Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических объектов
Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии . Целью изобретения является улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов. Для этого в состав среды вводят тризтаноламин при следующем соотношении компонентов, мае. % : хлоралгидрат50-65; поливинилпирролидон 15-25; триэтаноламин 5-7; вода - остальное. 5 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (! 9) (11) (s1)s G 01 N 1/28
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4670660/13 (22) 09.02.89 (46) 07.04.92. Бюл..N 13 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт гельминтологии им. акад.
К.И.Скрябина (72) А.В.Хрусталев (53) 576.3(088.8) (56) Ромейс Б. Микроскопическая техника.—
М,: 1953, с.101 — 205.
Раскин Г.И„Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника. — М„1957, с.124 — 169.
Буланова-Захваткина Е.M. Панцирные клещи-орибатиды. — M„1967, с.88-90.
Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для цветовой микроскопии.
Цель изобретения — улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов, Для этого в состав среды, содержащей просветляющее и мацерирующее вещество — хлоралгидрат, вводят в качестве пластифи-, катора — триэтаноламин и в качестве формообразующей основы поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Хлоралгидрат 50-65
Поливинилпирролидон 15 — 25
Триэтаноламин 5 — 7
Вода Остальное
Среда с триэтаноламином предназначена для заключения неокрашенных объектов и окрашенных гематолсилином. (54) СРЕДА ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПОСТОЯННЫХ МИКРОПРЕПАРАТОВ ИЗ EiNOflOГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ (57) Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии. Целью изобретения является улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов. Для этого в состав среды вводят триэтаноламин при следующем соотношении компонентов, мас. %:õëîðàëãèäðàò50-65;поливинилпирролидон 15-25; триэтаноламин 5-7; вода— остальное. 5 табл, В табл.1 представлены примеры составов среды с триэтаноламином (составы 1,2— граничные, 3 — оптимальные значения компонентов).
Пример 1, Неокрашенные препараты членистоногих.
Куриных клещей (Dermanyssus
gallinarum), хранящихся в 700-ном спирте, непосредственно из фиксатора переносили в капле заключающей среды на предметном стекле. Монтировали препараты по 5 экземпляров клещей на каждом стекле.
Результаты испытания заключающей среды с триэтаноламином на препаратах куриных клещей представлены в табл.2.
Пример 2. Препараты нематод, окрашенных гематоксилином.
Паразитических нематод Metastrongylus
apri, собранных из легких свиней, фиксировали в жидкости Карнуа и окрашивали гематоксилином по Караччи, После промывки червей в течение 1 ч в воде их на 1 ч помещали в
700-ный спирт и затем заключали в среды.
1725094
Таблица 1
Таблича 2
Время затвердевания препаратов
Визуальная оченка препаратов качества
Время просветления
Среда препаратов
4 (1) 9-7 дней
2-3 ч
Хитиновые структуры просматриваются очень отчетливо. Мягкие ткани соверщенно не видны. Форне тело и мелкие структуры хитинового скелета без из,менений
4 (2) 1-1,9 сут
1 сут
Хитиновые структуры хорощо просматриваются. Видны контуры внутренних органов и слабо проступающие мягкие ткани, несколько снижена отчетливость мелких структур хитиноеого скелета. Многие экземпляры клещей немното сморщены.
4 (3) 2-3 дня
10-12 ч
Хитиновые структуры просматриваются отчетливо. Нягкие ткани не видны.
Форма тела без изменений.
То we
7-9 дней
То we
1 сут
То же
Хитиновые структуры просматриваются отчетливо. Мягкие ткани едва различимы. Форма тела без изменений.
Видкость
ФораБерлезе
50
Результаты применения заключающихся сред для окрашенных гематоксилином нематод представлены в табл.3.
Il р и м е р 3. Препараты растительных тканей, окрашенных гематоксилином.
Кусочки листа бегонии обрабатывали и заключали в препараты так же, как и в примере 2.
Результаты применения заключающих сред к окрашенным препаратам листа бегонии представлены в табл.4.
Пример 4. Препараты хромосом нематод.
У живых нематод Mefastrongulus apri в физиологическом растворе препарировали гонады и подвергали их действию гипотонического раствора нитрата натрия в течение
10 мин при 37 С. Гонады фиксировали в метанол-уксусной (3:1) смеси и окрашивали ацетогематоксилином в течение 4 ч. Окрашенные половые трубки промывали 10 — 20 мин в 50%-ной уксусной кислоте, маленькие их кусочки, длиной около 1 мм помещали в каплю заключающей среды на предметном стекле, накрывали покровным стеклом и раздавливали.
Результаты применения заключающих
5 сред к препаратам хромосом, окрашенным ацетогематоксилином представлены в табл.5.
Формула изобретения
Среда для изготовления постоянных
10 микропрепаратов из биологических объектов,вклющающая хлоралгидрат, воду, формообразующую основу и пластификатор, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью улучшения просветляющей способности и увеличения
15 прочности препаратов, в качестве формообразующей основы используют поливинилпирролидон, а в качестве пластификатора используют триэтаноламин при следующем соотношении компонентов, мас, Д:
20 Хлоралгидрат 50-60
l1оливинилпирролидон 15 — 25
Триэтаноламин 5 — 7
Вода Остальное
1725094 иyа
Табл
Время затеердевания препаратов
Среда Визуальная оценка качества препаратов
Время просветления препаратов
4(1) 5-7 дней 2-3 ч
Отчетливая, ясная синяя окраска ядер, железистых включений и др. базофильных структур на чистон, прозрачном фоне. Кожно-мускульный мешок и внутренние органы не деформированы.
4(2) Окрашенные структуры видны недостаточно отчетливо из-за мутного фона.
Тело нематод сиорщено.
1 сут
1 сут
Окрашенные структуры видны отчетливо на чистом, прозрачнон фоне. Кожно-мускульный мешок и внутренние органы не деформированы.
4-3 ч
4 (3) 2-3 дня
Жидкость фораБерлезе
Окраска полностью разрушена.
То же
Среда
4(1) 5-7 дней
1 сут
2-3 дня
0,5-1 ч
5-6 ч
1-2 ч
30
4(2)
4(3)
Жидкость
ФораБерлезе
Визуальная оценка качества препаратов
Отчетливо видны интенсивно окрашенные в синий цвет ядра паренхимы и проводящих сосудов на чистом прозрачном фоне. Форма клеток и ядер не нарушена
То же
То же
Окраска разрушается
Окраска разрушается
Время затвердевания препаратов
Таблица 4
Время просветления препаратов
1725094
Таблица 5
Время про- I Время зат-! светления вердевания препаратов препаратов
Визуальная оценка качества препаратов
Среда
4 (1) Хороший разброс хромосом, структуры хромосом четкие. Фон прозрачный
Во всех
4 (2) Плохой разброс хромосом, все хромосомы слипшиеся. Структуоа хромосом плохо различима. Фон прозрачный
4 (3) Недостаточный разброс хромосом.
Многие хромосомы налегают друг на друга ° Структура хромосом четкая.
Фон прозрачный.
Окраска хромосом сильно обесцвечена
Жидкость
ФораБерлезе То же
45
Составитель И.Тареева
Редактор В.Бугренкова Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Т.Малец
Заказ 1170 Тираж Подписное
ВНИИПИ Госудаоственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 случаях просветления препаратов составляло не более 5 мин
Время затвердевания препаратов аналогично времени относительно среды для всех примеров
1-3
