Способ получения гетероциклических кетонов

 

Изобретение касается гетероциклических кетонов, в частности получения соединений общей ф-лы I: Rj- -aohNH-CtCHtHjljI-CIO-N-pC(ObNH-C(CHtCHj jVC(0) где Ri - -C(0)-NH-S(0)2R2; -NH-C(0)-NH- S(0)2R2 или -NH-S(0)2-CF3 при R2 - Х-кислород или сера; О - орто-фенилен (возможно замещенный) ОН, С1-С4-алкоксикарбонилом) или цис-винилен, являющихся ингибиторами лейкоцитарной эластазы человека . Цель - создание новых с иной активностью веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией кислоты ф-лы II Ri-CeH -n- С(0)-ОН с соответствующим аминокетоном. Новые соединения не имеют признаков токсичности и оказывают ингибирующее действие лейкоцитарной эластазы человека на пептидном субстрате низкомолекулярного веса (анилида метоксисукцинилаланилпролилвалин-п-нитроанилида).

союз соВетских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕ НТУ

О

iI

В1 / С-N н О х 0 о х (21) 4355719/04 (22) 06.05.88 (31) 8711050; 8803206 (32) 11.05.87; 11,02.88 (33) GB (46) 15.09.91. Бюл. ¹ 34 (71) Ай-Си-Ай Америказ Инк (US) (72) Филип Дьюк Эдвардс. Джозеф Джеймс

Льюис, Чарльз Вилльям Перкинс, Даяна

Эми Трейнор и Ричард Алан Вилдонджер (US) (53) 547.743. 1 787 789.07 (088.8) (56) EP ¹ 189305, кл. С 07 К 5/06, опубл, 1986. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ KETOHOB (57) Изобретение касается гетероциклических кетонов, в частности получения соединений общей ф-лы I:

Изобретение относится к способу получения новых биологически активных химигде R1 — группа формулы Вг — SOgNHCO-, Вг$0г(чНСОМН- или СЕз$0г(чН-, где Яг— хлорфенил, Х вЂ” кислород или сера, 0— о-фенилен, незамещенный или замещенный гидроксигруппой или (C>-С4) — алкоксикарбонилом, или 0 = цис-винилен, являющихся ингибиторами лейкоцитарной эластаэы человека (ЛЭЧ), Укаэанное свойство предполагает возможность применения этих соединений в медицине, „„Б13 „„16782Î7 А3 (s()s С 07 D 413/12. 417/12, С 07 К 5/08//

//А 61 К 31/42, 31/425 (С 07 0 413/12, 207:04, 263:00) (С 07 О 417/12, 207:04, 277:001 н, ((;©с(онл+с(сн(сн,),1-с(о(-й — с(оман-с(сн(сн,),(-c(ol-с ..Q где R1 -C(O)-NH-$(0)гйг; -NH-C{0)-NH$(0)гйг или -NH-S(O)2-СРЭ при Вг — С6Н4О;

Х-кислород или сера; 0 — орто-фенилен (возможно замещенный) ОН, С1-С4-алкоксикарбонилом) или цис-винилен, являющихся ингибиторами лейкоцитарной эластаэы человека. Цель — создание новых с иной активностью веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией кислоты ф-лы II R -СБН4-иC(0)-OH с соответствующим аминокетоном.

Новые соединения не имеют признаков токсичности и оказывают ин гибирующее действие лейкоцитарной эластаэы человека на пептид loM субстрате низкомолекулярного веса (анилида метоксисукцинилаланилпролилвалин-п-нитроанилида). ческих соединений, конкретно к способу получения гетероциклических кетонов формулы!

Цель изобретения — получение новых гетероциклических кетонов, обладающих новым для этого ряда видом биологической активности — способностью ингибировать лейкоцитарную эластазу человека.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, в которых, если не указано иначе:

1) температуры даются в градусах Цельсия (C); операции осуществляют и ри комнат1678207

15

25

35

50

55 ной температуре или при температуре окружающей среды, т.е. при температуре в пределах 18-25 С;

2) выпаривание растворителя осуществляют с использованием вращающегося испарителя при пониженном давлении (600-4000 Па 4,5 — 30 мм рт.ст.) с температурой бани до 60 С;

3) мгновенную хроматографию осуществляют на Мерк Кизельгеле (Art 9385) фирм ы Е.Меок, Барм штадт, Ф РГ; если указывается "кислый силикагель", то использовался материал, производимый фирмой Дж,Т.Бейкер Кемикал КО„Филлипсбург, НДж, США и имеющий рН около 6 при суспендировании в воде, тонкослойную хроматографию (ТСХ) осуществляют на силикагельных CHLF пластинках Аналтек 0,25 мм (Art 21521), поставляемых фирмой Аналтек, Ньюарк, ДЕ, США:

4) обычно за ходом реакции следят с помощью ТСХ, и время реакции дается лишь для иллюстрации;

5) точки плавления являются нескорректированными и (разл) указывает разложение; данные точки плавления являются температурами, получаемыми для веществ, полученных как описано; полиморфизм может приводить в результате к выделения веществ с различными точками плавления при некоторых получениях;

6) по данным ТСХ все конечные продукты были по существу чистыми и имели удовлетворительные спектры ЯМР и микроаналитические данные;

7) выходы даются только для иллюстраци и не обязательно являются величинами, которые могут быть получены при тщательной разработке процесса; если требовалось больше вещества, некоторые процедуры получения повторялись;

8) если они даются, данные ЯМР представлены в виде дельта-величин для основных диагностических протонов, данные в миллионных долях (млн,дол,) по отношению к тетраметилсипану (ТМС) в качестве внутреннего стандарта, определенных при 80

МГц или 250 МГц с использованием СОС!з, ДМСО-бо ипи С0з00 в качестве растворителя; "Ar" означает ароматическую группу или сигнал, 9) пониженные давления даются в аиде абсолютных давлений в паскалях (Па); другие давления даются в виде давления по манометру в барах;

10) соотношения растворителей даются в виде объем/объем (об./об,); соотношения твердых веществ даются в виде мас./мас, (м. /м,);

11) масс-спектры (МС) снимались с энергии электронов 70 эВ при способе химической ионизации с использованием прямого экспозиционного зонда; когда они даются, сообщаются только пики в десять процентов основного пика и более крупные;

12) когда сообщаются данные жидкостной хроматографии высокого давления (НР1 С), дается tR (время удержания) FR (скорость течения) дается в мл/мин, Col А представляет ODS аналитическую колонку

"Цорбакс" (торговая марка) 4,6 мм х 25 см и

Col B — "Феноменекс" (торговая марка) "Цорбакс" С-8 аналитическую колон ку 4,6 мм х 35 см.

Номенклатура: для единообразия и ясности, где это возможно, используются наименования типа "аминокислотная последовательность". Обычно стереохимическая идентификация хирального центра в виде (S) указывает, что по оценке продукт содержит не менее 95 / (S)-изомера при указанном центре; отсутствие идентификации при хиральном центре указывает на смесь изомеров, которая при указанном центре не обязательно составляет смесь 1:1.

Пример 1. /4-/4-Хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензоил/-L-валил-N/1

-/5-/гидрокси-метил)бензоксазол-2-ил/кар бонил-2-метилпропил/- -пролинамид (формула 1, гетероцикл, содержащий Х, N u Q—

5-/гидроксиметил/-бензоксазол-2-ил, R> =

Rz (S0z) - NHC0-, Й2 = 4-С!СвН ), а. 3-амино-4-гидроксибензольный спирт, Смесь 10 (об./об,) палладия на угле (5,25 г) и 4-гидрокси-3-нитробензилового спирта (25,0 г) в этаноле (1,3 л (гидрируют в шейкере при 3,4 бар в течение 23 ч, после чего смесь фильтруют через диатомовую землю и упаривают. Остаток подвергают мгновенной хроматографии с элюированием смесью метанол;хлороформ (О:100—

10:90), получая продукт (11,92 г, 607) в виде красного твердого вещества, ТСХ, Ю = 0,14, метанол;хлороформ (5:95), МС, м/е=140 (M+1), 139, 138, 123, 122, 110.

Ь.(1S)-Бензилоксикзр бонил-L-валил-N

-/1-/гидрокси/-/5-/гидроксиметил/бензо ксазол-2-ил/метил-2-метилпропил /-L-npoлинамид. (1$)-Бензилоксикарбонил-L-валид.-,N-/

3-этокси-2-гидрокси-3-имино-1-/1-метила тилпропил/-1=пролинамид-хлоргидрат (3,0

r) и спирт, полученный согласно примеру 1а (0,771 r), в абсолютном этаноле (20 мл) нагревают при 65 С в течение 20 ч, смесь растворяют в этилацетате, промывают (1 н.

Na0k, соленым раствором), сушат сульфатом магния иупаривают. Неочищенный про1678207 дукт подвергают мгновенной хроматографии с элюированием смесью ацетон;гексаны (55:45), получая продукт (858 мг) в виде белого твердого вещества, TCX, Rf = 0,26, ацетон:гексан (3:2), МС, м/е =581(М+1), 563, 5

501, 473, 455.

Вычислено, /: С 61,73; Н 7,10. N 9,29.

Сз1H

Найдено, : С 61,81; Н 6,86, N 9,09. с. (1 S)- Бе нзил окси ка рбон ил-L-валилN/1-/5-//третбутилдиметилсилил-окси/ме тил/бензоксазол-2-ил /гидроксиметил-2-м етилпропил/-L-пропинамид. 15

Раствор продукта примера 1Ь {736 мг), трет-бутилдиметилсилилхлорида (380 мг), 4диметиламинопиридина (7,8 мг) и триэтиламинэ (0,37 мл) в дихлорметане (10 мл) перемешивают при комнатной температуре 20 в течение 16 ч. Раствор затем растворяют в этилацетате. промывают(1 í. H C!, насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), Сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают 25 с помощью мгновенной хроматографии при элюировании смесью ацетон гексан (1;3), получая продукт (715 мг, 82%) в виде светло-желтого твердого вещества, ТСХ, Rf =

0,46, ацетон:гексан (2:3), МС, м/е = 695 30 (М+1), 679, 587, 563, 455.

Вычислено, %: С 63,54, Н 7,85, N 8,01

С 37H54N407 1,025 Í20

Найдено, o . С 63,44, Н 7,75, N 7,54.

d. (S)-Бензилоксикарбонил-L-валил-К/1-/5-//третбутилдиметил силил окси/метил/бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метилп роп ил /-(=и ролин амид, 40

Трет-бутиловый спирт (0,068 мл) добавляют к раствору продукта примера 1 с (500 мг) и периодинана Десс-Мартина (1,22 г) в дихлорметане (5 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 45 ч. Полученную суспензию распределяют между этилацетатом и 1:1 раствором насыщенного Na2S203, насыщенного йаНСОз, слои разделяют и этилацетатный слой промывают (один раз 1:1 раствором насы цен- 50 ного Ма23203, насыщенного ИаНСОз, два раза насыщенным бикарбонатом натрия, один раз солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают, Неочищенный продукт очищают с по- 55 мощью мгновенной хроматографии с элюированием смесью ацетон:гексан (1:3), получая продукт (448 мг, 90%) в виде белого твердого вещества, ТСХ, Rf = 0,54, ацетон:гексан (2:3), HPLC, tR = 6,18, Col À, FR =

2, вода:ацетонитрил (1;9), МС, м/е = 603 (М+1, основание), 677, 635, 585, 460.

Вычислено, : С 63,72, Н 7,59, N 8,03.

C37H52N407SI 0,25Н20

Найдено, о : С 63,84, Н 7,45, N 7,70. е. Бензилоксикарбонип-L-валил-N-/1/5-/гидроксиметил/-бензоксазол-2ил/карбонил-2-метил пропил/-L-пролинам ид.

Фтористый тетрабутиламмоний (1,2 мл

1 М раствора в тетрагидрофуране) добавляют к раствору продукта примера 1d (418 мг) в тетрагидрофуране (5 мл). Полученный в результате красный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и выдерживают при 5 С в течение 16 ч, Красный раствор распределяют между этилацетэтом и 1 í. HCI и этилацетатный слой промывают (насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают, Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии при элюировэнии смесью ацетон:гексаны (35:65) с последующей еще одной очисткой с помощью мгновенной хроматографии при элюировании смесью метанол:хлороформ (2,5.97,5), получая продукт (183 мг, 53/) в виде белого твердого вещества, ТСХ, Rf = 0,52, ацетон;гексаны (3;2), HPLC, tR = 6,27, COI, А, FR=1, вода:ацетонитрил (40:60), МС, м/е = 579 (М+1), 561, 331, 225, 197, 91 (основание).

Вычислено, : С 62,40, Н 6.76, N 9,39.

C3iH38N407 1,0H20

Найдено, : С 62,23, Н 6,40, N 9,14.

f. /4-/(4-Хлорфенил)супьфонилэминокарбонил/бензоил/- -валил-N-/1-/5- (гидроксиметил)бензоксазол-2-ил/карбонил-2

-метилпропил/- =пропинамид (формула I, гетероцикл, содержащий Х, N и 0-5-/гидроксиметил/бензоксазол-2-ил; R< = В2(ЯО2) NH

СО-; R2 = 4-С!С6Н4).

Трифторметансул ьфокислоту (0,140 мл) добавляют к раствору вещества, полученного согласно процедуре примера 1е, (182 мг) в дихлорметане (8 мл), перемешивают в течение 15 мин и смесь упаривают. Остаток растворяют в тетрагидрофуране (10 мл), обрабатывают 4-диметипаминопиридином (293 мг), 4-(4-хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензойной кислотой (113 мг) и хлоргидратом-1-(3-диметиламинопропилЯ-этилкарбодиимида (66,5 мг) и перемешивают при комнатной температуре в течение 16

1678207

15

% ч. Смесь распределяют между 1 н. HCI u этилацетатом, этилацетатную фазу промывают (1 í. HCI, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии при элюировании смесью метанол:хлороформ:уксусная кислота (1,5:97,5:1,0), получая продукт (77 мг, 32 ) в виде светло-желтого твердого вещества ТСХ, Pf = 0,28, метанол;хлороформ: ук, сусная кислота (5:9:1), МС, м/е = 766 (M+1), 758, 592, 562, 421, 346, 328.

Вычислено, : С 55,48, Н 5,49, N 8,29.

СзтН4оСЮ8093 1,0Н20 1,0СН3СООН

Найдено, : С 55,42, Н 5,33, N 8,77

Пример 2. /S/-4-//4-Хлорфенил/сульфониламинокарбонил/бензоил/-Z-валилК-/1-/5-/метоксикарбонил/бензоксазол-2

-ил/карбонил- 2-метилпропил/-пролинамид (формула I, гетероцикл, содержащий Х, N u Q-5-/метоксикарбонил/бензоксазол-2ил, R1 = Rz (SOz) К Н -СО-, В2 = 4-С! С8Нд). а. /1S/-Бензилоксикарбонил-L-валилN-/1-/гидрокси/-/5-метокси-карбонил/бе нзоксазол-2-ил/метил-2-метилпропил/-1.пролинамид.

Перемешиваемый раствор /1S/ бензи- л оксика рбонил-L-вал ил-К-/3-это кси-2-гидрокси-3-имино-1-/1-метилэтил/пропил-1-1

-пролинамид-хлоргидрата (5,47 г)и 4-карбометокси-2-аминофенола (5,10 r) a сухом этаноле (50 мл) нагревают в течение 3 ч при

60 С в атмосфере азота. Смесь растворяют в этилацетате, промывают (1 í. HCI, 1 н, NaOH, три раза, солевым раствором), сушат . над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт подвергают мгновенной хроматографии при элюировании смесью ацетон:гексаны (30:70), получая 2,210 r npopy ra, ТСХ, Rf - 0,18, ацетон:гексаны (35:65), МС, 649 (M+41), 637 (M+29), 611 (M+3), 610 (M+2), 609 (М+1), 591, 501.

Вычислено, Д: С 62,73, Н 6,74, N 8,76

C32H40N4O8 0 35СНЗСО2С2Н5

Найдено, : С 62,71, Н 6,73, N 8,67.

Ь. /Я/-Бензилоксикарбонил-L-валил-К/1-/5-метоксикарбонил /-бензоксазол-2-ил /

/карбонил-2-метилпропил/-L-пролинамид.

Трет-бутанол (0,340 мл) добавляют к раствору продукта примера 2а (2,70 r) и периодииана Десс-Мартина (4,62 г) в дихлорметане (20 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 22 ч. Полученную в результате суспензию разбавля20

45 ют этилацетатом и промывают (тремя порциями 1;1 смеси насыщенный NazSzOz .насыщенный КаНС03, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают, Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии при элюировайии смесью ацетон;гексан (25:75), получая

2,20 г твердого вещества, ТСХ, Rf =- 0,21, ацетон:гексаны (30:70), МС, м/е = 635 (M+29), 608 (M+2), 607 (M+1), 374, 331, 91.

Вычислено, /: С 62,43, Н 6,38, N 9,10

C3zH38N408 0,50Н20

Найдено, : С 62,43, Н 6,24, N 8ЯО. с. /S/-1 -Валил-К-/1//5-/метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил /карбонил-2-метил пропил/-L-пролинамид, К перемешиваемому раствору продукта примера 2Ь (500 мг) в дихлорметане (4 мл) в атмосфере азота добавляют по каплям трифторметансульфокислоту (0,365 мл).

Спустя 5 мин реакционную смесь выливают в дистиллированную воду (100 Mn) и экстрагируют три раза дихлорметаном, Водный слой доводят до рН 8 с помощью бикарбоната натрия и промывают три раза дихлорметаном, водную фазу обрабатывают 1 н, гидроокисью натрия (50 мл) и промывают еще один раз дихлорметаном. Органические промывные жидкости объединяют, сушат сульфатом натрия и упаривают, получая

185 мг (48 ) белой пены, ТСХ, Rf = 0,22, метанол:хлороформ (5:95}.

d./S/-4-/(4-Хлорфенил)сульфонилами нокарбонил/бензоил/- -валил- К-1/-/5-метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил/карбон ил-2-метилпропил/- - пролинамид (формула I, гетероцикл, содержащий X, N u Q-5/метокси ка рбонил/бензоксазол-2-ил, R < =

Rz (302) NH СО-, Rz = 4-CIC8H4).

Хлоргидрат 1-/3-диметиламинопропил/3-этилкарбодиимида (160 мг) добавляют к раствору продукта примера 2с (185 мг), 1-гидроксибензотриазола (110 мг) и 4-/(4хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензойной кислоты (280 мг) в тетрагидрофуране (3 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают (три раза 1 í. HCI, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии с элюированием смесью ацетон:дихлорметан:уксусная кислота (20:80:1 капля/мл), получая 160 мг твердого вещества, Rf = 0,36, метанол:хлороформ:уксусная кислота (5:95:1 капля/мг) HPLC, tp = 15,84, CoI А, вода, ацетонитрил:тетрагидрофуран:трифт

1678207

10 оруксусная кислота (55:35:15:0,1), FR = 2, МС, м/е = 684 (M+29), 656 (M+1), 375, 374, 356, 355, 354, 352, Х 302, 283, 260, 259, 178, 163. . Вычислено, 7,,. С 55,07, Н 5,31, N 8,03

СзвН4оСИИ501о$1,0Н20 1,0 СНзСО2Н

Найдено, Д: С 55,05, Н 5,13, N 8,06, Пример 3, /S /-/4-/(4-Хлорфе н ил)сул ьфониламинокарбонил/бензо-ил/-L-валилN-/1-/6-(метоксикарбонил)бензоксазол-2ил/карбонил-2- метилпропил/-L-пролинамид (формула 1, гетероцикл, содержащий Х, N u Q = 6-/метоксикарбонил/бензоксазол2-ил, R) = В2(Я02) NH СО-, Ra=4-CICsH4), а. /1$/-Бензилоксикарбонил-L-валилN-/,1-/гидрокси/-/6-/метокси-карбонил/б ензоксазол-2-ил/-метил-2-метилпропил/пролинамид, Перемешиваемый раствор /1Я/-бензилоксикарбонил-L-валил-N-/3-этокси-2-гид рокси-3-ими но- 1-(1-метилэтил) и ро и ил/-1= пролинамид-хлоргидрата (1,00 г) и 5-карбометокси-2-аминофенола (930 мг) в сухом этаноле (9 мл) нагревают в течение 4 ч при

60 С в атмосфере азота. Смесь растворяют в этилацетате, промывают (два.раза 1 н.

NaOH, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт подвергают хроматографии с элюированием смесью ацетон:гексаны (35:65), получая 300 мг продукта, ТСХ, Rf = 0,50, ацетонггексаны (45:55), Мс, м/е = 610 (М+2), 609 (М+1). . Ь./S/-бензилоксикарбонил-L-валил-N/1-/6-/метоксикарбонил/бензоксазол-2ил/карбонил-2-метилпропил/-L-пролинам . ид.

Трет-бутанол (0,050 мл) добавляют к раствору продукта примера За (300 мг) и периодинана Десс-Мартина (630 мг) в дихлорметане (3 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 17 ч.

Полученную в результате суспензию раз. бавляют этилацетатом и промывают (тремя порциями 1;1 смеси насыщенный

Naz$z0i:йаНСОз, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают, Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии с элюированием смесью ацетон:гексан (30:70), получая твердое вещество, которое растворяют в ацетонитриле (30 мл) и обрабатывают 300 мг активированного угля. Смесь перемешивают в течение 10 мин. фильтруют и упаривают, получая 257 мг продукта, TCX, Rf = 0,49, ацетон:гексаны (40:60), МС, м/е = 635 (М+29), 608. (М+2), 607 (М+1).

Вычислено, 7;: С 62,43, Н 6,38, N 9,10

25 Хлоргидрат 1-/3-Диметиламинопронил/сульфониламинокарбонил/-бензойной

30 кислоты (130 мг) в метиленхлориде (2 мл) и

5

C32H38N4O3 0,5 Н20

Найдено, : С 62,62. Н 6,28, N 8.94. с. /S/- -Валил-N-/1-/6-/метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метил пропил-L-пролинамид-трифторметансул ьфокислотная соль.

К перемешиваемому раствору продукта примера 3b (210 мг) в дихлорметане (1,5 мл) в атмосфере азота добавляют по каплям трифторметансульфокислоту (0,15 мл). Через 40 мин реакционную смесь упаривают.

Полученное твердое вещество помещают под вакуум на 1 ч и используют непосредственно в примере Зб, приведенном ниже, TCX, Rf = 0,00, ацетон:гексаны (25:75). МС. м/е = 244, 242, 235, 195, 189, 186, 181, 178, 121, 105, 93, 92, 91, 79.

d, /$/-/4-/(4-Хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензоил/- -валил- N-/1-/6(метоксикарбонил)бензоксазол-2-ил/-карбо нил-2-метилпропил/-L- пролинамид (формула 1, гетероцикл, содержащий, Х, N и 0 =

6-/метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил, R >

= Rg ($02). NH. СО-, йг = 4-CICgHp). пил/-3-этилкарбодиимиф(75 мг) добавляют к раствору продукта примера 3с, 1-гидроксибензотриазола (50 мг) и 4-//4-хлорфететрагидрофуране (2 мл) с последующим добавлением 4-метил-морфолина (0,041 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. К реакционной смеси добавляют дополнительно 4-метилморфолин (0,041 мл) и реакционную смесь. перемешивают еще 7 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают (1 н.

НС1 три раза, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии с элюированием смесью ацетон;метиленхлорид:уксусная кислота (30:70:1), получая твердое вещество (160 мл), которое далее очищают с помощью мгновенной хроматографии с использованием градиентного элюирования смесью ацетон:метиленхлорид:уксусная кислота (500 мл, 100;1, 900 мл 10:90:1, затем 50;50;1), получая целевое соединение (71,6 мг), ТСХ, Rf =0,17, ацетон:хлороформ;уксусная кислота (10;90:1), HPLC, tg = 15,84, Col А, FR = 2, вода:ацетонитрил:тетрагидрофуран:трифт оруксусная кислота (55:35:15:О,1), МС, м/е =

794 (М+1), 778, 777, 776, 423, 422, 421, 384, 374, 357, 356, 355, 354, 259, Вычислено, %: С 54,57, Н 5,36, N 7,76

СзвН40С!М501о$ 1,0 Н20 1,5 СНзС02Н

Найдено, : С 54,31, Н 5,19, N 7,81.

1678207

N-/1-/2-оксазолил/-гидр0 ксиметил-2-мет

С26Н 36N06

Пример 4. /4-/(4-Хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензоил/- L-валил-N/1-/2-оксазолил lкарбонил-2-метилпропил

/-1-пролинамид (формула 1, гетероцикл, содержащий Х, N и 0 = 2-оксазолил, R> = R2 (S02) NH СО-, R2 = 4-С1С6Н4), а. 2-Триметилсилилоксазол, н-Бутиллитий (28,5 мл 2,54 М раствора в гексане) добавляют к раствору с температурой -78 С оксазола (5,0 r) в простом эфире (150 мл), Полученный в результате раствор перемешивают при -78 С в течение 30 мин с последующим добавлением триметилсилилхлорида (7,86 г) и смесь оставляют подогреваться до комнатной температуры, Реакционную смесь перегоняют, собирают фракцию с температурой кипения примерно

130 С, получая 2-триметилсилилоксазол (5,12 r), MC, м/е = 142 (М+1), 91, 73, Ь. /1S/-Бензилоксикарбонил-L-валилилпропил/-L-пролийамид.

Раствор /S!-бензилоксикарбонил-L-вал ил-N-/1-форм ил-2-метил и ро пил/-i„-и ро- .. линамида (7,4 г) и продукта примера 4а (4,84

r) в толуоле (10 мл) нагревают при 80 С в течение 24 ч и еще в течение 14 ч при 60 С, Растворители выпаривают, остаток растворяют в тетрагидрофуране (50 мл), обрабатывают 1 н. HCI (5 мл) и перемешивают в течение 30 мин, Смесь растворяют в этилацетате, промывают (1 í. HCI, насыщенным бикарбонатом натрия; солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают.

Неочищенный материал очищают с помощью мгновенной хроматографии с использованием злюирования смесью ацетон:гексаны (30:70), получая продукт (4,57 r), TCX, Rf = 0,31, метанол:хлороформ (5:95), МС, м/е = 501 (М+1), 483, 393.

Вычислено, ) : С 62,38, Н 7,25, N 11,19

Найдено, 7;. С 62,52, Н 7,22, N 10,87, с, /S/-Бензилоксикарбонил-L-валил-й/2-метил-1-/-/2-оксазолил/- карбонил/пропил/-I=пролинамид.

Трет-бутанол (0,83 мл) добавляют к раствору продукта примера 4b (4,4 г) и периодининана Десс-Мартина (15 г) в дихлорметане (150 мл) и смесь перемешивают в течение 16 ч. Получающуюся суспензию распределяют между смесью насыщенный Na2S203: насыщенный . МаНСОз (1:1) и этилацетатом. Этилацетатный раствор промывают (смесью насыщенный йаг520з:насыщенный ИаНСОз (1;1), насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и

55 упаривают. Остаток очищают с йомощью мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью ацетон:гексаны (35:65), получая 4,8 г твердого вещества. Это твердое вещество растворяют в этилацетате, промывают (смесью насыщенный

Na2S203. насыщенный КаНСОз (1:1), насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат сульфатом магния и упаривают, получая продукт в виде белой пены (3,74 г), ТСХ, Rf = 0,32, ацетон:гексаны (40:60), МС„м/е = 499 (М+1), 266.

Вычислено, Д: С 62,64, Н 6,87, N 11,24

Сг6 Н 34 Й4 0 6

Найдено, 7;: С 62,30, Н 6,74, N 11,01. б, /4-/(4-Хлорфенил)сул ьфониламинокарбонил/бензоил-L-валил-К- /1-(2-оксазолил)карбонил-2-метилпропил/-L-пролина мид (формула 1, гетероцикл, содержащий Х, N u Q = 2-оксазолил, R< = R2 (S02) NH CO-, R2 = 4-.CIC6H4).

Трифторметансульфокислоту (0,89 мл) добавляют к раствору продукта примера 4с (1,0 rj в дихлорметане (15 мл) и перемешивают в течение 10 мин, растворитель упаривают и остаток помещают под высокий вакуум на 20 мин. Остаток растворяют в тетрагидрофуране (40 мл) и обрабатывают хлоргидратом 1-/3-диметиламинопропил/-3этилкарбодиимида (429 мг), 4-/(4-хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензойной кислотой (800 мг) и 4-диметиламинопиридином (1,97 г), Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч, растворяют в этилацетате, промывают (1 н.

HCi, насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают. Неочищенное вещество очищают с помощью мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью ацетон;гексаны:уксусная кислота

{10:90:1-20;80:1), получая продукт (930 мг), ТСХ, й1 = 0,40, метанол;хлороформ:уксусная кислота (5:95:1), HPLC, 1я = 7,35. Col А, FR = 2, вода:ацетонитрил:тетрагидрофуран,трифторуксусная кислота (55:35:15. 0,1), МС, м/е = 685 (М+1), 668, 393, 377, 266, 248.

Вычислено, 7;; С 54,07, Н 5,47, N 9,27

СзгНз6С1МО68 0,5 Н20 1,0 СНзСООН

Найдено, (: С 53,78, Н 5,33, N 9.25.

Пример 5, /4-/(4-Хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензоил/ -валил-N-/1/(2-бензотиазолил)карбонил-3-метилпропил/- L-пролинамид.(формула 1, гетероцикл, содержащий Х, N и 0 = 2-бензотиазолил, R>

= R2 (ЯОг) NH СО-, R2 = 4-С1С6Н4).

1678207

5

20 п5

30 основание), 332, 331

55 а. N-Q-Бензилоксикарбонил-N-метоксиN-метилвалинамид.

Раствор хлоргидрата 1-/3-диметиламинопропил/-3-этилкарбодиимида (19,07 г) в дихлорметане (500 мл) охлаждают до -10 С.

К данному раствору добавляют 1-гидроксибензотриазол (13,44 г) и 4-метилморфолин (11,5 мл). К реакционной смеси добавляют по каплям раствор N-(бензилоксикарбонил}1=валина (25,0 г) в дихлорметане (200 мл).

После окончания добавления смесь подогревают до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 0,5 ч, а затем охлаждают до 10 С. К перемешиваемой реакционной смеси по каплям добавляют смесь хлоргидрата N-метил-О-метил гидроксиламина (9,7 r) и 4-метилморфолина (11,5 мл) в дихлорметане (150 мл). Реакционную смесь подогревают до температуры окружающей среды при перемешивании в течение ночи. Смесь упаривают и остаток распределяют между водой и этилацетатом. Органический слой промывают (10 -ной HCI, насыщенным бикарбонатом натрия, солевым раствором), сушат над сульфатом магния, упаривают сушат в течение ночи под глубоким вакуумом, получая продукт в виде смолы (26,25 r), которая затвердевает в морозильнике, ТСХ, Rf = 0,57, xnopoPop :ìåтанол (40:1), МС, м/е = 295 (М+1), 234, 187, 162, 152, 119.

Ь. /S/-1-/2-Бензотиазолил/2-бензилокси ка рбон ил /амина-3-метил-1-бутан ол.

Сухой эфир (5 мл) охлаждают до -78 С и добавляют н-бутиллитий (6,0 мл 2,54 М раствора в гексане). Быстро по каплям добавляют раствор бензотиазола (1,83 г) в сухом эфире (15 мл). Перемешивание при -78ОС продолжают в течение 10 мин, Через тонкую трубочку (канюлю) добавляют эфирный раствор (10 мл) амида, полученного согласно процедуре примера 5а, и использованного без дополнительной очистки, (2,00 г) и реакционную смесь оставляют подогреваться до

30 С при перемешивании в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают путем выливания ее в насыщенный NH

Очистка с помощью мгновенной хроматографии, элюирование смесью гексан:этилацетат (10:1), дают продукт в виде желтого стекла (0,98 г) ТСХ, Rf = 0,67, гексан:этилацетат (2:1). МС, м/е = 368 (М+1), 206, 191, 162, 135, 91 (основание), с. 2-Амино-1-/2-бензотиазолил/-3-метил-1-бутан он, Вещество, получанное согласно процедуре примера 5Ь (0,94 г), растворяют в смеси дихлорметана (20 мл) и анизола (1 мл) в атмосфере азота. Добавляют трифторметансульфокислоту (1 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин. Реакционную смесь разбавляют диклорметаном и экстрагируют водой. Водные экстракты промывают дихлорметаном, доводят до рН 8 насыщенным бикарбонатом натрия и экстрагируют дихлорметаном, Органический раствор сушат сульфатом натрия и упаривают, получая желтое масло (0,50 г). ТСХ, Rf =

0,36, гексан:этилацетат (2:1).

d. Бензилоксикарбонил-L-валил-N-/1(2-бензотиазолил)-ка рбонил-2-метилпропил/-1=п ролинамид.

Дихлорметановый раствор материала, полученного согласно процедуре примера

5с и использованного без дополнительной очистки (0,5 г), 1-гидроксибензотриазола (0,58 г) и бензилоксикарбонил-L-валил-!пролина (0,74 г) обрабатывают хлоргидратом 1-/3-диметиламинопро-пил/-3-этилкарбодиимида (0,47 г) и реакционную смесь перемешивают в атмосфере азота в течение

15 ч. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном, промывают (насыщенным бикарбонатом натрия. 10 -ный HCI), сушат сульфатом натрия и упаривают, получая желтое масло (1,48 r), ТСХ, Rf = 0,39, хлороформ:метанол (50:1), МС, м/е = 565 (М+1, е. 1 -Валил-N-/1-(2-бензотиазолил)карбонил-2-метил-пропил/-L-пролинамид.

Амид, полученный в соответствии с процедурой примера 5d и использующийся без дополнительной очистки (1,20 г), подвергают реакции снятия защитной группы с использованием процедуры аналогичной процедуре примера 5с, получая продукт в виде масла (0,34 г, 37 ), ТСХ, Rf = 0,34, хлороформ:метанол (10:1).

/4-/(4-Хлорфенил)сул ьфониламинокарбонил/бензоил-L-валил-N- /1-(2-бензотиазолил)карбонил-2-метил и ро пил/-1=про линамид (формула I, гетероцикл, содержащий Х, N и С1 = 2-6ензотиаэолил, R< = Вг (302)

NH СО-, R2 = 4-CIC6H4).

Амин, полученный в соответствии с процедурой примера 5е и использующийся без дополнительной очистки {0,34 r), 1-гидроксибензотриазол (0,21 г) и 4-/(4-хлорфенил)сульфониламинокарбонил/бензойную кислоту (0,27 г) объединяют в дихлорметане (12 мл), суспензию обрабатывают хлоргидратом 1-/3-диметиламиноп ропил/-3-этилкарбодиимида (0,17 r), Перемешивание продолжают в течение 7,5 ч, Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и промывают (насыщенным бикарбонатом натрия, 107ь-ной HCI), сушат сульфатом натрия и упаривают, получая маслянистую пену. Очи15

1678207

16 стка с помощью мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью гексан;этилацетат:уксусная кислота (50:50:1,5) дает продукт в виде белого твердого вещества {0,32 г), ТСХ, Rf = 0,29, гексаны:этилацетата;уксусная кислота (50:50:1,5) HPLC, тр =

26, Cot А, FR = 2, вода:ацетонитрил:тетрагидрофуран:трифторуксусная кислота (55:35:15:0,1), М С, м/е = 752 (М+1), 423, 421, 393, 377, 342, 332,315, 314 (основание), 313, 312, 136.

Вычислено, %: С 57,07, Н 5,13, N 9,09

С36Н38С! К707$2 ОЗСНзСООН

Найдено, %; С 57,32, Н 5,45, N 8,76;

Пример 6, /S/-/4-/(4-Хлорфенил/сульфониламинокарбонил/ бензоилl : валил-N-/2-метил-1-(2-тиазолил)карбонил пропил/-L- пролинамид (формула f, гетероцикл, содержащий X, N u Q = 2-тиазолил,. R1

= Я2 ($02} КН СО-, R2 =4-С1С6Н4). а. /Я/-2-/Бензилоксикарбонил/амино,3-метил-.1-/2-тиазолил/-1- бутанон., К охлажденному -35 Ñ раствору тиазола (1,23 мл) в сухом тетрагидрофуране (40 мл) добавляют н-бутиллитий (6,6 мл 2,18 М раствора в гексане) на протяжении 3 мин.

Темно-коричневую реакционную смесь перемешивают в температурном интервале от

-30 до -25 С в течение 10 мин, Быстро на протяжении 1 мин добавляют раствор вещесгеа, полученного согласно методике примера 5а и использующегося без дополнительной очистки (1,7 r), в сухом тетрагидрофуране (15 мл). Перемешивание при -30 С продолжают в течение 15 мин.

Смесь резко охлаждают выливанием ее в насыщенный хлористый аммоний(100 мл) и органические вещества экстрагируют этилацетатом. Экстракты промывают насы.щенным бикарбонатом натрия, сушат сульфатом натрия и упаривают, получая коричневое масло. Очистка с помощью мгновенной хроматографии с использованием . злюирования смесью гексан;этилацетат (2:1) дает продукт в виде желтого масла (1,81 г, 98%) ТСХ, Rf = 0,45, гексан:этилацетат (2;1), МС, м/е = 319 (М+1), основание), 275.

b. /S/-2-Амино-3-метил-1-(2-тиазолил}1-бутанон.

Кетон, полученный .в соответствии с процедурой примера 6а (1.8 г}, растворяют в дихлорметане (30 мл) и обрабатывают трифторметансульфокислотой (2,5.мл) в виде одной порции, реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 5 мин. Смесь разбавляют дихлорметаном и экстрагируют водой, Водную фазу доводят до основной величины рН

25 желтое масло (2,5 r). Очистка с помощью

30 МС, м/е = 515 (М+1, основание), 407, 331, 282; 91.

Вычислено, %; С 59,6Ф, Н 6,74, К 10,70

40

55 мид (формула 1, гетероцикл, содержащий Х, 5

15 с помощью насыщенного бикарбоната натрия, а затем экстрагируют дихлорметаном.

Экстракты сушат сульфатом натрия и упаривают, получая продукт в виде темно-желтого масла (0,78 r, 75%), TCX, Rf = 0,7, хлороформ:метанол (10:1), МС, м/е = 185 (М+1, основание) 167, 140, с. /$/-Бензилоксикарбонил-L-валил-К/2-метил-1-L-/2-тиазолил/ карбонилпроп ил К-и рал инамид.

Аминокетон, полученный в соответствии с процедурой примера 6b (0,73 г), растворяют в дихлорметане (25 мл).

Последовательно к раствору. добавляют бензилоксикарбонил-L-валил-L-пролин (1,38 r), 1-гидроксибензотриазол (1,07 г) и хлоргидрат 1-/3-диметиламинопропил/-3этилкарбодиимид (0,76 г). Смесь перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды в атмосфере азота, Ре акционную смесь разбавляют дихлорметаном, промывают (насыщенным бикарбонатом натрия, 10%-ной HCL), сушат сульфатом натрия и упаривают, получая мгновенной хроматографии с использованием элюирования смесью гексан:этилацетат (1;1) дает продукт в виде твердой пены (1,6.г), TCX, Rf = 0,3, гексан:этилацетат (1:1), Найдено, О : С 59,56, Н 6,54, N 10,42, б,. IS/-1 -Валил-К-/2-метил-1-/2-тиазолил/карбонилпропил/-L-npoauH-аминтриф торметансульфокислотная соль, .Кетон, полученный согласно примеру Gc (0,51 г), растворяют в дихлорметане (15 мл) и обрабатывают трифторметансульфокислотой (0,44 мл) в аиде одной порции. Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей средьг в течение

15 мин. Упаривание и сушка в глубоком вакууме дают белую смолу (1,17 г, более чем

100%). Вес неочищенного продукта, составляющий избыток по отношению к 100%-му выходу, предписывается трифторметансул ьфокислоте. е. /8/-/4-/(4-Хлорфенил)сул ьфониламинокарбонил/бензоил-L-валил-N- /2-метил1-(2-тиазолил)карбонилпропил/-L-пролина

N и Q=2-тиазолил, R) = Rz(S02) NH CO-, Rz

= 4-CIC6H4).

Неочищенный аминокетон, полученный согласно процедуре примера 6d и использующийся без дополнительной очистки (0,13

1678207

18 г), 4-/(4-хлорфенил)сульфонаминокарбонил/бензойную кислоту (0,34 r) и 4-метилморфолин (0,59 мл) растворяют в тетрагидрофуране и смесь обрабатывают хлоргидратом 1-/3-диметиламинопропил/3-этил карбодиимида. Смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере азота, Упаривание дает остаток, который распределяют между водой и этилацетатом, Органическую фазу промывают (10%-ной HCI, водой, солевым раствором), сушат сульфатом магния и упаривают. Мгновенная хроматография, элюирование смесью хлороформ:л етанол:уксусная кислота (100:2,5:0,5) дают продукт в виде белой пены (0,50 г), Еще одна очистка (та же система растворителей. что использовалась выше) дает целевой продукт в виде белой пены (0,43 r), ТСХ, Rf =

0,35, хлороформ;метанол:уксусная кислота (100:2,5:0,5), М С, м/е = 702 (35С1- М+1), 283, 282 (основание), 120, HPLC- tq = 8,54, Col А, FR = 2, вода,ацетонитрил:тетрагидрофуран:трифторуксусная кислота (55:35:15:0,1).

Пример 7. /S/-(4-(N -/(4-Хлорфенил)сул ьфонил/уреидо/бензоил/-1 -валил

-N- /1-/5-(метоксикарбонил)бензоксазол-2ил/карбонил-2-метилпропил)-! - .пролинамид (формула I, гетероцикл, содержащий Х, N, Q = 5-/метоксикарбонил/-бензоксазол-2ил, В1= R2 (ЯОг) NH CO, NH, Вг =4-С!СгН4). а. /5/-! -Валил-N-/1-/5-(метоксикарбонил)бензоксазол-2-ил/карбо- нил-2-метилпропил/-1 -пролинамид, К перемешиваемому раствору продукта примера 2b (1,00 мг) в метиленхлориде (8 мл) в атмосфере азота добавляют по каплям трифторметансульфокислоту (0,73 мл). Спустя 10 мин реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают три раза дистиллированной водой. Величину рН раствора доводят до 8 с помощью добавления раствора насыщенного бикарбоната натрия (25 мл). Основной раствор энергично экстрагируют дихлорметаном 6 раз. К получающемуся в результате водному слою добавляют хлористый натрий (10 г) и смесь экстрагируют дважды дихлорметаном. Все органические экстракты объединяют, сушат сульфатом натрия и упаривают, получая продукт(620 мг), ТСХ, Rf = 0,20, метанол:хлороформ (5:95).

b. /Я /-/4-/N -/(4-Хлорфенил/сульфонил/уреидо/бензоил/-L-валил-N- /1-/5(метоксикарбонил)бензоксазол-2-ил/-карбо нил-2-метилпропил/- 1=пролинамид (формула I, гетероцикл, содержащий X N u Q =

5-/метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил, Я1

= Вг (Зог) NH СО МН, Вг = С1сбн4), Хлоргидрат 1-/3-диметиламиноп ропил/3-этилкарбодиимида (100 мг) добавля25 Найдено, %: С 51,40, Н 4,97, N 9,48.

Пример 8. /4-/(ТрИфторметилсульфонил/аминс!бензоил -L-валил-N-/1-/5-метокси30

35 в атмосфере азота. Реакционную смесь пе40 ремешивают в течение 1 ч при 0 С, затем

55 ют к раствору продукта примера 7а (225 Mr), 1-гидрооксибензотриазола (70 л г) и 4-IN/(4-хлорфенил/сульфонил/ уреидо/-бензойной кислоты (190 мг) в дихлорметане (3 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают (1 н. HCI три раза), солевым раствором), сушат над сульфатом магния и упаривают.

Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии, при элюировании смесью ацетон:метиленхлорид:уксуснаая кислота (10:90:1), получая целевое соединение (271 мг)в виде твердого вещества, ТСХ, Rf = 0,14, ацетон;дихлорл етан:уксусная кислота (20:80;1), HPLC, 1я = 13,47, Со! А, FR =- 2, вода;ацетонитрил:тетрагидрофуран:трифторуксусная кислота (55:35:15:0,1), МС, м/е = 699, 374, 245, 219, 197, 178, 120, Вычислено, %; С 51,55, Н 5,62, N 9,15.

C38H44CIN601oS 3,7Нг0 0,70 СНзС0гН карбонил/бензоксазол-2-ил/ карбонил-2-ме тиленпропил/-L- пролинамид (формула 1, гстероцикл, содержащий Х, N u Q =- 5-(метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил, R> =- С Гз (50г) NH-). а, Этил 4-//трифторметилсульфонил/амина/бензоат.

Ангидрид трифторметансульфокислоты (4,1 мл) добавляют по каплям к предварительно охлажденному (О С) раствору атил-паминобензоата (3,3 г) в дихлорметане (50 мл) оставляют подогреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 1 ч.

После того, как реакционную смесь упарили, к остатку добавляют этилацетат (125 мг) и полученный в результате органический раствор промывают(1 H. HCI, затем солевым раствором), сушат сульфатом магния и упаривают. Остаток очищают с помощью мгновенной хроматографии с элюированием смесью хлороформ:метанол (95:5), получая продукт ввиде белого порошка (1,,27 г), ТСХ, Rf = 0,37, хлороформ;метанол (90:10), b. 4-//(Трифто рметил сул ь фон ил)ам ино/бензойная кислота.

Раствор 1 н, NaOH (8,4 мл) добавляют к перемешиваемому раствору продукта примера 8а (1,25 г) в метаноле (25 мл). Добавляют воду (2 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. После отгонки метанола под вакуумом водоструйного

1678207

20 насоса полученный водный остаток разбавляют водой (20 мл). Водный раствор промывают этилацетатом, подкисляют до рН 2 с помощью 1 н. HCI и экстрагируют этилацетатом (общее количество 40 мл). Органическую фазу сушат сульфатом магния и упаривают, получая продукт в виде белого порошка (1,05 r), ТСХ, Rf = 0,4, хлороформ;метанол:уксусная кислота (96:4:0,2). с. /S/-1=Валил-N-/1-/5-(метоксикарбонил)бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метилп ропил/-L-пролинамид.

К перемешиваемому раствору продукта примера 2Ь (750 мг) в метиленхлориде (5 мл) в атмосфере азота добавляют по каплям трифторметансульфокислоту (0,53 мл). Спустя 20 мин реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают три раза дистиллированной водой, К объединенным водным слоям добавляют хлористый натрий (5

r) и полученный раствор доводят до рН 8 с помощью добавления раствора насыщенного бикарбоната натрия (20 мл). Основной раствор энергично экстрэгируют дихлорметаном восемь раз, Органические слои объединяют, сушат сульфатом натрия и упаривают, получая продукт (420 мг), ТСХ, Rf

= 0,28, метанол: хлороформ (5:95).

d. /4-//Трифторметилсульфонил/амино/бензоил/-L-валил-N-/1-/5- (метоксикарбонил)бензоксазол-2-ил/карбонил-2-метил . пропил/-1 - пролинамид (формула I, гетероцикл, содержащий Х, N u Q = 5-/метоксикарбонил/бензоксазол-2-ил, R1 = СГз(50г) NH-).

Хлоргидрат 1-/3-диметиламинопропил/-3-этилкарбодиимида (240 мг) добавляют к раствору продукта примера Sc (420 мг), 4-диметиламинопиридина (110 мг) и 4/трифторметилсульфонил/-амино/-бензой ной кислоты (340 мг) в тетрагидрофуране (3 мл) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают (1 í. HCI три раза, солевым раствором), сушат сульфатом магния и упаривают. Неочищенный продукт очищают с помощью мгновенной хроматографии, при элюировании смесью метанол:хлороформ:уксусная кислота (20:800:1), получая целевое соединения (330 мг) в виде тьердого вещества, ТСХ, Rf 0,50, метанол:хлороформ:уксусная кислоты (5:95:1), НР(С, tR = 15,61, Coi А, вода:ацетонитрил:тетрагидрофуран:уксус ная кислота(55:35:15:0,1), FR -2, МС, м/е. 752 (M+29), 724 (М+1), 706, 374, 356, 351, 323.

Вычислено, $: C 51,57, Н 5,20, N 8,95.

СзгНуРзй ОвЯ 0,60 НгО 0,80 СНзСОгН

Найдено, ф,: С51,29, Н 5,07, N 8,97

Исследование биологической активности гетероциклических кетонов.

Силу действия соединений, полученных по предлагаемому способ, в качестве ингибиторов эластазы прежде всего определяют по способности соединений ингибировать действие лейкоцитарной эластазы человека (ЛЭЧ) на пептидном субстрате низкого молекулярного веса. Силу ингибитора или его активность оценивают с помощью кинетического определения константы диссоциации (К1) комплекса, образующегося при взаимодействии ингибитора с ЛЭЧ. Используемым субстратом был анилид метоксисукцинил-аланил-пролилвалин-п-нитроанилид.

В исследованиях используется фермент

ЛЗЧ фирмы Зластитин Продактс, Сент-Луис, Миссури или очищенный согласно методике Vlscarello, ВЯ. и др.

С использованием очищенной ЛЗЧ стандартную степень или скорость получения и-нитроаналина измеряют при 25 С спектрофотометрически в видимом спектре при 410 нм по автоматическим данным, получаемым от спектрофотометра Сагу 210 (фирма Вариан Ассошиэйтс). Реакции инициируют с помощью инъекции 10 мкл раствора ЛЭЧ в 3-миллилитровую кювету, содержащую 2,89 мл буфера (10-миллимолярный фосфат натрия, 500-миллимолярный

NaCI, рН 7,6), 50 мкл раствора субстрата в

ДМСО и 50 мкл ДМСО. Начальные скорости стабильной реакции получения и-нитроанилина вычисляют с помощью приведения в соответствии экспериментальных данных с линейной зависимостью от времени по наименьшим линейным квадратам. Данная скорость, определенная без добавления ингибитора, используется в качестве стандарта при вычислении величин Kt ингибитора.

Обычно гетероциклические кетоны по изобретению не являются "медленно связывающими" ингибиторами ЛЭЧ; однако, если обнаруживается, что гетероциклические кетоны являются "медленно связывающими" ингибиторами ЛЗЧ, осуществляются специальные методы анализа для точного определения величин Kl no их ингибированию Л ЗЧ.

В типичном эксперименте в 3-миллилетровую кювету добавляют 2,89 мл буфера (10миллимолярный фосфат натрия, 500-миллимолярный хлористый натрий, рН

7,6), 50 мкл раствора ингибитора в ДМСО и

50 мкл раствора субстрата в ДМСО. Кювету закупоривают, переворачивают несколько раз для перемешивания ее содержимого и выдерживают в спектрофотометре при

25 С. По истечении 5 мин (за это время реакционный раствор достигает термического равновесия) в кювету для инициирования

22

21

1678207 реакции добавляют 10 мкл исходного раствора фермента. Проводят дву- или трехкратное повторение опытов при нулевой концентрации ингибитора и по крайней мере при трех ненулевых концентрациях ингибитора. Величины Ki вычисляют в соответствии с методикой ИИНатз and

Morrison, Величины Ki для гетероциклических кетонов формулы 1;

Величина Ki для известных трифторметилкетозамещенных производных ди-, трии тетрапептидов, являющихся ингибиторами ЛЭЧ, составляет меньше 10

Животные модели.

Животные модели эмфиэемы включают внутритрахеальное (и.т.) введение эластолитической протеазы для того, чтобы вызвать медленно прогрессирующее деструктивное повреждение легких. Эти повреждения обычно оценивают по истечении от нескольких недель до нескольких месяцев после начального инсульта, Однако эти протеазы также вызывают повреждения, которые становятся очевидными в первые несколько часов. Раннее повреждение сначала носит характер кровотечения, прогрессирует до воспалительного повреждения к концу первых 24 ч и достигает полноты в первую неделю после инсульта. Чтобы воспользоваться результатами данного раннего повреждения используют следующую модель, Хомячков сначала слегка анестезируют бревиталом. Затем непосредственно в трахеи вводят фосфатный буферированный физиологический раствор (P 8 S) р Н ?,4 (в чистом виде или содержащий 400 мкг ЛЭЧ).

Через 24 ч животных умерщвляют, легкие удаляют и тщательно освобождают от посторонней ткани. После определения сырого веса легких легкие промывают PBS u определяют общее количество выделенных красных и белых кровяных телец. После введение ЛЭЧ величины сырого веса легких, общее количество красных кровяных телец и общее число белых кровяных телец увеличиваются в зависимости от дозы. Соединения, которые являются эффективными ингибиторами эластазы, могут предотвращать или снижать до предела серьезность повреждений, вызываемых ферментом, приводя в результате к более низкому сырому весу легких и к пониженным величинам общего числа кровяных телец (красных и белых) по сравнению с введением одной ЛЭЧ, Соединения могут оцениваться с помощью введения или их одновременно или в различные периоды времени до введения ЛЭЧ для определения их полезности в предотвращении повреждений от ЛЭЧ. Соединения, полученные по предлагаемому способу. дают статистически значительные снижения сырого веса легких и общего числа телец по отношению к введению одного ЛЭЧ.

Как показали опыты, соединения по изобретению проявляли активность по крайней мере в одном из испытаний, описанных выше. Однако не всегда наблюдалась прямая корреляция между активностью соединений. величины К которых измерялись в испытании по измерению ингибирования, и пониженными величинами общего числа телец и сырого веса легких по отношению к введению одной ЛЭЧ, полученными в испытании с животной моделью. Кроме того, в опыте с животной моделью не было замечено никаких явных признаков острой токсичности.

Формула изобретения

Способ получения гетероциклических кетонов формулы I

О О

И N, В С-N+ — N-- N Q

1 —, — i Хб

Н О H О. где В1 — группа формулы Rz — SOpNHCO-, В

SOzNHCONH- или СРзЗО МН-, где Rz — хлорфенил; Х вЂ” кислород или сера;

Q — о-фенилен, незамещеннь|й или замещенный гидроксигруппой или (Ci-Ñ4)-алкоксикарбонилом, или Q-цис-винилен, о т л ич а ю шийся тем, что кислоту формулы i! я, (i i) -соон гле К1 имеет укаэанные значения, подвергают взаимодействию с аминокетоном формулы Ill

1678207

Приоритет по признакам

Составитель Н.Капитанова

Редактор Л,Веселовская Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор А.Осауленко

Заказ 3125 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР.

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

11,05.87 при и — группа формулы  —

SG2NHCG- или йг SOzNHCONH-, Rz — хлорфенил; Х вЂ” кислород или сера; Q — о-фенилен, незамещенный или замещенный гидроксигруппой или (С -Ca)-алкоксикарбонилом, или Q-цис-винилен.

11.02.88 и ри В1 — СРэ302ЙН; Х - кислород или сера; Q — о-фенилен, незамещенный или замещенный гидрокси груп пой или (С1-С4)-алкоксикарбонилом, или Q-цис-винилен,