Способ получения аналога соматостатина
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕД МСТВО СССР (ГОС АТЕНТ СССР)
О ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ е (я)5 С 07 К 1/04, А 61 К 37/02
4ЙИЛ
: Ы. Р4а0ИЫ (54
М (57 из по ти
Су
С.-Сн(сн,н
QN-cH сн Я-Д, сн;о к ж т з
I (21) 4356419/04 (22) 16.08.88 (31) 3153/87 (32) 17.08.87 (33) СН (46 30,01.93.Бюл.¹ 4 (71 Сандос АГ(СН) (72 Моника Мерглер (ДЕ) и Вальтер Прикосо ч (AT) (56 Патент США ¹ 4395403, кл.424-177, оп бл. 1983.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАЛОГА СООСТАТИ НА
Использование: в медицине. Сущность бретения: усовершенствованный способ учения аналсга соматостатина — гептапепа формулы Н-0-Phe-Cys-Phe-0-Trp-Lys Thr-ЙН СН(СН2ОН)ОН(СНз)ОН. Реагент 1: онцевой цист ин, связанный с полимерИзобретение относится к усовершенваннному способу получения аналога соостатина — гептапептиду формулы I
Ф" I=ON
D-Рье-сцз-РЪе-ц-тгр-цз -Ть -С е-НН-сн
I сн;он орый может найти применение в медине.
Известен способ получения соединения утем фрагментной конденсации в раствоНедостатком известного способа являя сложность процесса, необходимость деления промежуточных продуктов на дой стадии и невозможно=ть его автомаации.
Цель изобретения — упрощение процесполучения соединения I.,. Ж„„1792418 АЗ ной матрицей ИН2СНСН(СНз)ОС -1 РЬ® ОН О где (Р/ — аминометилированный полистирол. Условия реакции: твердофазный синтез ступенчатым наращиванием цепи, начиная с реагента 1 в присутствии конденсирующего агента, с получением защищенного пептидииполимера формулы
Fmoc-0-Phe-Cys(B u ) P he-О-Тгр-1.ys(Boc)Thr-Cys(Bu )-X, где Fmoc-флуоренилоксикарбонил; Вос-трет-бутилоксикарбонил, Ви -трет-бутил; X-КНСНСН(СНз)ОСНРЬ9, СН20 который деблокируют окисляющим агентом и трифторуксусной кислотой в среде органического растворителя. Процесс упрощается за счет исключения стадий выделения и очистки промежуточных продуктов, а также простой процедуры выделения целевого продукта. (a(6 = - 42 (С 0,5; 95 $ АсОН).
Поставленная цель достигается описываемым способом, который заключается в том, что синтез соединения 1 осуществляют твердофазным методом путем ступенчатого наращивания пептидной цег.и, начиная с Сконцевого цистеина, связанного с полимерной матрицей формулы где Р— аминометилированный полистирол, с использованием соответствующих Мфлуоренилоксикарбониламинокислот в присутствии конденсирующего агента с последующей обработкой полученного защищенного пептидилполимера формулы:
Fmoc-0-Phe-Cys(B u )-Phe-0-Trp-Lys(Boc)-Thr-Cys(B u ) X (1 I I), 1792418
20
40
55 где Fmoc — флуоренилоксикарбонил, Вострет.-бутилоксикарбонил, В u -трет,-бутил, ХX- -NH-СН-СН(СН, -О сн,-о--сн+Qv, деблокирующими агентами, окисляющим агентом и трифторуксусной кислотой в среде органического растворителя, Стадия 1, Получение треонинол-ацеталь и-формилфеноксиуксусной кислоты (I la).
К 105 r (1 моль) L-треонинола в 200 мл метанола в атмосфере азота прикапывают при 0 С 200 мл метилового эфира трифторуксусной кислоты в 250 мл метанола, Реакционную смесь перемешивают 1,5 ч при
10 С и упаривают при 40 С, Полученный белый кристаллический остаток растворяют в 200 мл этилацетата при 70 С и переосаждают добавлением 100 мл гексана. Осадок отфильтровывают при 0 С, промывают гексаном и сушат при комнатной температуре, 50,3 г (0,25 моля) полученного продукта растворяют в атмосфере азота в 1250 мл тетрагйдрофурана и к полученному раствору прикапывают последовательно 75 мл триметилхлорсйлана и 70 мл триэтиламина в
250 мл тетрагидрофурана. Через 4 ч отфильтровывают образовавшийся осадок, фильтрат упаривают при 40 С, остаток растворяют в 1500, мл метиленхлорида, Полученный раствор порциями смешивают с
90,4 г и-формил-феноксиуксусной кислоты, а затем добавляют 9 мл триметилсилилового эфира трифторметансульфокислоты. Реакционную смесь перемешивают 24 ч, образовавшийся осадок отфильтровывают, тщательно промывают метиленхлоридом, фильтрат упаривают при 40 С, остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле с использованием в качестве элюента этилацетата, Чистоту полученного соединения lla определяют с помощью жидкостной хроматографии высокого давления.
Стадия 2. Получение соединения И, 17,2 г Аминометилированного полистирола (0,7 вес.%, 11, что соответствует
0,50 ммоль/г) суспендируют в 80 мл смеси метиленхлорида с диметилформамидом (4:1). К полученной суспензии последовательно добавляют 4,17 r Ila, 1,6 г оксибензотриазола и 4 г дициклогексилкарбодиимида, перемешивают 2 ч при комнатной температуре, смолу отфильтровывают, промывают и суспендируют в 100 мл смеси тетрагидрофурана с метанолом (3;1). Полученную суспензию порциями смешивают с 10,4 r боргидрата натрия, перемешивают 6 ч при комнатной температуре, отфильтровывают и промывают, Стадия 3, Получение гептапептида 1.
Полученную на стадии 2 смолу сус пендируют в смеси метиленхлорида с диметилформамидом и добавляют последовательно
5,57 г N-флуоренилоксикарбонил, $-трет.бутил-L-цистеина, 1,74 г оксибензотриазола и 3,6 г дициклогексилкарбодиимида. После отщепления флуоренилоксикарбонильной защитной группы обработкой смолы пиперидином (2х20 мин), затем последовательно присоединяют с помощью дициклогексилкарбодиимида с добавкой оксибензотриазола N-флуоренилоксикарбонил-L-треонин, N-флуоренилоксикарбонил, N -бензилоксикарбонил- -лизин, N-флуоренилоксикарбонил-D-триптофан, N-флуоренилоксикарбонил- -фенилаланин, N-флуоренилоксикарбонил, S-трет,-бутил-L-цистеин, и К-флуоренилоксикарбонил-0-фенилаланин, В итоге получают пептидил-полимер формулы III, Полученный пептидилполимер суспендируют в 100 мл смеси трифторэтанола с метиленхлоридом (1:1) и смешивают с 50 мл трибутилфосфина. Суспензию перемешивают 70 часов при комнатной температуре, смолу отфильтровывают и смешивают со
100 мл смеси тетрагидрофурана и 1 М раствора ацетата аммония (1:1), К полученной смеси добавляют 1,1 мл 30%-ной перекиси водорода и перемешивают 24 ч при комнатной температуре, Затем смолу промывают и смешивают со смеськ 20 мл трифторуксусной кислоты, 80 мл метиленхлорида, 10 мл воды и 2 мл тиоанизола и перемешивают 2 ч. Затем смолу отфильтровывают, промывают трифторуксусной кислотой и метиленхлоридом, к фильтрату добавляют 200 мл диэтилового эфира, выпавший осадок отфильтровывают, растворяют в водном буфере, Полученный раствор обессоливают обработкой Дуолитом и подвергают лиофильной сушке.
В итоге получают 2,1 г (70%) соединенияя 1; (a$ = -42 (С О,б; 95% AcOH).
Как видно из приведенного примера, предлагаемый способ получения гептапептида I позволяет существенно упростить процесс получения целевого продукта за счет исключения стадий выделения и очистки промежуточных соединений и за счет простой процедуры выделения конечного продукта путем фильтрования и обессоливания. Кроме того. предлагаемый способ может быть автоматизирован при проведении процесса на пептидном синтезаторе.
Формула изобретения
Способ получения аналога соматостатина формулы
1792418
Fmoc-0-Phe-Cys(B u )-Phe-D-TrpLys(Boc)-Thr-Cys(B и )-Х, где Fmoc"- флуоренилоксикарбонил;
Вос — трет.-бутилоксикарбонил;
В u — трет.-бутил; х- -нн-ш-сн«н -о
I сн,-о — сн-О-®, Составитель М. Меркулова
Техред М.Моргентал Корректор 3. Салко
Тирам Подписное осударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-ÇS, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101
Н-о-Р«е-.CyS-Phe-О Тгр -LyS—
r сН(СН i-OH
-Tht-Cys-NH CH
1 сн -он путем наращивания пептидной цепи с ис- 5 пользованием N-защищенных аминокислот, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, синтез ведут путем стуПенчатого наращивания пептидной цепи, начиная с С-концевого цистеина, свя- 10 зайного с полимерной матрицей формулы
М н сн ъ лр где Р— аминометилированный полистирол, 15 с ирпользованием соответствующих N-флуор нилоксикарбониламинокислот в присутствии конденсирующего агента с последующей обработкой полученного защищенного пептидилполимера формулы послеДовательно деблокирующими агентами, окисляющим агентом и трифторуксусной кислотой в среде органического растворителя.
