Способ определения личиночной диапаузы у мух
Изобретение относится к разведению насекомых, в частности к способам определения физиологического состояния насекомых. Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса. Определение диапаузы проводят путем определения концентрации гемоцитов в гемолимфе насекомых. Концентрация, превышающая 15 тыс. кл/мм<SP POS="POST">3</SP>, свидетельствует об отсутствии либо о прекращении диапаузы. При концентрации менее 9 тыс. кл/мм<SP POS="POST">3</SP> для установления наличия диапаузы изучаемых насекомых нагревают путем погружения в воду и по увеличению концентрации гемоцитов в 2 - 3 раза судят о наличии диапаузы. Способ дает количественную характеристику диапаузы у мух, обеспечивает резкое сокращение затрат времени до 1 - 2 ч на определение диапаузы, упрощает процесс путем исключения необходимости использования сложных технических средств. 3 табл.
СОВХОЗ СОВЕ ТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
nI1s А 01 К 67/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4143780/15 (22) 04,11.87 (46) 23.08,91. Бюл. M 31 (71) Зоологический институт АН СССР (72) Д, Г,Черногуз (53) 632.093(088.8)(56) Виноградова Е, Б. Мясная мука
Calllphora viclno —. модельный объект энтомологических и физиологических исследований. — Л.: Наука, 1984, с.44. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИЧИНОЧНОЙ ДИАПАУЗЬ! У MYX (57) Изобретение относится к разведению насекомых, в частности к способам определения физиологического состояния насекомых, Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса. ОпредеИзобретение относится к разведению насекомых. в частности к способам определения физиологического состояния насекомых.
Цель изобретения — упрощение и ускорение процесса определения.
Способ осуществля ют следующим образом, Для получения пробы кутикулу личинки надрезают и вытекающей гемолимфой заполняют лейкоцитарный меланжер до метки
0,5. При недостаточном объеме гемолимфы, полученной из одной особи, для получения пробы используют несколько личинок. Затем пробы разбавляют до метки 11 1ф>-ным раствором уксусной кислоты в физиологическом растворе для Calli phora следующего состава, г: NaCI 8,86, KCI 2.86, CaClz 1,13, глюкоза 9,72, дистиллированная вода до 1 л, Заполненный меланмер встряхивают в те„„59„„1671211 А1 ление диапаузы проводят путем определения концентрации гемоцитов в гемолимфе насекомых. Концентрация, превышающая
15 тыс. кл, мм, свидетельствует об отсутствии либо о прекращении диапауэы. При концентрации менее 9 тыс. кл, 1 мм для установления наличия диапаузы изучаемых насекомых нагревают путем погружения в воду и по увеличению концентрации гемоцитов в 2 — 3 раза судят о наличии диапаузы.
Способ дает. количественную характеристику диапаузы у мух, обеспечивает резкое сокращение затрат времени до 1-2 ч на определение диапаузы, упрощает процесс путем исключения необходимости использования сложных технических средств.
3 табл. чение 1 мин, затем выпускают первые две капли и третьей каплей разведенной пробы заполняют счетную камеру с сеткой Горяева, После оседания клеток на дно камеры производят их подсчет на площади 1 мм с помощью микроскопа, а затем определяют расчетную концентрацию гемоцитов в 1 мм гемолимфы . При необходимости личинки перед получением пробы гемолимфы нагревают путем погружения в горячую воду при
60 C на 2 мин. Для достоверного определения средней концентрации гемоцитов достаточно 5-10 параллельных измерений.
Для формирования диапаузы личинки выкармливают мясом и содержат в стеклянных банках с влажными опилками при 12 С и 12-часовом освещении. Диапаузирующие личинки для холодовой сенсибилизации содержат при 6+ 1 С в течение 3 мес, а затем
1671211
Таблица 1 переносят на реактивацию в исходные условия. Для получения бездиапаузного развития личинки содержат при 20 С.
В табл.1 дана зависимость изменений концентрации гемоцитов в гемолимфе
С.vlclna от возраста особей.
Из табл.1 видно. что если при бездиапаузном развитии (примеры 1-8) концентрация гемоцитов возрастает до 20-24 тыс. клеток в 1 мм, а затем в ходе окукливания резко падает, то при наступлении диапаузы (примеры 9-19) она остается примерно на одном уровне в пределах 5 — 9 тыс, клеток в
1 мм . Однако начиная с 16-ro дня развития нагрев перед получением пробы гемолимфы (примеры 20 — 30) вызывает у личинок, детермированных к диапаузе, повышение концентрации гемоцитов до 15-18 тыс. клеток в 1 мм, т.е. в 2,1 — 2,9 раэ по з сравнению с необработанными особями, что свидетельствует о наступлении диапаузы.
В табл.2 показано изменение концентрации гемоцитов при прекращении диапауэы у личинок, прошедших холодовую сенсибилизацию при 6 С и перенесенных на реактивацию в 12 С (примеры 31 — 39).
Видно, что по мере реакгивации концентрация гемоцитов в гемолимфе необработанных особей повышается до уровня концентрации у особей, которые были нагреты пред получением пробы, а затем падает аналогично тому. как это происходит при бездиапаузном развитии, Таким образом, у необработанных особей величина концентрации гемоцитов, которая превышает 15тыс. клеток в 1ммз, свидетельствует либо от отсутствии. либо о прекращении диапауэы.
В табл,З приведено изменение концентрации гемоцитов о гемолимфе при прекращении диа паузы после холодовой сенсибилизации у личинок, перенесенных
5 иэ 6 в 12 С, т.е. оптимальная температура нагрева насекомых.
Выбор интервала температуры, при ко, торой происходит нагрев личинок перед получением пробы гемолимфы, обусловлен
10 тем, что при нагреве ниже 55 С повышение концентрации гемоцитов носит временный характер, быстро возвращаясь к исходному уровню после прекращения нагрева (табл,3). При температуре более 60ОС резко
15 увеличивается число неклеточных объектов, затрудняющих подсчет гемоцитов. При нагреве в интервале температуры 56-60 С повышение концентрации гемоцитов сохраняется в течение продолжительного
20 времени после прекращения нагрева, а количестBQ неклеточн ых объектов незначительно, Формула изобретения
Способ определения личиночной диа25 паузы у мух, включающий изучение физиологического состояния насекомых, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса, изучение физиологического состояния насекомых проводят пу30 тем определения концентрации гемоцитов в гемолимфе насекомых, при этом при концентоации, превышающей 15 тыс. клеток в
1 мм, судят об отсутствии либо прекращении диапауэы, а при концентрации менее 9
35 тыс. клеток в 1 мм для установления нализ чия диапаузы изучаемых насекомых нагревают путем погружения в воду при 55-60 С на 2-4 мин и по увеличению концентрации гемоцитов в 2-3 раза судят о наличии диа40 паузы.
1671211
Продолжение табл. 1
Нет
Да
1,7
1.4
1,4
1.2
2,4
2,4
2,9
2,7
23
9
11
12
13
14
16
17
18
19
21
22
23
24
26
27
28
29
11
12
13
14
16.
17
18
19
42
11
12
13
14
16
17
18
19
С иапа зой
Я=У
12
11
16
6
12
5
12
16
13
13
27
22
18
5
4533
4066
4211
5782
6588
6367
5717
7567
5563
5908
5116
6067
15807
15236
15434
17743
23,6
28.0
24,7
20,1
14,4
12,2
3.7
10,5
12,3
9,6
6.7
21,8
14,6
13,8
14.3
18,3
7,8
8,5
6,1
6,6
13,8
4,3
Таблица 2
1671211
Таблица 3
П р и ме ч а н и е . Прочие условия проведения примеров аналогичны условиям примера 1.
Составитель А.Сафонкин
Редактор Н.Лазаренко Техред М. Моргентал Корректор О.Кравцова
Заказ 2780 Тираж 361 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035. Москва. Ж-35. Раушская наб„4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент". r, Ужгород, ул.Гагарина, 101
