Способ микроклонального размножения картофеля

 

Использование: молекулярная генетика , а именно способы размножения фрагментов ДНК неизвестной последовательности из определенной области ДНК. Сущность изобретения: осуществляют последовательные обработки ДНК рестриктазами и легирование, в результате которых фрагмент ДНК неизвестной последовательности, расположенный в нативной ДНК на некотором расстояний от фрагмента ДНК известной последовательности, оказывается непосредственно примыкающим к фрагменту ДНК известной последовательности; синтез олигонуклеотидных праймеров, проведение с их использованием амплификации (размножения) фрагмента ДНК неизвестной последовательности, 3 ил. SЈ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 5/04

ННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ССР

ССР) АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 4792700/13 (22 19.02.90 (4 07.02.93. Бюл, ¹ 5 (71) Институт генетики и цитологии АН

Б CP. (7 А.П. Ермишин, Е,В, Воронкова и И.О. .Ш ралева . (5 Пузанков О,П., Гришанович А.К. и др.

М тодические указания по оздоровлению се енного картофеля. Минск: Урожай, 1988, с, 9.

Изобретение относится к биотехнологи .

Известен способ микроклонального ра змножения картофеля, выбранный в качест е прототипа, включающий черенкование вь ращиваемых in vitro растений, посадку че ен ков на питательную среду, получение р стений, повтиорное их черенкование и выс,дку полученных регенерантов в грунт.

Однако для этого способа характерны следующие недостатки: растения при выс дке в грунт сильно повреждаются (обрыв корней, поломка стебля), что снижает их и иживаемость. Применение агариэованн и питательной среды предопределяет з ачительную сложность технологии микр клонирования, в частности, процедуру о вобождения пробирок от остатков иси льзованной среды, приготовления и разливки среды по пробиркам, посадки черенков, извлечения растений при высадке в грунт и др, !

Цель изобретения состоит в повышении живаемости растений-регенерантов,. Ж„, 1792971 А1

2 (54) СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РА3МНОЖЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ (57) Использование: биотехнология, сельское хозяйство, картофелеводство, семеноводство картофеля. Сущность изобретения: микроклональное размножение картофеля проводят с использованием в качестве носителя для питательных сред ваты гигроскопической. 2 табл. при высадке их в грунт и упрощение технологии микроклонирования.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе микроклонального размножения картофеля, включающем черенкование выращиваемых in vitro растений, посадку черенков на среду, получение растений, повторное черенкование и высадку регенерантов в грунт, посадку черенков осуществляют на гигроскопическую вату, пропитанную питательной средой.

Добавление в питательную среду, с которой будет производиться высадка растений в грунт, хлорхолинхлорида усиливает положительный эффект, Сопоставительный анализ заявляемого решения с прототипом показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что посадку черенков осуществляют на гигроскопическую вату, пропитанную питательной средой. Таким образом, заявляемый способ соответствует критерию изобретения "новизна".

В патентной и научно-технической литературе отсутствуют сведения об использо-

1792971

Ф.ормула изобретения

1, Способ микроклонального размножения картофеля, включающий черенкование выращйваемых in чего растений, посадку черенков на питательную среду, получение растений, повторное черенкавание и высадку полученньи регенерантов e:r ðóíò, о т л ич,а ю щ и и с.я тем, что, с целью повышения приживаемости растений-регенерантов при высадке в грунт и упрощения технологии микроклонирования, посадку черенков осуществляют на гигроскопическую вату, пропитанную питательной средой.

2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что в питательную среду перед высадкой растений s грунт добавляют хлорхолинхлорид вании гигроскопических субстратов, в част- количество среды на пробирку 14х160 мм— ности, ваты, для улучшения приживаемости 5 мл, но пробирку 16х210. мм — 10 мл. Провыращиваемых in vitro растений при высад- бирки закупоривают ватно-марлевыми . ке их в грунт при одновременном упроще- пробками и автоклавируют 20 мин при 0,7— нии технологии микроклонирования. Это 5 0,8кг/см . позволяет сделать вывод о соответствии за- Пробирочные растения, имеющие 5-6 являемого решения критерию "существен- листьев, извлекают в ламинар-боксе из проные отличия". бирок и черенкуют на простерилизованной

Посадка черенков на гигроскопическую чашке Петри, Посадку черенков производят вату, пропитанную питательной средой, "0 следующим. образом. В левую руку берут обеспечивает повышение приживаемости столько пробирок с ватой, смоченной срерастений при высадке в грунт за счет умень- дой; сколько получилось черенков. Извлекашения их повреждаемости, позволяетсуще- ют пробирки и с помощью пинцета ствен но ускорить эту и роцедуру. помещают черенки на поверхность субстраЗаполнение пробирок ватой и ее извлече- "5 та. Пробирки закупоривают пробками, расние после черенкования менее трудоемко ставляют на штативе. Посла посадки по сравнению с.агаризованной питательной штативы с пробирками йереносят на стелсредой, Смачивание ваты жидкой питатель- лаж, оборудованный люминесцейтными ной средой произвоДится с помощью авто- лампами ЛД-40, где производят культивироматического дозатора. Нет необходимости 20 вание при освещенности 2-4 тыс.люкс, фотратить время и электроэнергию на топериоде 16 ч, температуре 22-24ОC днем растапливание агар-агара. Посадка черен- и 18-20 С вЂ” ночью. ков на вату, как при посадке на агар, что Образовавшиесяизчеренковпробирочпозволяетускорить йупростить процесс по- ные растения снова черенкуют или высажисадки черенков на среду. После извлечения 25 вают в грунт. В последнем случае растений из пробирок стенки последних ос- целесообразно использовать среду, в кототаются практически чистыми, благодаря че- рую добавляют хлорхолинхлорид (концентму упрбщается процедура мытья пробирок, рация для каждого сорта подбирается

Предлагаемый способ микроклонально- индивидуально, обычно она бывает в преде: горазмножения картофеляреализуетсясле- З0 лах 50 — 200 мг/л). Для высадки растения дующим образом.;:: .. . - вместе с субстратом извлекают из пробирок

В вымытые и высушенные пробирки(14 х и высаживают в теплицу в торфо-перегнойх160 мм или 16х210 мм) вносят соответствен- ный грунт. но на Ь или 7 см длины пробирки вату гигро- . В табл, 1, 2 приведены результаты осу- . скопическую, проталкивая ее с помощью 35 ществления данноГо способа. деревянной палочки. Вату сильйо не уплот- Из таблиц следует, что способ позволяняют. Пробирки расставляют на штативы. ет снизить повреждаемость растений при

Жидкую питательную среду, йапример Му- . высадке в грунт, что обеспечивает более расйге-Скуга(МЯ)(см.1), разливаютпо про -" высокую их приживаемость. Достигается биркам с помощью медицинского 40 существенное повышение производительавтоматйческого дозатора А-2. Экспери- ности труда за счет упрощения технологии ментально установленб; что оптимальйое микроклонирования.

1792971

Таблица 1

Показатель

Известный способ (среда MS в модификации

Бел НИ И КПО) П едлагаемый способ

Питательная среда MS

Питательная среда MS с хлорхолинхлоридом

100 мг/л ломка стебля при извлечении стений из пробирок, иживаемость (через 3 недели сле высадки, П р

П и

7,8

7,1

5,8

29,8

72,4*

78,8+

* Р < 0,01

Таблица 2

Процедура

Заявляемый способ

Известный способ

5,00

5,83

1,95

2,50

1,17

5,00

0,28

4,11*,1,63

1,37

2,36

2,33

16,62

2,92

3,33

23,16

Редактор

Заказ 482 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб;, 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патен ", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 !

0 з

М

П

Н

Ч че

П (с

В

Приживаемость растений картофеля после высадки в грунт (сорт Ласунак) Трудозатраты (чел/час) на производство 1000 растений картофеля вобождение пробирок от остатков испольванной среды, субстрата тье пробирок иготовление питательной среды полнение пробирок питательной средой ренкование растений (250 растений на 4 ренка) садка черенков на питательную среду бстрат) садка растений в грунт ого:

Экономия составляет 6,54 чел/час, или 39,35

* В заявляемом способе эта процедура включает набивку пробирок ватой 3,0 чел ч и разлив жидкой питательной среды по пробиркам с помощью медицинского дозатора

А-2 (1,11 чел/ч).

Составитель А. Е рмишин

Техред М,Моргентал Корректор А.Мотыль