Штамм гриба aspergillus oryzae (анlвurg) сонn - продуцент ксиланазы

 

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой высокоактивный штамм гриба, синтезирующий ксиланазу. Цель изобретения - выделение более активного штамма гриба Aspergillus oryzae ВКМ Г-46Д - продуцента ксиланаз. Штамм выделен из проб, взятых с поверхности гниющих пней осины. Штамм может быть использован как активный продуцент для получения мультиэнзимного ферментного препарата и использования его в животноводстве для расщепления полисахидов одревесневших (лигнннфицирующих материалов, при производстве пива и различных соков из плодов и ягод, при экстракции из растительного сырья крахмала, белков, жиров,, эфирных масел и других веществ. Активность ксиланаэы в зависимости от источника углерода в культуральной жидкости после 3-4 суточного культивирования составляет 350-490 или 690-730 ед/мп. 1 табл. а $

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (щ)5 С 12 N 9/42,,@$14

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

Ао изОБРетениям и ОчнРытиям

flPH ГКНТ СССР (21) 4610007/13 (22) 02.09.88 (46) 15.04.91. Бюл. ¹ 14 . (71) Институт ботаники им. Н.Г.Холодного (72) M.A.Ùåðáàêoâ, Г.А. Бр унь и Л.Н.Налепина (53) 577. 15 (088.8) (56) Thermoascus anrantiacus. — Enzyme and Microb. Technol, 1987, 9, № 1, р. 1624.

Авторское свидетельство СССР

Р 1090713, кл. С 12 N 9/42, 1982. (54) 11ТАММ ГРИБА ASPERGILLUS ORYZAE (AHLBURG) СОНИ вЂ” ПРОДУЦБНТ КСИЛЛНАЗЫ (57) Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой высокоактивный штамм гриба, синтезирующий ксиланазу. Цель изобретения — выдеИзобретение относится к биотехнологии и касается высокоактивного .штамма гриба, способного синтезировать ксиланазу и амилазу для его использования в различных отраслях народного хозяйства.

Целью изобретения является выделение более активного штамма гриба

Aspergillus oryzae (Ahlburg) Cohn

BKM F- 46Ä, продуцента ксиланаз.

Цтамм мезофильного гриба А.ory зае — 46Д вццелен из проб, взятых с поверхности гниющих пней осины и

„„SU„„1641887 А 1 ление более активного штамма гриба

Aspergillus oryzae ВКМ Г-46P — продуцента ксиланаз. Итамм выделен иэ проб, взятых с поверхности гш ацих пней осины. Итамм может быть использован как активный продуцент для получения мультиэнзимного ферментного препарата и исгользования его в животноводстве для расщепления полисахидов одре веснев11>их (лигнинфицирующих) материалов, при производстве пива и различных соков из плодов и ягод, при экстракции из растительного сырья крахмала, белков, >киров„ эфирных масел и других веществ. Лктивность ксиланазы в зависимости от источника углерода в культуральной жидкости после 3-4 суточного. культивирования составляет 350-490 или

690-730 ед/мл. 1 табл. характеризуется следующими признаками.

Морфологические признаки, Колонии гриба на сусло-агаре в начале белые, затем постепенно становятся бледнозеленоватыми, с возрастом желтовато-. бурьпчи. Обратная сторона не окрашена.

Запах слабый, неопределенный. Колонии растут быстро достигают диамет» > о ра 45-50 мм через 7 сут при 2G С с вегетативным мицелием, большей частью погруженным и поверхностным воздушным.

1641887

1 ультуральные признаки .. Оптимальной средой для данного микроскопичесI кого гриба является сусло-агаровая r среда (7 по Баллингу) . Через 56 сут роста при 28 С на сусло-агароо вой среде: конидиальные головки диаметром

150-330 мк с конидиальными цепочками, расходящимися и рыхло прилегающи- 10 ми, конидиеносцы берут начало большей частью от глубинного мицелия, неокрашены, длиной 2-2,5 мм, постепенно увеличивающиеся в диаметре снизу 15 вверх от 4-6 до 12-25 мк со стенками относительно тонкими, шероховатыми, конечные вздутия овально шаровидные, р еже флажковидной формы, со стеригмами, покрывающими всю поверхность или верхние три четверти, часто тонкостенные, легко спадающие, диаметром 40-50 мк, стеригмы обычно однородные 1215 х 4-5 мк или двурядные, тогда первый ряд 10-12 > 4,5 мк, второй ряд

8-10 х 3-3,5 мк. Оба варианта встречаются у одного штамма и даже в одной головке, конидии большей частью шаровидные, гладкие, 4-7 мк в диаметре.

Очень молодые конидии грушевидные и эллипсоидные. Старые конидии обычно зеленовато-коричневых тонов: на мальц-агаре колонии растут бо35 лее быстро, чем на среде ЧапекаДокса, более рыхлые, с поверхностным мицелием, спороношение обильное, в молодой культуре преобладают желтые оттенки с возрастом желтовато-бурые.

Обратная сторона колонии слабо окрашена в желтовато-коричневый тон, на картофельно-глюкозной и картофельно-морковной агаризованной среде колонии растут быстрее, чем на среде 45

Чапека-Докса, но менее плотные, паутинистые, почти прозрачные слабоспорулирующие, бледно окрашенные.

Свет не имеет особого значения.

Развитие идет одинаково как в темI ноте, так и на рассеяном свету. Температура для развития .на плотной питательной среде, С: оптимальная 3035, максимальная 40, минимальная 10.

Физиолого-биохимические признаки. 55

Преимущественно аэроб, мезофил. Оптимальная температура роста на агазиФ рованной среде 30-35 С. Оптимум рН 4,5-5,0. Желатину разжижает при обильном росте мицелия со .спорообра зованием. Молоко сварачивает и пептонизирует °

Усвоение источников углерода. Использует арабинозу, глюкозу, мано-. зу, фруктозу, мальтозу, глицерин.

Слабо развивается на лактозе и раинозе. Не использует маннит, сорбит, инозит, рафинозу, инсулин, дульцит.

Образование органических кислот.

При выращивании гриба на средах, в состав которых входит салицин, арабиноза, глицерин, глюкоза и фруктоза, образуются органические кислоты.

Пример 1. Для выявления активной ксиланазы А.огу де -46Д культуру выращивают в колбах Эрленмейера (250-750 мл) на следующей питательной среде, мас. : NANO> 0,3, КН РО

0,2, MgS04 0,05, кукурузный экстракт

1, 5, кукурузные коч ерыжки 2, водопроводная вода до 1 л. Начальное рН среды 4,5, 5 О. Оптимальная температура роста при глубинном культивировании на качалке (200220 об/мин) 28-30 С.

Инокуляцию проводят 3-суточной культурой конидий гриба, предварительно выращенного на сусло-агаре, и культивируют в глубинных условиях

2 сут. Полученную культуру используют как расплодку для массового засева из расчета 5 . посевного материала на объем среды.

Продолжительность культивирования представлена в таблице и зависит от применяемого источника углерода (2-4 сут) .

Лучшим источником углерода для биосинтеза ксиланазы являются пшеничные отруби. Активность ксиланазы в фильтрате культуральной жидкости на данном субстрате равна 350-490 ед/мл после 3-4 сут выращивания. При.фракционировании культурального фильтрата этанолом активность препарата по ксиланазе составляет 60-70 тыс. ед/г, а по амилазе — 900 ед/г. Оптимальная температура гидролиэа фермента с субстратом при определении активности 45 С. Оптимальное рН фильтрата культуральной жидкости при осаждении этанолом 4-5, а его концентрация (оптимальная) 65-70%.

Пример 2. Выращивание

А. oryzae (Ahlburg) Coha-46 проведено на известной питательной среде

7 6 ной жидкости на 72 ч культивирования составила 690 ед/мп, а на 96 ч

730 ед/мп.

5 164188 следующего сос тана, мас. Х: NANO О, 3, КН РО 0,2, MgSO 7Н О 0,5, солодовые ростки 1,5, вода до 100 мп.

Условия культивирования те же, что описаны в примере 1. Активность ксиланазы определяли по той же методике и в тех же условиях как у известного штамма. При этом ксиланазная активность фильтрата культураль10

Формула изобретения штамм гриба Asper g i l lu s ory zae

F-46Д вЂ” продуцент ксиланазы.

Активность культурального фильтрата ксилианазы гриба A.oryzae-46Д на различнык источниках углерода (2%), ед. мп

Продолжительность к ул ьти вирования, ч

Виног- Фильтрорадные вальная выкимки бумага

Пшенич Кукуруз- Подсолные от- ная ко- нечная руби черыжка лузга

Древес- Пшеничные ная опилки солома

116 76 0 0 0

143 80 54 46 18

156 137 55 55 23

178 115 60 51 26

134

171

233

490

24

48

72

Составитель И.Привапова

Редактор Т.Лазоренко Техред М.Дццык Корректор, М. Демчик

Заказ 1126 Тираж 373 Подписное

ВНИИПК Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101