Способ культивирования клеток животных и человека
Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в биотехнологии и онкологии. Цель изобретения - предотвращение контаминации культур клеток лимфоидными и вирустрансформированными клетками достигается за счет внесения в культуральную среду строфантина G в концентрации 0,1-20 мкг/мл или дигоксина в концентрации 2,5-5,0 мкг/мл.
СОК)З t,".nnf I i:VuX
СЛ И АЛИС t И И. СКИХ
РЕСПУБЛИК (st)s А 61 К 31/705
ГОСУДАРСТБЕННЫИ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ, 21) 4667187/14; 4667188/14 (22) 30.01,89 (46) 07,11,91, Бюл. ¹ (71) Институт биологической физики АН СССР (72) А.А.Нариманов и С.Н.Мякишева (53) 612.475 (088.8) (56) Адамс Р. Методы культуры клеток для биохимиков,— М.: Мир, 1983. (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в биотехнологии и онкологии.
Цел ь изобретения — предотвращение контаминации культур клеток лимфоидными и вирустрансформированными клетками.
Пример 1. Влияние строфантина G на рост эмбриональных клеток человека (ЭКЧ) и опухолевых клеток Rajl при смешанном посеве культур.
Готовятсуспензию ЭКЧ в концентрации
50 тыс.кл/мл на среде ДМЕМ с 107,-ной. фетальной сывороткой. Параллельно на этой же среде готовят суспензию клеток Raji в концентрации 50 тыс. кл/мл. Далее во флаконы Карреля вносят по 2,5 мл клеточной суспензии ЭКЧ и Raji. Затем в одну группу из трех флаконов (со смешанными культурами) вносят 10 мкл/мл строфантина с конечной концентрацией его в среде 0 01 мкг/мл.
В следующую группу флаконов вносят 0,1 мкг/мл строфантина, в другую 1,0 мкг/мл, в следующую 10 мкг/мл. Растворы строфантина готовят на 307;-ном этаноле, поэтому в контрольные три флакона вносят по 10 мкл/мл 30 -ного этанола.
„„5lJ „„1688878 А1 (57) Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в биотехнологии и онкологии, Цель изобретения — предотвращение контаминации культур клеток лимфоидными и вирустрансформированными клетками достигается за счет внесения в культуральную среду строфантина G e концентрации 0,1 — 20 мкг/мл или дигоксина в концентрации 2,5-5,0 мкгlмл.
Приготовленные таким образом контрольные и опытные культуры помещают для культивирования в термастат при 37 t.
Клетки подсчитывают в камере Горяева через 5 сут культивирования. При этом клетки
ЭКЧ, которые в отличие от суспензионной культуры Raji пролиферируют только прикрепляясь к подложке (контакт — зависимая культура), снимают трипсином.
Внесение строфантина в среду в дозах
0,1 — 10 мкг/мл вызывает 100"-,ь-ную гибель опухолевых клеток, в то время как в контроле, без строфантина, эти клетки активно пролиферируют и число их к концу опыта достигает 360 тыс,кл/мл.
Пример 2. Влияние дигоксина на рост
ЭКЧ и опухолевых клеток Raji при смешанном посеве культур.
Готовят суспензию ЭКЧ в концентрации
50 тыс.кл/мл на среде ДМЕМ с 107ь-ной фетальной сывороткой. Параллельно на этой же среде готовят суспензию клеток Ra)i . в концентрации 50 тыс.кл/мл, Далее во флаконы Карреля вносят по 2,5 мл клеточной суспензии ЭКЧ и Raji. Затем в одну группу из трех флаконов (со смешанными культурами) вносят 10 мкл/мл дигоксина с конечной
1688878
Составитель С.Рыбалкин.
Техред М.Моргентал Корректор Т,Палий
Редактор И.Шмакова
Заказ 3762 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 концентрацией его в среде 0 25 мкг/мл. В следующую группу флаконов вносят 2,5 мкг/мл дигоксина, в другую группу 5 мкгlмл, в следующую 25 мкг/мл. Растворы дигоксина готовят на 30 -ном этаноле, поэтому в контрольные три флакона вносят по
10 мкгlмл 30 -ного этанола.
Приготовленные таким, образом контрольные и опытные культуры помещают дая культивирования в термостат при 37 С.
Клетки подсчитывают в камере Горяева через 5 сут культивирования. При этом ЭКЧ снимают трипсином.
Внесение дигоксина в среду в дозах
2,5-25 мкг/мл вызывает 100ф,-ную гибель опухолевых клеток, в то время как в контроле, без дигоксина, эти клетки активно пролиферируют, число их. к концу опыта достигает 325 тыс.кл/мл. Наиболее эффективными дозами дигоксина являются 2,5-5 мкг/мл, кото5 рые, вызывая гибель всех опухолевых клеток, не оказывают влияния на фибробласты ЭКЧ.
Формула изобретения
Способ культивирования клеток животных и человека путем инкубирования кле10 ток в питательной среде, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью предотвращения контаминации культур клеток лимфоидными и вирустрансформированными клетками, в питательную среду вносят строфантин G в
15 концентрации 0,1-10 мкгlмл или дигоксин в концентрации 2,5-5,0 мкг/ мл.
