Способ консервирования микроорганизмов

 

Сущность изобретения: культуру микроорганизмов суспендируют в защитной среде , содержащей, мас.%: сахароза 25-30; глутамат натрия 2,5-3; тиомочевина 0,8-1,2; пептон 0,8-1,3; дистиллированная вода. Взвесь смешивают в массовом соотношении 6,5-7,5:1 с охлажденной до -18-(-22)°С смолой КБ-4П-2, досушивают в течение 65- 72 ч. В процессе хранения повышается жизнеспособность культур.1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (ч)s С 12 N 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4846234/13 (22) 06.04.90 (46) 30.04,92, Бюл, М 16 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (72) В,B.Ìèùåíêî, А.А.Ильин и B.С,Тарумов (53) 576.8.093.3(088.8) (56) Методы общей бактериологии/Под ред.

Ф. Герхардта и др. Т.1, M,: Мир, 1983, с.512—

534.

Парини О.В, и др. Исследование выживаемости и физиологической активности некоторых штаммов дрожжей после длительного хранения в силикагеле. — Мик- робиология, Т.41, 1972. с,164-167.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам хранения микроорганизмов в обезвоженном состоянии. и может быть использовано в микробиологической промышленности.

Поставленная цель достигается тем, что консервирование микроорганизмов осуществляют путем суспендирования культуры в защитной среде с последующим контактносорбционным обезвоживанием и досушиванием при комнатной температуре, причем в качестве защитной среды используют смесь, содержащую. Mac.%: сахароза 25-30; глутамат натрия 2,5-3; тиомочевина 0,8 — 1,P: пептон 0,8-1,3 и дистиллированную воду. контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта проводят охлажденной до

-18 — (-22) С смолой КБ-4П-2 при массовом соотношении 6,5 — 7,5:1 соответственно, а досушивание осуществляют в течение 6572 ч.

Пример 1. Защитную среду следующего состава, мас.%. сахароза 25: глутамат!

Ж,, 1730138 А 1 (54) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ (57) Сущность изобретения; культуру микроорганизмов суспендируют в защитной среде, содержащей. мас,%: сахароза 25-30; глутамат натрия 2,5 — 3; тиомочевина 0,8 — 1,2; пептон 0.8 — 1,3; дистиллированная вода, Взвесь смешивают в массовом соотношении 6,5 — 7,5:1 с охлажденной до -18 — (-22) С смолой КБ-4П-2, досушивают в течение 6572 ч. В процессе хранения повышается жизнеспособность культур. 1 табл. натрия 2,5; тиомочевина 0,8; пептон 0,8, готовят путем последовательного растворения компонентов в дистиллированной воде (рН 7.2) и стерилизуют автоклавированием при 120 С в течение 20 мин, Расфасованный во флаконы обезвоженный при 105 2 С катионит КБ-4П-2 (Na -форма) охлаждают до

-18" С.

Используемые культуры микроорганизмов. выросшие на соответствующей плотной питательной среде преимущественно до стационарной фазы роста, смывают 5,0сантиметровой средой. Стабилизированную культуру вносят по 0,2 см" во флаконы, содержащие сорбент в соотношении 1:6,5.

Флаконы после внесения культуры выдерживают при температуре внешней среды (20 - 2) С в течение 65 ч, Подготовку контактно-обезвоженных культур проводят в стерильных условиях, Через два года хранения контактно-обезвоженные препараты регидратируют 15,0 см охлажденного до 4 С бульоном на основе серно-кислотного гид1730138 ролизата рыбокостной муки. Высевом десятикратных разведений регидратированной культуры определяют процент жизнеспособных клеток.

В таблице показано влияние различных 5 соотношений катионита КБ-4П-2 (Na -форма) и суспензий клеток на их выживаемость при хранении в течение двух лет, Из данных, представленных в таблице, видно, что изменение соотношения суспен- 10 зии клеток и сорбента влаги приводит к ухудшению качества сушки и снижению выживаемости микроорганизмов, Пример 2. Процесс контактно-сорбционного обезвоживания культуры вакцин- 15 ного штамма туляремийного микроба осуществляют аналогично примеру 1, но в опытах используют защитную среду следующего состава. мас.о : сахароза 30: глутамат натрия 3,0, тиомочевина 1,2: пептон 1,3: 20 вода остальное, и варьируют температурой сорбента от плюс 22 + 3 С до минус

30 ч-2 С, Суспению клеток вносят на охлажденную до -22 С смолу КБ-4П-2 при массовом 25 соотношении 1;7,5, и для досушивания выдерживают при комнатной температуре

72 ч.

Результаты опытов свидетельствуют о том, что использование предлагаемого со- 30 става защитной среды и температуры охлаждения сорбента до минус 20 +.2 С существенно повышает выживаемость клеток в процессе контактно-сорбционного обезвоживания. 35

Пример 3, Культуру S.cuteritidis наг.issatehenko выращивают на плотной питательной среде в чашках Петри до стационарной фазы. Смывают 5,0 см защитной среды, содержащей. мас. /: сахароза 30,0; 40 глутамат натрия 3,0; тиомочевина 1,2; пептон 1,3, вода остальное. Высушенный до постоянного веса катионит КБ-4П-2 (Naформа) расфасовывают по 1,4 г в пенициллиновые флаконы. Флаконы с сорбентом 45 стерилизуют и досушивают в течение четырех часов в сухожаровом шкафу при (110 ч 2) С. Силикагель, расфасованный по 4,0 г в пенициллиновые флаконы. обезвоживают при 180"С в течение 2 ч, Пе- 50 ред использованием флаконы с сорбентом влаги охлаждают до температуры минус (20 ч-2) С в камере бытового холодильника. Стерильной пипеткой стабилизированную защитной средой культуру клеток 55 по 0,2 см вносят на поверхность сорбента.

Флаконы закрывают резиновыми пробками и фиксируют путем закатки алюминиевыми колпачками.

Для досушивания клеток до оптимальной остаточной влажности образцы препаратов выдерживают при комнатной температуре в течение 3 сут, Препараты хранят при температуре 4 или -20 С. Через 24 мес хранения проводят контроль жизнеспособности культур. Для этого препарат регидратируют 15,0 см мясопептонного бульона и встряхивают в течение 1 — 2 мин, поле чего делают посев десорбцированных клеток на плотную питательную среду в чашках Петри, После инкубирования подсчитывают число колоний. Через 24 мес хранения выживаемость культур, хранящихся на катионите КБ-4П-2 (Na -форма) составля+ ет 16,8О живых микробных клеток для температуры -20ОC. и 9,3ь — для температуры 4 — 6 С. Выживаемость культур, хранящихся на силикагеле (известный способ, при температуре -20 С менее 1, а при температуре 4-6 С жизнеспособность культур потеря на.

Преимущество предлагаемого способа заключается в том. что она обеспечивает высокий уровень жизнеспособности культур в процессе хранения и позволяет хранить штаммы с различными плазмидами, так как в процессе хранения стабильно сохраняются селективные маркеры устойчивости к антибиотикам. Кроме того, предлагаемый способ по сравнению с известными характеризуется простотой и доступностью осуществления, расширением спектра микробных культур, подлежащих хранению.

Формула изобретения

Способ консервирования микроорганизмов путем суспендирования культуры в защитной среде с последующим контактносорбционным обезвоживанием и досушиванием при комнатной температуре, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения сохраняемости микроорганизмов, в качестве защитной среды используют смесь, содержащую. мас. : сахароза 25 — 30; глутамат натрия 2,5 — 3; тиомочевина 0,8 — 1,2; пептон

0,8 — 1.3 и дистиллированная вода, контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта проводят охлажденной до -18— (-22) С смолой КБ-4П-2 при массовом соотношении 6,5 — 7,5:1 соответственно, а досушивание осуществляют в течение 65—

72 ч, 1730138

15

25

Составитель А.Ильин

Техред М.Моргентал

Корректор Н.Ревская

Редактор М.Петрова

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 1488 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5