Способ выделения ферментных препаратов из культуральной жидкости12известны способы выделения ферментных препаратов из культуральной жидкости их осаждением нейтральными солями (осадителем) с последующим отделением белкового осадка.5с целью ускорения процесса, белковый осадок предлагается отделять флотоагентом, который вносят в культуральную жидкость одновременно с осадителем. в качестве флотоагеита целесообразно применять индиффе- ю рентный неполярный растворитель плотностью меньше 1, например толуол.согласно предлагаемому способу в культуральную жидкость вносят одновременно осадитель, например сульфат аммония, и несмеши- 15 ваю^щийся с водой индифферентный неполярный растворитель плотностью меньше 1. последний растворяется в среде в виде мелких капель. выпадающий под действием осадителя белок смачивается этим растворителем и 20 всплывает вместе с ним на поверхность, образуя сплошной слой. после осветления раствора слой белка легко отделяется от нсидкости.пример \. к. 25 л культуральной жидко- 25 сти actinomyces aureoverficillatus kras. et di shen, штамм 1306, содержащей около 0,2 г белка на 1 л, добавляют 100 мл толуола. при интенсивном перемещивании вносят 16,55 кг сухого сульфата аммония, после чего продол- 30 жают перемешивать до полного растворения соли. затем смесь оставляют на осветление при комнатной температуре на сутки, послечего получают осветленный раствор с осадком в виде пленки на поверхности. водный слой сливают сифоном, а осадок с остатками маточника (объем около 1 л) центрифугируют при 3000 об/мин. при этом образуется плотная паста, которую для получения очишенной рибонуклеазы диализом освобождают от сульфата аммония и подвергают хроматографии на ионообменниках.пример 2. к 1 л раствора сывороточного альбумина

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Кл. 6а, 14

Заявлено 17.VIII.1964 (¹ 916793/28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 21.IX.1965. Бюллетень № 19

Дата опубликования описания 17.XI.1965

МПК С 12k ДК 576.8.093.1:663, 132 (088.8) Государственный комитет по делам изобретений и открытий СССР

Г, л г р,1.I. i:". i c

Г, .:". с

Р. И. Татарская, А. А. Баев, Н. Я. Ниедра и А. И. Кореняко (Авторы изобретения

Заявитель

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ

Подписная группа № 14

Известны способы выделения ферментных препаратов из культуральной жидкости их осаждением нейтральными солями (осадителем) с последующим отделением белкового осадка.

С целью ускорения процесса, белковый осадок предлагается отделять флотоагентом, который вносят в культуральную жидкость одновременно с осадителем. В качестве флотоагента целесообразно применять индифферентный неполярный растворитель плотностью меньше 1, например толуол.

Согласно предлагаемому способу в культуральную жидкость вносят одновременно осадитель, например сульфат аммония, и несмешивающийся с водой индифферентный неполярный растворитель плотностью меньше 1. Последний растворяется в среде в виде мелких капель. Выпадающий под действием осадителя белок смачивается этим растворителем и всплывает вместе с ним на поверхность, образуя сплошной слой. После осветления раствора слой белка легко отделяется от жидкости.

Пример 1. К 25 л культуральной жидкости Actinomyces aureoverficillatus Kras. et Di

shen, штамм 1306, содержащей около 0,2 г белка на 1 л, добавляют 100 лл толуола. При интенсивном перемешивании вносят 16,55 кг сухого сульфата аммония, после чего продолжают перемешивать до полного растворения соли. Затем смесь оставляют на осветление при комнатной температуре на сутки, после чего получают осветленпый раствор с осадком в виде пленки на поверхности. Водный слой сливают сифоном, а осадок с остатками маточника (объем около l л) центрифугируют при 3000 об1мин. При этом образуется плотная паста, которую для получения очищенной рибонуклеазы диализом освобождают от сульфата аммония и подвергают хроматографии на ионообменниках.

П р им е р 2. К 1 л раствора сывороточного альбумина (0,1 г белка на 1 л) прибавляют

10 мл толуола. Интенсивно перемешивают и добавляют 561 г сухого сульфата аммония.

Продолжают перемешивать до полного раст15 ворения соли, после чего смесь оставляют на холоду на двое суток. Затем с поверхности жидкости счерпывают плотную пленку белка, которую диализуют и высушивают методом сублимации под вакуумом.

Предмет изобретения

1. Способ выделения ферментных препаратов из культуральной жидкости с помощью осадителя с последующим отделением белко25 вого осадка, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса, отделение белкового осадка производят флотоагентом, который задают в культуральную жидкость одновремен. но с осадителем.

30 2. Способ по п. l, отличающийся тем, что в качестве флотоагента применяют индиффе рентный Heïîëÿðíûé растворитель, плотность которого меньше lс например толуол.