Способ оценки растений на устойчивость к фузариозу

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений. Цель изобретения - ускорение оценки и снижение трудоемкости процесса. Для оценки растений на устойчивость к фузариозу семена испытываемых образцов стерилизуют и проращивают в чашках Петри на фильтровальной бумаге. У проростков отделяют кончики корней длиной 3-5 мм и помещают их в мацерирующий раствор, содержащий ферменты: пектиназу 22,5-30,0 ед/мл

целлюлазу 2,5-5,0 ед./мл, хлористый кальций 5,0-5,5%

итаконовую кислоту 0,005-0,01% и воду. Материал инкубируют в темноте в течение 10-14 ч при 24±1°С. После инкубирования под микроскопом подсчитывают количество протопластов. В качестве стандартов используют сорта с известной степенью устойчивости. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 5 А 01 Н 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ к двторСком свиДктельСтв

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4478961/30-13 (22) 21.07.88 (46) 15.10.90. Бюл. № 38 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт кормов им. В.P. Вильямса (72) О.Ю. Мезенцева (53) 631 52(088.8), (56) Методические указания. Методы оценки устойчивости клевера лугового к грибным болезням. ВИЗР: Ленинград, 1986, с. 12. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ РАСТЕНИЙ НА

УСТОЙЧИВОСТЬ К ФУЗАРИОЗУ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений. Цель изобретения — ускорение оценки и снижение трудоемкости поИзобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений.

Цель изобретения — ускорение оценки и снижение трудоемкости процесса.

Способ осуществляют следующим образом.

Семена испытываемых образцов проращивают на фильтровальной бумаге, смоченной дистиллированной водой, в течение

1 — 2 сут при 24 С, отрезают кончики корней длиной 3 — 5 мм, разрезают их вдоль и помещают в мацерирующий раствор, содержащий, r нHа 11000 0 мMл р а cстTв оOр а : : п еeкKтTиHнHа з3а 00,,5 5— 1; целлюлаза 1,5 — 2; хлористый кальций (СаС4.6H O) 5,0 — 5,5 и итаконовая кислота

0,005 — 0,01. Материал инкубируют в темноте в течение 10 — 14 ч при 24 С. После инкубирования осторожно встряхивают и подсчитывают выделившиеся протопласты под микроскопом. По количеству изолированных протопластов судят о степени устойчивости к фузариозу. В качестве биологических стандартов используют образцы с известной иммунологической характеристикой. Наи„„Я0„„1598928 А 1 цесса. Для оценки растений на устойчивость к фузариозу семена испытываемых образцов стерилизуют и проращивают в чашках

Петри на фильтровальной бумаге. У проростков отделяют кончики корней длиной

3 — 5 мм и помещают их в мацерирующий раствор, содержащий ферменты: пектиназу

22,5 — 30,0 ед/мл; целлюлазу 2,5 — 5,0 ед/мл; хлористый кальций 5,0 — 5,5%, итаконовую кислоту 0,005 — 0,01% и воду. Материал инкубируют в темноте в течение 10 — 14 ч при 24<-1 С. После инкубирования под микроскопом подсчитывают количество про опластов. В качестве стандартов используют сорта с известной степенью устойчивости.

1 табл. большее количество протопластов выделяется у восприимчивых образцов, наименьшее — у устойчивых.

Учитывая, что активность ферментов бывает различной, в опыте целесообразно использовать только оптимальные значения их концентраций, а именно: целлюлазы

22,5 в 30,0 ед/мл, пектиназы — 2,5 — 5,0 ед/

/мл.

Пример. Оценку на устойчивость к фузариозу проводят на сортах клевера лугового — ВИК 7 (восприимчивый) и Московский 1 (устойчивый), и озимой пшеницы—

Безостая 1 (восприимчивый) и Мироновская 808 (устойчивый). Семена стерилизуют в течение 5 мин в 96%-ном этаноле и 0,1%ном растворе диоцида с последующей трехкратной промывкой дистиллированной водой, после чего проращивают в чашках Петри на фильтровальной бумаге, смоченной дистиллированной водой. Семена клевера проращивают в течение 1 сут, пшеницы — 2 сут при 24 С в темноте.

У пророщенных семян отделяют кончики корней длиной 3 —,5 мм и помещают в чашки

1598928

Количество проРазвитие болезни

Сортообразцы клевера лугового топластов в поле, l тыс, /мл 7

ВИК 7 (стандарт восприимчивости)

Московский 1 (стандарт устойчивости)

Гибрид Рз Р 67

BytowI1

53,3 78,2

21,1 46,0

71,0 83,6

15,5 27,9

Составитель Л. Марченкова

Редактор Н. Швыдкая Техред А. Кравчук Корректор И. Муска

Заказ 3098 Тираж 436 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Петри диаметром 40 мм, в которые предварительно заливают по 3 мл мацерирующего раствора. В каждую чашку помещают по

20 кончиков корней испытываемого образца. Испытания проводят в 4-кратной повторности. Мацерирующий раствор содержит, г на 100 мл раствора: целлюлаза (Онозука P-10) 2; пектиназа, (Мацерозим P-10)

1; хлористый кальций 5,2 и итаконовая кислота 0,01 (рН 5,5).

Материал инкубируют в темноте при 24 С в течение 10 — 14 ч, затем осторожно встряхивают и подсчитывают количество выделившихся протопластов в гемоцитометре ФуксРозенталя под микроскопом.

Существенное влияние на количество выделившихся протопластов оказывало добавление итаконовой кислоты, оптимальные концентрации которой лежали в пределах 0,005 — 0,01 г на 100 мл раствора.

П ри испытании селекционных образцов данным способом и сравнении полученных данных с результатами полевых испытаний установлена положительная корреляция между количеством выделившихся протопластов и развитием болезни в поле (ч — +0,96 при уровне значимости 0,05).

В таблице приведены данные об эффективности определения устойчивости по количеству протопластов.

Способ значительно сокращает время и затраты труда на оценку устойчивости растений к фузариозу.

Формула изобретения

Способ оценки растений на устойчивость к фузариозу, включающий проращив ание семян и последующее определение биологического показателя, по которому оценивается устойчивость к фузариозу, отличаюи4ийся тем, что, с целью ускорения оценки и снижения трудоемкости процесса, проращивание осуществляют в течение 1 — 2 суток, в качестве биологического показателя используют количество протопластов, выделившихся из кончиков корней, при этом их выделение осуществляют путем погружения в мацерирующий раствор, содержащий ферменты целлюлазу и пектиназу, хлористый кальций, итаконовую кислоту и воду при следующем соотношении компонентов в мацерирующем растворе:

Целлюлаз а 22,5 — 30,0 ед,/мл

Пектиназа 2,5 — 5,0 ед,/мл

25 Хлористый кальций 5,0 — 5,5Я

Итаконовая кислота 0,005 вЂ,010Я

Вода Остал ьное