Способ определения границ хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов при разделении их смеси методом тонкослойной хроматографии
Использование: аналитическая химия, препаративное выделение отдельных классов фосфолипидов из сложных липидных смесей в клинической и лабораторной практике . Сущность изобретения: способ заключается в нанесении смеси фосфолипидов на пластинку с тонким слоем адсорбента, пропускании через него подвижной фазы в хроматографической камере и визуального обнаружения границ образовавшихся зон индивидуальных классов фосфолипидов. Нанесение смеси фосфолипидов на стартовую линию ведут параллельно с нанесением равного количества смеси определенных красителей в отдельные точки, лежащие на той же линии. Обнаружение границ проводят по соответствию значений хроматографической подвижности отдельных классов фосфолипидов и соответствующих красителей. сл с
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК. (si)s G 01 N 30/90
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ CCP) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4872327/25 (22) 10,10.90 (46) 30.11.92. Бюл. Ф 44 (71) Институт физиологии растений им.
К,А.Тимирязева (72) Н.Ю.Грачева, В.П,Пчелкин и В.Д.Цыдендамбаев (56) Бергельсон Л.Д. и др. Препаративная биохимия липидов.M.; Наука, 1981, с. 124.
Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен)./Под ред, М.И.Прохоровой. Л.: Изд-во Л.Университета, 1982, с. 76 — 78. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРАНИЦ
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ ЗОН ОТДЕЛЬНЫХ КЛАССОВ ФОСФОЛИПИДОВ, ПРИ
РАЗДЕЛЕНИИ ИХ СМЕСИ МЕТОДОМТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам определения границ хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов (ФЛ) при разделении их смеси методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может найти применение при препаративном выделении различных классов липидов из сложных смесей в клинической и лабораторной практике.
Известен способ определения границ хроматографических зон веществ, в частности фосфолипидов, методом ТСХ, заключающийся в том, что пластинку с нанесенной на нее смесью помещают в камеру для хроматографии, а затем, после окончания хроматографического разделения смеси, опрыскивают весь слой адсорбента или его,!Ж,, 1778684А1 (57) Использование: аналитическая химия, препаративное выделение отдельных классов фосфолипидов из сложных липидных смесей в клинической и лабораторной практике. Сущность изобретения: способ заключается в нанесении смеси фосфолипидов на пластинку с тонким слоем адсорбента, пропускании через него подвижной фазы в хроматографической камере и визуального обнаружения границ образовавшихся зон индивидуальных классов фосфолипидов.
Нанесение смеси фосфолипидов на стартовую линию ведут параллельно с нанесением равного количества смеси определенных красителей в отдельные точки, лежащие на той же линии. Обнаружение границ проводят по соответствию значений хроматографической подвижности отдельных классов фосфолипидов и соответствующих красителей, часть каким-либо агентом, который считыва Ч ется неразрушающим, например, родамином В.
Недостатком этого способа является то, О" что на самом деле использование этого не- ОО разрушающего агента, ведет к увеличению ф концентрации активного кислорода в слое адсорбента, а следовательно, вызывает потери определяемых веществ в результате их окисления.
Известен также способ определения границ хроматографических зон при разделении смеси веществ методом ТСХ, включающий разделение смеси и последующее помещение пластинок в камеру, насыщенную парами иода. Появившиеся пятна желто-коричневого цвета обводят иглой, измеряют подвижность хроматографиче1770684 ских зон и вычисляют величины их Rf. Идентификацию проводят сравнением полученных значений Rf с имеющимися в литературе, а также с помощью стандартов, После улетучивания иода фракции элюируют.
Однако этот способ не может быть признан полностью неразрушающим, так как при проведении с происходит нарушение нативной структуры олефиновых связей и их миграция, а также благодаря присутствию йода в ходе самого определения значительно ускоряется процесс окисления ненасыщенных ацильных остатков.
Цель изобретения — препаративное выделение в условиях проточной ТСХ неокрашенных и недеструктурирова нных фосфолипидов, а также упрощение способа обнаружения границ их хроматографических зон.
Поставленная цель достигается способом, заключающемся в нанесении смеси фосфолипидов на пластинку с тонким слрем адсорбента, пропускании через него подвижной фазы B хроматаграфической камере и визуального обнаружения границ образовавшихся зон индивидуальных классов фосфолипидов, причем нанесение смеси фосфолипидов на стартовую линию пластинки для ТСХ ведут параллельно с нанесением равного количества смеси красителей в отдельные точки, лежащие на той же линии, а обнаружение границ проводят по соответствию хроматографической подвижности отдельных классов фосфолипидов и соответствующих красителей.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. На пластинку "Силуфол"
SiIufol, фирмы КачаПег, ЧСФР) размером
15х5 см, адсорбент — силикагель, толщина слоя — 150 мкм; наносят 0,2 мг смеси ФЛ (Lecitine-soybean "$егча", ФРГ) и 0,2 мг GMecu красителей метилового красного и 2,4динитрофенола, растворенных в 5 мл смеси хлороформ:метанол (2;1), Помещают пластинку в хроматографическую камеру, насыщенную парами подвижной фазы, и пропускают через тонкий слой адсорбента подвижную фазу. По достижении фронтом подвижной фазы верхнего обреза пластинки последнюю вынимают из камеры, высушивают и обнаруживают границы образовавшейся эоны фосфатидилэтаноламина по величине Rf окрашенной зоны метилового красного (Rf = 0,53) — нижняя
55 граница и окрашенной зоны 2,4-динитрофенола(Rf = 0,65) — верхняя граница.
Пример 2. Проводят аналогично примеру 1, но используют смесь красителей тропеолина 00 и лакмоида для обнаружения фосфатидилхолина. Величина Rf окрашенной зоны тропеолина 00 равна 0,32 — нижняя граница зоны фосфатидилхолина, à Rf лакмоида — 0,53 — верхняя граница зоны фосфатидилхолина.
Пример 3. Проводят аналогично примеру 1, но используют смесь красителей светло-зеленого (Light green, Loba-cheme, Wien-Fischameno, Австрия) и магнезона ХС и обнаруживают фосфатидилинозит. Результаты представлечы в таблице.
Пример 4. Проводят аналогично примеру 1, но берут стеклянную пластинку со слоем силикагеля (производство Ляэне
Калур, Эстония), размером 20х20 см. Результаты аналогичны примеру 1.
Соответствие между красителями и различными классами природных фосфолипидов по ТСХ-подвижности
Из результатов по примерам 1 — 5 следует, что предлагаемый способ позволяет определить границы хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов. в частности фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина и фосфатидилинозита со значительным упрощением процесса, Формула изобретения
Способ определения границ хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов при разделении их смеси методом тонкослойной хроматографии (ТСХ), заключающийся в нанесении смеси фосфолипидов на пластинку с тонким слоем адсорбента, пропускании через него подвижной фазы в хроматографической камере и визуальном обнаружении границ образовавшихся зон индивидуальных классов фосфолипидов, от.л и ч а ю щи и с я тем, что, с целью препаративного выделения в условиях проточной ТСХ неокрашенных и недеструктурированных фосфолипидов, а такмсе упрощения способа обнаружения границ их хроматографических зон, нанесение смеси фосфолипидов на стартовую линию пластинки для ТСХ ведут параллельно с нанесением равного количества смеси красителей в отдельные точки, лежащие на той же линии, а обнаружение границ проводят по соответствию хроматографической подвижности отдельных классов фосфолипидов и соответствующих красителей.
1778684
Составитель Н. Грачева
Техред М. Моргентал
Корректор M. Керецман
Редактор Т. Полионова
Заказ 4190 Тираж Подписное
BHNNlflN Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113935, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат."Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Соотношение между красителями и различными классами природных фосфолипидов по ТХС-подвижности
