Полимерный реагент для ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина и способ его получения

 

Изобретение относится к химии полимеров и позволяет создать полимерный реагент с повышенной способностью к ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина (94-110 мг белка на 1 г полимерного реагента), что достигается новой структурой вещества общей формулы {-f СН2 - СН (СбН4СН2 NCS)uf СН2 - -СН (СеН4 CH2CI) СН2 - СН (CeHsHzгде х 46-54 мол.%, у 3-12 мол.%. z 42-43 мол.%, k 2400-2900, а также способом его получения, заключающемся в нагревании хлорметилироранногс полистирола со степенью полимеризации 2400-2900 и степению замещения 57-58% с роданидом калия в ацетонитриле,ацетоне, изопропаноле или метилэтилкетоне при температуре кипения растворителя в течение 10-20 ч. 1 табл, Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4675401/05 (22) 18.01,89 (46) 23,10.91, Бюл, М 39 (71) Ташкентский государственный университет им. В.И.Ленина (72) А,А.Юльчибаев, С.Ахмедова и О.LU.Шаликова (53) 678.641.7 (088,8) (56) Axen R., Porath J., Chemical coupling of

enzymes to cross-linked dextran ("Sepadex"), Nature, 1966, v. 210, р, 367.

Туркова Я, Аффинная хроматография.—

М,; Мир, 1980, с. 171 — 172. (54) ПОЛИМЕРНЫЙ РЕАГЕНТ ДЛЯ КОВАЛЕНТНОЙ ИММОБИЛИЗАЦИИ СЪ|ВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА И СПОСОБ ЕГО

ПОЛУЧЕНИЯ (57) Изобретение относится к химии полимеров и позволяет создать полимерный реаИзобретение относится к химии полимеров, а именно к полимерному реагенту для ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина и к способу его получения, и может быть использовано в химической энзимологии и биотехнологии.

Цель изобретения — повышение количества иммобилизированного сывороточного альбумина и упрощение способа получения полимерного реагента.

В качестве исходного полимера использован блочный полистирол в виде гранул..

Пример 1. 5 г промышленного блочного полистирола с мол.м. 270000 растворяют в 100 мл монохлордиметилового эфира, прибавляют 0,6 г безводного хлористого цинка и кипятят 8 ч, Затем реакционную смесь разбавляют водным диоксаном, нижний слой, содержащий монохлордиметило„„ А,„, 1685948 Al (si)s С 08 F 212/14, 8/34, С 12 N 11/08// (С 08 F 212/14, 212:08) гент с повышенной способностью к ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина (94-110 мг белка на 1 г полимерного реагента), что достигается новой структурой вещества общей формулы (+CH2 — СН (CsH4CHp NCS) Q+CHz— — СН (CsH4 CH2CI) ф- CHz — СН (С6Н5)+-ф -„ где х = 46 — 54 мол., у = 3 — 12 мол., z = =42 — 43 мол,, k = 2400 — 2900, а также способом его получения. заключающемся в нагревании хлоометилированного полистирола со степенью полимеризации 2400 — 2900 и степению замещения 57 — 58;(, с роданидом калия в ацетонитриле, ацетоне, изопропаноле или метилэтилкетоне при температуре кипения растворителя в течение 10-20 ч. 1 табл, вый эфир, отделяют, а раствор хлорметилированного полистирола в диоксане медленно приливают в воду (или 70 -ный водный метанол). Осадок отфильтровывают, промывают дистиллированной водой до исчезновения ионов хлора и высушивают при комнатной температуре. Получают белый. порошок в количестве 4,97 г(75 от теории), растворимый в ацетоне, диоксане, метилэтилкетоне, бензоле, толуоле. Найдено. Cl

13,5";ь. ИК-спектр наряду с полосами поглощения СН-, СН2-групп и бензольного кольца показывает четкую полосу поглощения С-С!связи при 1260 см, отсутствующую в ИКспектре исходного полистирола. Степень замещения полистирола 58 . Мол.м, 300000, Смесь 1,5225 г (0,01 оснаво-моль) хлорметилированного полистирола, полученно1685948

ro по примеру 1, и 1,94 г (0,02 моль) роданида калия кипятят при 81 С в 25 мл ацетонитрилв в течение 10 ч. Осадок отфильтровывают, многократно промывают водой и высушивают при остаточном давлении 0,2 мм рт.ст, при ЗООС, получают 1,696 r полимерного реагента.

Найдено, $: N 3,68; CI 2,75, что соответствует 46 мол.71 звеньев 4-(изотиоцианометил)винилбензола, 12 мол.07ь

4-(хлорметил)винилбенэола и 42 мол.$ винилбензола. ИК-спектр показывает интенсивную полосу поглощения в области 2160 см (колебания группы — N==C=S) и слабоинтенсивную полосу поглс1щения в области поглощения 1260 см (колебания группы

-Н2С вЂ” Ci), Ковалентное связывание сывороточного альбумина на полученном полимерном реагенте осуществляют при (21 + 1) С в боратном буферном растворе с рН 8,45 в течение 48 ч, используя массовое соотношение полимер: белок, равное 100:50 мг. Количество иммобилизованного белка определяют двумя методами: спектрофотометрическим по оптической плотности растворов белка при 280 нм и методом Лаури по поглощению при 750 нм (спектрофотометр СФ-46). Количество иммобилизованного белка в данном примере составляет 94 мг на 1 полимерного реагента.

Пример ы 2 — 9, Данные приведены в

- таблице.

Формула изобретения

1. Полимерный реагент общей формулы

H— - СН

5 -., СН, 1.5

IV

И

1 где х = 46 — 54 моль. ; у = 3-12 мол.ф,;

10 z = 42-43 мол.7ь;

k = 2400-2900, для ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина, 2. Способ получения полимерного pea l5 гента для ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина общей формулы

СН СНС к, X

25 где х = 46 — 54 мол.7; у = 3-12 мол,7,;

z = 42 — 43 мол. ;

k = 2400-2900, нагреванием хлорметилированного поли30 стирола со степенью полимеризации 24002900 и степенью хлорметилирования

57 — 58 с роданидом калия в ацетонитриле, изопропаноле, метилэтилкетоне или ацетоне при температуре кипения растворителя в

35 течение 10-20 ч. ест- Иоличест- CooT ор- во КИСБ, 1 вне ц- г 1 RjlPR

1

1 полни

1 I, рода !

J воАцето- 31 инто ил

270000 58 1,5225

2 270000 58 1>,5225

1,9400 1: 2

12 42

100 50

1,9400 1:2

20 49

9 42 100 50

Изопро- 32 нанон

102

Ацетон 56 20; 49

3 270000 58 1,522>

4 270000 58 1,5225

1.,9400 1: 2

9 42

3 43

100 . 50

102

1,,9400 112 Петин- 79 20 54 зтнлнетон

100

110

10 i 43

1„9400 1: i

5 270000 58 1,525

Ацетон зб 15 47 контрольные

110

16

50 б 270000 5&

7 270000 48

100

110

Сравнительные

23-62

8 Иэотиоцианатные производные

Сефадекса

M,N -лвтилонансакрилаиндп н и-ювтро(енилолрнлана

9 Слитый сололннер акрилаиица

6080

0 р н н е ч а н и е. Ирн использоьаннл сроиьввленного блочного полистирола с иол.н. 250000, 270000, 300000 ползчеви одиноновне результаты. слецовзтвльио к тоичество ниноовппвзсваанаго альпунина не зависит от нолекулнриор ласси неводного поювиера, а зависит от степени злиесеиин Оевзольного кольца. Ppí ззнецеаин Ьонвольлозо кольца полее 582 степень нювобнлн» злпнн ве рве тичив II TcJT.