Способ получения биологически активного вещества на основе соли n,n-диметил-(2-n`,n`-диметиламинометилпиридил-3) карбамата и стиролвинилбензольного сульфокатионита, обладающего свойством ингибировать холинэстеразы

 

Использование: в качестве веществ, обладающих антихолинэстеразной активностью. Сущность изобретения. Продукт: аминостигмин, адсорбированный на стирилвинилбензольном сульфокатионите. Реагент 1: аминостигнин. Реагент 2: стирилвинилбензольный сульфокатионит с диаметром гранул 0,25-0,5 мм. Условия реакции: соотношение реагентов 1 и 2, равное 1:(3-3,5), в воде в присутствии лимонной и аскорбиновой кислот и цистеина при комнатной температуре до уровня адсорбции аминостигмина 21-26%. 2 табл.

Изобретение относится к способам получения биологически активного вещества на основе соли N, N-диметил-(2-N', N'- диметиламинометилпиридил-3)карбамата и стиролвинилбензольного сульфокатионита, обладающего свойством ингибировать холинэстеразы. Известно, что среди карбаматов, обладающих антихолинэстеразной активностью, имеется ряд соединений, получивших широкое практическое применение. К таким препаратам относится физостигмин салицилат, прозерин метилсульфат и пиридостигминбромид, ингибирующие холинэстеразы. Однако антихолинэстеразное действие этих соединений ограничивается 0,5-4 ч. Кроме того, фазостигмин трудно доступен, поскольку получается из импортного растительного сырья и не стоек при хранении. Пиридостигмин обладает слабым антихолинэстеразным действием. Прозерин является четвертичным производным и не проникает через гемато-энцефалический барьер. Известен также препарат аминостигмин, представляющий собой хлористоводородную соль N,N-диметил-(2-N',N'- диметиламинометилпиридил-3)карбамата, обладающий высокой антихолинэстеразной активностью. Будучи производным третичного азота, она легко проникает через гематоэнцефалический барьер, ингибирует холинэстеразу всех органов, в том числе и мозга. Недостатком аминостигмина является относительно короткое антихолинэстеразное действие при внутримышечном и пероральном введении. Цель изобретения увеличение времени ингибирования, холинэстеразы при введении препарата. Цель достигается получением соли N,N-диметил-(2-N',N'- диметиламинометилпиридил-3)карбамата и стиролвинилбензольного сульфокатионита ингибитора I (ионостигмин). П р и м е р 1. Способ получения предлагаемого соединения. N, N-Диметил-(2-N',N'-диметиламином- етилпиридил-3)карбамата гидрохлорид (аминостигмин) смешивают с ионитом КУ-2чМ, представляющим собой сферические гранулы от светло-желтого до светло-коричневого цвета диаметром 0,25-0,50 мм. В качестве растворителя используют полярную реакционную среду. Катионы карбамата вступают в реакцию с сульфогруппами ионита с образованием ионообменной соли (резината). Свободные сульфогруппы нейтрализуют солями натрия или другими физиологически приемлемыми катионами. Количественные соотношения аминостигмина и ионита подбирают таким образом, чтобы содержание карбамата в резинате было 21-26% (считая на аминостигмин). 6,06 г аминостигмина растворяют в 55 мл дистиллированной воды и доводят водой до объема 60,6 мл. В полученный раствор карбамата добавляют до 0,25 мг лимонной, аскорбиновой кислот и цистеина. 20,2 г катионита КУ-2чМ (с содержанием дивинилбензола 20% ) заливают до зеркала приготовленным раствором аминостигмина (около 20 мл). Время контакта 42 ч. Затем раствор сливают и гранулы заливают оставшейся порцией раствора аминостигмина. Процесс сорбции длится 2 недели. По окончании процесса в суспензию добавляют 2,5 г натрия гидрокарбоната на 30 мин. Затем гранулы промывают 5 объемами дистиллированной воды, сушат при 60^оС до достаточной влажности менее 5% и обрабатывают в течение 1 ч 1 г газообразного аммиака. Гранулы досушивают до остаточной влажности менее 3% Содержание N,N-диметил-(2-N',N'- диметиламинометилпиридил-3)-карбамата в резинате 24,2% При испытании гранул по тесту на растворение в приборе 545 Р-АК-7 за 2 ч выделяется 30% за 7 50% за 24 85% пиридилкарбамата. Количество выделяющегося во времени N,N-диметил-(2-N',N'- диметиламинометилпиридил-3)карбамата определяют спектрометрически при длине волны 263 2 нм. Параллельно проводят измерение оптической плотности стандартного образца, приготовленного из аминостигмина. П р и м е р 2. Увеличение длительности обратимого торможения холинэстеразы мозга и крови животных. Опыты выполнены на беспородных белых крысах массой 190-220 г и кошках обоего пола массой 2,4-4,0 кг. В каждой опытной группе взято по 6 животных. Динамику изменения активности холинэстеразы продолговатого мозга крыс и цельной крови кошек, которым вводили ингибитор 1 или аминостигмин, определяли методом непрерывного потенциометрического титрования на автотитраторе ТТТ-1 с титрографом фирмы "Radiometer" (Дания) в условиях постоянства рН (7,4) и концентрации субстрата (2 10^-3 М). Субстратом являлся иодид ацетилхолина. Предварительно оценивали скорость ферментативного гидролиза ацетилхолина в продолговатом мозге и крови контактных животных. Полученное вещество вводили крысам перорально, а кошкам внутрижелудочно. Аминостигмин вводили животным внутрижелудочно в водном растворе. Крыс через различные сроки после введения препаратов декапитировали и выделяли продолговатый мозг, который гомогенизировали для последующего исследования. Соединение согласно изобретению и аминостигмин вводили животным в эквитоксичных дозах 1/6ЛД₅₀. У кошек забор крови для исследования осуществляли из поверхностных вен ушной раковины через различные сроки после введения препаратов. Аминостигмин использовали в дозе 0,015 мг/кг, при применении которой достигается такой же уровень угнетения активности холинэстеразы, как и при введении предлагаемого соединения в дозе 0,2 мг/кг. Существенно, что доза аминостигмина относительно более токсична (1/57 ЛД₅₀) чем используемого соединения (1/164 ЛД₅₀). Результаты экспериментов представлены в табл.1 и 2. Представленные в табл.1 и 2 данные свидетельствуют о различной длительности действия рассматриваемых препаратов. Если после введения ионостигмина выраженная обратимая ингибиция холинэстеразы мозга и крови животных сохранялась в течение 24 ч, то после применения аминостигмина она не превышала 8 ч. Таким образом, ингибитор I в опытах на крысах и крошках превосходит аминостигмин по длительности антихолинэстеразного действия не менее чем в 3 раза.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ВЕЩЕСТВА НА ОСНОВЕ СОЛИ N,N-ДИМЕТИЛ-(2-N', N'-ДИМЕТИЛАМИНОМЕТИЛПИРИДИЛ-3)КАРБАМАТА И СТИРОЛВИНИЛБЕНЗОЛЬНОГО СУЛЬФОКАТИОНИТА, ОБЛАДАЮЩЕГО СВОЙСТВОМ ИНГИБИРОВАТЬ ХОЛИНЭСТЕРАЗЫ, отличающийся тем, что, с целью увеличения времени действия ингибитора, смешивают водный раствор аминостигмина со стиролвинилбензольным сульфокатионитом с диаметром гранул 0,25 0,5 мм при массовом соотношении аминостигмин катионит, равном 1 (3 3,5), в присутствии лимонной и аскорбиновой кислот и цистеина, реакционную смесь выдерживают до достижения уровня сорбированного аминостигмина, равного 21 26% нейтрализуют реакционную смесь гидрокарбонатом натрия, промывают ионит дистиллированной водой, сушат при 60^oС до остаточной влажности менее 5% и обрабатывают в течение 1 ч газообразным аммиаком с последующим досушиванием целевого продукта до остаточной влажности менее 3%

РИСУНКИ

Рисунок 1

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 16.06.1999

Номер и год публикации бюллетеня: 7-2000

Извещение опубликовано: 10.03.2000        

---