Способ определения модифицированных липопротеидов крови

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, терапии для определения модифицированных липопротеидов крови у больных ишемической болезнью сердца. Цель изобретения - определение упрощения способа. Цель достигается путем электрофоретического определения модифицированных липопротеидов крови после центрифугирования и ультрацентрифугирования 8% ПЭГ-6000 преципитатов.

(19) (! 1) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/92

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

=Ж

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4753770/14; 4753769/14 (22) 25.10.89 (46) 15.03.92. Бюл, Ь 10 (71) Научно-исследовательский институт кардиологии Томского научного центра

AMH СССР (72) Н.В.Канская и P,С.Карпов (53) 612,015(088.8) (56) Лабораторные методы исследования/Под ред. В.В.Меньшикова, M.: Медицина, 1987, с. 248-249, Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии и терапии.

Цель изобретения — упрощение способа за счет сокращения стадий.

Цель достигается путем злектрофоретического разделения липидов из фракций крови после центрифугирования 8% ПЭГ6000 преципитатов при 2800 g и ультрацентрифугирования 8% ПЭГ-6000 преципитатов при 25000 g.

Способ осуществляют следующим образом.

К 1 мл сыворотки крови добавляют 40 мл

8% ПЭГ-6000, инкубируют 1 ч при комнатной температуре и центрифугируют 40 мин при 2800 9. Часть полученного супернатанта повторно центрифугируют 40 мин при 25000

g .Осадок дважды промывают по 0,25 мл раствора преципитата после первого и второго центрифугирования используют для злектрофоретического исследования. — Приготовление судана Б; 400 мг судана Б растворяют в 20 мл этиленгликоля на (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОДИФИЦИРОВАННЫХХ ЛИПОПРОТЕИДОВ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, терапии для определения модифицированных липопротеидов крови у больных ишемической болезнью сердца. Цель иэобретения— определение упрощения способа. Цель достигается путем электрофоретического определения модифицированных липопротеидов крови после центрифугирования и ультрацентрифугирования 8% ПЭГ-6000 преципитатов. кипящей бане в течение 50 мин, фильтруют и хранят в стеклянной посуде; — приготовление геля агароэы: 320 мг агарозы А фирмы "Сигма" растворяют в 20 мл воды при кипячении, затем помещают в о термостат при+55 С; добавляют 20 мл раствора альбумина (1 r альбумина в 200 мл веронал-мединалового буфера, рН 8,6).З мл геля агарозы наносят на обезжиренное горизонтально установленное стекло, помещают металлический стержень 20х2 мл, который при эастывании геля убирают магнитом; — к 0,25 мл раствора преципитата 8%

ПЭГ-6000 добавляют к раствору красителя . судана Б, помещают на 1 ч в темное место, затем добавляют 0,2 мл горячего раствора геля агарозы, смешивают, прогревают при

550 С и подогретым наносят в желобок геля; — предметное стекло помещают в камеру для злектрофореза слоем агарозы вниз, электрофореэ проводят в течение 1 ч при напряжении 100 В, силе тока 40 — 45 мА; — алектрофореграмму фиксируют в 5%ном растворе уксусной кислоты в течение 1 ч, затем высушивают между листами фильт1720015 ровальной бумаги, непрерывно смачивая

96 -ным этиловым спиртом, Пример 1. Больной Г„м., 54 года, поступил в НИИК ТНЦ AMH СССР 20.12.84 г. с жалобами на сжимающие боли за грудиной при ходьбе, Болевые приступы бывают до 10 раз в день, снимаются нитроглицерином.

На ЭКГ: рубцовые изменения в области верхушки и передней стенки левого желудочка.

Результаты лабораторного обследования, ммоль/л: общий холестерин крови 4,3; триацилглицериды 0,7; XM ЛПВП 1,54.

При электрофорезе 8 ПЭ -600 преципитатов крови выявленыР-ЛП (ЛПНП), Дополнительно проведено электрофоретическое определение липопротеидов в 8% ПЭГ-6000 прицепитатах после двойного ультрацентрифугирования (при 18000 об/мин и 30000 об/мин), Выявлены а -ЛП (модифицированные формы ЛПВП).

Диагноз: ИБС, стенокардия напряжения, ФК ill, в крови присутствуют модифицированные ЛПВП.

Пример 2. Больной Н., м., 55 лет, поступил в HNNKTHO, AMH СССР 13.02.85 г. с жалобами на сжимающие боли за грудиной, иррадиирующие в левую руку. Боли усиливаются при ходьбе.

На ЭКГ, ритм синусовый, 70 ударов в 1 мин, косовосходящая депрессия ST: в Чз-в(-)

Т в AVL, ЧЗ, V41 /5 °

Результаты лабораторного обследования, ммоль/л: общий холестерин крови 4,5; триацилглицериды 1,16; ХС ЛПВП 1,03.

При электрофорезе 8 ПЭГ-6000 преципитатов крови выявлены Р-ЛП (ЛПНП). Дополнительно проведено электрофоретическое определение липопротеидов в 8 ПЭГ-6000 преципитатах после двойного ультрацентрифугирования (при 18000 об/мин и 30000 об/мин). Выявлены а-ЛП (модифицированные ЛПВП), Способ применен у 62 больных ИБС и у

19 пациентов позволил выявить модифицирование ЛПВП.

Пример 3. Больной M., м„64 г„ поступил в НИИК ТНЦ AMH СССР 17.01.85 г. с жалобами на одышку в покое, сердцебиение, колющие боли в области сердца. Боли не купировались приемом анальгетиков. На

ЭКГ-мерцание предсердий, ЧСС 103 удара в 1 мин, тахисистолическая форма, признаки гипертрофии левого желудочка, желудочковая зкстрасистолия.

Результаты лабораторного обследования: активность А в АГ - 0.3 ммоль/мг;

АлАТ вЂ” 0,74 ммоль/л,ч„ ХСобщ 7,8

10 Диагноз: ИБС, стенокардия, напряжения ФК! Н!!; в крови больного присутствуют модифицированные ЛПНП и ЛПОНП.

45 aoðoòêó крови перед инкубацией обрабатывают 8%-ным раствором ПЭГ6000, смесь центрифугируют 40 мин при

28009, отбирают супернатант, часть его повторно центрифугируют 40 мин при 25000 g, 50

40 ммоль/л; ТАà — 0,93 ммоль/л; ХС Л П ВП - 0,9 ммоль/л. При электрофорезе липопротеидов в геле агарозы выявлены/>-ЛП и пре/> -ЛП после диссоциации 8 % ПЭГ-.6000 преципитатов крови.

Дополнительно проведено определение модифицированных форм ЛПНП и ЛПОНП без диссоциации 8 ПЭГ-6000 преципитатов крови; выявлены j3--ЛП и пре-/> -ЛП

Пример 4. Больной Т., м„56 лет, поступил в НИИК ТНЦ АМН СССР 21.02.85 г. с жалобами на колющие боли в области сердца, возникающие после физического напряжения, одышку.

На ЭКГ: вертикальное положение оси сердца, ритм синусовый, 80 ударов в 1 мин, ишемия передней стенки левого желудочка.

Результаты лабораторного обследова ния, ХС бщ - 6,8 ммоль/л:ХС ЛПВП - 1,4 ммоль/л; Т Аà — 0,75 ммоль/л. При электрофорезе пипопротеидов в геле агарозы выявлены/3- ЛП после диссоциации 8 % ПЭГ-6000 преципитатов крови.

Дополнительно проведено определение модифицированных форм ЛПНП и

ЛПОНП без диссоциации 8% ПЭГ-6000 преципитатов крови. Выявлены p- Jill.

Диагноз: ИБС, стенокардия напряжения ФК l; в крови больного присутствуют модифицированные ЛПНП и ЛПОНП.

Способ применен у 57 больных ИБС и у

29 из них позволил выявить модифицированные ЛПНП и ЛПОНП, Формула изобретения

Способ определения модифицированных липопротеидов крови путем инкубации сыворотки крови с красителем с последующим электрофоретическим разделением и выявлением фракций липидов, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа стадий, сыполученный супернатант и супернатант после первого центрифугирования раздельно инкубируют с красителем, разделение проводят в геле агарозы на пластинах, при этом в пробах супернатанта после первого центрифугирования определяют модифицированные липопротеиды вь|сокой плотности, а после второго центрифугирования — модифицированные липопротеиды низкой и очень низкой плотности.