Способ оценки иммунного ответа животных

 

Использование: селекционно-ветеринарная генетика. Сущность изобретения: для проведения иммунизации готовят суспензию антигена Суспензия включает. мас.%: физиологический раствор 49,5; яичный альбумин 0,3; неполный адьювант Фрейнда50,2. Суспензию вводят внутримышечно . Иммунизацию проводят три раза. Ведут контроль наличия антител в сыворотке крови посредством иммуноферментного анализа, Через 14 дн. после проведения третьей иммунизации по оптической плотности сыворотки определяют силу иммунного ответа у животных и оставляют для дальнейшего разделения особе й с силой иммунного ответа не менее, чем X + 0,5 а, по сравнению со средним по группе. 1 табл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Я2 1752344 А) (я)з A 61 В 5/00, А 61 О 7/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

- ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗСБРЕТЕНИ4

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ф

Изобретение относится к области био- сыворотку, обеспечивающую реальный конлогии, в частности к селекционно-ветери-. : троль наличия антйтел ; и, следовательно, не нарной генетике, и может быть возможноустановить пикйммунногоответа использовано при создании популяций жи- и класс иммуноглобулинов(антител), поэтовотных с высоким иммунным ответом и сле- му невозможно точно оценить генотип, явдовательно,устойчивых кзаболеваниям. ляющийся лучшим продуцентом того или Ql

Наиболее близким по технической сущ- иного класса иммуноглобулинов, Кроме то- Я ности к заявляемому объекту является cna- го, 4-5-кратная иммунизация является био- () соб установления различной сочетаемости логически неоп равданйой, так как ф родительских пар по иммунному ответу,, мйогократнoe введение антигена. (более 4 включающий 4-5-кратное введение антиге-.. раз) вызывает гиперсенсибилизацию органа подкожно реципиенту другого вида и " низма, а четвертная иммунизация не ведет

:контроль наличия антигена подкожно феци- к-нарастанию айтител. Использование в ка- Ф пиенту другого вида и контроль наличия ан- честве антигена зритроцитов крови ведет к тител в крови животных после каждой дополнительному"стрессу у доноров и являиммунизации через 5 дн. Однако известнйй ется трудоемким по технике выполнения. способ имеет следующие недостатки. Во- : Целью изобретения является повышепервых, для получения иммунной сыворотки we точности оценки;используется реципиент другого вида. что Поставленная цель достигается тем, что не позволяет получить моноспецифическую в способе оценки иммунного ответа живо1 (21) 4797039/15 (22) 27.02.90 (46) 07.08.92. Бюл. M 29 (71) Омский сельскохозяйственный институт ис. С.M.Êèðîâà (72) Н.M.Êîñòîìàõèí (53) 612.017.1(088.8) (56) Малаховский А.Я, Проблема индивидуального подбора и методика установления различной сочетаемостй родительских пар.

Научные труды Омского сельхозинститута, - 1960, с. 10-17. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ИММУННОГО ОТВЕТА ЖИВОТНЫХ

2 (57) Использование: селекционно-ветери. нарная генетика. Сущность изобретения: для проведения йммунизации готовят суспензию антигена. Суспензия включает. мас. j: физиологический раствор 49,5; яичный альбумин 0,3; неполный адъювант .Ф рейнда 50,2. Суспензию вводят внутримышечно. Иммунизацию проводят три раза, Ведут контроль наличия антител в сыворотке крови посредством иммуноферментного аналйза, Через 14 дн, после проведения третьей иммунизации fio оптически плотности сыворотки определяют силу иммунного ответа у животных -и оставляют "для дальнейшего разделения особей с силой им" мунного ответа не мейее, чем X + 0,5 о, по — сравнению со средним по группе. 1 табл. Я

1752344 тных, включающем введение антигена, антиген вводят внутримышечно трехкратно с интервалом нарастания иммунного ответа, причем в качестве антигена используют суспензию, содержащую физиологический раствор, неполный адъювант Фрейнда, яичный альбумин при следующем соотношении компонентов, мас,$:.

Физиологичеекий раствор 49,5

Неполный адъювант

Фрейнда 50,2

Яичный альбумин 0,3, а оценку проводят по оптической плотности сыв6ротки крови, при этом к животным с высоким иммунным ответом относят особей с величиной оптической плотности сыворотки крови выше, чем Х + 0,5, сг.

Способ осуществляют следующим образом.

Общепринятым в разведении способом определяют генетическую принадлежность животных к линии, семейству, родственной группе и т.д. Затем формируют группы животных с заведомо известным происхождением в количестве, обеспе чиваю щем получение статическим достовернйх результатов. Как известйо, стайовлеййе основных иммунных реакцйй организма жвачных животных и роисходит к 2-3-месячному возрасту и поэтому необходимо формировать группы из молодняков указайного возврата, Для проведения -иммунизацйй готовят суспензию антигена включающую следующие компоненты: физиологический раствор

1 мл (49,5;4); яичный альбумин фирма

"Sigrni" (США) с концентрацией белка 99 /

6 мг (0,37;); неполный адъювант Фрейнда 1 мл (50 2%), 6 мт яичного альбумина растворяют в 1 мл физиологического раствора а затем пол ученную суспензию смешивают с 1 мл адьюванта Фрейнда и смесь гомогенизируют гомогенизатором в течение 2-3 мин. Затем, перед началом иммунизации у животных берут кровь для контроля на наличие антител.

После этого каждому животному вводят внутримышечно 2 мл приготовленной суспензии антигена, Через 14 дн. (цикл нарастания иммунного ответа) у животных разного происхождения берут кровь для контроля уровня антител и повторяют цикл иммунизацйи, Иммунизацию проводят три раза и проводят оценку по оптической плотности сыворотки крови. Через 14 дн. после проведения третьей иммуйизации по значениям, полученным в результате иммуноферментного анализа (оптическая плотность сыворотки), определяют силу иммунного от20 вета у животных разного происхождения и оставляют для дальнейшего разведения особей с силой иммунного ответа выше, чем

Х+ 0 5 о по сравнению со средним по груп-

5 пе, Одновременно осуществляется оценка генотипа быков-проИзводителей по генетической детерминации иммунологической реактивности потомства.

Установлено на опытной группе живо10 тных (40 голов). что нарастание иммунного ответа идет интенсивно до:третьей иммунизации и его сила не изменяется после четвертой и пятой . иммунизаций, что подтверждается следующими показателя15 ми

Иммунизация Концентрация антилел, оптическая плотность

До иммунизациИ . 0,033

1 иммунизация 0,485

2 иммунизация 1,031

3 иммуйизация . 1,467 .

4 иммунизация 1,475

5 иммунизация . 1,452

В качестве средства для проведения им-.

25 мунизации предлагается суспензия антиге-

"на в строго определенных соотношениях компонентов. Это обусловлено тем, что бы ло пpoведeнo несколько экспериментов с различным соотношением компонентов

30 указанной суспензии, Пример 1, Берут рекомендуемое соотношение компонентов, представленных втаблице. Сусйензию вводят внутримы шечно трем животным различного генотипа.

35 Результаты таблицы свидетельствуют о том, что йарастание иммунного ответа шло интенсивно до третьей иммунизации и одновременно выявлена . существенная индивидуальная гетерогенность у животных

40 различного происхождения в уровне иммунного ответа. Так, животное М 4882 превосходило после третьей иммунизации животн ых М% 4884 и 4885 на 181,5 и 120,1 $ соответственно, Животное hL. 4885 превос45 ходило животное % 4884 на 156,2ф(,. Четвертая иммунизация не повлияла на .. дальнейшее нарастание антител в крови, Пример 2, Берут минимальную дозу яичного альбумина — 0,05 (1 мг), при этом

50 соотношение других компоНентов также изменяют (см. таблицу). Результаты показали, что тенденция нарастания иммунного ответа сохранялась, но в то же время его сила была очень низкой, что не позволило выя55 вить каких-либо значительных различий между животными разного генотипа. Такие результаты мало эффективны для использования в селекционном процессе.

П ри м е р 3, Берут максимальнуа дозу антигена 0,5 (, (10 мг), при этом соотноше1752344

5 6 ние других компонентов изменяют (табл. 2). ференцирующей способностью, присутстСиланарастанияиммунногоответабылада- вие в способе количественного критерия же несколько выше, чем с рекомейдуемой учета позволяет определить достоверность дозой антигена. Но высокое нарастание оценки, Это придает способуточность, объуровня антигена в крови также не позволи- 5 ективность, комплексность, так как объедиловыявитьразличиймеждуживотнымираз- няет ветеринарный и селекционный личного происхождения, так как высокая подходы, Способ технически может быть доза антигена вызывает гиперсенсибилиза- осуществлен в любом научно-исследовацию организма, что не позволяет реально тельском учреждении . оценить его защитные способности и может 10 Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я привести к анафилэксическому шоку. : Способ оценки иммунного ответа живоВо всех приведенных примерах нара- тных, включающий введение антигена, о тстание антител в крови животных наблюда- л и ч а ю шийся тем, что, с целью лось до третьей иммунизации, нос большей повышения точности," антиген вводят или меньшей силой.. -: 15 внутримышечно трехкратйо с интервалом

Использование предлагаемого способа нарастания иммунного ответа, причем в кав результате трехкратной внутримышечной честве антигена используют суспензию, соиммунизации животных различного проис- держащую физиологический раствор, хождения предлагаемой суспензии антиге- неполный адъювант Фрейнда, яичный эльна и контроля на наличие антител 20 бумин при следующем соотношении компопосредством иммуноферментного анализа нентов, мас.%: позволяет точно оценить генотип животно- Физиологический

ro по иммунологической реактйвности с уче-: раствор - . "" 49,5 том, как общего количества специфических Неполный адъювант антител, так и отдельных их классов tgG>, 25 . Фрейнда 50,2

1д62, IgA. IgM, что позволяет судить о гене- Яичный альбумин 0,3 . тической детерминированности данного а оценку проводят по оптической плотности феномена. " ::- -:- .. : сыворотки крови, при "этом к животным с

Предложенный способ отвечает требо- вйсоким иммунным ответом относятособей ваниям, предъявляемым к методам диагно- 30 с величиной оптической плотйости с6Ьворотстики иммунного ответа и принципам ки крови выше, чем Х+ 0,5о, селекции животных. Способ обладает дифВлияние различного соотйошения компонентов в сусупензии для иммунизации на силу иммунного ответа у"животных различного происхождения (оптическая плотность ) 7

1752344

Продолжение таблицы

СостаВитейь НЛ(ООФэмахин

Редактор Т.Никольская Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор k.Mèëþêîâà

Производственно-издательский комбинат "Патент". r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2712 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рауаская наб.. 4/5