi(ciiiIe ведут «среде, содержац;сй 2Р/р глюкозы, 1, р пептона, 1 )р,7ро:к>кевого экстр
Coc, !:;!. .-„, Р. Л, Т; р .та Рсдакгор Б. Шнейдерман Тсхрсд Г. E. Петровская Коррск.оры Г. Е. Опарина и 3. М. Райнина -a.":;,.: 2026 !7 Тираж 625 формат бум. 60>,90 /к Обьсм 0,13 изд. гк Подписное ТТ1!11!,li!! Комитета по делам изобретений и открытий прп Совете Министров СССР Москва, Центр, пр. Серова, д. 4 Типография, пр. Сапунова, 2 с гана: глюкоза 100 г, мочевипа 6 г, КНвРО» 1О г, К НРО» 10 г, МАЗО» 7НвО 10 г, биотип 30 лкг, пантетоиат кальция 2 л!г. Указанные компоненты растворяют в воде и доводят до 1 л. Перед стерилизацией рН фермептативпой среды доводят с помощью ХаОН до 8,0. Пор-!,пи ферментативной среды с внесенным посевом по 20 лл помещают в эрлеимейеровские колбы на 250 лл и используют после добавления 3 г/100 льг среды СаСО;, и стерилизации в автоклаве в течение 10 нин под давлением 1 кг/сл- . После выращивания культуры в течение 72 час в фермептативпуlо хкидкость вносят гуаш»и в количестве 2 л!г па 1 дчл фсрмептативиой среды. После дальнейшего выращивания в течение 48 нас в питательной жидкости получают только 0,26 лг/лл, рН раино 6,2. Полученный фильтрат после удаления бактериальных клеток из ферментатиш!ой среды пропускают через колонку с сильно основпой иовообмепной смолой (Довекс 1/х 2/хлоридпого типа). Конечный продукт (гуанозипдпфосфат) выделяют злю!»рованиеми слабой со5 ляной кислотой. Эту фракцию нейтрализуют водным раствором едкого патра, обрабатывают угольным порошком, упаривают, охлаждают и выделяют натриевую соль гуанозиндифосфата. Предмет изооретения Способ получепия три- и дифосфатов аденозина и гуаиозипа кульгив:!роваипем микрооргапизмов на питательной среде с последую15 щим выделением из среды полученных в результате ишсубации продуктов, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, используют микроорганизм штамма Brevibacterium ammoniagenes.
