Способ определения объема эритроцитов в биологической ткани

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Использование: для определения объема эритроцитов и исследования функции внутриорганных сосудов при действии различных экстремальных факторов. Сущность изобретения: после окрашивания гемолизата производят повторное центрифугирование , в качестве красителя используют смесь, состоящую из амидопирина, анилина сернокислого и этилового спирта, объем эритроцитов в тканях определяют по формуле (Етк-Ек)/(ЕЭр-Ек), где V - объем эритроцитов в ткани, мкл/г; Етк - экстинкция пробы ткани; ЕЭр экстинкция пробы эритроцитов крови; Ек - экстинкция пробы контроля на реактивы; К - постоянный коэффициент . . ,

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (s1)s G 01 и 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР Р0 iraq,,, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4800324/14 (22) 05.01.90 (46) 15.04.92 Бюл. N 14 (71) Казанский государственный институт усовершенствования врачей им. В.И,Ленина (72) В.Г.Малышев (53). 616.07 (088.8) (56) Поспелов В.С., Леонтьев В.К„Смирнова B.Б„Поспелова В. И. Объем крови в миокарде. Метод определения; нормативы влияния экстремальных факторов. В кн.:

Экстремальные и терминальные состояния в клинике и эксперименте, Омск, 1983, с. 63-65. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЪЕМА

ЭРИТРОЦИТОВ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ

Изобретение относится к медицине, а . именно к нормальной и патологической физиологии сердечно-сосудистой системы, и предназначено для характеристики внутриорганного кровенапслнения при воздействии различных возмущающ х факторов.

Известен способ оценки объема эритроцитов в навеске биологической ткани, основанный на способности гемоглобина гемолизата с помощью метгемоглобинобразователя (феррицианида) и цианистой сали образовывать цианметгемоглобин, концентрацию которого измеряют фотометрически. После определения количества гемоглобина в заданном объеме эритроцитов крови вычисляют объем эритроцитов в исследуемой ткани.

Однако, при использовании известного способа из-за мутности фотометрируемого раствора (наличие белка в пробе) величина (57) Использование: для определения объема эритроцитов и исследования функции внутриорганных сосудов при действии различных экстремальных факторов. Сущнесть изобретения: после окрашивания гемолизата производят повторное центрифугирование, в качестве красителя используют смесь, состоящую из амидопирина, анилина сернокислого и этилового спирта, объем эритроцитов в тканях определяют по форму.ле Ч=К(Ет»-E»)/(Esp-Å»), (äå V вЂ” объем эритроцитов в ткани, мкл/г; Ет» - экстинкция пробы ткани; Е p вЂ” экстинкция пробы эритроцитов крови; Е»- экстинкция пробы контроля на реактивы; К вЂ” постоянный коэффициент, экстинкции существенно.. завышается, что ведет к снижению показателя объема эритроцитов в ткани.

Цель изобретения вЂ” повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

После забоя животного тушку промораживают при -150С в течение 3-х ч. Выделенный кусочек органа взвешивают и .гомогенизируют в дистиллированной воде в соотношении I:10. Гемолизат ткани центрифугируют при 6000 об/мин в течение

15 мин.

Параллельно извлекают кровь, которую стабилизируют 5$-ным раствором цитрата натрия и центрифугируют при

1000 об/мин в течение 15 мин. К 0,1 мл эритроцитарной массы добавляют 4,0 мл дистиллированной воды. Гемолизат эритроци1727067 тов центрифугируют при 6000 об/мин в течение 15 мин.

В три пробирки вносят по 1,0 мл дистиллированной воды, 1,0 мл красителя (70,080,0 мл 20%-ного водного раствора амидопирина, 70,0-80,0 мл 5%-ного водного раствора анилина сернокислого и 96%ного этилового спирта до 500,0 мл) и 0,8 мл

3%-ной перекиси водорода. В первую пробирку добавляют 0,2 мл супернатанта ткани, во вторую вЂ” 0,2 мл супернатанта эритроцитов крови, а в третью вЂ” 0,2 мл дистиллированной воды (контроль на реактивы).

Содержимое первых 2-х пробирок перемешивают и центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин.

Через 15 мин после прибавления красителя пробы спектрофотометрируют при дли, не волны 540 нм. Длина оптического пути кювет 10 мм;

Объем эритроцитов в биологической ткани рассчитывают по формуле (Qp вЂ” Е») х 2 где V вЂ” объем эритроцитов в ткани, мклlг;

Ет» вЂ” экстинкция пробы ткани;

Еэр вЂ” экстинкция пробы эритроцитов крови;

Е» вЂ” экстинкция пробы контроля на реактивы;

5 вЂ” объем эритроцитов крови в пробе, мкл;

2 вЂ” масса ткани в пробе, мг;

1000 вЂ” коэффициент пересчета из мг в г.

Пример 1. У белой беспородной крысы вЂ” самца массой 130 г после забоя передозировкой эфирного наркоза и промораживания тушки в морозильной камере холодильника при -15 С в течение 3-х ч взяты для анализа навески следующих органов: печени (массой 95 мг), почки (массой 60 мг), селезенки (массой 65 мг) больших полушарий мозга (массой.70 мг).

Обработка биогогической ткани и крови проведена по предлагаемому способу. Состав красителя, мл: 20%-ный водный раствор амидопирина 70,0; 5%-ный водный раствор анилина сернокислого 70,0; 96%ный этиловый спирт да 500,0.

Результаты измерения экстинкции проб;

Печень 0,452; Ет» вЂ” Е»=0,422;

Почка 0,207: Ет»-Е»=0,177;

Селезенка 0,219; Ет»-Е»=0,189;

Большие полушария мозга 0,073; Ет»-Е»=0,043;

Эритроциты крови 2,480; Еэр вЂ” E»=2,450;

Контроль G,G30, Исходя из формулы V=

E„â€” Е» хбх1000, 06beM эритроцитов

Еэр вЂ” Е») х 2 составляет, мкл/г: в печени 430,6; в почке

180,6; в селезенке 192,9, в больших полушариях мозга 43,9.

Пример 2, У белой беспородной крысывЂ” самца массой 200 г после забоя передозировкой эфирного наркоза и проморажива10 ния тушки в морозильной камере холодильника при -15 С в течение 3-х ч взяты для анализа навески следующих органов: печени (массой 80 мг), почки (массой

65 мг), селезенки (массой 90 мг), больших полушарий мозга (массой 60 мг).

Обработка биологической ткани и крови проводилась по предлагаемому способу.

Состав красителя, мл: 20%-ный водный раствор амидопирина 75,0; 5%-ный водный раствор анилина сернокислого 75,0; 96%ный этиловый спирт до 500,0 мл.

Результаты измерения экстинкции проб:

Печень 0,426; Ет» вЂ” Е»=0,402;

Почка 0,213: Ет»-Е»=0,189;

Селезенка 0,207: Ет» вЂ” E»=0,183, Большие полушария мозга 0,064; Ет»вЂ” вЂ” Е»=0,040;

Эритроциты крови 2,252; Ерр Е»=2,228;

Контроль 0,024, Исходя из формулы V=, объем эритроцитов

Ьр вЂ” Е») х 2 составляет, мкл/г: в печени 451,1, в почке

212, t, в селезенке 205,3; в больших полушариях мозга 44,9, Пример 3. У белой беспородной крысы-самца массой 150 г после забоя передозировкой эфирного наркоза и промораживания тушки в морозильной камере холодильника при -15 С в течение 3-х ч взяты для анализа навески следующих органов: печени (массой 60 мг), почки (массой 60 мг), селезенки (массой 85 мг), больших полушарий мозга (массой 70 мг).

Обработка биологической ткани и крови проводилась по предлагаемому способу.

Состав красителя, мл: 20%-ный водный раствор амидопирина 80,0; 5%-ный водный

50 раствор анилина сернокислого 80,0; 96%ный этиловый спирт до 500,0 мл, Результаты измерения экстинкции проб:

Печень 0,439; Ет»-Е»=0,412;

Почка 0,227; Ет»-Е»=0,200;

Селезенка 0,216; ET» Å»=0,189;

Большие полушария мозга 0,078; Ет»-Е»=0,051;

Эритроциты крови 2,520; Ет» Е» 2,493;

Контроль 0,027.

1727067 (Е.р-Е,1 где Ч вЂ” объем эритроцитов в ткани, мкл/г;

Е вЂ” экстинкция проб ткани;

Еэр вЂ” экстинкция пробы эритроцитов крови;

Ек вЂ” экстинкция пробы контроля на реактивы, К вЂ” постоянный коэффициент.

Составитель В. Малышев

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Э. Лончакова

Редактор Н, Шитев

Заказ 1276 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета Ао изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул;Гагарина, 101

Исходя из формулы Ч

Е вЂ” Ек х 5 х 1000, объем эритроцитов

Еэр вЂ” Ек) х 2 составляет, мкл/r: в печени 413,2; в почке

200,6; в селезенке 189,5; в больших полушариях мозга 51,1. . При использовании предлагаемого красителя в предлагаемом способе после повторного центрифугирования проб и удаления осадка фотометрируемый раствор 10 оказывается прозрачным. В результате становится возможным точное измерение концентрации гемоглобина в пробе, что делает более объективным и информативным способ onðåäåïåíèÿ объема эритроцитов в на- 15 веске биологической ткани. Способ прост в исполнении, не требует высокотоксичных и дефицитных реактивов, а также дорогостоящего оборудования. Он может с успехом использоваться при изучении состояния ре- 20 гионарного кровенаполнения сосудов в условиях нормы и патологии, при действии различных вазоактивных препаратов.

Формула изобретения 25

Способ определения объема эритроцитов в биологической ткани путем гемолиза эритроцитов, центрифугирования, окраши-. вания гемолизата с последующим измерением экстинкции пробы ткани против контроля, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, производят повторное центрифугирование после окрашивания гемолизата, в качестве красителя используют смесь, состоящую из

20 -ного амидопирина, 5$-ного анилина сернокислого, 96 -ного этилового спирта, при следующих соотношениях компонентов, мас,g:

Раствор амидопирина 14-16

Раствор анилина сернокислого 14 вЂ” 16

Этиловый спирт Остальное, а объем эритроцитов определяют по формуле

Способ определения объема эритроцитов в биологической ткани

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для контроля за содержанием белка при лабораторном и промышленном культивировании дрожжевых клеток

Способ оценки токсичности биологических жидкостей // 1725120

Изобретение относится к медицине, биологии и может быть использовано для определения токсичности биологических жидкостей организма человека

Способ определения индивидуальной чувствительности к низкоинтенсивному лазерному излучению // 1725119

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования , и может быть использовано для оценки эффективности фототерапии

Способ диагностики степени тяжести токсикоза беременных // 1725118

Изобретение относится к акушерству

Способ прогнозирования токсических и аллергических осложнений при химиотерапии туберкулеза // 1725117

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования возможности возникновения аллергических и токсических реакций при химиотерапии туберкулеза

Способ определения эффективности микроволновой резонансной терапии при гастродуоденальной патологии // 1725116

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения показаний к воздействию МРТ в процессе лечения

Способ диагностики степени тяжести бронхиальной астмы у детей // 1725115

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано в диагностике степени тяжести бронхиальной астмы у детей, а также определении уровня гипоксии при бронхообструкции другой этиологии

Способ определения агрегационной способности тромбоцитов // 1720386

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики заболеваний, связанных с нарушением состояния свертывающей системы крови

Способ прогнозирования эффективности инфузии эритромассы // 1720001

Изобретение относится к медицине, в частности к трансфузиологии, и может быть использовано при инфузии компонентов крови больным

Способ диагностики невроза // 1720000

Изобретение относится к области медицины , а именно к психиатрии и неврологии

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750