Способ получения лейцинаминопептидазы из мозга
Изобретение относится к медицине и предназначено для выделения и очистки из ткани мозга применяемою в медицине и биологии ферменте лейцинаминопептидазы. Цепью изобретения является увеличение еычода целевого продукта и упрощение способа, Дня этого гомогенизацию ткани мозга проводят в сфере формальдегида перед стадией гель-фильтрации а гель-фильтрации подвергают неочищенный супернаг&нт гомогената При этом время выделения сокращается до 30 мин, а удельная ачтиьост ь -л а доход т до 42 рд/мг белкз.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Г,{21) 4772905/13 (22) 25.12.89
{46) 30.12,91. Бюл. ¹ 48 (7:) 1-й Московский медицинский vHcTmyT им. И. M. Сеченова (72) !О. H. Савченко, Н. А. Хрусталева и
И.Г.Диденко (53) 577.152.34{088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
N -1293658, кл. С 12 N 9/48, 1987. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЙЦИНАМИНОПЕПТИДАЗЬ! ИЗ МОЗГА
Изобретение относится к медицине и предназначено для выделения и очистки из ткани мозга поименяемого в медицине и биологии фермента лейцинаминопептидазы (ЛАП).
Цель изобретения состоит в увеличении выхода целевого ироду;::та и упрощении способа.
Цель достигается тем, что обработку ткани формальдегидом проводят в процессе гомогенизации до стадии гель-фильтрации на сефадексе, а гель-фильтрации подвергают не чищенный супернатант гомогената.
Сйособ осуществл яют следующим образом.
1,5 r ткани мозга гомогенизируют в 10 мл 6 — 9%-ного раствора формальдегида на
0,01 M трис-буфере, цечтрифугируют в течение 15 мин при 6000 об/мин. Супернатант наноСят на кол- нку для центрифугирования, . заполненную сефадексом 6-75, центрифугируют 1 мин со скорость.:о 3000 об/мин и в
5U,, 1701746 А1 (я)з С 12 N 9/48, А 61 К 37/48
{57) Изобретение относится к медицине и предназначено для выделения и очистки из ткани мозга применяемого в медицине и биологии фермента лейцинаминопептидазы. Целью изобретения явл.=ется увеличение выхода целевого продукта и упрощение способа, Для этого гомогенизацию ткани мозга - .рпводят в сфере формальдегида перед стадией гель-фильтрации. а гель-фильтрации подвергают неочищенный супернатант гомогената, При этом время выделения сокращается до 30 мин, а удельная активность ферме. -; а доход1::т до 42 ед/мг белка. злюате определяют сг:;-, иФичгскую актив. ность ЛАП.
Специфике-кую активность б;=рмента о реgeляют о помощ..ю стандартного ЛАПтес-.-а, Удельная активность ЛАП, очищенной данным способом, составляет от 20 до гъ / s. едг мг оелкаа. .Пример. 1,5 г ткани мозга гомогенизирм-от а 10 мл 9%-- a; n . астяора формальдегид на 0,01 t.rt -;р, с-буфера. Гомогенат центр ;футиру от 15 мин при 6000 об/мин.
Суперчатант наносят íà колонку для центриф гированич, заполненную сефадексом
6-75, це -трифуг. ру,от 1 мин при
3000 Ж/мин. Удельная активность ЛАП в элюата составляет ч2 едlмг белка, !. с;-оту ..=.. де. я ного феаг ента контроЛИр .-.-,т дИУ..--,ЛЕ--.,-ГРО.t::r ÐàTÈ×ÅOÊÈÌ аНаЛИзол., В прot:åссе диск",ëе <трофореза препарат ЛА . . роявляе..;--.я в виде двух зон— основная в области г..2 — и глобули ов и в о
1701746 области преальбуминов-а> глобулинов. Отсу гствие примесных зон позволяет судить о высокой степени гомогенности полученных препаратов.
Составитель Т,Забойкина
Редактор Л.Павлова Техред М.Моргентал Корректор M.éàðîøè
Заказ 4513 Тира>к Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5.
Проиааодстаанно-иадаталаокий коиоинат "Патент", г. Уаггород, ул.Гагарина, 101
Таким образом, изобретение позволяет сократить и упростить очистку фермента, а также увеличить его выход-удельная активн сть ЛАП 20-42 ед/мг белка. Изобретение и эволяет получить высокоочищенный mмогенный фермент. Использование цельнрй ткани мозга расширяет воэможности промышленной наработки ЛАП вЂ” широко
) используемого в медицине и биологии фермента. л
Формула изобретения
Способ получения лейцинаминопепти5 дазы из мозга, включающий гомогенизацию ткани, центрифугирование, гель-фильтрацию на сефадексе 6 75, обработку 6-9$ным оаствором формальдегида, о т л и ч ею шийся тем, что, с целью увеличения
10 выхода целевого продукта и упрощения способа, обработку формальдегидом проводят во время гомогенизации ткани, а гель-фильтрации на сефадексе подвергают неочищенный супернатант гомогената,
