Способ выделения ацетилхолинэстеразы из эритроцитов теплокровных животных

О П И С А Н И Е l81980

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Соеетскик

Социалистические

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

К.t. 531, 1/03

ЗОЬ, 2/04

Заявлено 10.1V.1965 (№ 1001434/31-16) с присоединением заявки ¹. 1ПК А 23j

А 61k

УДК 615.45:577.159 (088.8) Приоритет

Опубликовано 21.1V.1966. Бюллетень № 10

Комитет оо делатт иаобретеииб и открытий ори Совете Миыиетрое

СССР

Дата опубликования описания 15.Ч!1.1966

» 1. (т, A. П. Бресткин и Д. Л. Певзнер,, /1»г47g1i;,„

/ -=.:д.- ..

1-- ь :с»фР;-,„

Институт эволюционной физиологии и биохимии имент» И. 1ф Сеч&вйа/

Ж ду

Авторы изобретения

Заявитель

СПОСОБ ВЫДЕЛ ЕН ИЯ АЦЕТИЛХОЛ И НЭСТЕРАЗЪ|

ИЗ ЭРИТРОЦИТОВ ТЕПЛОКРОВНЫХ ЖИВОТНЫХ

Известен способ выделения препарата ацетилхолинэстеразы из эритроцитов теплокровных животных, заключающийся в том, что эритроциты отмывают от плазмы, гемолизируют, осаукдают и лиофилизируют строму, обрабатывают ее бутанолом с последующей экстракцией, очисткой и сушкой. Однако активность препарата, изготовленного указанным способом, очень низка.

По предлагаемому способу в качестве детергента используют первичный октиловый спирт нормального строения.

Пример. Свежую дефибринированную кровь центрифугируют 30 вин, сыворотку отсасывают и удаляют. Затем эритроциты отмывают шесть-семь раз 0,9 /о-ным раствором поваренной соли. К 1 л отмытых эритроцитов для гемолиза их добавляют 6 л воды и 68 лл

1М раствора уксусной кислоты. Получающаяся при этом строма оседает в течение 10—

24 час. Гемолизат над осадком стромы декантируют с помощью сифона, а осевшую внизу строму взмучивают в 10 л 0,01 М раствора

ХаНсРО». После оседания стромы через 10—

24 час жидкость удаляют. Для удаления

ХаН,РО» к осадку добавляют 2 л дистиллированной воды и центрифугируют. Плотный осадок стромы смешивают с 500 л л фосфатного буфера, и полученную смесь подвергают лиофильной сушке. К сухой строме добавляют октиловый спирт и через 10 лин центрифугируют, Из осадка стромы фермент экстрагируют 0,01 М фосфатным буфером и, спустя

60 лгин, смесь центрифугнруют, Раствор фер5 мента добавляют к влажному гндрокснланатиту- — нз расчета 1,0 — 1,5 г сухого адсорбента на 100 лгл раствора, — а смесь центрифугируют 10 лин при 5000 оборотов. Для удаления октнлового спирта раствор фермента фильт10 руют через колонку, заполненную сефадексом д=-50. Полученный препарат в 300 раз превышает удельную активность исходного материала. Молекулярная активность составляет

350 000 единиц.

15 Препараты могут быть использованы для определения антихолннэстеразных свойств фосфороорганическпх н других соединений, применяемых в качестве инсектнцидов и лекарственных веществ.

Предмет изобретения

Способ выделения ацетилхолинэстеразы нз эритроцитов теплокровных животных путем экстрагирования фермента из стромы эрнтроци25 тов после разрушения липопротеинового комплекса с помощью детергента, отличающийся тем, что, с целью сохранения активности ацетилхолинэстеразы в процессе выделения и очистки, в качестве детергента используют

30 первичный октиловый спирт нормального строения.