Способ проведения твердофазного иммуноферментного анализа бруцеллеза

 

Изобретение относится к технике лабораторных исследований, в частности к твердофазному иммуноферментному анализу (ТИФА), предназначенному для лабораторной серологической диагностики различных заболеваний, в том числе особо опасных инфекций (бруцеллеза, чумы и т.п.). Цель изобретения - повышение чувствительности анализа. Это достигается тем, что в качестве твердофазного сорбента используются нити из полиакрилонитрильного волокна , которые обладают высокоразвитой поверхностью, хорошими сорбционными свойствами. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 5 G 01 N 33/542

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ пО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

{21) 4474530/13 (22) 15.08.88 (46) 23.12.91. Бюл. ¹ 47 (71) Научно-исследовательский противочумный институт Кавказа и Закавказья (72) И.Б.Шимко, М,И.Леви и Т.А.Шимко (53) 576.8,077(088.8) (56j Патент США ¹ 4371612, кл. 6 01 N 33/53, 1982.

Апп. Inst. Pasteur MIcrobIol., 1987, 138, ¹ 1, р.75 — 79. (54) СПОСОБ ПРОВЕДЕНИЯ ТВЕРДОФАЗНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА БРУЦЕЛЛЕЗА

Изобретение относится к технике лабораторных исследований, в частности к твердофазному иммуноферментному анализу (ТИФА), предназначенному для лабораторной серологической диагностики различных заболеваний, в том числе особо опасных инфекций (например, бруцеллеза, чумы и др.).

Цель изобретения — повышение чувствительности анализа.

Способ иллюстрируется примером.

Пример. На поверхность чисто вымытого полиакрилонитрильного волокна сорбировали бруцеллезный полисахаридный антиген. Для этого иммуносорбент (нить) опускали в раствор антигена. Незанятые антигеном участки волокна блокировали нейтральными белком (бычий сывороточный альбумин). После высушивания волокно с адсорбированным антигеном разрезали на,,ЯЛÄÄ 1700476 А1 (57) Изобретение относится к технике лабораторных исследований, в частности к твердофазному иммуноферментному анализу (ТИФА), предназначенному для лабораторной серологической диагностики различных заболеваний, в том числе особо опасных инфекций (бруцеллеза, чумы и т.п.). Цель изобретения — повышение чувствительности анализа, Это достигается тем, что в качестве твердофазного сорбента используются нити из полиакрилонитрильного волокна, которые обладают высокоразвитой поверхностью, хорошими сорбционными свойствами. 1 табл. отрезки по 3 см и каждый из них помещали в лунку 96-луночной иммунологической пластины, изготовленной из нейтрального материала, или использовали полистироловую пластину, участие которой в реакции блокировали предварительной обработкой нейтральным блоком. Пластина при этом С использовалась многократно. Далее после- Д довательно проводили все этапы ТИФА, Для промывки отрезков волокна непосред- Q ственно в лунках использовали крышку от микротитровальной пластины, в которой сверлили отверстия соответственно лункам пластины, а с прилегающей к пластине стороны заклеивали сплошь пластмассовой оконнной сеткой от насекомых. Такая крышка при плотном поижатии к пластине предотвращала выскальзывания при промывке отрезков волокна иэ лунок, не мешая свободному току промывочной жидкости через зарешеченные отверстия.

Сравнение чувствительности ТИФА с применением палиакрилонитрильного иммуносорбента в форме н п.и и палистиралавагаиммунасарбента в форме плато

Твер фаз (им му сорб

ТИФА — ТИФА"- I ТИ

ЬТИФА/

lПС

-ПА:= -ПА

=ТИФA-- -гИ 1

--ПС -П

ТИс

ПА

П р и м е ч а н и е. ПС-палистирол, ГА-палиакрилонитрил.

Составитель Д. Панковский

Техред М,Маргентал Корректор M. Демчик

Редактор Н. Козлова

Заказ 4464 Тираж Подписное

ВНИИПИ Гасударственного комитета па изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113935, Москва, К-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 1Q1

Для получения сравнительных данных проводили ТИФА с использованием в качеСтве твердой фазы полиакриланитрильнога

80поКНа в форме нити vi ТИФА с использованием полистироловых пластин, параллельно исследовали на наличие

Специфических антител ЗО сывороток крови больных бруцеллезОм людей. Данные свефены в таблицу, из которой следует, что при остоверности результатов (левая часть таб; ицы — оценка вероятности различий при помощи критерия знаков: Р<О,О5), ТИФА с использованием в качестве твердой фазы йолиакрилонитрильнага волокна в форме иити обладает более высокой чувствительйостью по среднему геометрическому тиру, ем ТИФА с применением палистиролаваго иммуносорбента. Этот вывод подтверждаЕтся и корреляционными, и регрессивными анализами {правая часть таблицы).

Использование в качестве твердафазkilora иммуносарбента для ТИФА полиакриланитрильного волокна обеспечивает па сравнению с существующими иммунасорЮентами следующие преимушества: повышает чувствительность ТИФА в 3 раза, дает возможность одномоментно и на предварительном этапе сорбировать иммунореактант (антиген, антитело) на большое

5 количество твердофазного сорбента с последующим отсроченным использованием иммуносорбента в ТИФА, что важно при производстве иммуноферментных наборов, позволяет многократно использовать одну и

1О ту же иммунологическую пластину в качестве резервуара для проведения ТИФА.

Формула изобретения

Способ проведения твердофазного иммуноферментного анализа бруцеллеза, 15 предусматривающий адсорбцию бруцеллезного полисахаридного антигена на твердофазный полимерный сорбент, внесение испытуемой сыворотки, инкубиравание с иммуноферментным конъюгатом и суб2О стратам с последующей количественной оценкой по связавшемуся с иммуносорбентам ферменту, о т л и ч à ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности анализа, в качестве полимерного сарбента ис25 пользуют нить из полиакрилнитрила.