Способ искусственного оплодотворения икры лососевых рыб

 

Использование: искусственное оплодотворение икры лососевых рыб, обеспечивающее повышение качества и выживаемости потомства. Способ предусматривает взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешивание икры и спермы. В процессе инактивации инактивируют как X, так и Y- низкоактивные спермии. Для этого поэтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления ее на две части и внесения первой части в воду за 10 с, а второй - за 5 с до перемешивания спермы с икрой, или путем нанесения спермы нз поверхность икры, добавление к ней воды в количестве 5% от объема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном объему икры, и перемешивания спермы с водой с одновременным перемешиванием с икрой после добавления второй порции воды. 6 табл. ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4794442/13 (22) 22,02,90 (46) 15,07.92. Бюл, N. 26 (71) Тихоокеанский океанологический институт Дальневосточного отделения AH

СССР (72) Ю.А,Митрофанов и Л.Н,Сасина (53) 639,3,034,3(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 891039,,кл. А 01 К 61/00, 1980.

Авторское свидетельство СССР

¹ 1361735, кл. А 01 К 61/00, 1986. (54) СПОСОБ ИСКУССТВЕННОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ ИКРЫ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ (57) Использование: искусственное оплодотворение икры лососевых рыб, обеспечивающее повышение качества и выживаемости потомства. Способ предусИзобретение относится к рыбному хозяйству, направлено на повышение качества и выживаемости потомства при искусственном оплодотворении и может быть использовано при разведении рыб на рыбоводных заводах.

Известен способ искусственного оплодотворения икры рыб, включающий взятие . половых продуктов, обработку спермы для инактивации нежизнестойких спермиев путем добавления к сперме водного раствора хлористого калия с рН 7,0 — 7,4 и концентрацией, обеспечивающей содержание хлористого калия в смеси, равное 20-60 мМ. При этом перед обработкой икры сперму выдерживают в смеси с хлористым калием в течение 3-5 мин.

„„5U, „1746959 А1 (51)5 А 01 К 61/00 зал, .1 > 0 » -,- матривает взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешиванйе икры и спермы. В процессе инактивации инактивируют как Х, так и Yнизкоактивные спермии. Для этого позтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления ее на две части и внесения первой части в воду за 10 с. а в1орой— за 5 с до перемешивания спермы с икрой; или путем нанесения спермы на поверхность икры, добавление к ней воды в количестве 5 от объема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном обьему икры, и перемешивания спермы с водой с одновременным перемешиванием с икрой после добавления второй порции воды. 6 табл.

В качестве прототипа выбран способ искусственного оплодотворения икры рыб, 4 предусматривающий взятие у производите- ф лей половых продуктов, включающий инак- 01 тивацию спермиев с Y-хромосомами, их- {) обработку для регулирования пола сперми- (у ее добавлением к икре за 4-l0 с до смешивания ее с молоками воды со значением рН на О.б ед. превышающем зто значение в реке обитания рыб, или добавления спермы в воду перед смешиванием с икрой в два этапа — деление порции спермы на две равные части и двухступенчатого внесения первой части в воду за 20 с до смешивания с икрой, а второй — за 5 с до смешивания с икрой.

Недостатком этого способа является недостаточная жизнестойкость потомства

1746959

10

55 вследствие того, что инактивация спермиев с Y-хромосомами ведет к увеличению числа самок в потомстве. но не обеспечивает достаточного разделения активных и низкоактивных спермиев. Первым периодом 20 сек создают слишком большие препятствия для спермиев. вследствие чего инактивируются не только слабые спермии, но и часть активных спермиев, которые определяют появление жизнестойкого потомства, Цель изобретения — создание условий, приводящих к элиминации спермиев с дефектными генотипами и препятствующих оплодотворению икры низкоактивными спермиями. В результате этого происходит оплодотворение икры высокоактивными спермиями, что приводит к увеличению выживаемости и улучшению качества потомства.

Поставленная цель достигается тем, что в способе искусственного оплодотворения икры лососевых рыб, включающем взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешивание икры и спермы, проводят инактивацию низкоактивных как Х-, тэк и Y-спермиев, для чего поэтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления спермы перед перемешиванием на две части и внесения первой части в воду за 10 с, а второй — за 5 с до перемешивания ее с икрой, или путем нанесения спермы на поверхность икры, добавления к ней воды в количестве 5 от обьема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном обьему икры, перемешивания спермы с водой и одновременно с икрой после добавления второй порции воды.

Известно. что потеря активности спермиев в воде происходит очень быстро: 80100 спермиев сохраняют активность в воде до 5-7 с, после 9-11 с пребывания в воде активны 30-70 спермиев, после 1316 с — активны 5-30, спермиев, после 1820 с — 1-4 $ спермиев. Поэтому при использовании двухступенчатого добавления спермы к воде порция спермы делится на две равные части, Первая часть добавляется к равному объему воды, быстро в течение 5 с перемешивается, потом в нее добавляется вторая часть спермы, перемешивается. Вся операция от момента прилития первой части спермы к воде до оплодотворения икры занимает 10 с. Укаэанные интервалы выбраны в связи с тем, что при активации спермы водой играют большую роль даже секунды.

Таким образом, при использовании способа создают условия, препятствующие оплодотворению икры низкоактивными спермиями, приводящие к элиминации спермиев с дефектными генотипами, а следовательно, уменьшению дефектных генотипов в потомстве, но оставляют достаточное количество высокоактивных спермиев, Пример 1. Смесь икры, взятую от четырех самок горбуши, разделили на две части. Для ее оплодотворения использовалась смесь спермы от пяти производителей, Контрольная икра оплодотворялась с использованием заводского метода.

При использовании двухступенчатого добавления спермы к воде порция спермы делилась на две равные части, Первая часть спермы добавлялась к равному объему воды, быстро перемешивалась (5 с). Эта процедура не может быть выполнена за период менее 5 с, так как при этом не происходит полного перемешивания. Затем в эту смесь добавлялась вторая часть спермы и также перемешивалась в течение 5 с. Смесь сразу после этого добавлялась к икре. Таким образом, вся операция от момента прилития первой части спермы к воде до оплодотворения икры занимала 10 с.

Указанные интервалы выбраны в связи с тем, что при активации спермы водой играют большую роль даже секунды. В табл. 1 приведены данные при невысоком уровне гибели икры и личинок. Из примера видно, что использование способа снижает отход при оплодотворении икры и увеличивает жизнеспособность икры и личинок в процессе развития.

ll р и м е р 2. Опыты поставлены так же, как и в примере 1. Использовались самки. в икре которых наблюдался высокий уровень отхода. Как видно из табл. 2, положительный эффект предл< женного способа в этом случае увеличивается, Пример 3. Изучено влияние различных периодов воздействия воды на спермии горбуши (табл. 3). Из табл. 3 видно, что в N

9 увеличение первого периода воздействия воды на спермии приводит к увеличению гибели икры и личинок; Еще более увеличивается отход при увеличении второго периода(N 10 и 11).

Временные интервалы обосновываются необходимостью создания условий для инактивации малоактивных спермиев с одной стороны, и гарантированностью высокого уровня оплодотворения икры — с другой. Спермии второй части находятся в воде 5+5 с, При этом низкоактивные спермии первой части спермы теряют активность, высокоактивные сохраняют

1746959 активность. Если первый период увеличить (N 9), то начинают терять активность и высокоактивные спермии. Вторые 5 с нахождения в воде влияют на спермии как первой, так и второй части. Однако в связи с тем, что 5 к второй порции спермы приливается не чистая вода, а ее смесь со спермой, потеря активности второй части спермы происходит не столь быстро, как первой. Этим приемом гарантируется полнота 10 оплодотворения икры, Следовательно, двухступенчатый способ разбавления спермы, с одной стороны, приводит к отсеву низкоактивных спермиев, а с другой гарантирует высокий уровень 15 оплодотворения икры, Аналогичные данные получены для кеты

Пример 4. В емкость собиралась 20 икра, которая занимала 1/3 объема емкости, На икру помещалась сперма, На сперму вливался небольшой объем воды — примерно 1/20 (5%) объема икры, Сперма перемешивалась с водой на поверхности икры в 25 течение 5 с. Далее в емкость вливалась вода в объеме, равном объему икры, и сперма перемешивалась со всем объемом воды и .одновременно с икрой. Таким образом; оплодотворение икры осуществлялось в толще 30 воды (табл. 4, N 9), При этом жизнеспособность икры была выше, чем в контроле, хотя и несколько ниже, чем при двухступенчатом способе (ДВС) добавления спермы к воде (табл. 4, N 18). 35

B табл, 4 приведены также варианты, когда в сперму перед оплодотворением добавлялась вода в течение 5 с (N. 20) и 7 с (N.

21). Они свидетельствуют о том, что такой прием резко увеличивает отходы икры, т,е. 40 при этом не гарантируются высокие уровни оплодотворения и развития икры.

Пример 5. Изучены размеры — длина от начала головы до выемки хвостового плавника (АС) и масса 5-ти и 6-ти месячных 45 мальков кеты (табл, 5). При использовании двухступенчатого способа оплодотворения

5+5 с длина мальков несколько больше, чем в контроле. Более существенными оказались различия в массе мальков, особенно 50 между №М 24 и 25. Очевидно, что повышенная жизнеспособность мальков кеты, возникающая при использовании предложенного способа, проявляется в повышенных тем55 пах роста и увеличении массы, Была определена масса погибших мальков, Ее показатели у них оказались очень низкими и колебались в пределах 163-276 мг (средний вес 224 мг). Все погибшие мальки были истощенными.

Определено соотношение полов при использовании предлагаемого ДВС 5+5 с. В контроле у кеты количество самок было равно 42,7%, а при ДВС вЂ” 55,2%. Следовательно, в отношении количества самок ДВС также более предпочтителен.

Пример 7, В качестве фактора, препятствующего свободному оплодотворению, была использована вода с различными рН при воздействии на спермии при оплодотворении двухступенчатым методом

15+5 с (табл. 6), В родной реке рН равно 5,5 (N. 26). При подкислении воды до рН=5,0 и использовании ее при оплодотворении отход; увеличивается (¹ 27). Небольшое лодщелочение воды до рН=5,8 по сравнению с контролем (N. 28) напротив снижает отходы за инкубацию, что происходит вследствие создания .ограничений в оплодотворении икры низкоактивными спермиями. Повышение рН до 6,8 увеличивает отход вследствие того, что создаются уже существенные пре пятствия спермиям.

Формула изобретения

Способ искусственного оплодотворения икры лососевых рыб, включающий взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешивание икры и спермы, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения качества и выживаемости потомства, при инактивации проводят инактивацию низкоактивных как

Х-, так и Y-спермиев, для чего поэтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления ее на две части и. внесения первой части в воду за 10 с, а второй — за 5 с до перемешивания ее с икрой, или путем нанесения спермы на поверхность икры, добавления к ней воды в количестве 5% от объема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном объему икры, и переме- . шивания спермы с водой с одновременным перемешиванием с икрой после добавления еТороА порции воды.

1746959

Таблица1

Таблица2

Данные по отходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двухступенчатого способа разбавления спермы

Таблица3

Данные по отходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двухступенчатого способа разбавления спермы с различными периодами воздействия воды на спермии перед оплодотворением икры

¹¹ вариантов

Заложено икры шт

Варианты оплодотворения икры

Отходы икры после оплодот..прения,,"(Отходя икры и личинок за инкубацию, 360

Контроль

Двухступенчатое добавление спермы к воде 5

4-5 с

Двухступенчатое добавление спермы к воде 8

+5 с

Двухступенчатое добавление спермы к воде 5

+7 с

Двухступенчатое добавление спермы к воде 5+9 с

6,7

30,1

642

1,0

12,9

1620

5,2

1024

7,7

31.2

7,9

ЗЗ,В

Данные flo отходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двухступенчатого способа разбавления спермы

1746959

Таблица4

Варианты on- Заложено иклодотворения ры, шт икры

ММ вариантов

Отходы икры после оплодотворения, о

Отходы икры за инкубацию, $

Отходы на стадии личинки, 17

Контроль

Двухступенчатое добавление спермы к воде 5+5 с

Двухзтапное добавление воды при оплодотворении

Добавление воды к сперме в течение периода 5 с перед оплодотворением

Добавление воды к сперме в течение периода 7 с перед оплоотво ением

11532

3,7

1.9

33,4

2490

2,5

1,7

13.7

3,0

2231

18,3

1437

16.2

67.7

10,1

354

93,0

25,2

Таблица5

Данные по весу и размеру мальков кеты при использовании различных способов оплодотворения

М1+ ва иантов

Варианты оплоотво ения ик ы

6- ти месячные мальки

5- ти месячные мальки

Представленные па амет ы

366,4

3,5

453,4

3.75

Контроль

Вес, мг длина, см

Двухступенчатое добавление спермы к воде5:+5 с

Контроль

Вес. мг длина, см

Вес, мг длина. см

398,8

3.,6

324,1

3.3

475,9

3,77

403.2

3,6

Двухступенчатое добавление спермы к воде 5 + 5 с

646,1

4,0

383,0

3,5

Вес, мг длина, см

Данные по отходам икры и личинок кеты при использовании различных способов оплодотворения (Соколовский р/з, 1986-1987 гг. ) 1746959

Таблицаб

Данные по отходам икры и мальков горбуши при добавлении к сперме горбуши воды с различными значениями рН о икСоставитель С.Филиппова

Редактор И.Касарда Техред М.Моргентал Корректор M.Äeì÷èK

Заказ 2447 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101