Способ измерения уровня амитриптилина в сыворотке крови радиорецепторным методом

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

СООЗ СОВЕТСКИХ

РЕСПУБЛИК ае (в (gl)5 С 01 N 33/48

ОПИОАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОЬЮ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ЖНРЫТИЯМ

flPH ГКНТ СССР (21) 4351819/14 (22) 28.12 ° 87 (46) 15.05.91. Бюл. Л". 18 (71) Институт клинической психиатрии

Всесоюзного научного центра психического здоровья АМН СССР (72) А.Г.Мухин и Н.Д.Чекалина (53) 612.015 (088.8) (56) Патент США Р 4299813, кл. G 01 N 33/48, 1979.

Пзобретение относится к медицине и биологии, в частности к биологической химии, касается способа измерения уровня амитриптилина в биологических жидкостях, и может быть использовано в лечебной практике для проведения лекарственного мониторинга путем определения в крови и иных биологических жидкостях концентраций амитриптилина и других антидепрессантов и лекарственных средств, имеющих сродство к М-холинорецепторам.

Цель изобретения вЂ” повьппение чувствительности.

Способ осуществляют следующим образом.

Для анализа берут рецепторный материал, содержащий М-холинорецепторы (в качестве источника рецелторного материала используют хвостатые ядра бычьего мозг1), их гомогенизируют в

40 объемах холодного трис-НС1 буфер

2 (54) СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ УРОВНЯ АМИТРИПТИЛИНА В СМВОРОТКЕ КРОВИ РАДИОРЕЦЕПТОРНЬМ МЕТОДОМ (57) Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к биологической химии. Цель изобретения вЂ” повышение чувствительности определения амитриптилина вЂ” достигается за счет ° ,проведения последовательной инкубации ,рецепторного материала с радиоактивным лигандом в два этапа при 23-25 С.

Способ дает увеличение чувствительности в 8-14 раз по сравнению с прототипом. с рН 7,4 с использованием гомогениза-, 1t тора типа Ultra вЂ” Turrax" при макси- Д мальной скорости в течение 40 с. Гомогенат центрифугируют при 30000 g в о течение ЭО мин при 4 С, Супернатант сливают, осадок ресуспендируют в

40 объемах буфера и повторяют процедуру гомогенизации и центрифугирования еще два раза в тех же условиях.

Конечный осадок ресуспендируют в

10 объемах трис-НС1 буфера с использованием гомогенизатора.

Для измерения уровня амитриптилина в сыворотке используют стандарты нерадиоактивного амитриптилина. Из исходного 8 10" !у раствора амитриг тилина в 50 мМ фосфатном буфере с рН 7,4 путем разведений в том же буфере готовят следующие стандарты: 8 ° 10

2ю5 10 в 1 10 э 5 10 в 2э5 1О э 1"

>10 М растворы амнтриптилина.

1649430

Формула изобретения

Составитель С.Рыбалкин

Редактор Т.Лаэоренко Техред И,Иоргентал КорректорЛ.Латай

Заказ 1518

Тираж 417

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Ярошзводстзенно-издательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина, 101

В каче с т ве меч е ног о лиг аида используют Н-QNB (квинуклидинил бензилат), 39 К/ммоль (фирма MEN).

Определение проводят в стеклянных пробирках при комнатной температуре

23-25 С. Смешивание ингредиентов инкубационной среды проводят последовательно в два этапа: .сначала в каждую пробирку вносят по 25 мкл стандарта и 400 мкл рецепторного материала, содержимое пробирок перемешивают на встряхивателе и инкубируют в течение

15-30 мин. После этого в пробирки добавляют по 50 мкл Н-QNB, пробы пере- 15 мешивают и инкубирают 60-65 с. После инкубации в каждую пробирку добавляют по 7 мл холодного фосфатного буфера с рН 7 ° 4. Содержимое пробирок тотчас фильтруют под вакуумом через

Mhatman GF/В фильтры. Фильтры промывают холодным буфером трижды по 7 мл и затем помещают в. сцинтилляционные флаконы, содержащие 8 мл сцинтиллято- ра "BRAY" ° Через 18 ч радиоактивность 25 просчитывают на жидкостном сцинтилляI ционном счетчике.

Процент ингибирования определяют в -в, как вЂ” вЂ” вЂ” вЂ” вЂ”, где Во и В; вЂ” величины

Ро.

30 связывания Н-лиганда в отсутствии и в присутствии амитриптилина.

По калибровочным кривым (зависимость ингибирования связывания HQNB от концентрации амитриптилина) определяют значение концентрации амитриптилина в сыворотке крови.

Способ дает увеличение чувствительности определения уровня амитриптилина в 8-14 раэ по сравнению с прототипами, Способ измерения уровня амитриптилина в сыворотке крови радиорецепторным методом, заключающийся в инкубации рецепторного материала с радиоактивным лигандом з Н-квинукпидинил бензилатом и исследуемым образцом, определение радиоактивности связанного с рецептором лиганда, расчете процента ингибирования связывания лиганда образцом и определении концентрации амитриптилина по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, инкубацию проводят в два этапа: вначале инкубация рецепторного материала с исследуемым образцом в течение 15-30 мин при 23-25 С, затем добавление радиоактивного лиганда и инкубация в течение 60-65 с.при той же температуре.

Способ измерения уровня амитриптилина в сыворотке крови радиорецепторным методом

Изобретение относится к медицине , в частности к стоматологии, и может быть использовано для определения начального кариеса зубов

Способ раннего прогнозирования течения острого вирусного гепатита в // 1645897

Изобретение относится к медицине , в частности к гастроэнтерологии

Устройство для обработки данных биохимических исследований // 1644167

Способ дифференциальной диагностики хронического пиелонефрита, хронического гломерулонефрита и мочекаменной болезни у больных с гематурией // 1644032

Изобретение относится к медицине , а именно нефрологии„ Цель изобретения - повышение точности способа

Способ диагностики двс - синдрома при острой пневмонии // 1644031

Изобретение относится к медицине , к разделу пульмонологии, и дает возможность раннего прогнозирования направленности реакции гемотоза при острой пневмонии и, следовательно, выбора адекватной тактики лечения, контроля применения препаратов, ока-v зывающих влияние и на систему гемостаза (гепарин, компламин, пенициллин , рисЬамицин и др.)

Способ прогнозирования течения рака ободочной кишки // 1644030

Способ определения механических свойств биологических мягких тканей // 1644029

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам оценки состояния биологических мягких тканей по их механическим характеристикам

Способ определения толерантности к этанолу у животных // 1642394

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть применено в практике наркологических, физиологических и патофизиологических лабораторий

Способ диагностики рефрактерной сердечной недостаточности // 1642393

Изобретение относится к кардиологии

Способ определения развития ложного сустава при переломе кости // 1642392

Изобретение относится к цине, в частности к травматологии, и может быть исполыоранэ ял костики начала развития ложного су с1-1 тава

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750